• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    茶葉中茶多酚和生物堿的測(cè)定及聚類和線性判別分析

    2010-03-23 02:05:11肖俊松袁英髦張愛雪曹雁平
    食品科學(xué) 2010年22期
    關(guān)鍵詞:烏龍茶白茶兒茶素

    肖俊松,袁英髦,張愛雪,曹雁平,*

    (1.北京工商大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院,北京 100048;2.食品添加劑與配料北京高校工程研究中心,北京 100048)

    茶葉中茶多酚和生物堿的測(cè)定及聚類和線性判別分析

    肖俊松1,2,袁英髦1,張愛雪1,曹雁平1,2,*

    (1.北京工商大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院,北京 100048;2.食品添加劑與配料北京高校工程研究中心,北京 100048)

    目的:建立一種反相高效液相色譜方法,測(cè)定綠茶、烏龍茶、紅茶、白茶和普洱茶中兒茶素[(+)-catechin,C]、表兒茶素[(-)-epicatechin,EC]、表兒茶素沒食子酸脂[(-)-epicatechin gallate,ECG]、表沒食子兒茶素[(-)-epigallocatechin,EGC]、表沒食子兒茶素沒食子酸脂[(-)-epigallocatechin gallate,EGCG]、沒食子酸(gallic acid,GA)、咖啡因(caffeine,CAF)、可可堿(theobromine,THEO)的水平。以這8種組分為指標(biāo)對(duì)茶葉進(jìn)行聚類分析和線性判別分析,建立區(qū)分綠茶、紅茶和烏龍茶的方法。方法:茶葉提取后采用HPLC法測(cè)定兒茶素和生物堿含量,色譜柱為C18柱,流動(dòng)相由甲醇(A)、2%的乙酸(B)等度洗脫,A、B相的體積比為25:75,流速為1mL/min,柱溫30℃。采用PDA檢測(cè)器在278nm檢測(cè),參考波長(zhǎng)為210nm。采用SPSS 14.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了聚類分析和線性判別分析。結(jié)果:在選擇的分析條件下,樣品中的8種組分獲得了理想分離,加標(biāo)回收率在87%~112.8%之間,并采用外標(biāo)法對(duì)8種組分進(jìn)行定量。以這8種組分的含量為指標(biāo),聚類分析和線性判別分析能對(duì)39種茶葉樣品進(jìn)較好的區(qū)分。

    茶多酚;咖啡堿;茶葉;高效液相色譜;聚類分析;線性判別分析

    茶葉由茶樹(Camellia sinensis)的葉子加工而成,是我國(guó)傳統(tǒng)的飲料之一,也是世界三大飲料之一,按照發(fā)酵程度的不同,分為綠茶、黃茶、白茶、青茶(烏龍茶)、紅茶、黑茶(普洱茶)等。綠茶為不發(fā)酵的茶,含有大量茶多酚及一定量的生物堿,如咖啡因、可可堿等(圖1),大約占干質(zhì)量的30%[1]。烏龍茶為半發(fā)酵茶,而紅茶則是全發(fā)酵的茶,兒茶素的含量相比綠茶偏低,而咖啡因含量則有所增加。兒茶素類物質(zhì)賦予茶湯苦、澀味以及特有的收斂性。此外,茶多酚具有抗氧化,抗動(dòng)脈粥樣硬化,降低血液膽固醇,抑制癌細(xì)胞增殖等多種生理活性[2-5]??Х纫?、可可堿是茶葉中的生物堿類,可賦予茶湯苦味,并具有祛除疲勞,興奮神經(jīng)的作用[6]。因此,茶多酚和咖啡因是茶葉品質(zhì)的重要因子。

    圖1 茶多酚和咖啡因、可可堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structures of catechin, caffeine and theobromine

    本實(shí)驗(yàn)擬建立一種反相高效液相色譜方法,快速測(cè)定茶葉中兒茶素[(+)-catechin,C]、表兒茶素[(-)-epicatechin,EC]、表兒茶素沒食子酸脂[(-)-epicatechin gallate,ECG]、表沒食子兒茶素[(-)-epigallocatechin, EGC]、表沒食子兒茶素沒食子酸脂[(-)-epigallocatechin gallate, EGCG]、沒食子酸(gallic acid,GA)、咖啡因(caffeine,CAF)、可可堿(theobromine,THEO)的水平。在此基礎(chǔ)上,調(diào)查目前北京茶葉市場(chǎng)上茶葉中茶多酚,咖啡因和可可堿的含量,并采用聚類分析和線性判別分析對(duì)茶葉進(jìn)行區(qū)分,為茶葉的真?zhèn)舞b定提供技術(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    茶葉購自北京馬連道茶葉市場(chǎng),未注明的均為新茶,存儲(chǔ)于-18℃冰箱待測(cè),共計(jì)39種,其中綠茶21種,烏龍茶8種,紅茶4種(其中立頓速溶紅茶1種),白茶3種,黑茶2種,花茶1種。

    兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、沒食子酸 美國(guó)Sigma公司;咖啡因、可可堿 中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇、乙腈(均為色譜純) 美國(guó)Fisher公司;乙酸(優(yōu)級(jí)純) 北京精細(xì)化工廠;VC、EDTA均為分析純。1.2儀器與設(shè)備

    2695高效液相色譜系統(tǒng)(配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和Empower 2色譜工作站) 美國(guó)Waters公司。

    1.3 方法

    1.3.1 茶多酚和生物堿的提取

    參照GB/T 8313—2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法》,取適量茶葉樣品于研缽,將其研碎至直徑小于1mm,精確稱取樣品200mg至于10mL離心管中,用移液管移取5mL經(jīng)70℃水浴預(yù)熱的70%甲醇溶液,注入其中,用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆驖?rùn)濕,立即移入70℃水浴鍋中,浸提10min。每隔5min攪拌一次取出,浸提后冷卻至室溫,轉(zhuǎn)入離心機(jī)在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心10min,將上清液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶,殘?jiān)儆?mL的70%甲醇溶液提取一次,重復(fù)以上操作,合并提取液定容至10mL。用移液管取上述溶液2mL于10mL容量瓶中,用穩(wěn)定液定容,待測(cè)。

    穩(wěn)定液配制:稱取250mg EDTA于燒杯中,加入少量pH值為8的NaOH溶液,用玻璃棒攪拌,溶解,再加入50mL乙腈后再加入250mg VC,待其溶解,轉(zhuǎn)移至容量瓶中,定容至500mL。

    1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

    精確稱取2.9mg C、3.0mg EC、2.5mg ECG、3.7mg EGC、2.9mg EGCG、2.4mg CAF、1.0mg THEO,用70%

    甲醇溶液溶解,定容至10mL,然后逐級(jí)稀釋得到一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。0.45μm膜過濾,進(jìn)樣10μL,進(jìn)行HPLC分析。以進(jìn)樣化合物質(zhì)量m(μg)為橫坐標(biāo)、色譜峰面積A為縱坐標(biāo),做標(biāo)準(zhǔn)曲線,得各標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.3.3 色譜條件

    色譜柱為迪馬Inertsil ODS-3 C18柱(4.6mm×150mm,5μm)。流動(dòng)相A為100%甲醇,流動(dòng)相B為2%乙酸溶液,采用等度洗脫,流動(dòng)相由甲醇(A),2%的乙酸(B),體積比為25:75,流速1mL/min,柱溫30℃。二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)2 7 8 n m,參考波長(zhǎng)210nm。

    1.3.4 茶多酚和生物堿的HPLC測(cè)定

    茶葉樣品如1.3.1節(jié)處理后,采用1.3.2節(jié)同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析。根據(jù)各化合物的峰面積,計(jì)算其含量,并根據(jù)稀釋度,計(jì)算茶多酚和生物堿的含量。

    稱取200mg茶葉樣品6份,其中3份測(cè)定8種化合物的質(zhì)量,另外3份加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品后,測(cè)定8種化合物的質(zhì)量,然后計(jì)算其加標(biāo)回收率。

    1.3.5 數(shù)據(jù)分析

    以C、EC、ECG、EGC、EGCG、GA、CAF和THEO這8種成分為指標(biāo),用SPSS 14.0 進(jìn)行聚類分析和線性判別分析[7]。聚類分析計(jì)算歐氏距離,線性判別分析則采用逐步判別法。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 同時(shí)測(cè)定茶多酚和生物堿的HPLC方法建立

    混合標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過HPLC分析,等度洗脫,得到HPLC圖譜見圖2??梢钥闯?,這6種茶多酚和2種生物堿得到了較好的分離,僅有EGCG和CAF基線部分有重疊。8種化合物的保留時(shí)間分別為GA 2.629min、THEO 3.294min、EGC 3.998min、C 4.573min、EGCG 6.611min、CAF 7.233min、EC 8.060min、ECG 15.111min。

    圖2 茶多酚和生物堿的HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatogram of tea polyphenols and alkaloids

    從表1可以看出,8種化合物的回歸方程的R2均大于0.9999,說明在線性范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。

    表1 茶葉中C、EC、ECG、EGC、EGCG、GA、CAF和THEO的標(biāo)準(zhǔn)曲線Table1 Regression equations of 8 compounds (C, EC, ECG, EGC, EGCG, GA, CAF and THEO) in tea samples

    這8種化合物的加標(biāo)回收率如表2所示,回收率在87.0%~112.8%之間,說明該提取和測(cè)定方法能準(zhǔn)確的反應(yīng)茶葉樣品中這8種化合物的準(zhǔn)確含量。

    表2 茶葉中C、EC、ECG、EGC、EGCG、GA、CAF和THEO的回收率(n=3)Table2 Recovery rates of spiked compounds (C, EC, ECG, EGC, EGCG, GA, CAF and THEO) in tea samples (n=3)

    2.2 茶葉中茶多酚和生物堿水平

    圖3 綠茶、白茶、烏龍茶和紅茶中C、E C、E C G、E G C、EGCG、GA、CAF、THEO、總生物堿和總茶多酚的平均含量Fig.3 Average contents of 8 compounds (C, EC, ECG, EGC, EGCG, GA, CAF and THEO), total alkaloids (TA) and total polyphenols (TPP) in green, white, oolong and black tea samples from Beijing market

    39種茶葉樣品經(jīng)過如上方法提取,HPLC測(cè)定,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算得到其中C、EC、ECG、EGC、EGCG、GA、CAF和THEO的含量,如表3所示。計(jì)算綠茶、白茶、烏龍茶、紅茶的8個(gè)指標(biāo),外加T A (CAF和THEO之和),TPP(其他6指標(biāo)之和)的平均水平,并采用SPSS14.0進(jìn)行Duncan多重比較,得到圖3。

    表3 茶葉中C、EC、ECG、EGC、EGCG、GA、CAF和THEO的含量Table3 Contents of 8 compounds (C, EC, ECG, EGC, EGCG, GA, CAF and THEO) in tea samples

    綠茶為非發(fā)酵茶,白茶、烏龍茶和紅茶的發(fā)酵程度逐漸加重,發(fā)酵方式也不一樣。從圖3可以看出,北京市場(chǎng)茶葉中總生物堿的含量在0.694%~3.454%之間,平均含量2.395%。單因素方差分析顯示,綠茶,白茶,烏龍茶和紅茶的總生物堿含量在α=0.05水平上無顯著差別,Duncan多重比較顯示4類茶葉的總生物堿也無顯著差別。這說明發(fā)酵對(duì)茶葉中生物堿的水平基本無影響。

    總茶多酚含量在2.815%~19.808%之間,平均含量11.205%,含量從高到低依次為綠茶,白茶,烏龍茶和紅茶。單因素方差分析顯示茶葉種類對(duì)TPP水平有極顯著影響(P<0.001),Duncan多重比較顯示,在α=0.05水平上,綠茶和烏龍茶TPP水平無顯著差異,和白茶,紅茶有顯著差異,這說明發(fā)酵方式對(duì)茶葉中茶多酚的含量有極顯著影響。

    茶葉中茶多酚以EGCG、EC、ECG為主,C和EGC含量較低,GA含量則是在綠茶,白茶中較高,烏龍茶,紅茶中含量較低。單因素方差分析顯示茶葉種類對(duì)茶葉中C、EC、ECG、EGC、EGCG和GA的含量

    都有顯著影響(P<0.005)。Duncan多重比較顯示,在α=0.05水平上,烏龍茶的EGCG含量與其他3類茶葉有顯著差異,E C含量只有白茶和烏龍茶之間有顯著差異,綠茶的ECG含量則與白茶和紅茶之間有顯著差異。

    2.3 茶葉的聚類分析

    采用SPSS 14.0軟件包中聚類分析程序,計(jì)算39種茶葉樣品之間的歐氏距離,進(jìn)行聚類分析聚類結(jié)果見圖4。

    圖4 39個(gè)茶葉樣品系統(tǒng)聚類分析圖Fig.4 Hierarchical cluster analysis of 39 tea samples

    從圖4可看出,當(dāng)臨界值為20時(shí),39個(gè)茶葉樣品分別聚為三類。第一類中包含19個(gè)綠茶,1個(gè)花茶1個(gè)烏龍茶和1個(gè)白茶。第二類中包含7個(gè)烏龍茶、2個(gè)綠茶、1個(gè)黑茶。第三類中包含3個(gè)紅茶、2個(gè)白茶、1個(gè)黑茶和1個(gè)立頓紅茶。這三類茶葉按發(fā)酵度逐漸遞增分類,分別是不發(fā)酵,半發(fā)酵和全發(fā)酵茶。第一類茶均為不發(fā)酵或低發(fā)酵度的茶。第二類茶主要是烏龍茶等半發(fā)酵茶,還含有少量綠茶。第三類茶主要為紅茶和黑茶,為全發(fā)酵的茶。有趣的是,33w和34w兩種白茶是輕度發(fā)酵的茶也聚到第三類中,其原因可能是33w和34w分別是07年春和08年春的茶。由于茶葉放置的時(shí)間過長(zhǎng),導(dǎo)致茶葉中的兒茶素類成份發(fā)生降解,所以被聚入第三類。因此,按照C、EC、ECG、EGC、EGCG、GA、CAF、THEO組分含量進(jìn)行分類是合理的。

    2.4 茶葉的判別分析

    用SPSS 14.0軟件包,采用Wilk sλ法對(duì)茶葉樣品進(jìn)行逐步線性判別分析,得到2個(gè)典則判別函數(shù)(Y),分別為Y1=1.169+0.535EGCG+1.285ECG-5.523CAF、Y2=-2.897-0.349EGCG+1.82ECG+1.058CAF。計(jì)算各茶葉樣品的得分,以Y1為橫坐標(biāo)、Y2為縱坐標(biāo),得到茶葉樣品線性判別圖(圖5)。82.9%的茶葉樣品分類正確,綠茶,紅茶和烏龍茶完全區(qū)分,白茶區(qū)分不太好,可能原因是其為往年陳茶,其中的茶多酚有一定程度的氧化聚合。

    圖5 綠茶、白茶、烏龍茶和紅茶的線性判別分析Fig.5 Linear discrimination analysis of green, white, oolong and black tea samples

    3 討 論

    本實(shí)驗(yàn)建立的提取及HPLC方法,可同時(shí)測(cè)定茶葉中咖啡因,可可堿以及6類茶多酚含量。雖然采用了等度洗脫,但8種化合物基本實(shí)現(xiàn)了基線分離(EGCG和CAF峰有少部分重合),基線平,能在18min內(nèi)完成測(cè)定,且8種化合物回收率均達(dá)到要求。Ferandez等[8]采用梯度洗脫方式,6種兒茶素流出需要20min,而且基線漂移嚴(yán)重;康海寧等[9]采用梯度洗脫,則需要左右;唐根源等[10]采用等度洗脫,需要30min左右;Mitsuaki等[11]采用等度洗脫,分析12種茶多酚需要時(shí)間大概110min。

    采用此方法對(duì)39個(gè)茶葉樣本中的上述8中化合物進(jìn)行了測(cè)定??偵飰A含量平均為2.395%,茶多酚總量平均為11.205%,以EGCG、EC、ECG為主。綠茶、白茶、烏龍茶和紅茶中咖啡因、可可堿的含量并無顯著差別,說明發(fā)酵處理,并不能將其有效去除。4種茶葉茶多酚含量有顯著性區(qū)別,說明發(fā)酵對(duì)兒茶素類物質(zhì)具有很大影響。發(fā)酵過程中,兒茶素類物質(zhì)氧化聚合,形成茶黃素和茶紅素,形成烏龍茶、紅茶的獨(dú)特風(fēng)味與茶湯顏色。隨著發(fā)酵程度的增加,綠茶、烏龍茶和紅茶中茶多酚的含量逐漸減少。這與Ferandez等[8]和朱勤艷等[12]研究結(jié)果一致。但是白茶作為一種發(fā)酵程度低于烏龍茶的茶葉,其總多酚低于烏龍茶,其原因可能是本實(shí)驗(yàn)選擇的白茶樣本為往年陳茶,其中的茶多酚已發(fā)生氧化聚合所致,有研究證明,綠茶在90%相對(duì)濕度,40℃條件下貯藏45d兒茶素下降了31%[13],說明茶多酚在貯藏條件下會(huì)氧化聚合,從而含量下降。

    聚類分析將茶葉分為了3大類,基本符合實(shí)際情況。通過逐級(jí)線性判別分析,利用EGCG、ECG和CAF構(gòu)成的判別方程,將茶葉分為了4大類,綠茶、烏龍茶和紅茶完全區(qū)分,白茶區(qū)分效果不好。雖然白茶樣

    品選擇不當(dāng),干擾了分類方法的表現(xiàn),但是利用這2種方法,用于茶葉種類的區(qū)分、鑒別是可能的。

    [1]DALLUGE J J, NELSON B C. Determination of tea catechins[J]. J Chromatogr A, 2000, 881: 411-424.

    [2]FUJIKI H, SUGANUMA M, IMAI K, et al. Green tea: cancer preventive beverage and/or drug[J]. Cancer Lett, 2002, 188(1/2): 9-13.

    [3]SHUKLA Y. Tea and cancer chemoprevention: a comprehensive review [J]. Asian Pacific J Cancer Prev, 2007, 8: 155-166.

    [4]YANG C S, LANDAU J M. Effects of tea consumption on nutrition and health[J]. J Nutr, 2000, 130: 2409-2412.

    [5]DAVID J M, GUO P L, NAI S C. Cholesterol-lowering effect of a theaflavin-enriched green tea extract[J]. Arch Intern Med, 2003, 163: 1448-1453.

    [6]HIGDON J V, FREI B. Coffee and health: a review of recent human research[J]. Crit Reviews in Food Sci Nutr, 2006, 46(2): 101-123.

    [7]高祥寶, 董寒青. 數(shù)據(jù)分析與SPSS應(yīng)用[M]. 北京: 清華大學(xué)出版社, 2007: 1-9; 311-364.

    [8]FERANDEZ P L, MARTIN M J, GONZALEZ A G, et al. HPLC determination of catechins and caffeine in tea. differentiation of green, black and instant teas[J]. Analyst, 2000, 125: 421-425.

    [9]康海寧, 陳波, 韓超, 等. HPLC法測(cè)定茶葉水提液中五種兒茶素和咖啡堿及其用于茶葉分類的研究[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2007, 26(2): 211-215.

    [10]唐根源, 吳紅京, 吳棱. 等度反相高效液相色譜法測(cè)定茶多酚中的兒茶素和咖啡因[J]. 色譜, 2001, 19(3): 233-235.

    [11]MITSUAKI S, MICHIKO T, MASAZUMI S. Simultaneous determination of twelve tea catechins by high performance liquid chromatography with electrochemical detection[J]. Analyst, 2001, 126: 816-820.

    [12]朱勤艷, 陳振宇. 茶中茶多酚的高效液相色譜法分離分析[J]. 分析實(shí)驗(yàn)室, 1999, 18(4): 16-18.

    [13]崔峰. 綠茶在貯藏過程中品質(zhì)變化規(guī)律及影響因素研究[D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2008.

    Determination of Polyphenols and Alkaloids in Tea and Cluster-Linear Discrimination Analysis

    XIAO Jun-song1,2,YUAN Ying-hao1,ZHANG Ai-xue1,CAO Yan-ping1,2,*
    (1. School of Chemical and Environmental Engineering, Beijing Technology and Business University, Beijing 100048, China;2. Beijing Higher Institution Engineering Research Center of Food Additives and Ingredients, Beijing 100048, China)

    Objective: To establish a HPLC method for the determination of (+)-catechin, (-)-epicatechin (EC), (-)-epicatechin gallate (ECG), (-)-epigallocatechin (EGC), (-)-epigallocatechin gallate (EGCG), gallic acid (GA), caffeine (CAF) and theobromine (THEO) in green, oolong and black tea samples, and to develop a discrimination method for green, oolong and black tea by cluster analysis and linear discrimination analysis on the basis of determined chemical components. Methods: Tea samples were extracted by 70% aqueous methanol. Totally 200 mg of grinded tea samples was extracted with 5 mL of 70% aqueous methanol for 10 min in 70 ℃water bath. The extract was centrifuged at 3500 r/min for 10 min, and the supernatant was collected. Then the precipitate was extracted with 5 mL of 70% methanol under the same conditions. The supernatants were combined in a volumetric flask and diluted to 10 mL. A total of 2 mL of such solution was diluted by 5 times with stabilizing solution, filtrated with 0.45 μm membrane, and then used for HPLC analysis. Eight compounds were separated by a C18 column using a mobile phase containing methanol-2% aqueous acetic acid at a ratio of 25:75 (V/V) in an isocratic elution at 30 ℃, and detected using a photodiode array detector at 278 nm with the reference wavelength at 210 nm. The cluster and linear discrimination analyses were performed using SPSS 14.0 software. Results: Eight compounds in all tea samples were well separated under the proposed conditions. The recovery rates of spiked samples were in the range of 87%-112.8%. The contents of 8 compounds determined by an external standard method were used to conduct cluster analysis and linear discrimination analysis. The good differentiation of green, oolong and black tea samples were achieved. Conclusion: This established method is feasible to discriminate green, oolong and black tea.

    tea polyphenol;caffeine;tea;high performance liquid chromatography (HPLC);cluster analysis;linear discrimination analysis

    TS255.36

    A

    1002-6630(2010)22-0343-06

    2010-07-08

    “十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2006BAD27B03);北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(3062007)

    肖俊松(1980—),男,講師,博士,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail:waq0012@hotmail.com

    *通信作者:曹雁平(1961—),男,教授,碩士,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)與物理場(chǎng)強(qiáng)化技術(shù)研究。E-mail:caoyp@th.btbu.edu.cn

    猜你喜歡
    烏龍茶白茶兒茶素
    超高效液相色譜法測(cè)定茶葉中的兒茶素
    繪本
    這只貓說得好有道理
    意林(2019年10期)2019-06-03 16:37:12
    ANIMATING ‘IP’
    烏龍茶秋季采摘時(shí)期調(diào)節(jié)技術(shù)研究
    ANIMATING ‘IP’COMICS AND EMOJIS BECOME ENTERTAINMENT BRANDS
    漢語世界(2017年4期)2017-03-07 06:21:20
    近年烏龍茶做青工藝的發(fā)展研究
    烏龍茶連續(xù)自動(dòng)化初制生產(chǎn)線的現(xiàn)狀與展望
    全甲基化沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備
    鐵觀音等三個(gè)烏龍茶品種綠茶適制性研究
    茶葉通訊(2014年4期)2014-02-27 07:55:52
    久久亚洲精品不卡| 亚洲成av人片在线播放无| 日本一二三区视频观看| 天堂动漫精品| 99视频精品全部免费 在线| 国产v大片淫在线免费观看| 69人妻影院| 日本与韩国留学比较| 97超碰精品成人国产| 少妇的逼好多水| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 好男人在线观看高清免费视频| 我要搜黄色片| 国产探花极品一区二区| 欧美国产日韩亚洲一区| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲中文字幕日韩| av专区在线播放| 精品一区二区三区视频在线| 日韩欧美三级三区| 日日啪夜夜撸| 国产免费男女视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久国内精品自在自线图片| 麻豆国产97在线/欧美| 日韩精品青青久久久久久| 91狼人影院| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲欧美日韩高清专用| 欧美性猛交黑人性爽| 精华霜和精华液先用哪个| 黄色日韩在线| 亚洲三级黄色毛片| 三级毛片av免费| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲美女视频黄频| 国内精品美女久久久久久| 在线国产一区二区在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 成人无遮挡网站| 天堂动漫精品| 国产精品无大码| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美激情在线99| 亚洲熟妇熟女久久| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一区二区三区免费毛片| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费人成在线观看视频色| 色播亚洲综合网| 国产精品一区www在线观看| 搡老岳熟女国产| 精品不卡国产一区二区三区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美成人免费av一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 国产精品av视频在线免费观看| 日韩人妻高清精品专区| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲色图av天堂| 成人精品一区二区免费| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲四区av| 欧美性感艳星| 91av网一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 赤兔流量卡办理| 99久国产av精品| 亚洲国产色片| 国产高清有码在线观看视频| 国产av不卡久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久精品91蜜桃| 亚洲,欧美,日韩| 成人综合一区亚洲| 中出人妻视频一区二区| 99久国产av精品国产电影| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 亚洲精品色激情综合| 亚洲自拍偷在线| 久久热精品热| 女同久久另类99精品国产91| 色5月婷婷丁香| 精品久久久久久久久久免费视频| 干丝袜人妻中文字幕| 午夜精品在线福利| 国产黄色小视频在线观看| 国产一区二区激情短视频| 热99在线观看视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日本黄大片高清| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 在线免费十八禁| 亚洲七黄色美女视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲,欧美,日韩| 免费观看精品视频网站| 九九爱精品视频在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 99riav亚洲国产免费| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 九九热线精品视视频播放| av免费在线看不卡| 五月伊人婷婷丁香| 又粗又爽又猛毛片免费看| av天堂中文字幕网| 又黄又爽又免费观看的视频| 在线国产一区二区在线| 联通29元200g的流量卡| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 少妇熟女欧美另类| 午夜老司机福利剧场| 我要搜黄色片| 亚洲无线在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品伦人一区二区| 一本久久中文字幕| 一区二区三区四区激情视频 | 国产一区二区在线观看日韩| 国产男靠女视频免费网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 高清毛片免费观看视频网站| 搡老妇女老女人老熟妇| 色综合站精品国产| 国产高清有码在线观看视频| 国产中年淑女户外野战色| 免费黄网站久久成人精品| 免费看av在线观看网站| av在线老鸭窝| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 男人狂女人下面高潮的视频| aaaaa片日本免费| 久99久视频精品免费| 亚洲五月天丁香| 国产精品女同一区二区软件| 两个人的视频大全免费| 日韩人妻高清精品专区| 成年女人看的毛片在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲电影在线观看av| 大香蕉久久网| 日韩成人伦理影院| 亚洲欧美成人精品一区二区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久久a久久爽久久v久久| 级片在线观看| 国产在视频线在精品| 欧美极品一区二区三区四区| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲成人久久爱视频| 国产亚洲精品久久久com| av卡一久久| 日韩高清综合在线| 性色avwww在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 丰满的人妻完整版| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费看a级黄色片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲自拍偷在线| 久久亚洲精品不卡| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 又黄又爽又免费观看的视频| 麻豆一二三区av精品| 99热6这里只有精品| 日韩强制内射视频| 少妇丰满av| av天堂中文字幕网| 国产 一区 欧美 日韩| 日本欧美国产在线视频| 色吧在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 性欧美人与动物交配| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产黄a三级三级三级人| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 99久久成人亚洲精品观看| 美女内射精品一级片tv| 99热网站在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 久久久久久伊人网av| 无遮挡黄片免费观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 91av网一区二区| 黄片wwwwww| 久久精品国产自在天天线| av国产免费在线观看| 久久精品国产自在天天线| 婷婷六月久久综合丁香| 香蕉av资源在线| 国产亚洲91精品色在线| 一区二区三区四区激情视频 | 热99re8久久精品国产| 精品久久久久久久久久免费视频| 全区人妻精品视频| 免费av毛片视频| 午夜免费激情av| 成人美女网站在线观看视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产三级中文精品| 看非洲黑人一级黄片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品色激情综合| 亚洲av免费在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 听说在线观看完整版免费高清| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品久久久久久av不卡| 毛片一级片免费看久久久久| 两个人视频免费观看高清| videossex国产| 一区二区三区免费毛片| 亚洲国产精品成人久久小说 | 卡戴珊不雅视频在线播放| 春色校园在线视频观看| 一本久久中文字幕| 久久午夜亚洲精品久久| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲美女搞黄在线观看 | 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲av免费在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 免费看美女性在线毛片视频| 久久综合国产亚洲精品| 日韩欧美免费精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲熟妇熟女久久| 免费观看人在逋| 免费人成视频x8x8入口观看| 天美传媒精品一区二区| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产成人a区在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 成人特级av手机在线观看| 午夜影院日韩av| 色综合色国产| 国产av一区在线观看免费| 精品欧美国产一区二区三| 在线观看午夜福利视频| 日韩强制内射视频| 久久久久久久久久黄片| av在线观看视频网站免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产爱豆传媒在线观看| 日本与韩国留学比较| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久精品影院6| or卡值多少钱| 此物有八面人人有两片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 中文字幕免费在线视频6| 精品久久久噜噜| av在线亚洲专区| av福利片在线观看| 熟女电影av网| 不卡视频在线观看欧美| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 在线看三级毛片| 免费看日本二区| 亚洲人成网站高清观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲人成网站在线播| 成人欧美大片| 不卡视频在线观看欧美| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 蜜臀久久99精品久久宅男| 搡老岳熟女国产| 变态另类丝袜制服| 毛片一级片免费看久久久久| 国产美女午夜福利| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲国产精品合色在线| 日本黄大片高清| av国产免费在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 69人妻影院| 久久久国产成人免费| 久久精品国产亚洲av天美| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 淫秽高清视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| aaaaa片日本免费| 国产 一区 欧美 日韩| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日本五十路高清| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲av电影不卡..在线观看| 97超碰精品成人国产| 不卡一级毛片| 色在线成人网| 国产精品一区二区三区四区久久| 色播亚洲综合网| 免费在线观看成人毛片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 精品福利观看| 看非洲黑人一级黄片| 综合色丁香网| 成人二区视频| 在线播放无遮挡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品午夜福利在线看| 日日干狠狠操夜夜爽| 最近的中文字幕免费完整| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日本黄色视频三级网站网址| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久久久久久久久丰满| 我的老师免费观看完整版| 色综合站精品国产| 亚洲成a人片在线一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久久久久九九精品二区国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 禁无遮挡网站| 亚洲国产精品国产精品| 欧美人与善性xxx| 村上凉子中文字幕在线| 日韩强制内射视频| 可以在线观看的亚洲视频| 级片在线观看| 看免费成人av毛片| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美一区二区亚洲| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 看非洲黑人一级黄片| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜激情欧美在线| 久久久久久久亚洲中文字幕| 成人精品一区二区免费| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产一区二区激情短视频| 亚洲成人久久爱视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人av一区二区三区在线看| 色吧在线观看| 欧美成人a在线观看| 级片在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品野战在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久精品影院6| 男插女下体视频免费在线播放| 九九爱精品视频在线观看| 日本成人三级电影网站| 高清日韩中文字幕在线| 日韩av在线大香蕉| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 美女免费视频网站| av视频在线观看入口| 成年免费大片在线观看| 人人妻人人看人人澡| 午夜影院日韩av| 我要搜黄色片| 99热这里只有是精品在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 舔av片在线| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产在线男女| 久久久午夜欧美精品| 乱人视频在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 99热网站在线观看| 一级av片app| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 在现免费观看毛片| av福利片在线观看| av视频在线观看入口| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产乱人偷精品视频| 一级a爱片免费观看的视频| 秋霞在线观看毛片| av在线蜜桃| 99riav亚洲国产免费| 婷婷亚洲欧美| 最近中文字幕高清免费大全6| 中文资源天堂在线| 露出奶头的视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲av免费在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 欧美丝袜亚洲另类| 全区人妻精品视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品日产1卡2卡| 全区人妻精品视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 看免费成人av毛片| 亚洲综合色惰| 毛片女人毛片| 在线播放无遮挡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 最近在线观看免费完整版| 看十八女毛片水多多多| 亚洲最大成人av| 成人亚洲精品av一区二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 老女人水多毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 男女边吃奶边做爰视频| 久久99热6这里只有精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚州av有码| av女优亚洲男人天堂| 亚洲性久久影院| 国产乱人偷精品视频| 欧美潮喷喷水| 国内精品美女久久久久久| 久久久精品欧美日韩精品| 成年女人毛片免费观看观看9| 少妇高潮的动态图| 哪里可以看免费的av片| 成年免费大片在线观看| 日本熟妇午夜| 国产成人91sexporn| 一级黄片播放器| 国产毛片a区久久久久| 亚洲综合色惰| 精品无人区乱码1区二区| 色综合色国产| 亚州av有码| 51国产日韩欧美| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产成人aa在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲av免费在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲国产精品合色在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 免费看av在线观看网站| av福利片在线观看| a级毛片a级免费在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产高清视频在线播放一区| 岛国在线免费视频观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲精品亚洲一区二区| 毛片一级片免费看久久久久| 午夜精品一区二区三区免费看| 午夜福利在线在线| 春色校园在线视频观看| 日韩成人伦理影院| 久久这里只有精品中国| 少妇熟女欧美另类| 成人亚洲欧美一区二区av| 床上黄色一级片| 老司机福利观看| 波多野结衣高清无吗| 国产成人a∨麻豆精品| 成人一区二区视频在线观看| 最新中文字幕久久久久| 成人性生交大片免费视频hd| 国产伦一二天堂av在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 在线看三级毛片| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久久精品欧美日韩精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩欧美精品v在线| 国产成人影院久久av| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品久久久久久久久av| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 神马国产精品三级电影在线观看| 夜夜爽天天搞| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一进一出好大好爽视频| aaaaa片日本免费| 成人亚洲欧美一区二区av| or卡值多少钱| 日韩大尺度精品在线看网址| 91av网一区二区| 麻豆国产av国片精品| 一级黄色大片毛片| 乱人视频在线观看| 天堂影院成人在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲国产精品合色在线| 淫秽高清视频在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久久久九九精品影院| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲无线在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲色图av天堂| 我要搜黄色片| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久这里只有精品中国| 亚洲精品456在线播放app| 成人毛片a级毛片在线播放| 日日摸夜夜添夜夜爱| av在线亚洲专区| 有码 亚洲区| 久久精品国产亚洲av天美| 91av网一区二区| 在线免费观看不下载黄p国产| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 乱人视频在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| av免费在线看不卡| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品福利在线免费观看| 老司机影院成人| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲av第一区精品v没综合| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久99热这里只有精品18| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 午夜免费激情av| 国产精品国产高清国产av| 日本a在线网址| 日韩一区二区视频免费看| 香蕉av资源在线| 亚洲第一电影网av| 一级a爱片免费观看的视频| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 69人妻影院| 欧美高清成人免费视频www| 波多野结衣高清作品| 午夜精品一区二区三区免费看| 99久久精品热视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品人妻视频免费看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 全区人妻精品视频| 午夜免费激情av| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日本免费a在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 淫秽高清视频在线观看| 成人综合一区亚洲| 哪里可以看免费的av片| 观看免费一级毛片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产精品一二三区在线看| 日韩欧美精品v在线| 精品无人区乱码1区二区| 色哟哟哟哟哟哟| 能在线免费观看的黄片| 永久网站在线| 高清毛片免费观看视频网站| 熟女电影av网| 久久午夜福利片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产免费男女视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 一个人看视频在线观看www免费| or卡值多少钱| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲精品国产成人久久av| 成人一区二区视频在线观看| 成人特级av手机在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 变态另类丝袜制服| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品久久久久久久久av| 免费人成在线观看视频色| 久久精品综合一区二区三区| 青春草视频在线免费观看| 成年女人永久免费观看视频| 免费人成在线观看视频色| 波多野结衣高清作品|