小兒肺炎患者治療前后單核細(xì)胞膜表面CD14和HLA－DR的表達(dá)

周國忠 劉淑梅 邵曉麗 黃 蓉

肺炎是指不同病原體或其他因素等所引起的包括終末支氣管、肺泡腔及肺間質(zhì)在內(nèi)的肺實(shí)質(zhì)炎癥。是兒童時(shí)期重要的常見病，是我國住院小兒死亡的第1位原因，嚴(yán)重威脅小兒健康，被衛(wèi)生部列為小兒四病防治之一［1］。常見的病原體有:細(xì)菌、病毒、真菌、原蟲、支原體和衣原體等。以發(fā)熱、咳嗽、氣促、呼吸困難和肺部固定性中細(xì)濕啰音為主要臨床表現(xiàn)。小兒肺炎病情的嚴(yán)重程度與CD14+/HLA－DR+相關(guān)的文章報(bào)道較少。本研究檢測了94例小兒肺炎患者外周血單核細(xì)胞膜表面HLA－DR的表達(dá)，并探討其在治療前后的變化。

資料與方法

1.一般資料:選擇2009年1月～2010年4月來筆者醫(yī)院小兒科就診的肺炎患者，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的94例［2］。按其嚴(yán)重程度分為重癥(24例)，中癥(36例)，輕癥(34例)。其中男性61例，女性33例，年齡1個(gè)月～14歲，平均年齡4.06歲。

2.標(biāo)本采集:受試者分別于治療前即未經(jīng)任何治療時(shí)及治療后7～10天采集外周血標(biāo)本2ml(EDTA －K2抗凝)。

3.方法:(1)細(xì)胞表形標(biāo)記:100μl抗凝全血加10μl CD14－FITC和10μl HLA－DR－PE，檢測單核細(xì)胞膜表面HLADR的表達(dá);100μl抗凝全血加 10μl CD4－FITC/CD8－PE/CD3－PC5，檢測CD3+CD4+、CD3+CD8+的T細(xì)胞;100μl EDTA抗凝全血加10μl CD(16+56)－FITC/CD19 －PE/CD3－PC5，檢測NK細(xì)胞和B細(xì)胞。并做同型陰性對照。室溫孵育15min，上Q－PREP制備標(biāo)本，待測。(2)流式細(xì)胞儀分析:首先用Flow－check進(jìn)行光路－流路校準(zhǔn)，所有熒光信號以亮異系數(shù)均＜2%，以“門技術(shù)”確定淋巴細(xì)胞群，再行陰性對照及顏色補(bǔ)償，每個(gè)樣本檢測5000個(gè)細(xì)胞。全部數(shù)據(jù)由流式細(xì)胞儀(美國Beckman Coulter公司提供，型號為EPICS@XL)及軟件SYSTEM TMⅡEOFT－WAREV3.0獲得和分析。(3)單克隆抗體和試劑:本文所用單抗(包括CD14－FITC、HLADR－PE、IgG1－FITC/IgG1－PE、CD4－FITC/CD8－PE/CD3－PC5、CD16+56－FITC/CD19 －PE/CD3－PC5、IgG1－FITC/IgG1－PE/IgG1－PC5)均為法國Immunotech公司產(chǎn)品，全血溶血試劑購自美國Coulter公司。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 11.5軟件包對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析處理。

結(jié) 果

1.小兒肺炎患者治療前與治療后外周血細(xì)胞膜表面抗原表達(dá)見表1，由表1可見，CD14+細(xì)胞百分率降低，有顯著性差異(P＜0.05)，CD14+HLADR+細(xì)胞百分率降低，有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 小兒肺炎患者治療前、后外周血細(xì)胞膜表面抗原表達(dá)(，%)

表1 小兒肺炎患者治療前、后外周血細(xì)胞膜表面抗原表達(dá)(，%)

與治療前比較，★P ＜0.05

2.肺炎患者重癥組、中癥組與輕癥組外周血單核細(xì)胞膜表面CD14和HLA－DR表達(dá)見表2。由表2可見，CD14+和CD14+/HLA－DR+細(xì)胞百分率都降低，有顯著性差異，P＜0.05;重癥組與中癥組相比，CD14+細(xì)胞百分率無顯著性差異，P＞0.05;CD14+/HLA－DR+細(xì)胞百分率降低有顯著性差異，P ＜0.05。

表2 肺炎患者重癥組、中癥組與輕癥組外周血單核細(xì)胞膜表面CD14和HLA－DR的表達(dá)(，%)

表2 肺炎患者重癥組、中癥組與輕癥組外周血單核細(xì)胞膜表面CD14和HLA－DR的表達(dá)(，%)

與輕癥組比較，★P ＜0.05;與中癥組比較，▲P ＜0.05

3.腫炎患者治療前、后外周血淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果見表3。由表3可見，治療后與治療前相比，CD3+CD4+細(xì)胞百分率增高有顯著性差異，P＜0.05;CD3+CD8+細(xì)胞百分率降低有顯著性差異，P＜0.05;CD16+CD56+和CD19+細(xì)胞百分率無顯著性差異，P＞0.05。

表3 肺炎患者治療前、后外周血淋巴細(xì)胞亞群(，%)

表3 肺炎患者治療前、后外周血淋巴細(xì)胞亞群(，%)

與治療前比較，★P ＜0.05

討 論

小兒由于其氣管、支氣管管腔相對狹窄，黏液分泌少，纖毛運(yùn)動(dòng)差，肺彈力組織發(fā)育不全等呼吸系統(tǒng)解剖生理上的特點(diǎn)使小兒易受病原微生物的感染。而嬰幼兒階段本身免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，特異性免疫功能較差，也是其中的一個(gè)重要原因［3］。單核－吞噬細(xì)胞系統(tǒng)是溝通天然免疫和特異性免疫系統(tǒng)的橋梁。CD14是單核細(xì)胞的膜表面分型標(biāo)志，也是發(fā)揮抗感染作用的主要成分之一。CD14是革蘭陰性菌內(nèi)毒素脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)高親和受體，在單核－吞噬細(xì)胞特異性免疫中起到了關(guān)鍵的信號傳導(dǎo)作用。LPS等細(xì)菌產(chǎn)物通過CD14的介導(dǎo)激活M－φ釋放細(xì)胞因子，即使完整的G－菌也能通過CD14的途徑激活M－φ發(fā)揮抗感染的作用［4］。單核細(xì)胞發(fā)揮抗感染作用的另一主要成分是HLA－DR，是參與外來抗原加工、處理和遞呈的關(guān)鍵分子。在某些免疫性疾病、傳染性疾病或內(nèi)分泌疾病均可發(fā)現(xiàn)患者抗原遞呈細(xì)胞表面HLA－Ⅱ類抗原表達(dá)的改變，從而通過影響抗原遞呈功能參與疾病的發(fā)生與發(fā)展［5］。而單核細(xì)胞的HLA－DR陽性表達(dá)是MHC－Ⅱ活性表達(dá)中最強(qiáng)烈的，因此臨床上可以通過檢測HLADR表達(dá)來判定單核細(xì)胞功能反應(yīng)，繼而判斷機(jī)體的免疫狀態(tài)［6］。

CD14+細(xì)胞比率代表了外周血中單核－吞噬細(xì)胞的百分比，而CD14+/HLA－DR+細(xì)胞百分率則表示活化的單核－吞噬細(xì)胞的含量。本研究顯示，小兒肺炎患者的外周血CD14+細(xì)胞顯著降低，治療緩解后會(huì)上升。林洪遠(yuǎn)等［7］認(rèn)為CD14表達(dá)的降低是免疫抑制的表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)中CD14+/HLA－DR+細(xì)胞也呈顯著性降低，說明單核－吞噬細(xì)胞的抗原遞呈功能受到抑制，故此可以得出小兒肺炎患者的免疫系統(tǒng)受到抑制。與輕癥組相比，重癥組、中癥組的CD14+和CD14+/HLA－DR+細(xì)胞含量都降低(P ＜0.05)，說明重癥組、中癥組免疫抑制程度更嚴(yán)重;重癥組與中癥組相比，CD14+/HLA－DR+細(xì)胞百分率降低有顯著性差異，而CD14+細(xì)胞無顯著性差異，外周血中的單核－吞噬細(xì)胞的含量沒有顯著差異，而活化的單核－吞噬細(xì)胞卻有顯著差異，可以在一定程度上說明外周血單核細(xì)胞數(shù)量在小兒患該病時(shí)會(huì)減少，但減少到一定值后就趨于穩(wěn)定。

從表1和表2可以看出，小兒肺炎患者的外周血CD14/HLA－DR的表達(dá)從一開始就下降，說明該病患兒免疫系統(tǒng)在早期就受到一定程度的抑制，這也許與小兒免疫功能不完善有關(guān)。隨著病情的加重，單核－吞噬細(xì)胞的活性受到抑制的程度也加重，提示CD14+/HLA－DR+的百分比可以用來反映小兒肺炎的嚴(yán)重程度，可以作為本病嚴(yán)重程度的輔助診斷。文強(qiáng)等［4］發(fā)現(xiàn)肝移植的患者 CD14+/HLA－DR+的變化，對判斷機(jī)體免疫功能十分重要。Lekkou等［8］研究認(rèn)為CD14+單核細(xì)胞HLA－DR表達(dá)不僅是入院時(shí)早期預(yù)后指標(biāo)，也是動(dòng)態(tài)評價(jià)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)提示，CD14+/HLA－DR+的百分比對小兒肺炎的預(yù)后診斷也具有較大價(jià)值。

單核細(xì)胞表面的HLA－DR分子與外來抗原形成的復(fù)合物，由CD4+T輔助細(xì)胞識別并啟動(dòng)免疫應(yīng)答和增殖。其中CD4+Th1細(xì)胞的主要效應(yīng)功能是增強(qiáng)吞噬細(xì)胞介導(dǎo)的抗感染免疫。實(shí)驗(yàn)中，CD14+/HLA－DR+的表達(dá)下降表明單核－吞噬細(xì)胞的抗原遞呈能力下降，可能導(dǎo)致治療前CD 4+T輔助細(xì)胞減少。而CD4+T輔助細(xì)胞的減少，又反過來影響單核細(xì)胞 CD14+/HLA－DR+的表達(dá)。治療后 CD14+/HLA－DR+的表達(dá)上升，CD4+T輔助細(xì)胞也增多，可進(jìn)一步說明它們間的相關(guān)性。在治療前CD8+T細(xì)胞數(shù)量明顯高于治療后，可能因?yàn)榧?xì)胞毒T細(xì)胞的增殖活化，抑制了機(jī)體的免疫功能，導(dǎo)致CD14+/HLADR+表達(dá)、CD4+T細(xì)胞顯著減少。

綜上所述，小兒肺炎患者的免疫系統(tǒng)在早期就受到抑制，抑制程度與病情的嚴(yán)重程度呈一定的正相關(guān)性，且CD14+/HLA－DR+的表達(dá)可以用來反映小兒肺炎的嚴(yán)重程度，可作為本病嚴(yán)重程度的輔助診斷。

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4 文強(qiáng)，蘇磊，劉志鋒，等.肝移植術(shù)后CD14+單核細(xì)胞人白細(xì)胞DR抗原表達(dá)率的變化及其意義［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(14):2251－2253

5 周靜，周蘇明，程蘊(yùn)琳.白細(xì)胞抗原－DR的表達(dá)和年齡及感染的關(guān)系［J］.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2005，24(8):634 －636

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7 林洪遠(yuǎn)，郭旭生，姚詠明，等.CD14(+)單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原－DR預(yù)測膿毒癥預(yù)后及指導(dǎo)免疫調(diào)理治療的初步臨床研究［J］.中國危重病急救醫(yī)學(xué)，2003，15(3):135－138

8 Lekkou A，Karakantza M，Mouzaki A，et al.Cytokine Production and monocyte HLA－DR expression as predictors of outcome for patients with community－acquired severe infections［J］.Clin Diagn Lab Imumunol，2004，11(1):161 －167