849例婦產(chǎn)科患者HPV基因分型檢驗(yàn)及結(jié)果分析

鐘佳伶 何鈺 黃文芳 杜瓊

【摘 要】目的：探討婦產(chǎn)科患者中人乳頭瘤病毒（ HPV）的感染率及各亞型的分布情況。方法：采用HPV基因分型技術(shù)對(duì)我院2012年 間849例患者進(jìn)行HPV分型檢測(cè)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：849例患者中，共檢出HPV陽性者267例，總陽性率為31.45%。HPV-21分型中，6型占首位（15.70%），其次是52型（11.39%）和58型（11.39%）。高危型別（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）、低危型別（HPV6、11、42、43、44）及中國人常見類型（53、66、CP8403）分別占55.94%，28.10%，15.94%。結(jié)論：在患者所感染的HPV亞型中，以6型最多，其次是52型和58型;高危亞型的感染率明顯高于低危亞型。

【關(guān)鍵詞】human papillomavirus（HPV）;基因型;感染

Abstract OBJECTIVE： To investigate the infection rate and distribution of HPV subtypes in patients of obstetrics and Gynecology.METHODS： The HPV genotyping technique was used to detect and analyze the HPV genotypes of 849 patients in our hospital in 2012. RESULTS： Of 849 patients， 267 were HPV positive， the total positive rate was 31.4%. Among HPV-21 types， type 6 was the most （15.70%）， followed by type 52 （11.39%） and type 58 （11.39%）. High-risk types （HPV16， 18， 31， 33， 35， 39， 45， 51， 52， 56， 58， 59， 68）， low-risk types （HPV6， 11， 42， 43， 44） and Chinese common types （53， 66， CP8403） accounted for 55.94%， 28.10% and 15.94%， respectively. CONCLUSION： Among the HPV subtypes infected by patients， type 6 is the most common， types 52 and 58 followed. and the infection rate of high-risk subtypes is significantly higher than that of low-risk subtypes.

Key works human papillomavirus（HPV）;genotype;infection

【中圖分類號(hào)】 R248.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A【文章編號(hào)】 1672-3783（2019）04-03-073-01

【前言】據(jù)世界腫瘤流行病調(diào)查分析，宮頸癌發(fā)病率位于女性腫瘤的第三位，致死率位于第四位，成為嚴(yán)重威脅女性健康和生命的殺手[1]。大量研究表明，人乳頭瘤病毒（HPV）感染時(shí)導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素，99%以上的宮頸癌有HPV感染[2-4]。HPV病毒含有多種亞型，在發(fā)現(xiàn)的HPV亞型中，約有 100 種可以感染生殖道 [5]。根據(jù)其致病性的不同，可分為低危型HPV （如6，11，42，43型），高危型 HPV （16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58 ，59 ， 68 型）及中國地區(qū)常見類型（53，66，CP8304型）。低危亞型主要與性病濕疣相關(guān)，高危亞型與宮頸癌的發(fā)生相關(guān)[6]。為了解本地區(qū)女性HPV感染情況，作者對(duì)本院849例就診婦產(chǎn)科患者作導(dǎo)流雜交HPV-21型基因分型技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1 對(duì)象與方法

1.對(duì)象? 本院2012年1月到12月間，婦產(chǎn)科泌尿生殖道炎癥女性患者共849，年齡16-77歲，平均年齡33.8歲。

2.儀器及試劑 細(xì)胞裂解液（凱普公司）;凱普21種人乳頭狀瘤病毒（HPV）分型檢測(cè)試劑盒（凱普公司）;DA-7600 核酸擴(kuò)增儀（達(dá)安公司）;HybriMaXM 醫(yī)用核酸分子快速雜交儀（凱普公司）。

3. 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 標(biāo)本采集：利用采集器，采集子宮脫落細(xì)胞樣本將采樣刷置于標(biāo)本保存液中 4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2 DNA的提取及擴(kuò)增： 取保存有宮頸細(xì)胞的細(xì)胞保存液0.5ml，14，000rpm離心1分鐘后，棄去上清，然后嚴(yán)格按照細(xì)胞裂解液試劑盒操作步驟提取DNA.取1ulDNA樣本按95℃-9分鐘一個(gè)循環(huán)，95℃-20秒-55℃-30秒-72℃-30秒40個(gè)循環(huán)，72℃-5分鐘，4℃-hold進(jìn)行擴(kuò)增。

3.3 雜交檢測(cè)：嚴(yán)格按照凱普21種人乳頭狀瘤病毒（HPV）分型檢測(cè)試劑盒的說明書操作步驟進(jìn)行雜交。簡(jiǎn)述為：PCR 產(chǎn)物25ul在95℃加熱5分鐘后立即冰浴2分鐘，與0.5ml的預(yù)熱至 45 ℃的雜交緩沖液混合，在導(dǎo)流雜交儀 HybrMax 上45 ℃與膜孵育 15 min 然后進(jìn)行導(dǎo)流雜交。雜交后再用 0.8 ml 雜交緩沖液清洗 3 次后，在 25 ℃條件下，用封阻液封阻孵育 5 min 封阻后，加入 0.5 ml 酶標(biāo)液孵育 3.5 分鐘， 用沖洗緩沖液 A清洗雜交膜，去除未結(jié)合的酶標(biāo)液。顯色過程加入 0.5 NBT/BCIP 底物在 36 ℃保持 3-5 min.在顯色后 1 h 內(nèi)查看分析結(jié)果。

2 結(jié)果

1.HPV感染總體陽性率：849例患者中，共檢出HPV陽性者267例，總陽性率為31.45%。

2.HPV感染各亞型分布：經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，在HPV感染當(dāng)中，以第6型所占比例最大（15.70%），其次是52型（11.39%）和58型（11.39%）。其余各亞型所占比例見表1及圖1.

3.HPV高危亞型分布：經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，在HPV高危亞型感染中，以52亞型（20.36%）、58亞型（20.36%）及16亞型（18.10%）為主。其余高危亞型所占比例見圖2.

4.HPV低危亞型分布：經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，在HPV低危亞型感染中，以6亞型（42.75%）及11亞型（32.41%）為主。其余低危亞型所占比例見圖3.

5. 中國人常見HPV亞型分布：經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，在中國人常見HPV亞型感染中，53型，66型及CP8304型分別占28.57%，17.46%及53.97%（圖4）。

3 討論

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種小的雙鏈DNA病毒，可以特異性地感染人皮膚黏膜的鱗狀上皮細(xì)胞，引起多種良、惡性病變。低危亞型主要與性病濕疣相關(guān)，高危亞型與宮頸癌的發(fā)生相關(guān)[6]。所以在篩查宮頸癌的同時(shí)篩查HPV感染 具有重要的意義。

本研究就本院849例婦產(chǎn)科患者進(jìn)行HPV-21型分型檢測(cè)，HPV總陽性率為31.45%，略高于其他研究的陽性率[7-9]。HPV 型別分布存在地區(qū)差異 。據(jù)IARC 報(bào)道，全球 25 個(gè)國家的 3607 例宮頸癌患者的多中心研究中 16 型在所有 HPV陽性的宮頸癌患者中的平均感染率為 57.4%， 18 型次之。 而在亞洲國家 52 和 58 型感染更常見。在上海有 42.5%的宮頸癌標(biāo)本存在 52、58 型感染[7]。在我們的研究中，所有亞型中，6型占首位（15.70%），其次是52型（11.39%）和58型（11.39%）。與亞洲的研究結(jié)果基本相符。高危亞型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）、低危亞型（HPV6、11、42、43、44，CP8304）及中國人常見類型（53、66、CP8403）分別占55.94%，28.10%，15.94%?？梢钥闯觯诟腥綡PV人群中，以高危亞型為主，可見高危感染問題的嚴(yán)重性。

在本研究中，僅對(duì)所出現(xiàn)的HPV亞型進(jìn)行整體統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)本地區(qū)人群HPV感染亞型以6型最多，其次是52型和58型;且高危亞型的感染率明顯高于低危亞型。在本研究并未對(duì)單一亞型感染和多重亞型感染，以及患病人群的感染程度及年齡的相關(guān)性進(jìn)行分別統(tǒng)計(jì)，這些有待于進(jìn)一步的數(shù)據(jù)整理和分析。

參考文獻(xiàn)

[1] Jemal A， Bray F， Center MM， Ferlay J， Ward E， Forman D. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin. 2011， 61： 69-90.

[2]Koss LG. The papnicolaou test for cervical detection： a triumph and a tragedy. J Am Yied Assoc， 2009，26（1）：737-743.

[3]陳麗艷，李春波，黃淑杰. 液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)合陰道鏡診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變分析. 局解手術(shù)學(xué)雜志， 2007， 16（2）：140-141.

[4]吳有利，陸學(xué)東，劉鍵，等.膜雜交多重檢測(cè)技術(shù)在HPV基因分型中的應(yīng)用.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2005，25：1048.

[5]Clavel C，Masure M，Bory JP，et al.Human papillomavirus testing in primary screening for the detection of high-risk lesions：a study of 7932 woman .Br J Cancer，2001，89：1616～1623.

[6]Munoz N，Spsch FX. Epidemiologic classification of human papillomavims types associated with cervical cancer .N Engl J Med，2003，348（6）：518～527.

[7]趙夏豐，楊小華，劉慶峰. 547 例婦科門診就診者HPV基因分型結(jié)果的回顧分析.臨床醫(yī)學(xué)工程. 2010，17（4）：145-146.

[8]潘莉，潘偉. 婦科門診患者HPV 分型檢測(cè)及結(jié)果分析. 醫(yī)學(xué)信息. 2010，23（9）：3372.

[9]徐維， 曾孟蘭， 楊黎明. 1285 例女性 HPV 感染狀況調(diào)查[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2009， 16（1）： 36-37.