枸杞花總黃酮的測定

貝盞臨 張欣 曹君邁 雷茜 盧維來

摘要：依次以水和體積分?jǐn)?shù)９５％的乙醇為提取劑，采用超聲法提取獲得寧夏枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）花的提取物，采用Ａｌ（ＮＯ３）３法測得樣品中的總黃酮含量為２．９５ ｍｇ／ｇ。結(jié)果表明該方法可快速評價枸杞花中的總黃酮水平。

關(guān)鍵詞：枸杞花；黃酮；蘆丁；測定

中圖分類號：Ｏ６５７．３２文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1240-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Tｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｆｌｏｗｅｒｓ

ＢＥＩ Ｚｈａｎ－ｌｉｎ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｎ，ＣＡＯ Ｊｕｎ－ｍａｉ，ＬＥＩ Ｑｉａｎ，ＬＵ Ｗｅｉ－ｌａｉ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｂｅｉｆａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ， Ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５００２１ Ｎｉｎｇｘｉａ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ． ｆｌｏｗｅｒｓ ｆｒｏｍ Ｎｉｎｇｘｉａ ｗｅｒｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ Ｈ２Ｏ ａｎｄ ９５％（Ｖ／Ｖ） ｅｔｈａｎｏｌ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｌ（ＮＯ３）３ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ content ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ was ２．９５ ｍｇ／ｇ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ ｆａｓｔ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｌ. ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ． ｆｌｏｗｅｒｓ

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ． ｆｌｏｗｅｒ； ｆｌａｖｏｎｏｉｄ； ｒｕｔｉｎ； determination

枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）全身是寶，枸杞花通常單生或數(shù)朵簇生于葉腋或短枝上，紫色或淡紫色，花梗細(xì)，花期４月至１０月［１，２］。黃酮類化合物在植物界分布廣泛，對植物生長具有重要作用，同時也具有一定的抗菌防病功效［３］。通常條件下，植物體內(nèi)的黃酮多以和糖結(jié)合形成的苷類存在，少數(shù)以游離形式存在，現(xiàn)在則泛指２個苯環(huán)通過中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)（Ｃ６－Ｃ３－Ｃ６）而成的一系列化合物［４，５］。目前，人們對枸杞的藥用成分及藥用機理等研究較多，但對枸杞花研究較少。已有報道包括枸杞的花聯(lián)合現(xiàn)象［６］和枸杞花色素提取工藝研究［７］。本研究采用比色法測定枸杞花中總黃酮類化合物的含量，為快速評價枸杞花中的黃酮類化合物水平提供參考。

１材料與方法

１．１材料與試劑

鮮枸杞花（寧杞１號）于２０１０年８月采自寧夏育新枸杞園，標(biāo)本保存于北方民族大學(xué)生物科學(xué)系植物標(biāo)本室。枸杞花放置陰干后，粉碎并置于密封塑料袋中保藏備用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、ＮａＮＯ２、Ａｌ（ＮＯ３）３、ＮａＯＨ，去離子水。

１．２儀器

ＦＷ１００型高速粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）、ＦＡ２１０４Ｂ電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、ＫＱ－５００Ｂ超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）、減壓蒸餾裝置、ＡＬＰＨＡ １－２冷凍干燥機（德國Ｍａｒｉｎ Ｃｈｒｉｓｔ 公司）、Ｓｉｇｍａ ４Ｋ１５離心機（德國Ｓｉｇｍａ公司）、ＵＶ７６５紫外－可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

１．３方法

１．３．１樣品制備水提取物的制備：稱取干燥處理的枸杞花５．０ ｇ于２５０ ｍＬ錐形瓶中，加入Ｈ２Ｏ １００ ｍＬ，在５０ ℃下超聲提?。担?ｍｉｎ，然后將提取液真空抽濾，得澄清提取液，殘渣用蒸餾水洗滌后，重復(fù)提取２～３次，收集合并抽濾后的提取液，減壓蒸餾得濃縮提取液。

乙醇提取物的制備：向上述枸杞花殘渣中加入６０％（體積分?jǐn)?shù)，下同）的乙醇，提取方法及步驟與水提取方法相同，然后依次用８５％和９５％的乙醇對經(jīng)６０％的乙醇提取后的殘渣進行提取。合并上述各濃度的乙醇提取液，減壓蒸餾濃縮，將濃縮液－７０ ℃下過夜后，真空干燥２７ ｈ，取出冷凍粉，加入９５％的乙醇，以１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１５ ｍｉｎ，收集上清液，即為乙醇提取液，測定其體積，置于４ ℃下，待用。

收集上述步驟的沉淀，加入適量Ｈ２Ｏ后搖勻，待沉淀溶解后，以１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１５ ｍｉｎ，去上清，將上清液與蒸餾水提取物溶液合并到一起，即為水提取液，記錄總體積，并置于４ ℃下待用。

１．３．２黃酮類化合物的測定準(zhǔn)確稱取在１０５ ℃下干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品３０ ｍｇ于１００ ｍＬ容量瓶，用６０％的乙醇溶解后定容，即為０．３ ｍｇ／ｍＬ的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液６ ｍＬ，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為５％ ＮａＮＯ２溶液０．６ ｍＬ，混勻后靜置６ ｍｉｎ，再加入100 mg/L的Ａｌ（ＮＯ３）３溶液０．６ ｍＬ，混勻后靜置６ ｍｉｎ；然后加入１ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液４ ｍＬ，混勻后靜置１５ ｍｉｎ。以未加入蘆丁的溶液作為空白溶液，于３００～９００ ｎｍ下掃描，其最大吸收波長為５１５ ｎｍ。

分別準(zhǔn)確移?。埃?、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ ｍＬ蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于２５ ｍＬ容量瓶中，加入６０％的乙醇補充至６ ｍＬ，然后同上述“加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)５％ ＮａＮＯ２溶液０．６ ｍＬ……靜置１５ ｍｉｎ”步驟。以０號組作對照，設(shè)３個平行。

將樣品水提取液稀釋１０倍后，精確吸?。啊ⅲ埃?、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０ ｍＬ于１０ ｍＬ容量瓶中，其余步驟同上，在５１５ ｎｍ處測定吸光度。

精確吸?。梗担サ囊掖继崛∫海?、０．５、２．０、３．０ ｍＬ于１０ ｍＬ容量瓶中，其余步驟同上，在５１５ ｎｍ處測定吸光度。

２結(jié)果與分析

２．１不同溶劑提取所得體積

經(jīng)測定，水提取物的總體積為８１ ｍＬ，９５％乙醇提取物的總體積為１２６ ｍＬ。

２．２黃酮類化合物結(jié)果分析

樣品在３００～９００ ｎｍ波長范圍內(nèi)進行掃描，檢測最大吸收峰波長為５１５ ｎｍ。樣品測定結(jié)果見表1，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸方程為ｙ＝１１．８９７ 0ｘ＋ ０．００４ １（ｒ＝０．９９９ ５）（圖1），水提液稀釋１０倍后，其線性回歸方程為ｙ＝０．０２１ 0ｘ-０．０００ ７（ｒ＝０．９９７ ９）（圖2），水提液的吸光度見表２，吸光度與體積變化曲線見圖２，水提液中總黃酮含量為１１．０３ ｍｇ；９５％乙醇提取液的吸光值見表３，吸光度與體積變化曲線見圖３，線性回歸方程為ｙ＝０．０４０ ３ｘ-０．００３ ６（ｒ＝０．９９７ ０）（圖3）。９５％乙醇提取液中的總黃酮含量為３．４５ ｍｇ，水溶性黃酮的量為醇溶黃酮量的３．２倍。５ ｇ枸杞干花中含有的總黃酮含量達(dá)到１４．４８ ｍｇ，即枸杞花中總黃酮含量為２．９５ ｍｇ／ｇ。

３結(jié)論

采摘的寧夏本地的枸杞花陰干后，對干枸杞花依次采用水、６０％、８５％、９５％乙醇在５０ ℃下超聲提?。担?ｍｉｎ，將提取液經(jīng)抽濾、減壓濃縮后，最終得到水提取液（８１ ｍＬ）和醇提取液（１２６ ｍＬ）兩種提取物。在弱堿條件下，用Ａｌ（ＮＯ３）３與黃酮類化合物反應(yīng)，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，在５１５ ｎｍ下分別測定總黃酮的含量。其中水提取物中黃酮含量為１１．０３ ｍｇ，乙醇提取物中黃酮含量為３．４５ ｍｇ，水溶性黃酮為醇溶性黃酮的３．２倍，枸杞花中總黃酮含量達(dá)到２．９５ ｍｇ／ｇ。

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