抗風(fēng)濕類中成藥和保健食品中非法添加雙氯芬酸鈉快速篩查方法研究

池浩波， 張夢(mèng)虹， 李國毅， 黃冬梅

(廣東省潮州市藥品檢驗(yàn)所，廣東潮州 521011)

我國地理緯度跨度大，高寒、高濕地區(qū)多，特別是少數(shù)民族居住的氣候條件惡劣的山區(qū)。同時(shí)，我國農(nóng)村人口較多，聚居及生活工作在高寒、高濕環(huán)境，感受風(fēng)寒濕三氣的機(jī)會(huì)較多，因此具有較高的風(fēng)濕病發(fā)病率［1］。

千百年來，人們一直同風(fēng)濕病進(jìn)行頑強(qiáng)的斗爭(zhēng)，積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)過數(shù)千年的探索和實(shí)踐，中醫(yī)對(duì)風(fēng)濕病的認(rèn)識(shí)、治療得到進(jìn)一步的發(fā)展，并形成了系統(tǒng)的中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)理論，中成藥是由中草藥直接加工而成，方便病人服用，在規(guī)定的劑量?jī)?nèi)中藥副作用少，但中藥的藥性緩和，所以藥效也比化學(xué)藥(俗稱西藥)要慢一些。西藥療效較為明顯，但同時(shí)副作用也比中藥大一些，因此大多數(shù)西藥都不適合長(zhǎng)期服用，必須在醫(yī)生的指導(dǎo)下服用［2］。

由于用于治療風(fēng)濕疾病的化學(xué)藥雙氯芬酸鈉價(jià)格低廉，且有一定的控制風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的功效。為了迎合患者既想快速治療風(fēng)濕疾病又想副作用小的心理，近年來雙氯芬酸鈉屢被一些不法商家加入到治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕疾病的中成藥和保健食品中，并被標(biāo)榜為所謂的“祖?zhèn)髅胤健薄ⅰ凹冎兴幹苿被颉疤烊皇称贰?，以增?qiáng)其療效，從中牟取暴利?；颊咴诓恢榈那闆r下服用了含有雙氯芬酸鈉的中成藥或保健食品后，癥狀看似緩解了，認(rèn)為有“療效”，其實(shí)往往會(huì)掩蓋病情，有可能產(chǎn)生嚴(yán)重的后果，危害身體健康，如長(zhǎng)期口服非甾體抗炎藥的患者中，大約有10% ～25%的病人發(fā)生消化性潰瘍，嚴(yán)重的并發(fā)癥會(huì)導(dǎo)致出血或穿孔;能導(dǎo)致10%的患者出現(xiàn)肝臟輕度受損的生化異常;可引起尿蛋白、管型，尿中可出現(xiàn)紅、白細(xì)胞等，嚴(yán)重者可引起間質(zhì)性腎炎等;有的會(huì)造成骨質(zhì)疏松或肌肉萎縮等嚴(yán)重不良反應(yīng)，使得病情惡化，甚至導(dǎo)致癱瘓［3］。

為了凈化我國的藥品市場(chǎng)，打擊不法分子的囂張氣焰，保護(hù)廣大人民群眾的身體健康，本實(shí)驗(yàn)建立一種簡(jiǎn)單、快速、高效、可靠的篩查方法，以滿足基層藥品現(xiàn)場(chǎng)打假的需求。

1 擬定快速篩查方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.1 取樣量 各種口服制劑均取一次服用量，片劑可壓碎或剪碎(紅色糖衣片應(yīng)除去糖衣);膠囊劑取內(nèi)容物;丸劑研碎或剪碎;口服液直接取服用量;酊劑取約1 mL。

1.2 供試液的制備 取經(jīng)壓碎或剪碎的一次服用量固體樣品于20 mL具塞試管中，加入乙醇約10 mL，密塞，上下強(qiáng)烈振搖約1 min，濾過，取續(xù)濾液約1 mL作為供試液。

1.3 檢驗(yàn)方法與結(jié)果判斷 在供試液中加入40%硝酸溶液約1 mL(注意加入硝酸溶液時(shí)不要振搖)，約40～50 s后檢視，如試管下部顯紅棕色，則可判斷供試品中含有雙氯芬酸鈉;如試管下部不變色或顏色變淺，則不含雙氯芬酸鈉。

2 確證方法 采用薄層色譜法和高效液相色譜法。

2.1 薄層色譜法 取一次服用量的樣品于具塞錐形瓶中，加乙醇10 mL，振搖提取1 min，濾過，濾液作為供試品溶液;另取雙氯芬酸鈉對(duì)照品適量，加乙醇制成每1 mL含2.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版附錄Ⅵ B)試驗(yàn)［4］，分別吸取上述兩種溶液各 1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，以乙酸乙酯－乙醇(15∶5)為展開劑［5］，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 TLC薄層鑒別色譜圖

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 精密稱取雙氯芬酸鈉對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL中含雙氯芬酸鈉約10 μg的溶液，于400～190 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在204.4 nm與281.2 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，參考有關(guān)文獻(xiàn)［6］，故選擇281 nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性 參考有關(guān)文獻(xiàn)［6－7］，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱的色譜柱，以二極管陣列式檢測(cè)器(DAD)為檢測(cè)器，以甲醇－0.2%冰乙酸溶液(3∶2)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm，進(jìn)樣量為10 μL，雙氯芬酸鈉的理論塔板數(shù)不低于10 000，與其它色譜峰的分離度大于1.5。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取雙氯芬酸鈉對(duì)照品約15 mg，置100 mL量瓶中，加適量甲醇振搖使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 若供試品為片劑(如糖衣片應(yīng)去糖衣)，稱量后研磨粉碎，然后稱取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為膠囊劑，取出內(nèi)容物研磨粉碎，然后稱取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為丸劑，稱量后研碎或剪碎，然后稱取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為口服液，直接量取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為酊劑，直接量取約1 mL的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

上述溶液經(jīng)微孔濾膜過濾后，分別吸取10 μL，注入液相色譜儀，若供試品色譜峰保留時(shí)間與雙氯芬酸鈉對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間一致，且供試品溶液與對(duì)照品溶液具有相同的紫外光譜圖，則初步確證供試品中含有雙氯芬酸鈉。HPLC－DAD 圖譜見圖2～5。

圖2 雙氯芬酸鈉對(duì)照品HPLC圖譜

圖3 陽性樣品HPLC圖譜

圖4 雙氯芬酸鈉對(duì)照品DAD圖譜

圖5 陽性樣品DAD圖譜

3 結(jié)果確證

根據(jù)廣東省藥品檢驗(yàn)所制訂的《中成藥和保健食品中擅自添加化學(xué)成分的快速篩查方法指導(dǎo)原則與技術(shù)要求(試行)》的要求對(duì)快速篩查方法總結(jié)見表1。

表1 快速篩查方法總結(jié)

可以看出，本快速篩查方法操作簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高，不需要專門的設(shè)備，適合于現(xiàn)場(chǎng)操作，能滿足基層監(jiān)督檢驗(yàn)需要。

4 討論

4.1 A試液為乙醇，B試液為40%硝酸溶液，選用乙醇作為化學(xué)溶劑，是因?yàn)殡p氯芬酸鈉的溶解性，選擇40%硝酸溶液作為顯色劑是因?yàn)殡p氯芬酸鈉能在稀硝酸溶液中發(fā)生硝化作用，生成紅棕色物質(zhì)。

4.2 有些中成藥或保健品，本身有較深的顏色，采用該方法不會(huì)影響判斷結(jié)果，如果含有雙氯芬酸鈉，則顏色更深，如果不含雙氯芬酸鈉，則顏色不變或變淺。

［1］張鐵軍.抗風(fēng)濕中草藥(彩色圖譜)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，1997.

［2］劉 利.非甾體抗炎藥的不良反應(yīng)機(jī)制及用藥安全［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，34(3):201－202.

［3］黃玉蘭.中成藥中非法添加化學(xué)藥成分的危害［EB/OL］.四川省食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站，2007－11－28［2010－03－12］.http://www.scfda.gov.cn/CL0206/9254.html

［4］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅥB.

［5］呂長(zhǎng)淮.雙氯芬酸鈉腸溶片薄層色譜鑒別方法的改進(jìn)［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10(5):344.

［6］鄭 凱.HPLC法測(cè)定雙氯芬酸鈉腸溶片的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2005，20(1):5－6.

［7］閆韶華.HPLC法測(cè)定雙氯芬酸鈉腸溶片的含量及含量均勻度［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2009，22(6):723－725.