輪狀病毒腸道內(nèi)外感染患兒細胞免疫功能檢測與分析

薛黎明,卞新南,薛 雪

(江蘇省蘇州市市立醫(yī)院東區(qū)兒科,江蘇蘇州,215001)

輪狀病毒(rotavirus,RV)是秋、冬季小兒腹瀉最常見的病原體。人類感染輪狀病毒后由于小腸上皮細胞黏膜受損導(dǎo)致細胞對體液和電解質(zhì)控制能力喪失,腸道分泌與吸收能力失衡引起腹瀉[1]。并引起全身多器官損害,如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、循環(huán)血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等損害[2]。其確切損傷機制尚不明確,可能與細胞免疫功能有關(guān)。為了解輪狀病毒腸炎患兒細胞免疫功能變化,對輪狀病毒腸炎患兒細胞免疫狀況進行檢測,現(xiàn)報告如下。

1 對象和方法

1.1 對象

選取2009年10月～2010年3月 40例因RV腸炎住院治療的患兒,診斷標準依據(jù)《實用兒科學(xué)》第7版,大便RV檢測(ELISA法)為陽性。其中20例為RV腸道內(nèi)感染患兒,男12例,女8例;平均年齡(32.7±6.25)個月。另20例為RV腸炎并發(fā)腸道外感染(并發(fā)呼吸道感染10例,心肌酶譜異常6例,肝功能異常4例),男 14例,女6例;平均年齡(33.1±6.18)個月。對照組20名為我院兒保門診體檢的健康兒童,男11名,女9名;平均年齡(33.2±5.96)個月;近2周內(nèi)無腸道感染,無過敏性及免疫相關(guān)的疾病。各組年齡、性別差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK細胞檢測:花青藻紅素-5(PE-CY5)標記抗CD3+抗體,異硫氰酸熒光素(FITC)標記CD4+抗體,藻紅朊(PE)標記抗 CD8+抗體、CD16+CD56+抗體和CD25+抗體,花青藻紅素-5(PE-CY5)標記抗CD19+抗體。取外周血,肝素抗凝,每管 50 μ L全血中加入不同熒光素標記的抗體,輕輕混勻后暗室下孵育,然后加入溶血素(OptiLyse)裂解紅細胞,輕輕混勻后再次暗室下孵育,經(jīng)離心、洗滌后流式細胞儀上進行分析。試劑盒由美國BD公司提供,儀器為美國BECKMAN COULTER公司的Epics XL.MCL流式細胞儀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計軟件包為SAS 8.0,計數(shù)資料的比較采用四格表的χ2檢驗或Fisher確切概率法,計量資料以±SD表示,同時進行方差齊性檢驗,多組比較采用單因素方差分析,各組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

同正常對照組比較,RV腸炎并發(fā)腸道外感染組患兒外周血CD4+、CD4+CD25+T淋巴細胞及CD4+/CD8+比值均增高,而 NK細胞下降;RV腸炎組患兒外周血僅NK細胞下降。RV腸炎并發(fā)腸道外感染組患兒 CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴細胞、CD19+B淋巴細胞比腸道內(nèi)感染組患兒為高,見表1。

表1 3組患兒細胞免疫功能檢測比較

3 討 論

RV的A、B、C組均可感染人類,A組是嬰幼兒、年幼動物的重要致病原。它可以在小腸黏膜分化上皮細胞內(nèi)復(fù)制,導(dǎo)致急性、自限性腹瀉,其發(fā)病率和嚴重程度居秋冬季腹瀉的首位。全球每年約有114億人發(fā)生RV引起的腹瀉,并導(dǎo)致大約80萬兒童死亡。RV不僅可以引起腸道內(nèi)感染,而且發(fā)病早期即可發(fā)生病毒血癥并引起全身多器官損害。研究認為可能與RV血癥及感染后的免疫損傷有關(guān)[3-5],但具體的發(fā)病機制目前還不清楚,有待進一步的深入研究。

免疫機制研究發(fā)現(xiàn),有免疫缺陷的患兒感染RV后可在腸道外如肝臟和腎臟等臟器內(nèi)檢測到復(fù)制的病毒抗原,這提示腸道外發(fā)病機制可能與機體免疫功能低下有關(guān)[6-7]。Van Cott等[8]通過對口服接種不同的BALB/c小鼠感染RV的研究發(fā)現(xiàn),去除T淋巴細胞和B淋巴細胞受體基因的小鼠糞便RV排放量明顯多于僅去除T淋巴細胞受體基因的小鼠,而且后者的病毒排放時間縮短,這表明 RV感染與免疫機制密切相關(guān)。T淋巴細胞不僅是機體免疫反應(yīng)的效應(yīng)細胞,而且也是重要的免疫調(diào)節(jié)細胞,機體的免疫平衡的維持依賴于T淋巴細胞亞群的相互協(xié)調(diào)作用,其中CD4+和CD8+T淋巴細胞相互誘導(dǎo),相互制約,形成T淋巴細胞網(wǎng)絡(luò),調(diào)節(jié)機體正常的免疫功能。本研究結(jié)果表明,RV腸炎并發(fā)腸道外感染患兒存在明顯的細胞免疫功能紊亂及細胞調(diào)節(jié)免疫紊亂。與正常對照組相比,雖然總T淋巴細胞(CD3+TC)沒有變化,但CD4+T淋巴細胞活化亢進,主要表現(xiàn)為CD4+T淋巴細胞的增高,而CD8+T細胞無變化,相應(yīng)的CD4+/CD8+比值也顯著增高,表明CD4+T淋巴細胞增高對機體的免疫反應(yīng)起到過度輔助作用而產(chǎn)生免疫損傷。另一方面,機體通過調(diào)節(jié)性 T淋巴細胞(CD4+CD25+TC,Treg)來抑制T淋巴細胞的過度活化。因此調(diào)節(jié)性T淋巴細胞比例也隨之升高。另外,RV腸炎并發(fā)腸道外感染患兒NK細胞也降低。NK細胞是機體固有免疫的組成細胞之一,在清除病毒感染中起重要作用。NK細胞活化后還通過分泌INF-γ、IL-2等細胞因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,使機體產(chǎn)生Th1型免疫反應(yīng)[9]。因此RV腸炎并發(fā)腸道外感染患兒Th1型免疫反應(yīng)可能受到抑制,對CD8+殺傷性T細胞(CD8+T)誘導(dǎo)增生減弱,從而導(dǎo)致清除病毒的能力下降,這與RV病灶擴散或病程延長存在一定關(guān)系。

RV腸炎腸道內(nèi)感染患兒與正常對照組比較僅NK細胞偏低,T、B淋巴細胞未見明顯異常。而RV腸炎并發(fā)腸道外感染患兒總T淋巴細胞、CD4+T細胞以及調(diào)節(jié)性T細胞、總B淋巴細胞均比RV腸道內(nèi)感染患兒為高,RV腸炎并發(fā)腸道外感染患者存在明顯的細胞免疫功能紊亂,這提示RV感染后癥狀的輕重及是否向腸道外播散可能與機體的細胞免疫機制有關(guān)。

[1]馬曉燕,仲海娟.輪狀病毒抗原檢驗結(jié)果189例分析[J].中華現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)雜志,2005,3(20):2158.

[2]王 斌,封志純.重癥輪狀病毒感染[J].小兒急救醫(yī)學(xué),2005,12(5):344.

[3]魏升云,張淑珍.輪狀病毒腸炎研究進展[J].國外醫(yī)學(xué)兒科分冊,2004,22(6):409.

[4]周 瑞,陳蘭舉,陳名武.輪狀病毒感染引起腸道內(nèi)外發(fā)病機制的研究進展[J].國外醫(yī)學(xué)兒科學(xué)分冊,2005,32(6):354.

[5]姚英民,歐乃群,李 寧.小兒輪狀病毒血癥與臨床發(fā)病特點關(guān)系初探[J].中華兒科雜志,2005,43(11):867.

[6]李 寧,姚英民.輪狀病毒多系統(tǒng)感染2例分析[J].中華兒科雜志,2002,40:141.

[7]姚英民,歐巧群,李 寧.小兒輪狀病毒血癥與臨床發(fā)病特點關(guān)系初探[J].中華兒科雜志,2005,43(11):867.

[8]Van Cott J L,McNeal M M,Flint J,et al.Role for T cellindependent B cell activity in the resolution of primary rotavirus infection in mice[J].Eur J Immunol,2001,31(11):3380.

[9]陳慰峰,金伯泉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:94.