全國(guó)5個(gè)不同地區(qū)乳香醋炙前后乙酸辛酯的含量變化

張會(huì)敏，王 萌，郭長(zhǎng)強(qiáng)

（山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014）

乳香為橄欖科植物乳香樹(shù)Boswellia carteriiBirdw.及同屬植物Boswellia.bhaw-dijianaBirdw.樹(shù)皮滲出的樹(shù)脂［1］，主產(chǎn)于利比亞、蘇丹、土耳其、索馬里、埃塞俄比亞等地。乳香為常用樹(shù)脂類中藥，具有活血化瘀、消腫止痛、祛腐生肌之功效。臨床用藥多為醋炙品，而醋炙品的藥理及化學(xué)含量測(cè)定的報(bào)道極少［2］。由于乳香為進(jìn)口中藥，來(lái)源較廣，市售乳香的質(zhì)量評(píng)價(jià)頗為重要。實(shí)驗(yàn)研究［3-4］表明乳香中的主要有效成分為揮發(fā)油類，而乙酸辛酯占乳香揮發(fā)油的40％左右。為了明確醋炙法是否能夠影響乳香中乙酸辛酯的含量，比較醋炙前后乳香中乙酸辛酯的含量變化，本文對(duì)購(gòu)自全國(guó)5個(gè)不同地區(qū)的乳香生品進(jìn)行統(tǒng)一醋炙，采用文獻(xiàn)［5］改進(jìn)方法：茴香醛內(nèi)標(biāo)法，利用氣相色譜測(cè)定法對(duì)不同地區(qū)的市售乳香醋炙前后的乙酸辛酯含量進(jìn)行測(cè)定比較。

1 儀器、試劑與材料

HP-6890氣相色譜儀；FID檢測(cè)器；毛細(xì)管色譜柱HP INNOWAX（30m×0.53mm×1.0μm）；AG245電子天平（METTLER TOLEDO）；乙酸辛酯（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111671-200401）；茴香醛（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110838-200504）：無(wú)水乙醇（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20070103）。

乳香：購(gòu)自全國(guó)5個(gè)不同地區(qū)，外觀性狀及規(guī)格見(jiàn)表1。

表1 5個(gè)不同地區(qū)乳香的外觀性狀及質(zhì)量評(píng)價(jià)

醋炙乳香：由本實(shí)驗(yàn)室醋炙制得。炮制程度的判定依據(jù)《山東省炮制規(guī)范》（1990版）［6］、《中國(guó)藥典》（2010版）［1］。取生乳香300g，于140℃時(shí)不停翻炒9min，至表面微溶時(shí)，噴淋5％米醋，即15mL，再翻炒1min，至醋液被吸盡，呈油亮光澤時(shí)，迅速出鍋，放涼即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 氣相色譜條件 進(jìn)樣口溫度：230℃；柱程序升溫：130℃（3min）-30℃/min-200℃（4min）；檢測(cè)器溫度：250℃；載氣流速（N2）：6.3mL/min；進(jìn)樣量：1.0μL。

2.2 溶液制備 乙酸辛酯對(duì)照品溶液的制備：精密稱取乙酸辛酯87.0mg，置10.0mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，混勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取5.75mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，置10.0mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，混勻，作為對(duì)照品應(yīng)用液（5.0mg/mL）。

內(nèi)標(biāo)溶液的制備：精密稱取茴香醛113.0mg，置10.0mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，混勻，作為內(nèi)標(biāo)對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取8.85mL儲(chǔ)備液，置10.0mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，混勻，作為內(nèi)標(biāo)應(yīng)用液（10.0mg/mL）。

2.3 供試品溶液制備 取乳香及醋炙乳香樣品50g，稱定重量，置500mL燒瓶中，加水300mL，沸石數(shù)粒，連接揮發(fā)油提取器與回流冷凝管。加熱至沸，保持微沸5h，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，將水緩緩放出，放置1h以上，再讀取揮發(fā)油量，并將揮發(fā)油保存至裝有適量無(wú)水硫酸鈉的容量瓶中，備用。取50μL已提取的揮發(fā)油樣品，置10.0mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，混勻，精密量取100.0μL溶液，置1.0mL量瓶中，精密加入50μL內(nèi)標(biāo)溶液，加入無(wú)水乙醇至刻度，混勻，進(jìn)樣1.0μL分析，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密量取乙酸辛酯對(duì)照品溶液（5.0mg/mL）0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0mL，置10.0mL量瓶中，分別加內(nèi)標(biāo)溶液（10.0mg/mL）500μL，加無(wú)水乙醇至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，分別進(jìn)樣分析，以乙酸辛酯的濃度為橫坐標(biāo)，以A標(biāo)/A內(nèi)為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：Y=4.049 1X+1.033 5，r=0.999 0。

2.5 方法精密度試驗(yàn) 日內(nèi)精密度：取標(biāo)準(zhǔn)曲線中0.5mg/mL乙酸辛酯對(duì)照品溶液，進(jìn)樣1.0μL，連續(xù)測(cè)定6次，以乙酸辛酯與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值計(jì)算精密度測(cè)得RSD為1.09％。日間精密度：取標(biāo)準(zhǔn)曲線中0.5mg/mL乙酸辛酯對(duì)照品溶液，進(jìn)樣1.0μL，每日測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5d，以乙酸辛酯與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值計(jì)算精密度測(cè)得RSD為1.02％。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按上述條件對(duì)同一乳香揮發(fā)油樣品（北京華邈乳香）進(jìn)行含量測(cè)定，每個(gè)樣品平行進(jìn)樣2次，連續(xù)進(jìn)行6次測(cè)定，RSD為1.68％。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取用于重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的乳香樣品適量，精確加入乙酸辛酯對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)溶液適量，按上述條件進(jìn)行6次加樣回收實(shí)驗(yàn)，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量，計(jì)算得平均回收率為105.3％，RSD為1.09％。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.8 樣品含量測(cè)定 按上述方法測(cè)定5個(gè)市售乳香樣品及其炮制品的揮發(fā)油中的乙酸辛酯絕對(duì)含量，結(jié)果見(jiàn)圖1，圖2，表3，表4。

表2 加樣回收率結(jié)果

圖1 生品乳香中乙酸辛酯的GC色譜圖

圖2 醋炙乳香中乙酸辛酯的GC色譜圖

表3 5個(gè)不同產(chǎn)地生乳香樣品中乙酸辛酯的絕對(duì)含量（n=3）

表4 5個(gè)不同產(chǎn)地醋炙乳香樣品中乙酸辛酯的絕對(duì)含量（n=3）

3 結(jié)語(yǔ)

3.1 內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對(duì)的校準(zhǔn)方法 在分析測(cè)定樣品中某組分含量時(shí)，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除出于操作條件的波動(dòng)而對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。內(nèi)標(biāo)法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)滿足以下幾個(gè)條件：1）內(nèi)標(biāo)物與被分析物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)要相似（如：沸點(diǎn)、極性、化學(xué)結(jié)構(gòu)等）。2）內(nèi)標(biāo)物應(yīng)能完全溶解于被測(cè)樣品（或溶劑）中，且不與被測(cè)樣品起化學(xué)反應(yīng)。3）內(nèi)標(biāo)物的出峰位置應(yīng)該與被分析物質(zhì)的出峰位置相近，且又不共溢出，目的是為了避免GC的不穩(wěn)定性所造成的靈敏度的差異。4）選擇合適的內(nèi)標(biāo)物加入量，使得內(nèi)標(biāo)物和被分析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75％，以免由于它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。茴香醛恰好滿足以上幾點(diǎn)，是筆者優(yōu)選出的最適內(nèi)標(biāo)物，故本文采用茴香醛內(nèi)標(biāo)法對(duì)不同地區(qū)的市售乳香醋炙前后的乙酸辛酯含量進(jìn)行測(cè)定。

3.2 本文所測(cè)乙酸辛酯的含量為其在藥材中的絕對(duì)含量，而非在揮發(fā)油中的含量 氣相測(cè)定結(jié)果顯示，5個(gè)不同地區(qū)的生乳香樣品中乙酸辛酯的絕對(duì)含量均在1.02～1.22（mL/g，％）；其醋炙品的含量均在1.00～1.20（mL/g，％）。可見(jiàn)，生乳香與醋炙乳香中乙酸辛酯的含量相差甚微，沒(méi)有顯著差異。原因可能有二：一是市售乳香生品可能都來(lái)自同一國(guó)家，醋炙品為統(tǒng)一炮制；二是醋炙過(guò)程溫度不高、時(shí)間短，僅有少量的乳香珠表面沸點(diǎn)低的揮發(fā)油受熱有所揮發(fā)。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：207.

［2］崔銳，周金云.乳香化學(xué)和藥理的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2003，38（6）：704.

［3］劉青，于宗淵.氣相色譜法測(cè)定乳香揮發(fā)油中乙酸辛酯的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（6）：1416.

［4］盧兗偉，王琦，李勝群，等.氣質(zhì)聯(lián)用法分析炮制對(duì)乳香揮發(fā)油的影響［J］.中成藥，1996，18（11）：20.

［5］宋光林，郭峰，曾廣銘，等.乳香中乙酸辛酯含量的測(cè)定［J］.貴州科學(xué)，2008，26（1）：57.

［6］山東省中藥炮制規(guī)范編委會(huì).山東省炮制規(guī)范［S］.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1990：246.