吳茱萸鑒別（2）方法的改進(jìn)并應(yīng)用HPLC法對(duì)該法進(jìn)行定性驗(yàn)證

劉敏，付輝政*，萬(wàn)凱化（.江西護(hù)理職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西南昌005；.中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京00050；.江西省食品藥品檢驗(yàn)所，江西南昌0046）

吳茱萸鑒別（2）方法的改進(jìn)并應(yīng)用HPLC法對(duì)該法進(jìn)行定性驗(yàn)證

劉敏1，付輝政2*，萬(wàn)凱化3
（1.江西護(hù)理職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西南昌330025；2.中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京100050；3.江西省食品藥品檢驗(yàn)所，江西南昌330046）

吳茱萸；化學(xué)成分；HPLC法；薄層鑒別；定性實(shí)驗(yàn)

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.officinalis（Dode）Huang或疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果實(shí)。具散寒止痛，降逆止嘔，助陽(yáng)止瀉功效。用于厥陰頭痛，寒疝腹痛，寒濕腳氣，經(jīng)行腹痛，脘腹脹痛，嘔吐吞酸，五更泄瀉，外治口瘡、高血壓［1］。其主要成份為吳茱萸堿、吳茱萸次堿［2-3］。筆者在對(duì)吳茱萸不同采收時(shí)期其吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，吳茱萸干燥幼果中不含吳茱萸堿和吳茱萸次堿。但是按《中國(guó)藥典》［1］（2005年版一部P118）所載吳茱萸鑒別（2）方法對(duì)吳茱萸干燥幼果和干燥近成熟果實(shí)進(jìn)行鑒別時(shí)，出現(xiàn)假陽(yáng)性，對(duì)檢視起干擾，且該鑒別方法繁瑣、費(fèi)時(shí)。另外該標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有對(duì)吳茱萸堿進(jìn)行定性或定量。為此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)《中國(guó)藥典》［1］（2005年版一部P118）所載吳茱萸鑒別（2）方法進(jìn)行了改進(jìn)，同時(shí)對(duì)吳茱萸、吳茱萸堿、吳茱萸次堿進(jìn)行鑒別，色譜結(jié)果令人滿意。并應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)該法進(jìn)行了定性驗(yàn)證。使修改后標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果更準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)；自動(dòng)進(jìn)樣器；VWD檢測(cè)器；Agilent 1100化學(xué)工作站；254 nm紫外分析儀（上?？扑嚬鈱W(xué)儀器廠）；吳茱萸（110715-200412）、吳茱萸堿（110802-200504）、吳茱萸次堿（110801-200505）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；薄層板：硅膠GF254（10 cm／20 cm）批號(hào)20050507均由青島海洋化工廠分廠提供；試劑：均為分析純；樣品：吳茱萸1（吳茱萸幼果）和吳茱萸2（吳茱萸近成熟果實(shí)）（經(jīng)江西省食品藥品檢驗(yàn)所中藥室袁桂平副主任藥師鑒定為蕓香科植物吳茱萸，現(xiàn)存放在江西省食品藥品檢驗(yàn)所標(biāo)本室）。

2 薄層鑒別實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)方法取吳茱萸1和2粉末各0.4 g，分別加乙醇10mL，靜置30min，超聲處理30min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取吳茱萸對(duì)照藥材0.4 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取吳茱萸次堿對(duì)照品加乙醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19∶5∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。吳茱萸1和吳茱萸2供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.2 改進(jìn)方法取吳茱萸1和2粉末各0.4 g，分別加乙醇10mL，靜置30min，超聲處理30min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取吳茱萸對(duì)照藥材0.4 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取吳茱萸堿和吳茱萸次堿對(duì)照品加乙醇分別制成每1 mL含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（4∶1∶0.2∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。吳茱萸1供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的斑點(diǎn)。吳茱萸2供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3 高效液相色譜法定性驗(yàn)證試驗(yàn)與結(jié)果

3.1 色譜條件色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.04%辛烷磺酸鈉溶液（43∶57）；流速：1mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；柱溫：25℃；理論板數(shù)：按吳茱萸次堿峰計(jì)算不低于3 000。

3.2 吳茱萸1供試品溶液的制備取吳茱萸1粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2 g，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加入乙醇約90 mL，浸泡1 h，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）40 min，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。吳茱萸2供試品溶液的制備：取吳茱萸2粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2 g，精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中，加入乙醇約90 mL，浸泡1 h，超聲處理（功率250W，頻率33 kHz）40 min，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.3 吳茱萸堿對(duì)照品溶液的制備分別精密稱(chēng)取吳茱萸堿對(duì)照品9.85 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

吳茱萸次堿對(duì)照品溶液的制備分別精密稱(chēng)取吳茱萸次堿對(duì)照品9.62 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 測(cè)定法分別精密吸取上述兩種對(duì)照品溶液與兩種供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)高效液相色譜圖1。

圖1 高效液相色譜圖

由高效液相色譜圖1可知。吳茱萸1不含吳茱萸堿和吳茱萸次堿，吳茱萸2含吳茱萸堿和吳茱萸次堿，但是在薄層色譜圖1中吳茱萸1在吳茱萸次堿相應(yīng)的位置上有一與吳茱萸次堿顏色相同的斑點(diǎn)，在與吳茱萸堿相應(yīng)的位置上有一與吳茱萸堿顏色不相同的斑點(diǎn)。表明按標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。從薄層色譜圖1顯示出改進(jìn)方法所顯示沒(méi)有出現(xiàn)假陽(yáng)性，且斑點(diǎn)分離效果好，原標(biāo)準(zhǔn)只能檢出吳茱萸堿，改進(jìn)后吳茱萸堿、吳茱萸次堿兩種成份均能檢出，在254 nm紫外燈光下熒光斑點(diǎn)明顯，結(jié)果明確。我們又取不同批次的樣品3批，按改進(jìn)方法進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，樣品溶液與對(duì)照品溶液所顯示斑點(diǎn)位置一致，且結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

4 討論

4.1 改進(jìn)方法將硅膠G薄層板改為硅膠GF254薄層板，展開(kāi)劑的比例由（19∶5∶1∶1）改為（4∶1∶0.2∶0.2）起到了能同時(shí)快速檢出4種成份。在254 nm紫外光燈下4個(gè)對(duì)照藥材熒光斑點(diǎn)和2個(gè)對(duì)照品熒光斑點(diǎn)顯色清晰，分離完全，易于辨認(rèn)，避免了用標(biāo)準(zhǔn)方法試驗(yàn)可能出現(xiàn)的假陽(yáng)性干擾而帶來(lái)了影響，重現(xiàn)性好，結(jié)果令人滿意。

4.2 吳茱萸1樣品在與吳茱萸次堿相應(yīng)的位置上出現(xiàn)假陽(yáng)性，是由于吳茱萸中存在與吳茱萸次堿極性相近且具有相同母核的吲哚類(lèi)生物堿。

4.3 用高效液相色譜法對(duì)改進(jìn)方法進(jìn)行驗(yàn)證，增加了方法的準(zhǔn)確性和可靠性。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中國(guó)藥典（一部）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：118.

［2］Hyun SL.Inhibition of angiotensin receptor binding by quinolone alkaloids from evodia rutaecarpa［J］.Phytotherapy Res，1998，12（3）：212.

［3］Rang WQ，Du YH，Hu CP，et al.Protective effects of calcitonin gene-related peptide-mediated evodiamine on guinea-pig cardiac anaphylaxis［J］.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2003，367（3）：306-309.

R284.1

A

1007－4813（2010）05－0779－02

2010－04－27）

劉敏（1980－），女，碩士研究生，講師。研究方向：藥物化學(xué)。

*通信作者：付輝政，Tel：13807048618。