HPLC法測(cè)定奧硝唑乳膏中奧硝唑的含量*

張玉琪,張國(guó)華,董偉林

(⒈天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院，天津 300100； ⒉天津市安定醫(yī)院，天津 300222； 3.天津醫(yī)科大學(xué)新科技應(yīng)用研究所，天津 300070)

奧硝唑(ornidazole)是一種繼甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑類(lèi)衍生物，具有良好的抗厭氧菌和抗滴蟲(chóng)作用[1]。奧硝唑乳膏是天津醫(yī)科大學(xué)新科技應(yīng)用研究所研制中的新制劑，臨床主要應(yīng)用于治療痤瘡及毛囊蟲(chóng)引起的皮膚感染。參考文獻(xiàn)資料[2]應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制，建立了奧硝唑含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1儀器 美國(guó)科美特高效液相色譜儀(6000 LDI精密恒流泵，6000PVW紫外/可見(jiàn)檢測(cè)器，Rheodyne 7725i型進(jìn)樣閥，Anastar色譜工作站)；Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm，天津市琛航科學(xué)儀器有限公司)；BFX5-320型臺(tái)式離心機(jī)(河北省安新縣白洋離心機(jī)廠)；MSB010.CX 2.5型臺(tái)式高速離心機(jī)(SANYO)；三環(huán)牌YKH-1型液體快速混合器(江西醫(yī)療器械廠)；PB153-S型電子分析天平(瑞典梅特勒-托利多)；C-9860A超聲波清洗器(天津市科貝爾光電技術(shù)有限責(zé)任公司)；HGC-12A氮吹儀(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)；Millipore-Q超純水裝置；20～200 μl微量加樣器(上海大龍醫(yī)療有限公司)；100 μl微量進(jìn)樣器(上海高鴿工貿(mào)有限公司)。

1.2試藥 奧硝唑?qū)φ掌?中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100608-200301)；奧硝唑乳膏(天津醫(yī)科大學(xué)新科技應(yīng)用研究所，批號(hào)20090512、20090815、20091116)；甲硝唑?qū)φ掌?內(nèi)標(biāo)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100191-200305)；甲醇(色譜純)；超純水；其余試劑均為市售分析純。

1.3處方 奧硝唑50 g，硬脂酸120 g，羊毛脂20 g，凡士林230 g，甘油50 g，三乙醇胺20 g，羥苯乙酯2 g，蒸餾水適量共制成1 000 g。

2 方法和結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)312 nm，流動(dòng)相：甲醇-水(30∶70)，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣量20 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取奧硝唑乳膏1.0 g，置于200 ml燒杯中，加入適量的流動(dòng)相于60 ℃水浴上加熱攪拌提取20 min，然后再于超聲波提取器上超聲提取10 min，在冰浴中冷卻后移至100 ml量瓶中，流動(dòng)相定容后，用微孔濾膜過(guò)濾器過(guò)濾，棄去初濾液，續(xù)濾液供含量測(cè)定用，為奧硝唑(0.5 mg/ml)供試品儲(chǔ)備液。再精密量取奧硝唑(0.5 mg/ml)供試品儲(chǔ)備液0.1 ml至100 ml量瓶中用流動(dòng)相定容，即得供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱(chēng)定于105 ℃干燥至恒重的奧硝唑?qū)φ掌?0 mg，置于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容，制成含奧硝唑1 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3陰性對(duì)照液的制備 取硬脂酸、羊毛脂、凡士林(油相)和甘油、三乙醇胺、羥苯乙酯及蒸餾水(水相)分別置適當(dāng)容器中，加熱至熔化或溶解，并保持70 ℃左右，在攪拌下將水相緩緩加入油相中，并按同一方向攪拌至凝，即得空白乳膏基質(zhì)。再精密稱(chēng)取空白乳膏基質(zhì)1.0 g，置于200 ml燒杯中，加入適量的流動(dòng)相于60 ℃水浴上加熱攪拌提取20 min，然后再于超聲波提取器上超聲提取10 min，在冰浴中冷卻后移至100 ml量瓶中，流動(dòng)相定容后，用微孔濾膜過(guò)濾器過(guò)濾，棄去初濾液，續(xù)濾液為陰性對(duì)照液。

2.2.4內(nèi)標(biāo)液的配制 精密稱(chēng)定于105 ℃干燥至恒重的甲硝唑?qū)φ掌? mg，置于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容，制成含甲硝唑0.5 mg/ml的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3奧硝唑乳膏標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制備 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，分別置于10 ml量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)0.1 ml，用陰性對(duì)照液定容后，得奧硝唑濃度分別為0.5、1.0、5.0、10、50 μg/ml，含內(nèi)標(biāo)5 μg/ml對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20 μl，以?shī)W硝唑和內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)，以?shī)W硝唑濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.009 1X+0.045 8(r=0.997 2)；結(jié)果表明乳膏劑中奧硝唑在0.5～50 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取陰性對(duì)照溶液、陰性對(duì)照溶液中加入內(nèi)標(biāo)、陰性樣品液中加入奧硝唑?qū)φ掌泛秃瑑?nèi)標(biāo)的奧硝唑乳膏樣品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣，結(jié)果上述諸因素不干擾奧硝唑的測(cè)定，見(jiàn)圖1。

1.內(nèi)標(biāo) 2.奧硝唑

2.5精密度試驗(yàn) 取同一濃度對(duì)照品溶液, 在相同色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果奧硝唑峰面積的RSD為0.42%(n=5)。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批(批號(hào)20091116)奧硝唑乳膏樣品，按“2.2.1”項(xiàng)下操作，得奧硝唑乳膏樣品供試液，并依“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、12 h時(shí)進(jìn)樣, 測(cè)定其峰面積，結(jié)果奧硝唑的RSD為1.20%(n=7)，表明樣品供試液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批(批號(hào)20091116)奧硝唑乳膏樣品，按“2.2.1”項(xiàng)下操作，得奧硝唑乳膏樣品供試液，并依“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定其含量，結(jié)果測(cè)得奧硝唑平均含量為4.94%, RSD為1.25%(n=6)。

2.8加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的奧硝唑乳膏5份，分別精密加入3個(gè)濃度水平的奧硝唑儲(chǔ)備液適量,按“2.2.2”項(xiàng)下操作，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣計(jì)算奧硝唑加樣回收率，得平均回收率為100.97%，RSD為1.01%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 奧硝唑乳膏加樣回收率

2.9樣品測(cè)定 取3批奧硝唑乳膏，分別按“2.2.1”項(xiàng)下處理后，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定其含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1提取溶劑及方法的選擇 選擇樣品處理方法時(shí)，參考文獻(xiàn)資料[3，4],比較了幾種處理方法， 實(shí)驗(yàn)證明，本樣品處理方法， 其分離度好， 無(wú)干擾， 峰信號(hào)較強(qiáng)。

3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 精密稱(chēng)定于105 ℃干燥至恒重的奧硝唑?qū)φ掌愤m量，用乙醇溶解制成含奧硝唑10 μg/ml的對(duì)照品溶液；另取乳膏劑基質(zhì)適量，用乙醇溶解，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以乙醇作空白，分別在200～400 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,奧硝唑在波長(zhǎng)312 nm 處有最大吸改，空白基質(zhì)在此波長(zhǎng)處對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，靈敏度高，可準(zhǔn)確測(cè)定奧硝唑， 故測(cè)定波長(zhǎng)選定312 nm。

1 閔潔,王澤華.口服奧硝唑治療滴蟲(chóng)性陰道炎臨床療效和安全性評(píng)價(jià).中華醫(yī)學(xué)雜志,2002，26(2):113

2 陳慶偉，阮寶強(qiáng).高效液相色譜法測(cè)定奧硝唑膠囊中奧硝唑的含量.海峽藥學(xué), 2008，(4): 55

3 安媛，孫德江.奧硝唑口腔膜劑的制備及質(zhì)量控制.中國(guó)藥房，2005，16(12):908

4 呂紅，彭彥，陳萍，等. 高效液相色譜法測(cè)定奧硝唑凝膠中奧硝唑的含量.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，7(4)：469