探討ELISA檢測(cè)HBsAg中延時(shí)不同時(shí)間比色對(duì)結(jié)果的影響

830017 新疆烏魯木齊溫泉療養(yǎng)院 李書(shū)群 劉艷 李曉勤

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 從428名來(lái)我院進(jìn)行體檢的體檢者中檢出的13例HBsAg陽(yáng)性血清標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 KHB ST-360酶標(biāo)儀，KHB ST-36W洗板機(jī)。

1.2.2 試劑 濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。

1.3 方法

1)對(duì)13例血清標(biāo)本進(jìn)行隨機(jī)編號(hào)，依次為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13號(hào)，用ELISA法檢測(cè)13例血清標(biāo)本HBsAg，按照試劑盒中的說(shuō)明書(shū)操作。

2)在加入終止液混勻后立即在酶標(biāo)儀上比色，記為0 min的OD值。然后依次在加入終止液后的10 min、20 min、30 min、40 min在酶標(biāo)儀上比色，分別記為10 min、20 min、30 min、40 min的OD值。

3)結(jié)果判斷。本試驗(yàn)的C.O.為0.105，以0 min的OD值/C.O.≥1者判為HBsAg陽(yáng)性，13例血清全部陽(yáng)性。

4)將0 min的OD值分別與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值配成對(duì)子，共4對(duì)。用配對(duì)t檢驗(yàn)，分別比較0 min的OD值與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值，結(jié)果(表1)。

表1 終止反應(yīng)后延時(shí)不同時(shí)間的OD值比較

2 結(jié)果

從表1中可以看出，終止反應(yīng)后延時(shí)10 min、20 min的OD值與0 min的OD值比較，P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。終止反應(yīng)后延時(shí)30 min、40 min的OD值與0 min的OD值比較，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討論

實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用試劑盒檢測(cè)標(biāo)本時(shí)，一般都是按照試劑盒中的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。本試驗(yàn)試劑盒中的說(shuō)明書(shū)上表明的比色時(shí)間應(yīng)在終止反應(yīng)的30 min內(nèi)完成。而作者所做的試驗(yàn)結(jié)果卻是：在終止反應(yīng)的20～30 min這段時(shí)間內(nèi)，樣本的OD值便與0 min的OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這種差異對(duì)OD值較高的強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本影響不大，但對(duì)于OD值較低的弱陽(yáng)性標(biāo)本，容易造成假陰性結(jié)果。從表1中可以看到，第9號(hào)標(biāo)本在延時(shí)第10分鐘比色時(shí)，已經(jīng)由弱陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性。對(duì)于有自動(dòng)化免疫分析儀的實(shí)驗(yàn)室，不存在延時(shí)比色的問(wèn)題。但對(duì)于沒(méi)有自動(dòng)化免疫分析儀的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，這個(gè)問(wèn)題就應(yīng)引起重視。作者建議用ELISA進(jìn)行HBsAg測(cè)定的操作過(guò)程中，加終止液終止反應(yīng)后應(yīng)立即比色。我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū)，HBsAg攜帶者約為1.2億，攜帶率為10%[1]。為了避免給臨床造成漏診、誤診，我們?cè)趯?shí)際工作中，應(yīng)以嚴(yán)謹(jǐn)負(fù)責(zé)的工作態(tài)度，認(rèn)真實(shí)踐，嚴(yán)格控制導(dǎo)致HBsAg假陰性結(jié)果的因素，減少誤差，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1]王振英，張紀(jì)云，高玉芳，主編.放射免疫分析與臨床[M].北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，1994：239.