用HPLC法測定鹽酸阿羅洛爾片的含量

蘇玉懷，聞 俊，石 寬，裘戈彬，4，洪戰(zhàn)英＊

［1.第二軍醫(yī)大學藥學院藥物分析學教研室，上海市藥物（中藥）代謝產物研究重點實驗室，上海200433；2.解放軍66051部隊衛(wèi)生隊，保定072150；3.解放軍95890部隊衛(wèi)生隊，武漢434000；4.第二軍醫(yī)大學研究生管理大隊，上海200433］

鹽酸阿羅洛爾（arotinolol hydrochloride，商品名Almarl）是日本住友制藥株式會社開發(fā)的新型α，β受體阻斷劑。該藥對β受體的阻斷作用無選擇性，對α1受體有微弱的阻斷作用，對β與α受體的作用強度為8∶1，因此被劃分為第4代β受體阻斷劑。臨床主要用于治療原發(fā)性輕、中度高血壓，對腎功能無不利影響，對心、腦、腎有保護作用，同時也可以用于治療心絞痛和原發(fā)性震顫［1］。本研究建立了HPLC法用于測定鹽酸阿羅洛爾片的含量，方法準確、簡便、重復性好，適用于其含量測定。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 HPLC儀包括LC－10ATVP溶劑輸送泵、SPD－10A紫外檢測器、手動進樣閥（日本島津公司）；N2000色譜工作站（浙江大學智能信息研究所）；HA－202M電子天平（日本A＆D公司）。

1.2 藥品和試劑 鹽酸阿羅洛爾對照品（含量100.3%，批號100203）和鹽酸阿羅洛爾片（10mg／片，批號2010－A008、2010－1139C、2010－1143C）由日本住友制藥（蘇州）有限公司提供；甲醇、磷酸（色譜純，美國Tedia公司）；氨水（分析純，上海振興化工廠）；濃鹽酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為去離子水（由第二軍醫(yī)大學藥學院自制）。

2 方法和結果

2.1 溶液的制備 （1）對照品溶液 精密稱取鹽酸阿羅洛爾對照品10.30mg置于10ml量瓶中，加甲醇溶解后稀釋至刻度，得對照品儲備液。取適量對照品儲備液，用甲醇∶0.3%氨水（45∶55，氨水用磷酸調節(jié)pH至6.0，作為流動相）稀釋成濃度為41.20μg／ml的對照品溶液。（2）供試品溶液 取本品10片，置于500ml量瓶中。取濃鹽酸適量，加水稀釋至0.01mol／L，取50ml加入上述500ml量瓶中，振搖使片劑完全崩解后，加適量甲醇超聲20min，使鹽酸阿羅洛爾溶出，放冷后加甲醇稀釋至刻度。精密量取溶出液2ml，置于10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾后，取續(xù)濾液作為供試品溶液。（3）陰性對照溶液 制備不含鹽酸阿羅洛爾的空白片劑，按供試品溶液制備方法操作，得到陰性對照溶液。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性實驗 色譜柱：Ultimate C18色譜柱（200mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇∶0.3%氨水（45∶55，氨水用磷酸調節(jié)pH至6.0）；檢測波長315nm；流速為1.0ml／min；柱溫為室溫；進樣量20μl。在該色譜條件下取鹽酸阿羅洛爾陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液進樣測定，得到色譜圖見圖1。由圖1可見，鹽酸阿羅洛爾的保留時間約為5.6min，理論塔板數＞5 000，片劑中輔料對鹽酸阿羅洛爾的含量測定無干擾。取41.20μg／ml的鹽酸阿羅洛爾對照品溶液連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算得到RSD為0.96%，表明該色譜條件的系統(tǒng)適用性良好。

2.3 標準曲線的制備 精密吸取2.1項下的對照品儲備液適量，用流動相稀釋得到系列濃度為10.30、20.60、41.20、61.80、82.40和103.0μg／ml的對照品溶液，各取20μl進樣，測定峰面積。以鹽酸阿羅洛爾的濃度（c）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標做線性回歸，得到線性方程為：A＝1.39× 104c－5.28×104（r＝0.999 9），表明鹽酸阿羅洛爾在10.30～103.0μg／ml范圍內線性關系良好。

2.4 重復性實驗 取批號為2010－A008的鹽酸阿羅洛爾片，按2.1（2）項方法制備供試品溶液6份，進樣，測定峰面積并計算含量，鹽酸阿羅洛爾的平均含量為標示量的98.0%，RSD為1.1%（n＝6）。

圖1 鹽酸阿羅洛爾的HPLC譜圖

2.5 穩(wěn)定性實驗 在供試品溶液配制后的8h內，每隔2h測定1次，記錄鹽酸阿羅洛爾峰面積，求得RSD＝1.4%（n＝5），表明供試品溶液在配制后8h內穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率實驗 取3個500ml量瓶，每個量瓶中分別加入5片鹽酸阿羅洛爾片，以及對照品30.30、50.10和70.20mg，按照2.1（2）項方法制備成低、中、高濃度分別為31.72、39.64、47.68μg／ml的供試品溶液各3份，分別測定其峰面積，以外標法計算加樣回收率。結果測得低、中、高濃度鹽酸阿羅洛爾的平均加樣回收率分別為（100.5±1.8）%、（99.2±2.1）%和（99.7±2.8）%（n＝3），表明該方法的準確度符合要求。

2.7 樣品含量測定 取2.1項下濃度為41.20μg／ml的鹽酸阿羅洛爾對照品溶液作為質控樣品。取批號為2010－A008、2010－1139C和2010－1143C的鹽酸阿羅洛爾片各10片，分別按照2.1（2）方法制備供試品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μl，進樣測定，按外標法以峰面積計算含量。結果3批樣品中鹽酸阿羅洛爾的含量分別為標示量的98.4%、99.7%、98.7%，RSD分別為1.3%、0.9%、1.0%（n＝5）。

3 討 論

3.1 色譜條件的選擇 目前關于鹽酸阿羅洛爾含量測定的HPLC法報道較少，文獻［2］以甲醇∶磷酸銨緩沖液（pH值為6.5）70∶30作為流動相，選擇254nm為檢測波長，在40℃柱溫下對鹽酸阿羅洛爾進行分離測定。作者對鹽酸阿羅洛爾對照品溶液做紫外光譜掃描，發(fā)現其在225、266和315nm處均有吸收峰，其中315nm處的吸光系數較大，因此本研究選擇315nm作為檢測波長，提高檢測靈敏度，并且在室溫下進行色譜分離，避免了長時間的高柱溫對色譜柱的損害［2，3］。

作者在預實驗中發(fā)現，流動相中甲醇和氨水的比例，以及氨水溶液的pH值對鹽酸阿羅洛爾的峰形和保留時間影響較大。隨著氨水溶液pH值增大，鹽酸阿羅洛爾峰保留行為增強，且色譜峰發(fā)生拖尾。這可能是由于流動相堿性增大使得阿羅洛爾呈分子狀態(tài)，增加了其在色譜柱上的保留性，同時堿性基團與未封尾的硅醇基作用造成了拖尾現象。為了得到對稱峰形與適合的保留時間，最終確定氨水溶液pH值為6.0，選定流動相組成為甲醇∶0.3%氨水（用磷酸調pH為6.0）＝45∶55。

3.2 供試品溶液制備方法 鹽酸阿羅洛爾為小劑量糖衣片劑，標示量＜25mg／片，片型小，且包衣與藥芯片粘連在一起，不易除去。去糖衣容易造成糖衣的殘留或藥芯片殘缺損失，影響測定準確性。因此本研究參考文獻［2］的方法，直接將鹽酸阿羅洛爾片用0.01mol／L鹽酸溶液崩解后再行測定，不影響取樣均勻性，并且由色譜圖可見片劑中輔料對鹽酸阿羅洛爾的含量測定無干擾。為了保證取樣具有代表性，且測定結果真實、可靠，對標示量＜25mg／片的片劑，一般要求取樣10片進行測定。本研究選擇10片樣品用于制備供試品溶液。

［1］ 吳 海，尹瑞興.新型β受體阻滯劑——阿羅洛爾［J］.醫(yī)學綜述，2001，7（3）：182－183.

Wu Hai，Yin RuiXing.A newβadrenoceptor blocker－arotinolol［J］.Med Recap，2001，7（3）：182－183.In Chinese.

［2］ 廖洪娟.HPLC法測定鹽酸阿羅洛爾片的含量［J］.海峽藥學，2008，20（10）：61－63.

Liao HongJuan.Determination of hydrochloride acid arotinolol by HPLC［J］.Strait Pharm J，2008，20（10）：61－63.In Chinese with English abstract.

［3］ 胡 琴，常建元.鹽酸阿羅洛爾含量測定方法研究［J］.中國藥品標準，2006，7（2）：62－63.

Hu Qin，Chang JianYuan.Study of assay of arotinolol hydrochloride［J］.Drug Stand China，2006，7（2）：62－63.In Chinese with English abstract.