IGFBP-rP1在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及意義

呂宏娜 王要軍

(1遼寧醫(yī)學(xué)院濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地;2中國(guó)人民解放軍濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院消化科,濟(jì)南250031)

IGFBP-rP1是目前生長(zhǎng)抑制因子中的研究熱點(diǎn),參與細(xì)胞衰老、程序性凋亡等多種生理過程,因此IGFBP-rP1可能是潛在的腫瘤抑制因子[1]。小鼠HCC能夠表達(dá)IGFBP-rP1[2],人類組織的研究尚未見報(bào)道。

材料和方法

1.標(biāo) 本

收集2003年-2008年濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院病理科HBsAg陽性的 HCC石蠟標(biāo)本43例,32例癌旁肝組織 (距癌邊緣組織>1.5cm)和9例 HBsAg陰性的正常肝組織。術(shù)前均未行任何抗癌治療,具有完整臨床及病理資料。

2.試 劑

濃縮型羊抗人 IGFBP-rP1多克隆抗體,購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。二步法山羊免疫組化檢測(cè)試劑盒及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

3.方 法

石蠟標(biāo)本常規(guī)切片進(jìn)行 IGFBP-rP1免疫組化二步法染色:切片脫蠟至水,高溫修復(fù),阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,滴加羊抗人 IGFBP-rP1抗體 (1:1000)4℃孵育過夜,滴加 Goat Enhancer二抗孵育,滴加poly-HRP anti-Goat IgG,DAB顯色,蘇木精復(fù)染,中性樹膠封片。用PBS替代抗 IGFBP-rP1抗體作陰性對(duì)照。

4.結(jié) 果判定

IGFBP-rP1陽性判定參照文獻(xiàn)[3]稍做改進(jìn)后采用半定量積分法,以細(xì)胞漿染成黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞,每張切片根據(jù)陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度及細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的多少進(jìn)行分級(jí):染色強(qiáng)度0分 (不著色),1分 (弱),2分 (中),3分 (強(qiáng)),細(xì)胞數(shù)記分:<5%為0分,5%-25%為1分,26%-50%為2分,51%-75%為3分,>75%為4分;組織化學(xué)積分 (兩記分的乘積):≤1為陰性,>1為陽性 (2-4分為弱陽性,6-8分為陽性,9-12分為強(qiáng)陽性)。

5.統(tǒng) 計(jì)學(xué)分析

用SPSS l3.0軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。IGFBP-rP1在 HCC組織、癌旁組織、正常肝組織的表達(dá)情況的差異用 Kruskal-Wallis H檢驗(yàn),在 HCC組織中與臨床病理因素的關(guān)系用Pearson Chi-Square及Fisher’s Exact Test檢驗(yàn),與 HCC的分化程度的相關(guān)性用Spearman秩相關(guān)分析;P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 IGFBP-rP1在 HCC的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系Table 1 The relationship of IGFBP-rP1 expression and cliniopathological factors in HCC

結(jié) 果

1.IGFBP-rP1在 HCC、癌旁組織和正常肝組織中的表達(dá)

43例肝癌組織IGFBP-rP1表達(dá)陽性22例,21例表達(dá)陰性 (圖1),其中強(qiáng)陽性0例 (0%),陽性12例 (27.9%),弱陽性10例 (23.3%),陰性21例 (48.8%);32例癌旁肝組織IGFBP-rP1表達(dá)陽性31例 (圖2),其中強(qiáng)陽性5例 (15.6%),陽性18例 (56.3%),弱陽性6例 (18.8%),陰性2例(6.3%),9例正常肝組織 IGFBP-rP1均表達(dá)陽性(圖3),其中強(qiáng)陽性 3例 (33.3%),陽性 2例(22.2%),弱陽性4例 (44.4%),陰性0例(0%),IGFBP-rP1在HCC的表達(dá)顯著低于癌旁肝組織 (P<0.01)及正常肝組織 (P<0.01),但正常肝組織和癌旁肝組織IGFBP-rP1的表達(dá)無明顯差異 (P>0.05)。

2.IGFBP-rP1表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系

在HCC組織中IGFBP-rP1的表達(dá)與性別、年齡、肝硬化有無、血清甲胎蛋白水平、肝功能Child分級(jí)、腫瘤數(shù)目、腫瘤直徑、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓及臨床分期無關(guān) (P>0.05),與 Edmondson分級(jí)、包膜完整性有關(guān)。在 Edmondson分級(jí)中Ⅲ-Ⅳ級(jí)和包膜不完整的 HCC組織中 IGFBP-rP1的表達(dá)陽性率明顯低于 Ⅰ-Ⅱ級(jí) (P<0.05)和包膜完整 (P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (表1)。IGFBP-rP1表達(dá)與分化程度的相關(guān)性分析顯示兩者呈正相關(guān) (r=0.4000,P<0.01)

討 論

IGFBP-rP1是第一個(gè)低親和力 IGFBP家族成員,又名 mac25、腫瘤源性粘附分子 (tumor-derived adhesion factor,TAF)、前列環(huán)素刺激因子(prostacyclin-stimulating factor,PSF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 7(insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7),除與其他 IGFBP相同的結(jié)合、攜帶、保護(hù)、轉(zhuǎn)運(yùn)IGFs,影響IGF受體下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能,IGFBP-rP1還是一種生長(zhǎng)抑制因子,參與細(xì)胞衰老與誘導(dǎo)細(xì)胞程序性凋亡等多種生理過程[3]。目前認(rèn)為細(xì)胞衰老和腫瘤抑制之間有緊密的聯(lián)系,腫瘤抑制基因可能通過促進(jìn)細(xì)胞衰老起作用[4]。因此 IGFBP-rP1可能是潛在的腫瘤抑制基因。有研究[5-6]認(rèn)為腫瘤中 IGFBP-rP1存在DNA超甲基化現(xiàn)象,使IGFBP-rP1基因靜默,從而影響轉(zhuǎn)錄過程,使 IGFBP-rP1表達(dá)減少,并且甲基化的程度與 IGFBP-rP1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。Tamura K[7]認(rèn)為IGFBP-rP1能夠阻止血管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的血管形成從而抑制腫瘤的血管形成。

雖然IGFBP-rP1在大部分體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)減低,并且轉(zhuǎn)染到腫瘤細(xì)胞株上,細(xì)胞的生長(zhǎng)減慢[8-9],但是在不同腫瘤組織中 IGFBP-rP1的表達(dá)報(bào)道卻相差較大[2,10]。因此我們用免疫組化檢測(cè)人 HCC中 IGFBP-rP1的表達(dá),發(fā)現(xiàn) IGFBP-rP1在HCC中的表達(dá)顯著低于癌旁肝組織及正常肝組織,并且 IGFBP-rP1低表達(dá)或無表達(dá)與腫瘤低分化及包膜完整性破壞等惡性生物學(xué)行為有關(guān),與 Ye F[3]在人大腸癌組織中對(duì) IGFBP-rP1表達(dá)的研究相一致。IGFBP-rP1表達(dá)越低,HCC分化程度越低,且包膜不完整 (P<0.01),其機(jī)制可能是IGFBP-rP1表達(dá)的下調(diào)減弱了其抑癌功能,從而導(dǎo)致HCC的進(jìn)展。因此我們認(rèn)為IGFBP-rP1能夠抑制 HCC的部分惡性生物學(xué)行為,IGFBP-rP1表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)HCC的進(jìn)展。

總之,IGFBP-rP1在肝細(xì)胞癌的進(jìn)展中起重要作用,能否通過控制IGFBP-rP1表達(dá)防治 HCC尚需進(jìn)一步研究。

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圖 版 說 明

圖1 IGFBP-rP1在 HCC中無表達(dá)。PV6003二步法 ×400

圖2 IGFBP-rP1在癌旁肝組織肝細(xì)胞胞質(zhì)呈片狀表達(dá)。PV6003二步法 ×400

圖3 IGFBP-rP1在正常肝細(xì)胞胞質(zhì)呈片狀表達(dá)。PV6003二步法 ×400

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Negative expression of IGFBP-rP1 in HCCs.PV6003 method×400

Fig2 The expression of IGFBP-rP1 in the cytoplasm of hepatocytes in liver tissues beside HCC,the positive cells distributed with patchy.PV6003 method×400

Fig3 The expression of IGFBP-rP1 in the cytoplasm of hepatocytes in normal liver tissues.,the positive cells distributed with patchy.PV6003 method×400