HPLC法測定沙利度胺片中沙利度胺的含量*

邱 娟

(廣州市藥品檢驗所，廣州 510160)

沙利度胺(thalidomide)化學名為N－(2，6－二氧代－3－哌啶基)－鄰苯二甲酰亞胺，為谷氨酸衍生物，最早作為鎮(zhèn)靜藥和鎮(zhèn)痛藥，主要用于治療妊娠惡心、嘔吐，后因其嚴重的致畸和神經(jīng)毒性副作用而退出市場。隨后，進一步研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺與抗麻風病藥同用可以減少麻風反應［1］，治療各型麻風反應，如結(jié)節(jié)性紅斑，并且對HIV感染、腫瘤引起的惡液質(zhì)、卡伯氏肉瘤、口腔潰瘍以及慢性移植物抗宿主反應病等有療效［2，3］。國內(nèi)未見有文獻報道有關(guān)沙利度胺片含量的分析方法。本文建立了高效液相色譜法用于該藥片劑的含量測定。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜系統(tǒng)，2695型液相色譜泵，2996型DAD檢測器，Millennium工作站。沙利度胺對照品(中國藥品生物檢定所，批號100504－200501)。樣品沙利度胺片(常州制藥廠有限公司，批號分別為0710081、07122714、0710091)，空白輔料(常州制藥廠有限公司提供);乙腈(美國 Merck公司產(chǎn)品，色譜純);磷酸為分析純;水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為 Waters Nova－Pak C18柱(150 mm ×3.9 mm，4 μm);流動相為水 －乙腈 －磷酸(85∶15∶0.1)，檢測波長:237 nm，流速 2.0 ml/min;柱溫 40 ℃，進樣量 20 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取沙利度胺對照品適量，精密稱定，用乙腈制成1 mg/ml的溶液，精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加入磷酸溶液(1→100)10 ml，加水定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取稱本品細粉適量(約相當于沙利度胺0.1 g)，精密稱定，置100 ml量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml置100 ml量瓶中，加入磷酸溶液(1→100)10 ml，加水定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液的制備 取不含沙利度胺的空白輔料約 0.3 g，依“2.2.2”項下方法制備空白輔料溶液。

2.3 專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液及空白輔料溶液，分別進樣20 μl，以“2.1”項下色譜條件進行測定。結(jié)果表明，輔料對沙利度胺峰無干擾。見圖1。

2.4 標準曲線的制備 精密稱取沙利度胺100 mg置100 ml量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，作為貯備液。分別精密吸取貯備液 1、5、8、10、12 和 15 ml置同一100 ml量瓶中，加10 ml磷酸溶液(1→100)，加水定容至刻度，作為線性溶液。按“2.1”項下色譜條件，取線性溶液20 μl進行測定。以峰面積(A)為縱坐標，濃度(C)作為橫坐標，繪制標準曲線，求得沙利度胺回歸方程:A=4.70 ×104C －5.73 ×104(r=1.000)，線性范圍為 10.055 ～150.825 μg/ml。

圖1 對照品(A)供試品(B)及空白輔料(C)HPLC色譜圖

2.5 精密度試驗 精密量取“2.4”項下制備的貯備液10 ml置100 ml量瓶中，加10 ml磷酸溶液(1→100)，加水定容至刻度，作為對照品溶液。依“2.1”項下色譜條件，取20 μl進行測定，得沙利度胺峰面積的RSD為0.1%(n=6)，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 重復性試驗 取同一批號樣品(批號0710081)，按“2.2.2”項下方法制備溶液共6 份，依“2.1”項下的色譜條件，取20 μl進行測定，測得沙利度胺平均含量為99.34%，RSD為0.3%，結(jié)果表明重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 將供試品溶液分別在室溫分別間隔0、2、4、6、10、14、20 和24 h 測定，結(jié)果沙利度胺峰面積的 RSD為0.1%，表明沙利度胺在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 定量限和檢出限 按S/N=10計算沙利度胺的定量限為1.3 ng，按S/N=3計算沙利度胺的檢出限為0.4 ng。

2.9 回收率測定 精密稱取沙利度胺對照品與空白輔料按“2.2.2”項下方法配制成 80%、100%、120%3個濃度水平各3份樣品，依“2.1”項下色譜條件進行測定，計算回收率。結(jié)果平均回收率為100.7%，RSD為0.3%，見表 1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.10 含量測定結(jié)果 按“2.2.2”項下方法制備3批樣品，依“2.1”項下色譜條件測定樣品含量。結(jié)果分別為 99.6%、102.0%、102.3%。

3 討論

本實驗研究為2010年版《中國藥典》修訂工作。此前國外藥典未有收載沙利度胺片含量測定方法，僅國家藥品標準有所收載，采用的是氮測定法，方法繁瑣費時，工作量較大。也有文獻報道采用水解法測定沙利度胺原料及膠囊的含量［4，5］。本實驗比較了高效液相色譜法和氮測定法，3批樣品未有明顯差異，測定結(jié)果表明HPLC法是一種快速、準確、靈敏的分析方法，能夠有效控制沙利度胺片的質(zhì)量。

1 梁銳，田耀文.沙利度胺治療反復發(fā)生性麻風結(jié)節(jié)性紅斑反應的療效觀察.地方病通報，2009，24(6):117

2 徐浩翔.沙利度胺在皮膚科的應用進展.中國麻風皮膚病雜志，2009，25(11):829

3 陳金月.沙利度胺的藥理作用與研究進展.醫(yī)藥導報，2004，23(3):177

4 陳新善，聶渝瓊，宋奕，等.不經(jīng)消化氮測定沙利度胺的含量.中國病案，2003，4(2):43

5 劉海英，陳新善，王秀琴.水解法測定沙利度胺膠囊的含量.解放軍藥學學報，2003，19(6):475