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    指紋圖譜技術(shù)在云南省烤煙質(zhì)量分類中的應(yīng)用研究

    2012-04-29 09:17:34唐徐紅矣躍平袁仕信何云燕劉磊尹曉東曹林海何結(jié)望李琳涂書新
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年6期
    關(guān)鍵詞:指紋圖譜品質(zhì)烤煙

    唐徐紅 矣躍平 袁仕信 何云燕 劉磊 尹曉東 曹林海 何結(jié)望 李琳 涂書新

    摘要:選擇合適的方法對煙葉質(zhì)量進(jìn)行科學(xué)合理的分類,對于指導(dǎo)烤煙配方打葉工作及提高卷煙質(zhì)量具有重要意義。試驗采用高效液相色譜指紋圖譜技術(shù),結(jié)合化學(xué)計量學(xué)分析方法,建立了云南省15個典型煙葉產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉基于指紋圖譜特征的煙葉質(zhì)量分類方法。結(jié)果表明,2010年收獲的云南省典型煙葉產(chǎn)區(qū)的煙葉質(zhì)量可分成4個基本類型,一類產(chǎn)區(qū)包括富源縣、沾益縣、馬龍縣和大姚縣,二類產(chǎn)區(qū)包括宣威市、祿勸縣、保山市、麗江市和景東縣,三類產(chǎn)區(qū)包括麒麟?yún)^(qū)、羅平縣、紅河縣和文山縣,四類產(chǎn)區(qū)包括臨滄市和昭通市。試驗研究結(jié)果顯示,煙葉指紋圖譜作為煙葉質(zhì)量控制的新方法,可以減少評吸師的工作量,提高配方打葉的工作效率。

    關(guān)鍵詞:指紋圖譜;烤煙;品質(zhì);分類;云南省

    中圖分類號:O657.7+3;S572;TS207.7(274)文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2012)06-1156-05

    Application of Fingerprint Technology in Quality Classification of Flue-Cured Tobacco in Yunnan Province

    TANG Xu-hong1,YI Yue-ping2,YUAN Shi-xin2,HE Yun-yan2,LIU Lei2,YIN Xiao-dong2,CAO Lin-hai1,

    HE Jie-wang3,LI Lin3,TU Shu-xin1

    (1. College of Resources and Environment, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China; 2. Yunnan Province Company of Tobacco, Kunming 650218, China; 3. Tobacco Industry Co., Ltd. of Hubei Province, Wuhan 430051, China)

    Abstract: Selecting appropriate method for scientific and rational classification of flue-cured tobacco quality was of great significance for guiding of flue-cured tobacco leaf blending modules and improving quality of cigarette products. A quality classification method of tobacco leaves, grade C3F, from 15 production areas of Yunnan was established by means of HPLC fingerprint technology combined with the analysis of Chemometrics. The result showed that the tobacco quality could be divided into 4 groups, the first class of areas included Fuyuan county, Zhanyi county, Malong county and Dayao county, the second class of areas included Xuanwei city, Luquan county, Baoshan city, Lijiang city and Jingdong county, the third class of areas included Qilin district, Luoping county, Honghe county and Wenshan county, the fourth class of areas included Lincang city and Zhaotong city. Application of the new method could reduce the workload of smoking valuator and improve the efficiency of leaf blending.

    Key words: fingerprint; flue-cured tobacco; quality; classification; Yunnan province

    云南省具有種植煙草(Nicotiana tabacum L.)得天獨厚的條件,生產(chǎn)出的烤煙色澤橘黃、香氣濃郁、吸味醇和、品質(zhì)優(yōu)良,是中式卷煙的主體原料[1]。但是,由于云南省地理特征和氣候變化較大,不同地區(qū)的煙葉風(fēng)格存在著顯著的差異;當(dāng)?shù)責(zé)熑~公司為了對煙葉質(zhì)量進(jìn)行控制,為卷煙生產(chǎn)企業(yè)提供更多的質(zhì)量穩(wěn)定的煙葉原料,需要在對煙葉質(zhì)量進(jìn)行合理分類的基礎(chǔ)上實行烤煙配方打葉工作。

    長期以來,煙葉品質(zhì)的評價和分類是采用感官評吸和化學(xué)分析等方法進(jìn)行的。然而,人工評吸工作量大,勞動強(qiáng)度高,且結(jié)果受主觀因素影響大,重復(fù)性差,并不適合在大規(guī)模生產(chǎn)上應(yīng)用。而常規(guī)化學(xué)成分檢測通常是煙葉質(zhì)量判斷的輔助手段[2,3],如鉀氯比只能表明煙葉的燃燒性,施木克值只能描述烤煙和香料煙的吃味品質(zhì),糖酸比僅能反映烤煙的香氣風(fēng)格和香氣品質(zhì),氮堿比反映煙氣的濃度、吃味,糖堿比用來判斷煙氣的柔和性和香味。由于煙草是一種植物原料,化學(xué)成分非常復(fù)雜,煙葉香氣品質(zhì)中已鑒定的成分就高達(dá)5 000種以上。顯然,單靠測定某一種或某些化學(xué)成分很難對煙葉質(zhì)量進(jìn)行有效的評價。

    指紋圖譜系指將分析對象經(jīng)適當(dāng)處理后,采用一定的儀器分析手段得到的、能夠標(biāo)示該對象特性的共有峰圖譜。指紋圖譜技術(shù)具有模糊指紋特征分析、宏觀推斷分析等特點,是進(jìn)行復(fù)雜物質(zhì)質(zhì)量評價的有效手段[4,5]。指紋圖譜技術(shù)已經(jīng)被成功地應(yīng)用于中藥品質(zhì)分析和判斷及農(nóng)產(chǎn)品溯源等領(lǐng)域。近年來,一些研究者對指紋圖譜技術(shù)在煙草科研與生產(chǎn)上應(yīng)用的理論和實踐問題也進(jìn)行了有益的探索[4-7]。課題組自2005年以來一直開展應(yīng)用烤煙指紋圖譜技術(shù)判斷烤煙品質(zhì)的研究,并建立了烤煙醇化品質(zhì)判定的高效液相指紋圖譜分析方法[8-10]。

    過去的研究證明了烤煙指紋圖譜技術(shù)是解決烤煙品質(zhì)評價復(fù)雜問題的有效手段,但烤煙指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用于烤煙配方打葉質(zhì)量控制的研究與應(yīng)用尚未見報道。本研究的目的是在建立云南省不同品質(zhì)煙葉的指紋圖譜數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上,應(yīng)用化學(xué)計量學(xué)的方法對指紋圖譜進(jìn)行表征,探討指紋圖譜技術(shù)在烤煙配方打葉中的應(yīng)用途徑和方法,從而為烤煙生產(chǎn)質(zhì)量控制、煙葉生態(tài)類型劃分和提高配方打葉的穩(wěn)定性提供理論基礎(chǔ)。

    1材料與方法

    1.1材料

    供試煙葉品種為 K326(N. tabacum L. cv. K326),等級為C3F,2010年分別取自云南?。保祩€不同的煙葉產(chǎn)區(qū),包括富源縣、沾益縣、大姚縣、馬龍縣、麗江市、麒麟?yún)^(qū)、祿勸縣、紅河縣、臨滄市、宣威市、景東縣、羅平縣、保山市、文山縣、昭通市。所有煙樣在2010年采樣收集后,經(jīng)云南省煙草煙葉公司統(tǒng)一復(fù)烤后制成煙絲。將煙絲樣品在60 ℃下烘干,用植物粉碎機(jī)粉碎,過60目篩,將煙末用塑料袋密封,置于超低溫冰箱(-80 ℃)中保存待測。

    1.2指紋圖譜數(shù)據(jù)庫的建立

    稱?。埃?g煙末,加入20 mL甲醇。在溫度25 ℃、頻率為40 MHz的超聲波儀器中超聲60 min。離心機(jī)上離心(10 000 g)8 min,離心后取上清液過0.45 μm的濾膜,取濾液為樣品待測溶液。

    采用Agilent ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,流動相A為乙腈,流動相B為0.1%甲酸。梯度洗脫程序:0 min,A與B體積比0∶100;30 min,體積比40∶60;45min,體積比50∶50;55 min,體積比60∶40,保持5 min;然后65 min,體積比0∶100,保持2 min后運(yùn)行5 min。體積流量為5 mL/min,柱溫25 ℃,檢測波長250 nm。

    1.3化學(xué)測定方法及數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    水溶性總糖及還原糖的測定采用文獻(xiàn)[11]的方法。煙堿的測定采用文獻(xiàn)[12]的方法。應(yīng)用SAS 8.0軟件進(jìn)行主成分分析、簡單相關(guān)分析、復(fù)相關(guān)分析,用類平均法進(jìn)行聚類分析。采用Excel 2003軟件進(jìn)行做圖分析。用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版對指紋圖譜進(jìn)行相似度評價。

    2結(jié)果與分析

    2.1云南省烤煙的指紋圖譜及其主成分分析

    不同代表性的樣品其指紋圖譜數(shù)據(jù)有機(jī)聯(lián)系放置在一起即構(gòu)成指紋圖譜數(shù)據(jù)庫。圖1是試驗獲得的云南省典型煙葉產(chǎn)區(qū)烤煙HPLC共有峰指紋圖譜。根據(jù)共有峰確定原則,在不同產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉中確定的甲醇提取物指紋圖譜共有48個峰(數(shù)據(jù)未列)。

    主成分分析(Principal component analysis,PCA)是在信息量損失最小的情況下對數(shù)據(jù)進(jìn)行壓縮、通過線性變化從多個變量中選擇數(shù)量較少的重要變量的過程。由于指紋圖譜特征峰高達(dá)數(shù)百個,不便于進(jìn)行化學(xué)計量學(xué)分析,因此試驗利用主成分分析方法,設(shè)法將原來的變量重新組合成一組新的互相無關(guān)的若干個綜合變量,同時根據(jù)實際需要從中取出幾個較少的綜合變量并能盡可能多地反映出原來變量的信息。試驗將從指紋圖譜分時數(shù)據(jù)庫選取的11組特征峰(分時特征峰的時間范圍分別是0~3 min、3~6 min、9~12 min、21~24 min、36~39 min、39~42 min、42~45 min、48~51 min、51~54 min、54~57 min、57~60 min)進(jìn)行主成分分析,結(jié)果見表1和表2。從表1可見,前3個主成分的累計方差貢獻(xiàn)率就已達(dá)到了91.50%,基本上能反映出指紋圖譜包含的信息。因此將這3個主成分指標(biāo)作為指紋圖譜新的變量進(jìn)行下一步的分析,從而達(dá)到降維的目的,這在很大程度上降低了數(shù)據(jù)分析的工作量。表2結(jié)果表明,主成分1的顯著特征因子包括3、4、5、6、7、8、9、10、11組特征峰,主成分2的顯著特征因子包括3、4組特征峰;主成分3的顯著特征因子包括1、2組特征峰。

    2.2云南省典型煙葉產(chǎn)區(qū)烤煙的化學(xué)品質(zhì)

    云南?。保祩€不同煙葉產(chǎn)區(qū)在2010年取樣測定的C3F等級煙葉重要化學(xué)品質(zhì)成分指標(biāo)結(jié)果見表3,表中按煙葉煙堿含量從低到高排序,表3的結(jié)果表明,富源縣、沾益縣、大姚縣和馬龍縣4個產(chǎn)區(qū)的煙葉煙堿含量處于云南省各產(chǎn)區(qū)的較低水平,煙堿含量在2%以下,而總糖、還原糖和糖堿比處于較高的水平,使得糖堿比在18以上。與之相反,保山市、文山縣和昭通市3個產(chǎn)區(qū)的煙堿含量處于較高水平,達(dá)3%以上,相應(yīng)地,其總糖、還原糖和糖堿比處于較低水平,糖堿比在10以下。其他產(chǎn)區(qū)的煙堿含量介于上述二者之間。

    將主成分得分值與煙葉常規(guī)化學(xué)成分進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果見表4。由表4可知,煙堿與主成分2呈極顯著的正相關(guān),與主成分3呈極顯著的負(fù)相關(guān),與主成分值之間的復(fù)相關(guān)達(dá)到了極顯著水平;總糖含量與主成分1、主成分2呈顯著的負(fù)相關(guān),與主成分值之間的復(fù)相關(guān)達(dá)到了極顯著水平;糖堿比與主成分1、主成分2呈極顯著的負(fù)相關(guān),與主成分3呈極顯著的正相關(guān),與主成分值之間的復(fù)相關(guān)達(dá)到了極顯著水平。

    2.3應(yīng)用指紋圖譜的聚類分析對云南省烤煙品質(zhì)進(jìn)行分類

    以指紋圖譜特征峰主成分值為參數(shù),對云南省2010年15個煙葉產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉樣品進(jìn)行聚類分析,結(jié)果見圖2。圖2表明,在距離值為0.1左右時,2010年云南省不同產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉可分成4類。第一類為麒麟?yún)^(qū)、麗江市、馬龍縣和大姚縣;第二類是沾益縣、富源縣;第三類是臨滄市、羅平縣、紅河縣、景東縣、祿勸縣和宣威市;第四類是保山市、文山縣、昭通市。

    比較圖2的聚類結(jié)果和表3的化學(xué)品質(zhì)成分可以看出,聚類分析的結(jié)果與烤煙化學(xué)成分含量具有密切的聯(lián)系,結(jié)合高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)與化學(xué)計量學(xué)分析方法,可建立云南省15個典型煙葉產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉基于指紋圖譜特征的煙葉質(zhì)量分類方法。其中,一類產(chǎn)區(qū)包括富源縣、沾益縣、馬龍縣和大姚縣,該產(chǎn)區(qū)煙堿含量范圍是1.27%~1.63%,總糖、還原糖含量范圍分別是27.32%~36.15%、23.54%~28.77%,糖堿比范圍是18.27~28.53;二類產(chǎn)區(qū)包括宣威市、祿勸縣、保山市、麗江市和景東縣,該產(chǎn)區(qū)煙堿含量范圍是2.04%~2.26%,總糖、還原糖含量范圍分別是30.35%~35.87%、24.20%~32.03%,糖堿比范圍是13.85~17.62;三類產(chǎn)區(qū)包括麒麟?yún)^(qū)、羅平縣、紅河縣和文山縣,該產(chǎn)區(qū)煙堿含量范圍是2.29%~3.00%,總糖、還原糖含量范圍分別是26.11%~32.02%、23.47%~25.91%,糖堿比范圍在10.55~11.77。四類產(chǎn)區(qū)包括臨滄市和昭通市。該產(chǎn)區(qū)煙堿含量是3.51%和3.91%,總糖、還原糖含量范圍分別是20.86%和26.33%、20.23%和21.56%,糖堿比是5.95和6.69。

    3小結(jié)與討論

    不同品質(zhì)或來源煙葉的差異性本質(zhì)上來源于內(nèi)在的化學(xué)成分組成或比例的不同。通過烤煙指紋圖譜特征峰的定量比較,可以判斷煙草品質(zhì)及其來源。因此,指紋圖譜技術(shù)可以直接用于煙葉質(zhì)量控制的定量研究。由于指紋圖譜分時特征峰仍是多元數(shù)據(jù),在指紋圖譜定量研究方面工作量比較大,也比較繁瑣。從定量應(yīng)用的角度考慮,需要有能夠反映信息權(quán)重的綜合指標(biāo)值為代表,從整體上反映指紋圖譜,而主成分分析法可以完成此類任務(wù)。試驗通過指紋圖譜主成分分析可以看出,前3個主成分的方差貢獻(xiàn)率達(dá)到了91.50%,基本上能反映指紋圖譜的總體信息。相關(guān)性分析顯示,前3個主成分與煙葉中煙堿、總糖和糖堿比達(dá)到了顯著或極顯著的相關(guān)性,可見指紋圖譜主成分可以用來對煙葉進(jìn)行質(zhì)量控制。類似的研究報道有,赫炎等[13]采用主成分分析結(jié)合指紋圖譜進(jìn)行制南星飲片質(zhì)量的控制方法;萬益群等[14]基于白酒HPLC指紋圖譜,采用主成分分析、聚類分析和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等統(tǒng)計方法,為白酒樣品的鑒別提供了一個新的技術(shù)手段,也為白酒的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù);劉江等[15]通過麥冬HPLC指紋圖譜進(jìn)行主成分-聚類分析,建立的模式識別模型結(jié)果可靠,為麥冬質(zhì)量評價和質(zhì)量分類提供了有效依據(jù)。

    聚類分析的基本思路是用“物以類聚”來衡量樣品之間的親疏程度,可廣泛地用于各類物質(zhì)包括中草藥進(jìn)行質(zhì)量分類和鑒別[16-18]。試驗通過指紋圖譜特征峰聚類結(jié)果可以看出,不同類別之間煙葉的質(zhì)量風(fēng)格類型存在著顯著的差別,同一類別之間煙葉中的化學(xué)成分穩(wěn)定性較好。通過相同等級的指紋圖譜再分級結(jié)果,可以使企業(yè)清楚了解煙葉的內(nèi)在品質(zhì)和等級結(jié)構(gòu),有利于從整體上設(shè)計配方,提高配方打葉的質(zhì)量和純度,且能充分有效地利用煙葉資源。

    試驗采用系統(tǒng)聚類方法[19],對云南省典型煙葉產(chǎn)區(qū)烤煙HPLC指紋圖譜分時數(shù)據(jù)庫中選取的11組特征峰多變量指標(biāo)進(jìn)行了聚類分析,其中距離的測定方法是類平均差法。結(jié)果顯示,該方法可以將不同產(chǎn)區(qū)不同風(fēng)格的煙葉進(jìn)行有效的分類評價,能夠客觀反映煙葉的內(nèi)在質(zhì)量。不同產(chǎn)區(qū)之間的聚類結(jié)果表明,煙堿、總糖、還原糖和糖堿比等煙葉中化學(xué)品質(zhì)成分指標(biāo)在同一類別中結(jié)果相近,這將有效地降低因產(chǎn)區(qū)間氣候條件帶來的煙葉質(zhì)量差異,從而提高配方打葉的穩(wěn)定性。本研究還對不同年份、不同產(chǎn)區(qū)及不同等級煙葉的分類結(jié)果進(jìn)行了比較(待發(fā)表),發(fā)現(xiàn)雖然產(chǎn)區(qū)內(nèi)各年份煙葉由于氣候條件和農(nóng)藝措施導(dǎo)致煙葉質(zhì)量出現(xiàn)變化,但通過對不同產(chǎn)地、不同部位煙葉的指紋圖譜特征峰進(jìn)行聚類分析和綜合評價,可以找到在化學(xué)成分組成方面真正相近的煙葉,這將為配方打葉技術(shù)提供理論依據(jù)。

    當(dāng)然,指紋圖譜技術(shù)在煙葉品質(zhì)判斷和分類的研究還處于起步階段,指紋圖譜數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用還存在嚴(yán)重不足,對烤煙質(zhì)量的評價還缺乏規(guī)范和統(tǒng)一的分析方法,這對指紋圖譜技術(shù)在煙草業(yè)上的推廣和應(yīng)用構(gòu)成了一定的障礙。指紋圖譜包含的潛在信息量非常大,也包含有雜質(zhì)或與指紋圖譜研究無關(guān)的信息,因此信息的整理、濾除無用的信息、保留原始特征信息也是指紋圖譜研究的難點和重點。指紋圖譜具有模糊性和整體性的特性,對指紋圖譜的評價應(yīng)是對整體內(nèi)容的綜合性分析,但目前的研究缺乏一個綜合的評價指標(biāo)。另外,目前烤煙指紋圖譜的特征峰對評吸指標(biāo)和風(fēng)格特點的影響研究較少。通過了解特征峰的作用和影響,將為特征峰的解析提供研究方向和目標(biāo)。

    采用主成分分析方法可將云南省典型煙葉產(chǎn)區(qū)烤煙HPLC指紋圖譜分時數(shù)據(jù)庫中11組特征峰分成3個主成分,其特征方差貢獻(xiàn)率總計達(dá)到了91.50%。指紋圖譜技術(shù)包含有先進(jìn)的儀器分析與信息技術(shù),采用指紋圖譜特征峰的聚類分析,可對不同產(chǎn)區(qū)煙葉的質(zhì)量和風(fēng)格進(jìn)行分類。分類結(jié)果與烤煙化學(xué)成分指標(biāo),如煙堿、總糖和糖堿比具有密切的關(guān)系,這表明應(yīng)用指紋圖譜技術(shù)進(jìn)行烤煙品質(zhì)分類具有科學(xué)性和可操作性。

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