獸藥中非法添加硝基咪唑類藥物的檢查方法

1 適用范圍

1.1 本方法適用于鹽酸多西環(huán)素可溶性粉和硫酸新霉素可溶性粉中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢查。

1.2 用于其他獸藥制劑中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑檢查時，需進(jìn)行空白試驗(yàn)和檢測限測定。

2 檢查方法

照高效液相色譜法（《中國獸藥典》一部附錄0512）測定。

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent EclipsePlus C18 4.6 mm×250 mm，5 μm 色譜柱或其他等效的色譜柱）；以甲醇為流動相A，以水為流動相B，流速為每分鐘0.8 mL，按表1進(jìn)行線性梯度洗脫；柱溫25 ℃；二極管陣列檢測器檢測，采集波長范圍為200～400 nm，分辨率為1.2 nm，記錄320 nm 波長處的色譜圖。供試品溶液中羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑和異丙硝唑的色譜峰與相鄰色譜峰的分離度應(yīng)符合要求。

表1 線性梯度洗脫程序

2.2 測定法 取供試品1.0 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理10 min，冷卻至室溫，濾過；取續(xù)濾液5.0 mL，置50 mL 量瓶中，用30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。分別取羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑和異丙硝唑?qū)φ掌犯骷s25 mg 置50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度；取適量，用30%甲醇溶液定量稀釋制成每1 mL中各含約50 μg的溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品各20 μL，分別注入液相色譜儀，同時記錄色譜圖和光譜圖。必要時，可調(diào)整供試品溶液或?qū)φ掌啡芤旱臐舛龋箖烧叻迕娣e接近。通過與對照品溶液色譜圖保留時間、光譜圖的對比，確定供試品中是否含有羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。

3 結(jié)果判定

3.1 供試品溶液色譜圖中如出現(xiàn)與相應(yīng)對照品溶液色譜圖中保留時間一致的色譜峰（差異不大于±5%），且為單一物質(zhì)峰；在規(guī)定的采集波長范圍內(nèi)，兩者紫外光譜圖匹配，且最大吸收波長一致（差異不大于±2 nm），判定為檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。

3.2 供試品溶液色譜圖中峰保留時間與相應(yīng)對照品峰相同，但峰面積小于檢測限峰面積，判定為未檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。

4 檢測限

本方法中羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢測限為1 mg/g。