羊蹄總皂苷的提取及抗炎作用研究

劉力豐,王 尚

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春130021;2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),吉林長(zhǎng)春130117)

羊蹄為蓼科植物羊蹄(Rumex japonicus Houtt.)的干燥根。據(jù)《全國(guó)中草藥匯編》記載有清熱解毒、止血、通便、殺蟲(chóng)之功,主治鼻出血,功能性子宮出血,血小板減少性紫癜,慢性肝炎,肛門(mén)周?chē)?大便秘結(jié);外用治外痔,急性乳腺炎,黃水瘡,皮癬等。主要含有蒽醌類：大黃酚、大黃素、大黃素甲醚等;同時(shí)還含有鞣質(zhì)等成分[1]。但對(duì)其所含皂苷類成分研究較少,故本課題以羊蹄為原料,對(duì)其皂苷類成分提取工藝進(jìn)行系統(tǒng)研究,為最終深入了解羊蹄這一藥用植物資源奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

UV-1700型分光光度計(jì)(日本島津);BP211D電子天平(德國(guó)賽多司);烘箱;水浴鍋;真空泵;超凈工作臺(tái)(CJ-1)。羊蹄(采于吉林長(zhǎng)白縣);齊墩果酸對(duì)照品(含量測(cè)定用,中國(guó)藥品生物制品鑒定所);Wistar雄性大鼠,購(gòu)自長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心,體重200～240 g。昆明種小鼠18～20 g,雌雄均用,購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 羊蹄總皂苷的提取 稱取羊蹄粉末200 g,置5 000 mL圓底燒瓶中,加乙醚2 000 mL浸泡2次,每次1 h,過(guò)濾,殘?jiān)鼡]盡乙醚后加70%乙醇2 000 mL,在80℃水浴中回流提取2次,合并2次提取液,減壓回收乙醇,殘?jiān)诱麴s水500 mL溶解,溶液上D101大孔樹(shù)脂,分別用水、30%乙醇、70%乙醇洗脫,棄去蒸餾水與30%乙醇洗脫部分,收集70%乙醇洗脫部分,回收乙醇,殘?jiān)诱麴s水300 mL溶解,溶液用水飽和正丁醇萃取3次,每次500 mL,棄去水層,合并正丁醇層,將正丁醇溶液60℃減壓干燥即得羊蹄總皂苷干品。

2.2 羊蹄總皂苷含量的測(cè)定[2]

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對(duì)照品2.0 mg,置10 mL的容量瓶中,加70%乙醇溶解并定容至刻度,備用。

2.2.2 樣品溶液的制備 稱取羊蹄總皂苷60 mg,置100 mL容量瓶中,加70%乙醇溶解并定容至刻度,備用。

2.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 吸取對(duì)照品溶液0.5 mL于10 mL具塞試管中,沸水浴中揮干,依次加入新配制的10%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,高氯酸0.8 mL,搖勻,于70℃水浴中加熱15 min取出,冰水浴中冷卻后加入冰醋酸5 mL,混勻,以相應(yīng)試劑為空白,在400～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定其吸收波長(zhǎng)。同法測(cè)定羊蹄總皂苷吸收波長(zhǎng)。二者最大吸收均為554 nm,故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為554 nm。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取對(duì)照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mL,置10 mL具塞試管中,照 2.2.3項(xiàng)下自“沸水浴中揮干”起,于554 nm測(cè)定吸光度,以齊墩果酸溶液濃度(C)為橫坐標(biāo),吸光度(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為：A=59.324C-0.0023,r=0.999 5(n=5)。結(jié)果表明齊墩果酸在3.333～16.667 μ g/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 樣品含量測(cè)定 取樣品溶液,在554 nm處測(cè)定吸光度,將吸光度帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性回歸法計(jì)羊蹄總皂苷含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,羊蹄總皂苷含量為64.3%。

2.3 羊蹄總皂苷的抗炎作用實(shí)驗(yàn) 取大鼠30只,隨機(jī)分為3組：對(duì)照組,0.2 g/kg陽(yáng)性藥阿司匹林組,0.521 g/kg受試藥給藥組。連續(xù)給藥5 d,于末次給藥1 h后于大鼠右后足腱膜下注入0.05%角叉菜膠0.20 mL/只,然后于注射后1,2,3,4,5,6 h測(cè)其足腫脹(先于注射前測(cè)正常大鼠足周長(zhǎng)),比較正常足值之差作為腫脹度。結(jié)果表1。

表1 對(duì)大鼠角叉菜膠性足腫脹的影響

從上表可知,與對(duì)照組相比受試物中劑量組對(duì)大鼠角叉菜膠性足腫脹有極顯著性差異。

3 討論

本文采用回流法提取羊蹄總皂苷,同時(shí)采用D101大孔樹(shù)脂、水飽和正丁醇有機(jī)溶劑萃取等方法純化所得總皂苷,最終含量達(dá)到64.3%,明顯提高總皂苷有效部位的含量。該方法簡(jiǎn)便易行,是提取皂苷類成分的常用方法,同時(shí)對(duì)設(shè)備要求低,實(shí)驗(yàn)室操作簡(jiǎn)單。本實(shí)驗(yàn)首次定量測(cè)定了羊蹄總皂苷的對(duì)大鼠角叉菜膠性足腫脹消炎的活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)對(duì)大鼠角叉菜膠性足腫脹抗炎作用較為明顯。此結(jié)果為該植物的開(kāi)發(fā)、利用提供了科學(xué)依據(jù)和物質(zhì)基礎(chǔ)。

[1]鄭永慶,陳萬(wàn)生.中藥羊蹄化學(xué)成分的研究(Ⅰ)[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,21(10)：910-913.

[2]騰燕平,張玉梅,劉穎,等.分光光度法測(cè)大豆總皂苷含量[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2000,12(4)：10-13.