益氣方對(duì)化療所致小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究

蘇 穎，郭 焱，劉 智，朱 娜，李春子，顧紅纓

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130117）

腫瘤患者術(shù)后放化療造成的毒副作用嚴(yán)重影響術(shù)后治療與康復(fù)，特別是對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能產(chǎn)生嚴(yán)重影響，因此，采取有效措施防治放化療的毒副反應(yīng)，越來越引起關(guān)注。中藥能夠提高放化療患者機(jī)體免疫力，其研究已受到醫(yī)學(xué)界的重視。本研究基于當(dāng)今臨床發(fā)病實(shí)際，采用來自臨床的調(diào)節(jié)放化療所致免疫功能低下的驗(yàn)方益氣方，通過對(duì)小鼠細(xì)胞因子IL-2水平檢測(cè)和小鼠血清免疫球蛋白指標(biāo)觀察益氣方對(duì)經(jīng)環(huán)磷酰胺抑制的免疫功能低下小鼠所具有的免疫重建作用，證明中藥制劑增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的正向調(diào)節(jié)作用，并進(jìn)一步篩選益氣方最佳劑量［2］。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取CAR小鼠，體質(zhì)量18～22g，SPF級(jí)，雌雄各半。由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中心提供。益氣方根據(jù)藥典配方調(diào)配，按湯劑常規(guī)煎藥、過濾。各飲片由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院提供。環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CY）：每支200mg，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)04090321。IL-2與IgG試劑盒：美國(guó)BD公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 取CAR小鼠50只，隨機(jī)分為模型組，空白對(duì)照組，益氣方高、中、低劑量治療組，每組10只，雌雄各半。動(dòng)物室室溫19～21℃，相對(duì)濕度40％～60％，每日光照12h，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物可自由進(jìn)食飲水，實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件符合GB1495-94國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 模型建立 給藥第8天開始對(duì)模型組，益氣方高、中、低劑量治療組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg體質(zhì)量，連續(xù)3d［3］。

1.2.3 分組給藥 給藥組小鼠按劑量分別灌胃給藥，各組給藥劑量均按小鼠臨床等效量計(jì)算所得?？瞻讓?duì)照組與模型組小鼠同時(shí)灌服等容量生理鹽水，連續(xù)15d，給藥體積為30mL/kg體質(zhì)量，每日給藥1次。從第8天起模型組與給藥組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg體質(zhì)量，連續(xù)3d，正常組小鼠同時(shí)注射等體積生理鹽水。

1.2.4 小鼠外周血IL-2、IgG水平測(cè)定 用ELISA法檢測(cè)小鼠外周血IL-2、IgG水平，小鼠眼球取血0.6mL，3 000r/min，離心30min分離血清，放置-20℃冰箱保存［4］。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析兩兩比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 益氣方對(duì)細(xì)胞因子IL-2的影響 見圖1。

2.2 益氣方對(duì)小鼠血清免疫球蛋白（IgG）的影響 見圖2。

圖1 益氣方對(duì)化療小鼠細(xì)胞因子IL-2水平的影響

圖2 益氣方對(duì)化療小鼠血清免疫球蛋白（IgG）水平的影響

3 討論

CY是臨床治療腫瘤的最常用藥物之一，人和動(dòng)物具有較高相似的毒性反應(yīng)，對(duì)藥物反應(yīng)具有一致性，并且重復(fù)性較好，故本實(shí)驗(yàn)采用CY化療制備引起免疫力下降的模型［5］。CY具有細(xì)胞毒性，能抑制細(xì)胞分裂，致骨髓造血功能損壞，引發(fā)多系血細(xì)胞數(shù)量減少。

本實(shí)驗(yàn)選用環(huán)磷酰胺造小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，注射環(huán)磷酰胺后，小鼠的細(xì)胞因子IL-2、IgG的水平指標(biāo)均顯著低于正常小鼠，表明其處于免疫抑制狀態(tài)。注射環(huán)磷酰胺并灌服益氣方的小鼠外周血象較模型組小鼠有明顯提高，說明灌服中藥益氣方能恢復(fù)或改善機(jī)體免疫功能。尤以給予益氣方中劑量治療后，上述各項(xiàng)指標(biāo)顯著增高，且達(dá)到正常對(duì)照水平。IgG在機(jī)體免疫中起主要保護(hù)作用，IL-2有多種免疫增強(qiáng)效應(yīng)，在眾多的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示益氣方可以抵消環(huán)磷酞胺引起的機(jī)體免疫損傷，對(duì)機(jī)體低下的細(xì)胞免疫具有一定的恢復(fù)作用［6］。

益氣方湯劑的主要成分為黃芪、當(dāng)歸、阿膠、川芎、芍藥，具有補(bǔ)氣固表、補(bǔ)血活血作用。方中黃芪含有多種生物活性成分，其中含量最多的為黃芪多糖（APS），其對(duì)機(jī)體特異性和非特異性免疫有廣泛的影響，能明顯增加正常小鼠的脾臟重量，能顯著對(duì)抗CY使動(dòng)物脾臟重量下降的作用，增加小鼠脾臟重量、脾細(xì)胞數(shù)及抗體生成量［7］；當(dāng)歸及其提取物阿魏酸鈉和當(dāng)歸多糖對(duì)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)有明顯的刺激作用，對(duì)免疫功能低下的機(jī)體也有免疫調(diào)節(jié)和恢復(fù)作用。研究表明，由當(dāng)歸提取物制成的當(dāng)歸注射液，每毫升相當(dāng)于含原生藥0.05g，化學(xué)成分主要為丁苯酞，能增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，并能拮抗環(huán)磷酰胺對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用；阿膠可明顯提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力，能增強(qiáng)小鼠自然殺傷細(xì)胞活性，并能促進(jìn)健康人淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，通過補(bǔ)血，提高體弱人群的免疫力，迅速補(bǔ)充疾病過程中消耗氣血陰液，保證一定免疫力，避免其他疾病的再次發(fā)生，是易傷陰液的流行疾病中后期不可缺少的治療藥物?？傊?，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，益氣方劑［8］對(duì)環(huán)磷酞胺所致的免疫損傷小鼠的免疫功能具有一定的恢復(fù)或增強(qiáng)作用。提示益氣加減方可作為各種免疫功能低下疾病或腫瘤放療、化療患者的輔助治療藥物，對(duì)該藥的臨床應(yīng)用有一定的參考價(jià)值。其中，中劑量治療組效果最為顯著，高劑量治療組次之，低劑量治療組效果不明顯。其有關(guān)機(jī)制需進(jìn)一步研究闡明。

［1］王纓，夏為軍.原發(fā)性血小板減少性紫癜模型小鼠血漿內(nèi)皮素水平與加味小柴胡顆粒及其組方的干預(yù)［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，33（11）：6597-6599.

［2］巴德年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用［M］.北京：北京醫(yī)科大學(xué)和協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998：615.

［3］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，1995：130.

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