自制弱陽(yáng)性質(zhì)控品對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行ABO血型鑒定室內(nèi)質(zhì)控的可行性探討

邱玉霞　李志平　孔莉娜　閆曉鵬　王林++++++郭超群++++++來(lái)祝檁++++++夏琳靜++++++劉志勇

[摘要] 目的 探討自制弱陽(yáng)性質(zhì)控品對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行ABO血型鑒定室內(nèi)質(zhì)控的可行性以及使用后提高亞型檢出率的效果。 方法 ①選擇本站日常工作中采集<6 d，各項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)均為陰性，血型鑒定分別被確定為A亞型和B亞型，且弱抗原與抗-A、抗-B的反應(yīng)強(qiáng)度均為1+的無(wú)償獻(xiàn)血者血液，將其離心后分出2 U濃縮紅細(xì)胞，并進(jìn)行甘油化后各等分為24份（2年用量）于-80℃冰箱冰凍保存。每月各取出1個(gè)分裝單位的冰凍紅細(xì)胞，融化洗滌后加入MAP紅細(xì)胞保存液及硫酸慶大霉素，制備成A抗原和B抗原弱陽(yáng)性質(zhì)控品。②適量收集保存時(shí)間<6 d，各項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)均為陰性，不規(guī)則抗體檢測(cè)均為陰性，無(wú)溶血和脂血的AB型、A型及B型血漿，在AB型血漿中分別加入一定比例的B型血漿和A型血漿，使其最終與Ac和Bc的凝集強(qiáng)度均為1+時(shí)，各等分為24份（2年用量）于-30℃冰箱冰凍保存。每月各取出1個(gè)分裝單位的冰凍血漿，融化后加入疊氮鈉，制備成A抗體和B抗體弱陽(yáng)性質(zhì)控品。③制備好的質(zhì)控品經(jīng)檢驗(yàn)科定標(biāo)合格后，和每批無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行ABO血型檢測(cè)。當(dāng)弱陽(yáng)性質(zhì)控品反應(yīng)結(jié)果為陰性時(shí)，提示存在影響亞型檢出的因素，應(yīng)及時(shí)分析并采取糾正措施。④統(tǒng)計(jì)并比較弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用前（2006年1月～2009年12月，對(duì)照組）和使用后（2010年1月～2013年12月，實(shí)驗(yàn)組）的ABO亞型檢出率。 結(jié)果 ①弱陽(yáng)性質(zhì)控品共有14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，采取措施后均得到糾正。②對(duì)照組的ABO亞型檢出率為0.25/萬(wàn)（2/79 704），實(shí)驗(yàn)組的ABO亞型檢出率為1.66/萬(wàn)（13/78 415），兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.25，P﹤0.05）。 結(jié)論 本站自制弱陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)用于無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定的室內(nèi)質(zhì)控，可顯著提高ABO亞型檢出率，進(jìn)一步保障無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性及臨床輸血的安全、有效性，具有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 質(zhì)控品；弱陽(yáng)性；ABO血型；亞型

[中圖分類號(hào)] R331.1+41 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）07（c）-0120-04

ABO血型系統(tǒng)是人類免疫性最強(qiáng)的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，在臨床安全輸血中具有十分重要的作用。在日常血型檢測(cè)工作中，ABO亞型由于主要表現(xiàn)為抗原減弱或同時(shí)存在弱的ABO不規(guī)則抗體，極易因漏檢而導(dǎo)致ABO血型鑒定錯(cuò)誤并發(fā)生嚴(yán)重的輸血不良反應(yīng)，給安全輸血帶來(lái)極大隱患[1-9]。為有效檢出無(wú)償獻(xiàn)血者中存在的ABO亞型，進(jìn)一步保障臨床輸血安全，本站利用獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本制備弱陽(yáng)性質(zhì)控品，并成功應(yīng)用于無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定的室內(nèi)質(zhì)控，使ABO亞型檢出率明顯提高。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 檢測(cè)對(duì)象 選取本站2006年1月～2009年12月79 704名無(wú)償獻(xiàn)血者（對(duì)照組）及2010年1月～2013年12月78 415名無(wú)償獻(xiàn)血者（實(shí)驗(yàn)組）的血液標(biāo)本。

1.1.2 主要試劑 單克隆抗-A、抗-B（北京金豪生物技術(shù)有限責(zé)任公司）。ABO試劑紅細(xì)胞；人源抗-A、抗-B；抗-A1、抗-H、抗-AB；A2紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）。硫酸慶大霉素（開封制藥集團(tuán)有限公司）。疊氮鈉（北實(shí)縱橫北京有限公司）。

1.1.3 主要儀器 Xantus全自動(dòng)血型儀，由Xantus雙機(jī)械臂全自動(dòng)加樣儀（瑞士Xantus公司）和Poseidon數(shù)字血型儀（深圳市愛康電子有限公司）整合而成；120孔V型梯度反應(yīng)板（日本Olympus公司）；96孔平底微板（丹麥Nunc公司）；Metis-200全自動(dòng)血型儀及配套96孔UV反應(yīng)板（深圳市愛康電子有限公司）；KA-2200血球洗滌離心機(jī)（日本KUBOTA公司）；SBHW2-1型電熱恒溫水浴箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠有限公司）；Liswell實(shí)驗(yàn)室管理軟件（煙臺(tái)海深威公司）。

1.2 方法

1.2.1 弱陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品的制備 ①選擇本站日常工作中采集<6 d，各項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)均為陰性，血型鑒定分別被確定為A亞型和B亞型，且弱抗原與抗-A、抗-B的反應(yīng)強(qiáng)度均為1+的無(wú)償獻(xiàn)血者血液，將其離心后分出2 U濃縮紅細(xì)胞，按文獻(xiàn)[10]的方法進(jìn)行甘油化后各分裝在24個(gè)血漿轉(zhuǎn)移袋中（2年用量）于-80℃冰箱冰凍保存。每月各取出1個(gè)分裝單位的冰凍紅細(xì)胞，融化洗滌后去除上清液，按壓積紅細(xì)胞的1.5倍，分別加入含有葡萄糖、腺嘌呤、甘露醇等成分的MAP紅細(xì)胞保存液懸浮，再按終濃度為0.05 mg/ml的比例分別加入硫酸慶大霉素混勻，即為紅細(xì)胞A抗原和B抗原弱陽(yáng)性質(zhì)控品，分裝于2支真空采血管中（約5 ml/支），于2～6℃冰箱保存?zhèn)溆?。②適量收集保存時(shí)間<6 d，各項(xiàng)傳染性指標(biāo)檢測(cè)均為陰性，不規(guī)則抗體檢測(cè)均為陰性，無(wú)溶血和脂血的AB型、A型及B型血漿，在AB型血漿中分別加入一定比例的B型血漿和A型血漿，使其最終與Ac和Bc的凝集強(qiáng)度均為1+時(shí)，各等分為24份（2年用量）于-30℃冰箱冰凍保存。每月各取出1個(gè)分裝單位的冰凍血漿，融化后按終濃度為1 mg/ml的比例分別加入疊氮鈉混勻，即為血漿A抗體和B抗體弱陽(yáng)性質(zhì)控品，分裝于2支真空采血管中（約5 ml/支），于2～6℃冰箱保存?zhèn)溆?。③觀察所制備質(zhì)控品的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，確定其最佳使用效期。

1.2.2 弱陽(yáng)性質(zhì)控品的使用規(guī)則 ①每批質(zhì)控品制備完畢后，檢驗(yàn)科必須用全自動(dòng)血型儀對(duì)其凝集強(qiáng)度定標(biāo)并進(jìn)行重復(fù)性評(píng)價(jià)，當(dāng)結(jié)果符合預(yù)期要求時(shí)可正常使用，否則需要重新制備并定標(biāo)。②質(zhì)控品應(yīng)在規(guī)定的有效期內(nèi)使用。③質(zhì)控品必須與每批獻(xiàn)血者標(biāo)本同步檢測(cè)和記錄。④每次使用前，將質(zhì)控品置室溫平衡15～30 min，用完后立即放回2～6℃冰箱保存，每天置于室溫時(shí)間應(yīng)≤1 h。⑤每次使用前必須檢查質(zhì)控品，發(fā)現(xiàn)溶血、顏色變化、細(xì)菌污染等，即放棄使用并更換新的質(zhì)控品。⑥批量檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本時(shí)，如果質(zhì)控品反應(yīng)結(jié)果呈弱陽(yáng)性為在控，如果反應(yīng)結(jié)果呈陰性則為失控，必須查明原因，及時(shí)糾正并做好記錄。

1.2.3 無(wú)償獻(xiàn)血者的ABO血型鑒定 ①檢驗(yàn)科使用全自動(dòng)血型儀檢測(cè)獻(xiàn)血者的ABO血型，用單克隆抗-A、抗-B做正定型，用Ac、Bc、Oc做反定型，試驗(yàn)前常規(guī)進(jìn)行試劑質(zhì)控，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。②對(duì)每批獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行ABO正定型時(shí)，同步檢測(cè)紅細(xì)胞A抗原和B抗原弱陽(yáng)性質(zhì)控品；反定型時(shí)同步檢測(cè)血漿A抗體和B抗體弱陽(yáng)性質(zhì)控品，以隨時(shí)監(jiān)控檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的異常情況。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果為陰性時(shí)，提示存在影響弱抗原或弱抗體檢出的因素，應(yīng)積極分析并采取針對(duì)性改進(jìn)措施，比如檢查試劑的效期、試劑稀釋的濃度、試劑與標(biāo)本的比例、試劑槽內(nèi)試劑存放的時(shí)間、孵育溫度和時(shí)間、離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間、振蕩頻率和時(shí)間以及儀器的穩(wěn)定性等。③采取電腦自動(dòng)化判讀和人工肉眼目測(cè)相結(jié)合的方法，對(duì)血型鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。一旦發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果，必須用試管法復(fù)核，復(fù)核時(shí)凡正定型凝集強(qiáng)度﹤4+，或呈混合視野凝集；反定型凝集強(qiáng)度﹤2+，或呈凝集不平行的O型；或者為正、反定型不符，均送血型室進(jìn)一步鑒定。④血型室按文獻(xiàn)[11-12]的方法進(jìn)行亞型檢測(cè)和分類，必要時(shí)送上級(jí)單位協(xié)助鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Modern 2000TMV5.0計(jì)算機(jī)管理軟件統(tǒng)計(jì)弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用前后的獻(xiàn)血者人數(shù)（不計(jì)重復(fù)獻(xiàn)血者），根據(jù)血型室試驗(yàn)記錄統(tǒng)計(jì)并計(jì)算兩組ABO亞型檢出率（不計(jì)重復(fù)檢測(cè)者），計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 弱陽(yáng)性質(zhì)控品呈陰性反應(yīng)結(jié)果的原因分析及解決方法

弱陽(yáng)性質(zhì)控品在無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定工作的使用過(guò)程中，共發(fā)現(xiàn)14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，其原因分析及解決方法見表1。

2.2 兩組ABO亞型檢出率的比較

弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用后（實(shí)驗(yàn)組）的ABO亞型檢出率明顯高于使用前（對(duì)照組），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

3 討論

ABO亞型是由于基因突變而導(dǎo)致的紅細(xì)胞抗原減弱[13]，在無(wú)償獻(xiàn)血者中存在一定比例，向東等[14]報(bào)道上海地區(qū)獻(xiàn)血者的亞型檢出率為1.50/萬(wàn)（66/440 617）。雖然獻(xiàn)血者的亞型比率不高，但如果漏檢，則嚴(yán)重影響臨床輸血的安全性和有效性。比如將AX、BX獻(xiàn)血者的血型誤定為O型而輸給O型患者；或?qū)XB、ABX獻(xiàn)血者的血型誤定為B型或A型，分別誤輸給B型或A型患者，均可引發(fā)嚴(yán)重的速發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，甚至威脅患者生命。所以，為了正確鑒定獻(xiàn)血者中存在的ABO亞型，保證我站發(fā)出的每一袋血液血型的正確無(wú)誤[15-16]，我們根據(jù)工作實(shí)際，客觀分析了亞型反應(yīng)的一般特點(diǎn)及可能導(dǎo)致亞型漏檢的各種原因，認(rèn)為目前可購(gòu)買的商品化質(zhì)控品，多為試劑廠家配套設(shè)計(jì)的強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)本，不能有效控制弱抗原或弱抗體的漏檢，有必要使用弱陽(yáng)性質(zhì)控品，以隨時(shí)監(jiān)測(cè)可能影響弱抗原或弱抗體檢出的因素。為此，本研究以本站豐富的血液標(biāo)本資源為基礎(chǔ)，結(jié)合成熟的低溫保存技術(shù)，用同源血液可制備2年用量的弱陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品，不但方便了日常工作，也減小了質(zhì)控品的批間差異，使質(zhì)控結(jié)果更加穩(wěn)定，幾年來(lái)應(yīng)用情況良好，和商品化質(zhì)控品比較，該質(zhì)控品更能保證ABO亞型的有效檢出，能進(jìn)一步提高無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性。

由表1可見，弱陽(yáng)性質(zhì)控品有14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，其中正定型出現(xiàn)12次，反定型出現(xiàn)2次。經(jīng)進(jìn)一步研究分析，正定型有2次為抗血清稀釋比例錯(cuò)誤，均由工作人員粗心大意造成，經(jīng)重新稀釋試劑后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；4次為試劑槽中的抗血清試劑未及時(shí)更換，導(dǎo)致效價(jià)降低而影響了凝集效果，經(jīng)徹底清洗試劑槽并更換試劑后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；4次為抗血清與標(biāo)本的比例不合適，主要因抗血清更換了新批號(hào)，其效價(jià)和原試劑相比發(fā)生了不同變化所致，經(jīng)重新選擇試劑與標(biāo)本的最佳比例后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；1次為振蕩頻率偏大，經(jīng)儀器廠家工程師校準(zhǔn)后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；1次為紅細(xì)胞弱陽(yáng)性質(zhì)控品本身使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，經(jīng)更換后結(jié)果呈陽(yáng)性。反定型出現(xiàn)2次陰性結(jié)果的原因，均為試劑紅細(xì)胞接近失效期所致，更換新批號(hào)后弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

由表2可見，自采用弱陽(yáng)性質(zhì)控品對(duì)ABO血型鑒定進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控以來(lái)，本站無(wú)償獻(xiàn)血者的ABO亞型檢出率，由2006年1月～2009年12月的0.25/萬(wàn)（2/79 704），提高為2010年1月～2013年12月的1.66/萬(wàn)（13/78 415），略高于文獻(xiàn)[14]報(bào)道的數(shù)據(jù)。其中不包括重復(fù)獻(xiàn)血時(shí)被確定為亞型的4名無(wú)償獻(xiàn)血者，該4名獻(xiàn)血者，在2009年以前獻(xiàn)血時(shí)均被定為正常血型，2010年以后再次獻(xiàn)血時(shí)均被確認(rèn)為亞型。1例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為O型，后確認(rèn)為BX；1例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為B型，后確認(rèn)為AXB；2例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為B型，后確認(rèn)為罕見的B（A）表型。由此再次證明該質(zhì)控方法的科學(xué)性、實(shí)用性和有效性，具有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。

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[16] GB18469-2012.全血及成分血質(zhì)量要求[S].

（收稿日期：2014-05-28 本文編輯：郭靜娟）

1.2.3 無(wú)償獻(xiàn)血者的ABO血型鑒定 ①檢驗(yàn)科使用全自動(dòng)血型儀檢測(cè)獻(xiàn)血者的ABO血型，用單克隆抗-A、抗-B做正定型，用Ac、Bc、Oc做反定型，試驗(yàn)前常規(guī)進(jìn)行試劑質(zhì)控，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。②對(duì)每批獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行ABO正定型時(shí)，同步檢測(cè)紅細(xì)胞A抗原和B抗原弱陽(yáng)性質(zhì)控品；反定型時(shí)同步檢測(cè)血漿A抗體和B抗體弱陽(yáng)性質(zhì)控品，以隨時(shí)監(jiān)控檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的異常情況。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果為陰性時(shí)，提示存在影響弱抗原或弱抗體檢出的因素，應(yīng)積極分析并采取針對(duì)性改進(jìn)措施，比如檢查試劑的效期、試劑稀釋的濃度、試劑與標(biāo)本的比例、試劑槽內(nèi)試劑存放的時(shí)間、孵育溫度和時(shí)間、離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間、振蕩頻率和時(shí)間以及儀器的穩(wěn)定性等。③采取電腦自動(dòng)化判讀和人工肉眼目測(cè)相結(jié)合的方法，對(duì)血型鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。一旦發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果，必須用試管法復(fù)核，復(fù)核時(shí)凡正定型凝集強(qiáng)度﹤4+，或呈混合視野凝集；反定型凝集強(qiáng)度﹤2+，或呈凝集不平行的O型；或者為正、反定型不符，均送血型室進(jìn)一步鑒定。④血型室按文獻(xiàn)[11-12]的方法進(jìn)行亞型檢測(cè)和分類，必要時(shí)送上級(jí)單位協(xié)助鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Modern 2000TMV5.0計(jì)算機(jī)管理軟件統(tǒng)計(jì)弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用前后的獻(xiàn)血者人數(shù)（不計(jì)重復(fù)獻(xiàn)血者），根據(jù)血型室試驗(yàn)記錄統(tǒng)計(jì)并計(jì)算兩組ABO亞型檢出率（不計(jì)重復(fù)檢測(cè)者），計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 弱陽(yáng)性質(zhì)控品呈陰性反應(yīng)結(jié)果的原因分析及解決方法

弱陽(yáng)性質(zhì)控品在無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定工作的使用過(guò)程中，共發(fā)現(xiàn)14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，其原因分析及解決方法見表1。

2.2 兩組ABO亞型檢出率的比較

弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用后（實(shí)驗(yàn)組）的ABO亞型檢出率明顯高于使用前（對(duì)照組），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

3 討論

ABO亞型是由于基因突變而導(dǎo)致的紅細(xì)胞抗原減弱[13]，在無(wú)償獻(xiàn)血者中存在一定比例，向東等[14]報(bào)道上海地區(qū)獻(xiàn)血者的亞型檢出率為1.50/萬(wàn)（66/440 617）。雖然獻(xiàn)血者的亞型比率不高，但如果漏檢，則嚴(yán)重影響臨床輸血的安全性和有效性。比如將AX、BX獻(xiàn)血者的血型誤定為O型而輸給O型患者；或?qū)XB、ABX獻(xiàn)血者的血型誤定為B型或A型，分別誤輸給B型或A型患者，均可引發(fā)嚴(yán)重的速發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，甚至威脅患者生命。所以，為了正確鑒定獻(xiàn)血者中存在的ABO亞型，保證我站發(fā)出的每一袋血液血型的正確無(wú)誤[15-16]，我們根據(jù)工作實(shí)際，客觀分析了亞型反應(yīng)的一般特點(diǎn)及可能導(dǎo)致亞型漏檢的各種原因，認(rèn)為目前可購(gòu)買的商品化質(zhì)控品，多為試劑廠家配套設(shè)計(jì)的強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)本，不能有效控制弱抗原或弱抗體的漏檢，有必要使用弱陽(yáng)性質(zhì)控品，以隨時(shí)監(jiān)測(cè)可能影響弱抗原或弱抗體檢出的因素。為此，本研究以本站豐富的血液標(biāo)本資源為基礎(chǔ)，結(jié)合成熟的低溫保存技術(shù)，用同源血液可制備2年用量的弱陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品，不但方便了日常工作，也減小了質(zhì)控品的批間差異，使質(zhì)控結(jié)果更加穩(wěn)定，幾年來(lái)應(yīng)用情況良好，和商品化質(zhì)控品比較，該質(zhì)控品更能保證ABO亞型的有效檢出，能進(jìn)一步提高無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性。

由表1可見，弱陽(yáng)性質(zhì)控品有14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，其中正定型出現(xiàn)12次，反定型出現(xiàn)2次。經(jīng)進(jìn)一步研究分析，正定型有2次為抗血清稀釋比例錯(cuò)誤，均由工作人員粗心大意造成，經(jīng)重新稀釋試劑后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；4次為試劑槽中的抗血清試劑未及時(shí)更換，導(dǎo)致效價(jià)降低而影響了凝集效果，經(jīng)徹底清洗試劑槽并更換試劑后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；4次為抗血清與標(biāo)本的比例不合適，主要因抗血清更換了新批號(hào)，其效價(jià)和原試劑相比發(fā)生了不同變化所致，經(jīng)重新選擇試劑與標(biāo)本的最佳比例后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；1次為振蕩頻率偏大，經(jīng)儀器廠家工程師校準(zhǔn)后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；1次為紅細(xì)胞弱陽(yáng)性質(zhì)控品本身使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，經(jīng)更換后結(jié)果呈陽(yáng)性。反定型出現(xiàn)2次陰性結(jié)果的原因，均為試劑紅細(xì)胞接近失效期所致，更換新批號(hào)后弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

由表2可見，自采用弱陽(yáng)性質(zhì)控品對(duì)ABO血型鑒定進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控以來(lái)，本站無(wú)償獻(xiàn)血者的ABO亞型檢出率，由2006年1月～2009年12月的0.25/萬(wàn)（2/79 704），提高為2010年1月～2013年12月的1.66/萬(wàn)（13/78 415），略高于文獻(xiàn)[14]報(bào)道的數(shù)據(jù)。其中不包括重復(fù)獻(xiàn)血時(shí)被確定為亞型的4名無(wú)償獻(xiàn)血者，該4名獻(xiàn)血者，在2009年以前獻(xiàn)血時(shí)均被定為正常血型，2010年以后再次獻(xiàn)血時(shí)均被確認(rèn)為亞型。1例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為O型，后確認(rèn)為BX；1例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為B型，后確認(rèn)為AXB；2例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為B型，后確認(rèn)為罕見的B（A）表型。由此再次證明該質(zhì)控方法的科學(xué)性、實(shí)用性和有效性，具有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。

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[15] 血站管理辦法[Z].衛(wèi)生部令第44號(hào).2005-11-17.

[16] GB18469-2012.全血及成分血質(zhì)量要求[S].

（收稿日期：2014-05-28 本文編輯：郭靜娟）

1.2.3 無(wú)償獻(xiàn)血者的ABO血型鑒定 ①檢驗(yàn)科使用全自動(dòng)血型儀檢測(cè)獻(xiàn)血者的ABO血型，用單克隆抗-A、抗-B做正定型，用Ac、Bc、Oc做反定型，試驗(yàn)前常規(guī)進(jìn)行試劑質(zhì)控，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。②對(duì)每批獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行ABO正定型時(shí)，同步檢測(cè)紅細(xì)胞A抗原和B抗原弱陽(yáng)性質(zhì)控品；反定型時(shí)同步檢測(cè)血漿A抗體和B抗體弱陽(yáng)性質(zhì)控品，以隨時(shí)監(jiān)控檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的異常情況。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果為陰性時(shí)，提示存在影響弱抗原或弱抗體檢出的因素，應(yīng)積極分析并采取針對(duì)性改進(jìn)措施，比如檢查試劑的效期、試劑稀釋的濃度、試劑與標(biāo)本的比例、試劑槽內(nèi)試劑存放的時(shí)間、孵育溫度和時(shí)間、離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間、振蕩頻率和時(shí)間以及儀器的穩(wěn)定性等。③采取電腦自動(dòng)化判讀和人工肉眼目測(cè)相結(jié)合的方法，對(duì)血型鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。一旦發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果，必須用試管法復(fù)核，復(fù)核時(shí)凡正定型凝集強(qiáng)度﹤4+，或呈混合視野凝集；反定型凝集強(qiáng)度﹤2+，或呈凝集不平行的O型；或者為正、反定型不符，均送血型室進(jìn)一步鑒定。④血型室按文獻(xiàn)[11-12]的方法進(jìn)行亞型檢測(cè)和分類，必要時(shí)送上級(jí)單位協(xié)助鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Modern 2000TMV5.0計(jì)算機(jī)管理軟件統(tǒng)計(jì)弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用前后的獻(xiàn)血者人數(shù)（不計(jì)重復(fù)獻(xiàn)血者），根據(jù)血型室試驗(yàn)記錄統(tǒng)計(jì)并計(jì)算兩組ABO亞型檢出率（不計(jì)重復(fù)檢測(cè)者），計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 弱陽(yáng)性質(zhì)控品呈陰性反應(yīng)結(jié)果的原因分析及解決方法

弱陽(yáng)性質(zhì)控品在無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定工作的使用過(guò)程中，共發(fā)現(xiàn)14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，其原因分析及解決方法見表1。

2.2 兩組ABO亞型檢出率的比較

弱陽(yáng)性質(zhì)控品使用后（實(shí)驗(yàn)組）的ABO亞型檢出率明顯高于使用前（對(duì)照組），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

3 討論

ABO亞型是由于基因突變而導(dǎo)致的紅細(xì)胞抗原減弱[13]，在無(wú)償獻(xiàn)血者中存在一定比例，向東等[14]報(bào)道上海地區(qū)獻(xiàn)血者的亞型檢出率為1.50/萬(wàn)（66/440 617）。雖然獻(xiàn)血者的亞型比率不高，但如果漏檢，則嚴(yán)重影響臨床輸血的安全性和有效性。比如將AX、BX獻(xiàn)血者的血型誤定為O型而輸給O型患者；或?qū)XB、ABX獻(xiàn)血者的血型誤定為B型或A型，分別誤輸給B型或A型患者，均可引發(fā)嚴(yán)重的速發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，甚至威脅患者生命。所以，為了正確鑒定獻(xiàn)血者中存在的ABO亞型，保證我站發(fā)出的每一袋血液血型的正確無(wú)誤[15-16]，我們根據(jù)工作實(shí)際，客觀分析了亞型反應(yīng)的一般特點(diǎn)及可能導(dǎo)致亞型漏檢的各種原因，認(rèn)為目前可購(gòu)買的商品化質(zhì)控品，多為試劑廠家配套設(shè)計(jì)的強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)本，不能有效控制弱抗原或弱抗體的漏檢，有必要使用弱陽(yáng)性質(zhì)控品，以隨時(shí)監(jiān)測(cè)可能影響弱抗原或弱抗體檢出的因素。為此，本研究以本站豐富的血液標(biāo)本資源為基礎(chǔ)，結(jié)合成熟的低溫保存技術(shù)，用同源血液可制備2年用量的弱陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品，不但方便了日常工作，也減小了質(zhì)控品的批間差異，使質(zhì)控結(jié)果更加穩(wěn)定，幾年來(lái)應(yīng)用情況良好，和商品化質(zhì)控品比較，該質(zhì)控品更能保證ABO亞型的有效檢出，能進(jìn)一步提高無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性。

由表1可見，弱陽(yáng)性質(zhì)控品有14次呈陰性反應(yīng)結(jié)果，其中正定型出現(xiàn)12次，反定型出現(xiàn)2次。經(jīng)進(jìn)一步研究分析，正定型有2次為抗血清稀釋比例錯(cuò)誤，均由工作人員粗心大意造成，經(jīng)重新稀釋試劑后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；4次為試劑槽中的抗血清試劑未及時(shí)更換，導(dǎo)致效價(jià)降低而影響了凝集效果，經(jīng)徹底清洗試劑槽并更換試劑后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；4次為抗血清與標(biāo)本的比例不合適，主要因抗血清更換了新批號(hào)，其效價(jià)和原試劑相比發(fā)生了不同變化所致，經(jīng)重新選擇試劑與標(biāo)本的最佳比例后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；1次為振蕩頻率偏大，經(jīng)儀器廠家工程師校準(zhǔn)后，弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；1次為紅細(xì)胞弱陽(yáng)性質(zhì)控品本身使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，經(jīng)更換后結(jié)果呈陽(yáng)性。反定型出現(xiàn)2次陰性結(jié)果的原因，均為試劑紅細(xì)胞接近失效期所致，更換新批號(hào)后弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

由表2可見，自采用弱陽(yáng)性質(zhì)控品對(duì)ABO血型鑒定進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控以來(lái)，本站無(wú)償獻(xiàn)血者的ABO亞型檢出率，由2006年1月～2009年12月的0.25/萬(wàn)（2/79 704），提高為2010年1月～2013年12月的1.66/萬(wàn)（13/78 415），略高于文獻(xiàn)[14]報(bào)道的數(shù)據(jù)。其中不包括重復(fù)獻(xiàn)血時(shí)被確定為亞型的4名無(wú)償獻(xiàn)血者，該4名獻(xiàn)血者，在2009年以前獻(xiàn)血時(shí)均被定為正常血型，2010年以后再次獻(xiàn)血時(shí)均被確認(rèn)為亞型。1例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為O型，后確認(rèn)為BX；1例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為B型，后確認(rèn)為AXB；2例以往獻(xiàn)血時(shí)被定為B型，后確認(rèn)為罕見的B（A）表型。由此再次證明該質(zhì)控方法的科學(xué)性、實(shí)用性和有效性，具有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。

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[6] 孫曉琳，關(guān)曉珍，于洋，等.36例ABO血型亞型檢測(cè)及血清學(xué)分析[J].中國(guó)輸血雜志，2012，25（3）：215-218.

[7] 王嶸，路林英，夏杰成，等.29例血型錯(cuò)誤的原因分析[J].北京醫(yī)學(xué)，2006，28（2）：120-121.

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[9] 杜紅梅，何天輝，趙民霞，等.48例非傳染性輸血反應(yīng)原因分析[J].中國(guó)輸血雜志，2013，26（1）：10-11.

[10] 趙陽(yáng).冰凍紅細(xì)胞制備工藝的標(biāo)準(zhǔn)化和產(chǎn)品的質(zhì)量控制[J].中國(guó)輸血雜志，2010，23（10）：788-790.

[11] 向東.ABO亞型的檢測(cè)[J].中國(guó)輸血雜志，2010，23（8）：577-580.

[12] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：246-271.

[13] 喻瓊，吳國(guó)光，梁延連，等.一個(gè)中國(guó)漢族ABO血型B亞型家系中發(fā)現(xiàn)新的B等位基因[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2005，22（2）：129-133.

[14] 向東，劉曦，郭忠慧，等.上海地區(qū)中國(guó)人群中ABO亞型的研究[J].中國(guó)輸血雜志，2006，19（1）：25-26.

[15] 血站管理辦法[Z].衛(wèi)生部令第44號(hào).2005-11-17.

[16] GB18469-2012.全血及成分血質(zhì)量要求[S].

（收稿日期：2014-05-28 本文編輯：郭靜娟）