丙肝抗體假陽性檢測(cè)中ELISA法應(yīng)用

鄭煤集團(tuán)總醫(yī)院，河南鄭州 452371

丙型肝炎（HepatitisC，簡(jiǎn)稱丙肝）是有丙型肝炎病毒（HCV）引起的危害廣大人群肝臟健康的一種傳染性疾病，目前臨床上把檢測(cè)患者血清丙肝抗體（HCV-Ab）做為診斷丙肝的主要依據(jù)，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）因其靈敏度高、特異性強(qiáng)，是進(jìn)行HCV-Ab的主要檢測(cè)方法之一[1]，但實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用 ELISA法檢測(cè)丙肝抗體有許多因素可能會(huì)導(dǎo)致假陽性的結(jié)果[1]。為此本文就回顧性統(tǒng)計(jì)分析了鄭煤集團(tuán)總醫(yī)院 36例用 ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽性血清標(biāo)本，再采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法將ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)復(fù)檢的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料36例血清標(biāo)本均來自2011年1月至2012年1月鄭煤集團(tuán)總醫(yī)院門診和住院患者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑HCV-RNA使用美國(guó)ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀，測(cè)定試劑由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供；HCV-Ab使用北京普朗新技術(shù)公司酶免儀以及配套洗板機(jī)，試劑由上海科華生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.2 檢測(cè)方法抽取患者空腹靜脈血3～5ml，離心分離血清后 1～2h內(nèi)先用 ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab，篩查出采用同種方法檢測(cè) 3次仍為弱陽性的血清標(biāo)本，再用聚合酶鏈反應(yīng)法將ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab檢測(cè)HCV-RNA加以證實(shí)。

1.2.3 質(zhì)控所有試劑均在有效期內(nèi)，全部?jī)x器、設(shè)備運(yùn)行狀況良好，每日質(zhì)控結(jié)果、每批測(cè)定陰陽對(duì)照均在可信范圍，HCV-Ab每次參加河南省臨檢中心質(zhì)控合格。

2 結(jié)果

36例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽性血清標(biāo)本，再采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)復(fù)檢的結(jié)果顯示28例仍為陽性，8例陰性，表明以PCR檢測(cè)HCV-RNA方法為準(zhǔn)，ELISA法有77.8%的真陽性率，有22.2%的假陽性率。

3 討論

目前，確定和臨床廣泛應(yīng)用的 HCV感染診斷方法有兩大類：檢測(cè)患者血清 HCV-Ab和HCV-RNA，雖然最近也發(fā)展了丙肝抗原（HCV-Ag）檢測(cè)技術(shù)，但尚未得到廣泛應(yīng)用。對(duì)血清（或血漿）HCV-RNA的檢測(cè)是目前唯一直接揭示存在的使用方法，但PCR也存在著技術(shù)復(fù)雜，要求特殊設(shè)備、費(fèi)用高等缺點(diǎn)，難以在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。血清HCV-Ab的檢測(cè)主要有膠體金（GICA）和酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法，GICA法雖然快捷、方便，但存在靈敏度低，重復(fù)性差，不能提供準(zhǔn)確的確定界限值的標(biāo)準(zhǔn)品，不能進(jìn)行質(zhì)控工作等缺點(diǎn)，僅可以做為初步篩查試驗(yàn)[3]，而ELISA法具有較高靈敏度、特異性強(qiáng)、可進(jìn)行定量和半定量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)成為檢測(cè)HCV感染的主要方法。

導(dǎo)致ELISA法檢測(cè)血清HCV-Ab出現(xiàn)假陽性的原因多數(shù)報(bào)道認(rèn)為[4]易受加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、洗滌徹底性等諸多因素的影響，根據(jù)工作體會(huì)認(rèn)為以下幾個(gè)方面是出現(xiàn)假陽性主要因素：標(biāo)本溶血、被細(xì)菌污染、貯存時(shí)間過長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全等標(biāo)本處理問題；試劑盒的抗原不純、采用多克隆抗體和酶結(jié)合物純度低等試劑盒本身問題；加樣時(shí)間過長(zhǎng)造成加樣后放入恒溫箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)，加樣后孔壁上貼有微小血塊加樣等問題；洗板針堵塞，抽吸不完全，洗液量不足，洗板次數(shù)少等問題。總之，影響ELISA法檢測(cè)血清HCV-Ab出現(xiàn)假陽性因素除了方法學(xué)、試劑盒本身之外，還有標(biāo)本處理、操作不當(dāng)?shù)榷喾N因素。因此，檢驗(yàn)人員在工作中應(yīng)嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，認(rèn)真對(duì)待每一份標(biāo)本，一定要做好檢驗(yàn)前、檢驗(yàn)中、檢驗(yàn)后質(zhì)控，盡可能降低人為因素造成的假陽性，對(duì)可疑的假陽性的標(biāo)本一定要認(rèn)真復(fù)測(cè)，盡可能用兩種以上不同廠家試劑盒進(jìn)行復(fù)檢，最好采用PCR檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證。

[1]洪秀華.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].1版,北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2004:385.

[2]張志梅.ELISA法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽性的分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師,2009,11(24):187.

[3]王鵬,任美英,王樹平.應(yīng)用金標(biāo)法檢測(cè)抗-HCV 假陰性和假陽性的結(jié)果分析[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,14(02):172-173.

[4]鄭嵐,蔣黎敏,方嫻靜,等.HBsAg,HCV 抗體和 HIV-1/2抗體膠體金檢測(cè)法在急診手術(shù)前的應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010,25(04):115-116.