凌朝珍 唐 新 梁 燕
1.廣西南寧市邕寧區(qū)蒲廟鎮(zhèn)衛(wèi)生院,廣西南寧 530200;2.廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司,廣西南寧 530003
HPLC法測定宮頸炎康栓的含量
凌朝珍1唐 新2梁 燕2
1.廣西南寧市邕寧區(qū)蒲廟鎮(zhèn)衛(wèi)生院,廣西南寧 530200;2.廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司,廣西南寧 530003
目的建立高效液相色譜法測定宮頸炎康栓中苦參堿的含量。方法采用Diamonsil C18(2)(5μm,4.6 mm×250mm)色譜柱,乙腈-水相(0.1%磷酸+0.4%三乙胺,pH7.0)(30:70)為流動相,流速為 1.0ml·min-1,檢測波長為220nm。結(jié)果苦參堿在0.0620-0.620mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.99991,平均回收99.56%,RSD=0.64%。結(jié)論該法簡便、快速、專屬性好,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
苦參堿;宮頸炎康栓;高效液相色譜法
宮頸炎康栓系廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司拳頭產(chǎn)品,為原中藥三類新藥,于2001年5月獲得新藥證書及生產(chǎn)批件,自正式投產(chǎn)以來,立即以其療效確切、使用方便、毒副作用少等特點(diǎn)深受千百萬婦女宮頸炎患者的好評。該中藥主要成份為苦參、枯礬、苦杏仁、冰片等,其中苦參堿含量測定在原標(biāo)準(zhǔn)。本文為此具體探討了HPLC法測定宮頸炎康栓的含量方法與效果。
安捷倫1100高效液相色譜儀(VWD檢測器),美國安捷倫科技公司。Diamonsil C18(2)色譜柱,5μm,4.6mm ×250mm。
苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號:110805-200507,供含量測定用)。宮頸炎康栓及缺苦參的陰性對照樣品為廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司自制樣品。
以十八烷基硅烷化鍵和硅膠為填料;乙腈-水相為流動相;檢測波長220nm;流速為1.0mL/min;柱溫為室溫。
精密稱取苦參堿對照品適量,加高純水溶解并定量稀釋制成1mL約含0.15mg的溶液,作為對照品溶液;另取本品10粒,切碎并混勻,精密稱取約1g,置50mL錐形瓶中,精密加入氯仿15mL,置水浴鍋回流提取1h,取出,過濾,揮干溶劑,加甲醇適量溶解殘渣,并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中,定容,搖勻,靜置,取上清液用0.22um微孔濾膜濾過,作為供試品溶液。取2種溶液各10μL,用外標(biāo)法以主峰面積定量。
圖 1 對照品(A)、樣品(B)、陰性對照品(C)色譜圖
以高純水為溶劑,制備對照品溶液,在上述色譜條件下,取10μl,注入液相色譜儀。色譜圖見圖1。
2.4 線性關(guān)系精精密吸取以上對照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL,分別置10ml量瓶中,加高純水稀釋至刻度,搖勻,進(jìn)樣測定。則回歸方程為:Y=1.4539×104X+37.5798,r=0.99991,表明苦參堿在0.0620~0.620mg/mL范圍內(nèi)時,進(jìn)樣量10μL與苦參堿峰面積呈良好的線性關(guān)系。
取對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次,每次10 μL,測得苦參堿的峰面積的RSD為0.65%。
對同一批供試品,按正文擬訂的方法平行測定6份,結(jié)果苦參堿的平均值為2.50mg/g。
取同一供試品溶液在室溫下立即測定,放置 4、12、20、24h 重新測定,結(jié)果峰面積測得值分別為 942.1、938.1、944.5、929.3 平均值 為 938.37,RSD 為0.55%,峰面積基本一致。
取已知含量 (苦參堿的含量為2.50mg/g)的供試品(100510 批)約 1.0g,共9份,精密稱定,置50mL錐形瓶中,加入氯仿15mL,精密稱取苦參堿對照品2.4、2.4、2.4、3.0、3.0、3.0、3.6、3.6、3.6, 分別加入以上三角瓶中,拌勻,置水浴鍋回流提取1h,取出,過濾,揮干溶劑,加甲醇適量溶解殘渣,并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中,定容,按外標(biāo)法計算平均回收率為99.56%,RSD為0.64%。
表1 回收率試驗結(jié)果表
精密稱取苦參堿,加高純水進(jìn)行溶解稀釋,制成 1mL約含0.15 mg的溶液,將此溶液作為對照品溶液;另取本品10粒,精密稱取約1g,置50mL錐形瓶中,精密加入氯仿15mL,置水浴鍋回流提取1h,取出,過濾,揮干溶劑,加甲醇適量溶解殘渣,并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中,定容,搖勻,靜置,取上清液用0.22um微孔濾膜濾過,作為供試品溶液。取2種溶液各10μL,用外標(biāo)法以主峰面積定量。結(jié)果表明,高效液相色譜法測定結(jié)果較為準(zhǔn)確、可靠,專屬性強(qiáng),可作為本品的含測方法,見表2。
表2 含量測定結(jié)果(mg/g,n=2)
10批樣品中苦參堿含量最低的為101202批,含量是2.145mg/g,含量最高的為 100902批,含量是 3.009mg/g,而本品規(guī)格為每粒1.2g,即 1.7mg×1.2=2.04mg/粒,故擬定宮頸炎康栓每粒含苦參堿(C15H24N2O)不得少于 2.0mg。
現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),苦參的主要成分包括生物堿和黃酮類化合物等,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)苦參堿類生物堿具有鎮(zhèn)痛,強(qiáng)心、抗心律失常,抗病毒,抗炎等作用。本文采用 Diamonsil C18②(5μm,4.6 mm×250mm)色譜柱,乙腈-水相(0.1%磷酸+0.4%三乙胺,pH7.0)(30:70) 為流動相,流速為 1.0ml·min-1,檢測波長為 220nm。顯示苦參堿在0.0620-0.620mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.99991,平均回收99.56%,RSD=0.64%。表明該法簡便、快速、專屬性好,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
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1672-5654(2012)04(c)-0119-02
2012-04-11)