紅系造血微環(huán)境-成紅細(xì)胞血島

張 玥 韓代書

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞生物學(xué)系,北京 100005)

1.血島的發(fā)現(xiàn)

20世紀(jì)50年代,法國血液學(xué)家Bessis[1]首次根據(jù)骨髓透射電鏡照片描述了血島的組成:許多有核紅細(xì)胞圍繞著中心巨噬細(xì)胞。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)中心巨噬細(xì)胞可作為滋養(yǎng)細(xì)胞[2],能夠?yàn)槌杉t細(xì)胞合成血紅蛋白提供鐵離子,排出的紅細(xì)胞核由巨噬細(xì)胞吞噬清除。此后,血島的研究有了較大進(jìn)展,發(fā)現(xiàn)在正常鼠的骨髓中,所有的成紅細(xì)胞起初都與巨噬細(xì)胞相連[3]。血島中含有處于分化各個(gè)階段的紅細(xì)胞,它們環(huán)繞著貼附在中心巨噬細(xì)胞邊緣。而且,成紅細(xì)胞在血島中的增殖和分化可同步進(jìn)行,在同一個(gè)成紅細(xì)胞血島中,有多個(gè)成紅細(xì)胞同時(shí)達(dá)到成熟[4]。

2.血島的組成和定位

骨髓中復(fù)雜而豐富的血管系統(tǒng)、造血細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞 (血管外膜細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞等)和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成造血微環(huán)境,它們直接或間接地通過多種造血因子誘導(dǎo)造血干細(xì)胞、造血祖細(xì)胞的增殖和分化,從而參與調(diào)節(jié)造血。發(fā)育中的各種血細(xì)胞在造血組織中的分布呈現(xiàn)一定規(guī)律,幼稚紅細(xì)胞常位于血竇附近,成群嵌附在巨噬細(xì)胞表面,構(gòu)成血島;幼稚粒細(xì)胞多遠(yuǎn)離血竇,當(dāng)發(fā)育至晚幼粒細(xì)胞時(shí),則借其變形運(yùn)動(dòng)接近并穿入血竇。巨核細(xì)胞常常緊靠血竇內(nèi)皮間隙,將胞質(zhì)突起深入竇腔,脫落成血小板。這種分布狀況表明造血組織的不同部位具有不同的微環(huán)境造血誘導(dǎo)作用。

紅細(xì)胞發(fā)生 (erythropoiesis)始于多能干細(xì)胞,首先分化為多能髓系祖細(xì)胞,進(jìn)一步分化為紅系祖細(xì)胞,經(jīng)歷紅系爆式形成單位 (burst forming unit-erythroid,BFU-E)和紅系集落形成單位(colony forming unit-erythroid,CFU-E)階段,接著經(jīng)歷原紅細(xì)胞→早幼紅細(xì)胞→中幼紅細(xì)胞→晚幼紅細(xì)胞,然后停止有絲分裂。這些細(xì)胞在骨髓中圍繞巨噬細(xì)胞形成血島,晚幼紅細(xì)胞在排核期離開血島與血竇內(nèi)皮接觸,將細(xì)胞核排出后成為網(wǎng)織紅細(xì)胞,它們穿過血竇內(nèi)皮細(xì)胞間隙進(jìn)入到外周血中進(jìn)一步分化為成熟紅細(xì)胞。

每個(gè)血島中的成紅細(xì)胞數(shù)目不盡相同,種間差別很大,小鼠骨髓中每個(gè)血島中的成紅細(xì)胞數(shù)為10個(gè)左右[5],而在人骨髓中,血島中的成紅細(xì)胞少則5個(gè),多則可達(dá)30個(gè)[6]。血島不僅位于血竇附近,還遍布整個(gè)骨髓。通過對骨髓血島的定量分析,發(fā)現(xiàn)有50%的血島與血竇相連,其余的血島位于血竇以外[7]。血竇外圍的血島中含有更多的嗜酸性成紅細(xì)胞,表明靠近血竇的成紅細(xì)胞更接近終末分化。一個(gè)可能的機(jī)制是中心巨噬細(xì)胞和正在成熟的成紅細(xì)胞間的相互作用刺激巨噬細(xì)胞釋放蛋白酶,降解周圍的胞外基質(zhì),使血島從最初的位置移動(dòng)到血竇附近。另一個(gè)可能的機(jī)制是分化中的成紅細(xì)胞通過與不同位置的巨噬細(xì)胞分離與再結(jié)合向血竇移動(dòng),這種機(jī)制可以解釋在應(yīng)激狀態(tài)下如果成紅細(xì)胞的數(shù)量多于巨噬細(xì)胞上結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量,外周血循環(huán)中會(huì)出現(xiàn)較多的未成熟紅細(xì)胞。

3.血島中的細(xì)胞間粘附

在分化過程中,成紅細(xì)胞表達(dá)多種粘附分子,它們介導(dǎo)紅細(xì)胞與紅細(xì)胞之間,紅細(xì)胞與巨噬細(xì)胞之間的相互作用,以及與細(xì)胞外基質(zhì) (如纖維素和層粘連蛋白)的粘附,調(diào)節(jié)紅細(xì)胞的分化。

3.1 成紅細(xì)胞/巨噬細(xì)胞蛋白 (Emp)

Emp(erythroblast macrophage protein)是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的血島細(xì)胞間的粘附分子,它是分子量為36 kD的跨膜蛋白,能夠形成巨噬細(xì)胞/成紅細(xì)胞間或者成紅細(xì)胞/成紅細(xì)胞間的同嗜性粘著[8]。Emp的胞質(zhì)區(qū)包括幾個(gè)SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白結(jié)合位點(diǎn)和一個(gè)酪氨酸磷酸化位點(diǎn),推測其具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能。在抗Emp條件下,可明顯抑制紅細(xì)胞的增殖、成熟和去核能力,促進(jìn)紅細(xì)胞的凋亡[9]。在體外培養(yǎng)胚胎肝臟巨噬細(xì)胞的分化過程中,Emp定位在不成熟巨噬細(xì)胞內(nèi),而在成熟的巨噬細(xì)胞中,大部分位于細(xì)胞表面[10]。成熟的巨噬細(xì)胞與成紅細(xì)胞結(jié)合,而未成熟的巨噬細(xì)胞則不與其結(jié)合。在Emp缺失胚胎中,產(chǎn)生嚴(yán)重貧血,胚胎于第19.5天圍產(chǎn)期死亡,說明Emp在紅細(xì)胞發(fā)生過程中起到重要的作用[11]。

3.2 α4β1整合素與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)

介導(dǎo)成紅細(xì)胞血島中細(xì)胞間相互作用的一對受體與配體是紅細(xì)胞表面的α4β1整合素 (integrin)和巨噬細(xì)胞表面VCAM-1(vascular cell adhesion molecule-1)[12],無論α4β1或VCAM-1的抗體都能夠破壞成紅細(xì)胞血島,它們之間的粘附可以維持卵黃囊中成紅細(xì)胞血島的完整。成紅細(xì)胞起初在循環(huán)中是有核的,在與胚胎肝臟巨噬細(xì)胞粘附后發(fā)生排核 (在小鼠懷孕胚胎期第14.5-16.5天)[13]。體外實(shí)驗(yàn)也證明,只有與胚胎肝臟巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),成紅細(xì)胞才能進(jìn)入排核階段。在紅細(xì)胞的成熟過程中,α4抗體能夠減少血島的數(shù)量,而且每個(gè)血島中的成紅細(xì)胞數(shù)量也有所減少[14]。此外,VCAM-1是α4酶體的類似物,因?yàn)榕咛テ诘?5.5天的肝臟巨噬細(xì)胞表面出現(xiàn)VCAM-1。

3.3 細(xì)胞間黏附分子-4(ICAM-4)與αV整合素

最近又發(fā)現(xiàn)了血島中的另一對粘附分子:紅細(xì)胞表面的細(xì)胞間粘附分子ICAM-4(intercellular adhesion molecule-4),和巨噬細(xì)胞表面的αV整合素。利用αV合成肽阻斷ICAM-4/αV結(jié)合可以使血島減少70%[15],在 ICAM-4基因敲除鼠中,血島在體外的形成或體內(nèi)的重建都顯著減少[16],表明ICAM-4/αV之間的粘附有助于血島的形成。一種分泌型的 ICAM-4異構(gòu)體 ICAM-4S,在紅細(xì)胞分化末期表達(dá)上調(diào),ICAM-4S可競爭結(jié)合巨噬細(xì)胞上的αV配體,從而抑制ICAM-4與αV的結(jié)合,可以促使網(wǎng)織紅細(xì)胞與中心巨噬細(xì)胞分離,以便進(jìn)入血液循環(huán)。

3.4 其他相關(guān)黏附分子

許多其他的巨噬細(xì)胞表面蛋白也可作為成紅細(xì)胞的受體,但還沒有確定它們所識別的配體。例如羊幼紅細(xì)胞受體 (SER)現(xiàn)在改稱為唾液酸黏附素(sialoadhesin或CD69),定位在血島中巨噬細(xì)胞和成紅細(xì)胞相連的位點(diǎn)上[17]。另一個(gè)巨噬細(xì)胞黏附糖蛋白是CD163(也稱為 ED2抗原)[18],它在紅細(xì)胞上的配體目前還未發(fā)現(xiàn)。在體外,CD163能夠促進(jìn)紅細(xì)胞的生長,但不影響其分化。

在將來的研究中還會(huì)發(fā)現(xiàn)更多的血島中細(xì)胞間相互作用的粘附分子。但各種成紅細(xì)胞與巨噬細(xì)胞之間連接的功能是什么,它們是否是動(dòng)態(tài)的,是否具有分化階段特異性,仍需進(jìn)一步的研究。因?yàn)檎纤嘏c肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架間的相互作用能夠調(diào)節(jié)胞內(nèi)信號的傳遞[19],表明血島中的某些黏附分子的相互作用能夠啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號通路,共同調(diào)節(jié)基因表達(dá)和黏附,這應(yīng)成為將來研究的重點(diǎn)內(nèi)容。

4.中心巨噬細(xì)胞的作用

中心巨噬細(xì)胞較大,直徑大多超過15μm,核質(zhì)比遠(yuǎn)小于1。中心巨噬細(xì)胞將紅細(xì)胞錨定在血島中,組成紅細(xì)胞增殖與分化的微環(huán)境,在紅細(xì)胞發(fā)生過程中起著關(guān)鍵作用。

中心巨噬細(xì)胞的功能之一是直接將鐵轉(zhuǎn)運(yùn)給附著的成紅細(xì)胞,近來證明[20]巨噬細(xì)胞合成轉(zhuǎn)鐵蛋白,分泌到細(xì)胞外,然后被成紅細(xì)胞攝取,轉(zhuǎn)鐵蛋白經(jīng)過酸化和蛋白水解作用后釋放出鐵離子,用于成紅細(xì)胞血紅蛋白的合成。哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞終末分化的特點(diǎn)之一是排核,排出的細(xì)胞核由中心巨噬細(xì)胞吞噬清除[21]。近來發(fā)現(xiàn)中心巨噬細(xì)胞在紅細(xì)胞排核中起重要作用,Emp與β整合素參與這一過程,它們的相互作用可以使細(xì)胞核黏附在巨噬細(xì)胞上,從而促進(jìn)紅細(xì)胞排核并被吞噬[22]。

巨噬細(xì)胞分化異?？梢云茐募t細(xì)胞發(fā)生的微環(huán)境。調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞分化的一個(gè)重要因素是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白 (retinoblastoma tumor supppressor protein,Rb)[23],Rb缺失的胚胎會(huì)患貧血,并于出生前死亡。紅細(xì)胞分化異常,不能成功排核,表明Rb對于建立一個(gè)正常的成紅細(xì)胞分化環(huán)境是非常重要的。然而它的作用機(jī)制仍不清楚,推測是由于Rb缺失的巨噬細(xì)胞不能完成分化所致。另一個(gè)與巨噬細(xì)胞功能相關(guān)的分子是一種細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白palladin[24]。palladin的靶向敲除會(huì)導(dǎo)致胚胎在第15.5天死亡,胚胎在第13.5天發(fā)生嚴(yán)重貧血,成熟紅細(xì)胞明顯減少,成紅細(xì)胞凋亡增加并且伴隨著紅細(xì)胞終末分化受阻。此外,胚胎肝臟成紅細(xì)胞血島的結(jié)構(gòu)在體內(nèi)發(fā)生異常,palladin缺失的胚胎肝臟細(xì)胞不能在體外形成血島。palladin缺失的巨噬細(xì)胞既不能與野生型的成紅細(xì)胞形成血島,也不能與palladin缺失的成紅細(xì)胞形成血島。而野生型的巨噬細(xì)胞既可以與野生型的成紅細(xì)胞形成血島,也可以與palladin缺失的成紅細(xì)胞形成血島。表明巨噬細(xì)胞的功能由于palladin缺失出現(xiàn)異常。

5.血島的正向調(diào)節(jié)

血島對紅細(xì)胞發(fā)生的調(diào)節(jié)是雙向性的,既可以促進(jìn)紅細(xì)胞增殖與分化,稱之為正向調(diào)節(jié);也具有一定的抑制作用,稱之為負(fù)向調(diào)節(jié)。紅細(xì)胞的正常發(fā)生需要正、負(fù)雙向調(diào)節(jié)所形成的平衡,包括細(xì)胞-細(xì)胞間的相互作用及細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。

5.1 細(xì)胞間相互作用

與巨噬細(xì)胞直接相互作用可以促進(jìn)成紅細(xì)胞的增殖[25],當(dāng)CFU-E/原紅細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的時(shí)候可以形成血島,與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的成紅細(xì)胞的增殖數(shù)量比單獨(dú)培養(yǎng)的成紅細(xì)胞高了3倍。成紅細(xì)胞-成紅細(xì)胞間的相互作用也調(diào)節(jié)了細(xì)胞的增殖與分化,轉(zhuǎn)錄因子 GATA-1在紅細(xì)胞正常分化過程中起重要作用[26],GATA-1表達(dá)受血島中成紅細(xì)胞相互作用的調(diào)節(jié),位于紅細(xì)胞表面的紅細(xì)胞分化信號分子參與了這一過程。

5.2 細(xì)胞因子的正向調(diào)節(jié)

促紅細(xì)胞生成素 (erythropoietin,EPO)是最早發(fā)現(xiàn)的紅細(xì)胞造血因子,它特異性作用于紅系祖細(xì)胞,合成EPO的主要器官是腎臟。EPO在紅細(xì)胞發(fā)生過程中有防止細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞增生的雙重作用。EPO的主要生物學(xué)作用是促進(jìn)紅系祖細(xì)胞的增殖、分化和成熟。BFU-E增殖受EPO、IL-3、M-CSF多種因子的調(diào)控;CFU-E的增殖分化主要由EPO調(diào)節(jié)。此外,EPO還有抗氧化穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的作用,改善紅細(xì)胞膜脂流動(dòng)性和蛋白質(zhì)構(gòu)象,促進(jìn)膜Na+-K+-ATP酶的活力,維持膜內(nèi)外正常滲透壓。EPO對紅細(xì)胞發(fā)生的正向調(diào)節(jié)主要是通過抗凋亡作用來實(shí)現(xiàn)的,因?yàn)樗⒉荒苤苯哟龠M(jìn)紅系祖細(xì)胞的有絲分裂[27]。

巨噬細(xì)胞分泌的一些可溶性細(xì)胞因子可以正向調(diào)節(jié)血島中紅細(xì)胞的發(fā)生,如胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1),能夠促進(jìn)BFU-E和CFU-E的生長[28]。另外,在巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)Epo的mRNA[29]。成紅細(xì)胞分泌的可溶性細(xì)胞因子在造血微環(huán)境中也具有一定的功能,如血管內(nèi)皮生長因子-A (vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)和胎盤生長因子 (placenta growth factor,PIGF)[30],它們可以通過旁分泌方式介導(dǎo)巨噬細(xì)胞和成紅細(xì)胞間的對話,從而調(diào)節(jié)血島的形成。

Gas6(Growth arrest-specific gene 6)是最近發(fā)現(xiàn)的能夠促進(jìn)紅細(xì)胞發(fā)生的因子,Gas6可以結(jié)合并激活它的受體Tyro3受體酪氨酸激酶 (receptor tryrosin kinases,RTKs)家族成員。生理狀態(tài)下,Gas6主要由造血基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生,而 Tyro3 RTKs組成性的表達(dá)于成紅細(xì)胞[32],分泌出的Gas6與成紅細(xì)胞上的受體結(jié)合,可增強(qiáng) Epo信號的傳導(dǎo)。另外,Gas6可以抑制巨噬細(xì)胞分泌成紅細(xì)胞抑制因子,因此,Gas6可以用于治療對 EPO無效的貧血病人[31]。我們發(fā)現(xiàn) Tyro3 RTKs突變小鼠表現(xiàn)為紅細(xì)胞發(fā)生異常[32],進(jìn)一步證實(shí) Gas6通過激活它的受體來調(diào)節(jié)紅細(xì)胞發(fā)生。

6.血島的負(fù)向調(diào)節(jié)

當(dāng)機(jī)體發(fā)生慢性炎癥時(shí),循環(huán)中一些細(xì)胞因子水平會(huì)升高,特別是炎癥相關(guān)因子,如腫瘤壞死因子 TNF-α,轉(zhuǎn)化生長因子 TGF-β,干擾素 IFN-γ和白細(xì)胞介素-6(IL-6)。在成紅細(xì)胞血島微環(huán)境中,這些因子的局部濃度可能更高,因?yàn)樗鼈冎饕怯芍行木奘杉?xì)胞直接分泌的。患有慢性炎癥的病人,炎癥因子水平的升高,可以抑制紅細(xì)胞發(fā)生[33]。TNF-α可以通過 caspase降解轉(zhuǎn)錄因子GATA-1,促進(jìn)細(xì)胞凋亡及抑制增殖,從而抑制紅細(xì)胞的發(fā)生[34]。另外,TNF-α能夠刺激巨噬細(xì)胞分泌金屬蛋白水解酶,降解胞外基質(zhì)。如果這種效應(yīng)發(fā)生在血島中,就會(huì)破壞成紅細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附作用,損壞紅細(xì)胞發(fā)生的環(huán)境。TGF-β可以抑制成紅細(xì)胞的增殖,這可能是通過啟動(dòng)Rho和Rac GTP酶的活性來影響成紅細(xì)胞的骨架[35]。IFN-γ可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和成紅細(xì)胞分泌可溶性的 TNF依賴性的凋亡配體 (TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)[36],TRAIL可以激活胞內(nèi)ERK/MAPK通路,抑制成紅細(xì)胞的分化[37]。IL-6能夠上調(diào)hepcidin蛋白的表達(dá),hepcidin可以結(jié)合到ferropotin蛋白上,導(dǎo)致它的內(nèi)化作用和降解,從而抑制巨噬細(xì)胞中鐵離子的輸出,抑制紅細(xì)胞發(fā)生過程中鐵離子的攝取[38]。顯然,多種細(xì)胞因子可以調(diào)節(jié)紅細(xì)胞發(fā)生,然而對大部分因子的作用機(jī)理認(rèn)識較少,深入研究它們作用的分子機(jī)理有可能發(fā)現(xiàn)治療貧血病的新方法。

7.成紅細(xì)胞血島中的細(xì)胞外基質(zhì)

已知有兩個(gè)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白對成紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞的終末分化起到調(diào)節(jié)作用:纖連蛋白 (fibronectin,FN)和層粘連蛋白 (laminin,LN)。纖連蛋白能夠影響包括造血細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞的增殖、分化、黏附和移動(dòng)。成紅細(xì)胞表達(dá)兩種與纖連蛋白結(jié)合的整合素:α4β1和α5β1[39]。然而α5β1的表達(dá)在終末分化期間有所下調(diào),在分化晚期的成紅細(xì)胞表面只表達(dá)α4β1[40]。在細(xì)胞分化的晚期,成紅細(xì)胞與纖連蛋白的黏附作用明顯減少,網(wǎng)織紅細(xì)胞與其失去黏附作用[41]。當(dāng)成熟的紅白血病細(xì)胞在纖連蛋白存在的條件下培養(yǎng)時(shí),比不加纖連蛋白培養(yǎng)更易分化為網(wǎng)織紅細(xì)胞。最近發(fā)現(xiàn)[42],纖連蛋白能通過抑制凋亡促進(jìn)成紅細(xì)胞的增殖,這種抗凋亡機(jī)制是通過bcl-XL作用的。

在紅細(xì)胞終末分化的晚期,在成紅細(xì)胞表面的Lutheran(Lu)糖蛋白與細(xì)胞外基質(zhì)層粘連蛋白結(jié)合[43]。Lu是層粘連蛋白的受體,它在人類紅細(xì)胞終末分化時(shí)表達(dá),而層粘連蛋白定位于骨髓血竇的基膜上,推測它們的相互作用可能有助于網(wǎng)織紅細(xì)胞向血竇移動(dòng)。

8.展望

成紅細(xì)胞血島在紅細(xì)胞發(fā)生中起著重要的作用,雖然進(jìn)行了長期的研究,但血島中的分子調(diào)控機(jī)制仍有待深入。已認(rèn)識到血島中主要通過Emp、VCAM-1等一些相關(guān)粘附分子介導(dǎo)細(xì)胞間的粘附,通過EPO、Gas6以及一些巨噬細(xì)胞和成紅細(xì)胞分泌的可溶性細(xì)胞因子對血島進(jìn)行正向調(diào)節(jié),通過TNF-α、TGF-β等細(xì)胞因子對血島進(jìn)行負(fù)向調(diào)節(jié)。

對于這些機(jī)制的深入研究可能發(fā)現(xiàn)治療貧血的新方法。需要解決的核心問題是:各種成紅細(xì)胞與巨噬細(xì)胞之間連接的功能是什么,不同分化階段的成紅細(xì)胞與巨噬細(xì)胞間是否存在特異的連接;中心巨噬細(xì)胞在使血島向血竇移動(dòng)以及將網(wǎng)織紅細(xì)胞釋放到外周循環(huán)的過程中胞外基質(zhì)的作用;以及血島細(xì)胞因子調(diào)節(jié)紅細(xì)胞發(fā)生的分子機(jī)理。有望在不久的將來可以通過調(diào)控細(xì)胞因子治療貧血病,如通過抗 TNF-α,單獨(dú)使用 Gas6或與 Epo聯(lián)合使用,有可能治療炎癥引發(fā)的貧血、骨髓增生異常綜合征,地中海貧血和瘧性貧血。

〔1〕Bessis M.Erythroblastic island,functional unity of bone marrow.Rev Hematol,1958,13(1):8-11

〔2〕Bessis MC,Breton-Gorius J.Iron metabolism in the bone marrow as seen by electron microscopy:a critical review.Blood,1962,19:635-663

〔3〕Mohandas N,Prenant M.Three-dimensional model of bone marrow.Blood,1978,51(4):633-643

〔4〕Allen TD,Dexter TM.Ultrastructural aspects of erythropoietic differentiation in long-term bone marrow culture.Differentiation,1982,21(2):86-94

〔5〕Yokoyama T,Kitagawa H,Takeuchi T,et al.No apoptotic cell death of erythroid cells of erythroblastic islands in bone marrow of healthy rats.J Vet Med Sci,2002,64(10):913-919

〔6〕Lee SH,Crocker PR,Westaby S,et al.Isolation and immuno-cytochemical characterization of human bone marrow stromal macrophages in hemopoietic clusters.J Exp Med,1988,168(3):1193-1198

〔7〕Yokoyama T,Etoh T,Kitagawa H,et al.Migration of erythroblastic islands toward the sinusoid as erythroid maturation proceeds in rat bone marrow.J Vet Med Sci,2003,65(4):449-452

〔8〕Hanspal M,Hanspal JS.The association of erythroblasts with macrophages promotes erythroid proliferation and maturation:a 30-kD heparinbinding protein is involved in this contact.Blood,1994,84(10):3494-3504

〔9〕Hanspal M,Smockova Y,Uong Q.Molecular identification and functional characterization of a novel protein that mediates the attachment of erythroblasts to macrophages.Blood,1998,92(8):2940-2950

〔10〕Soni S,Bala S,Kumar A,et al.Changing pattern of the subcellular distribution of erythroblast macrophage protein (Emp) during macrophagedifferentiation.Blood Cells Mol Dis,2007,38(1):25-31

〔11〕Soni S,Bala S,Gwynn B,et al.Absence of erythroblast macrophage protein(Emp)leads to failure of erythroblast nuclear extrusion.J Biol Chem,2006,281(29):20181-20189

〔12〕Sadahira Y,Yoshino T,Monobe Y.Very late activation antigen 4-vascular cell adhesion molecule 1 interaction is involved in the formation of erythroblastic islands.J Exp Med,1995,181(1):411-415

〔13〕Kingsley PD,Malik J,Fantauzzo KA,et al.Yolk sacderived primitive erythroblasts enucleate during mammalian embryogenesis.Blood,2004,104(1):19-25

〔14〕McGrath KE,Kingsley PD,Koniski AD,et al.Enucleation of primitive erythroid cells generates a transient population of“pyrenocytes”in the mammalian fe-tus.Blood,2008,111(4):2409-2417

〔15〕Lee G,Lo A,Short SA,et al.Targeted gene deletion demonstrates that the cell adhesion molecule ICAM-4 is critical for erythroblastic island formation.Blood,2006,108(6):2064-2071

〔16〕Lee G,Spring FA,Parsons SF,et al.Novel secreted isoform of adhesion molecule ICAM-4:potential regulator ofmembrane-associated ICAM-4 interactions.Blood,2003,101(5):1790-1797

〔17〕Crocker PR,Werb Z,Gordon S,et al.Ultrastructural localization of a macrophagerestricted sialic acid binding hemagglutinin,SER,in macrophage-hematopoietic cell clusters.Blood,1990,76(6):1131-1138

〔18〕BarbéE,Huitinga I,Dopp EA,et al.A novel bone marrow frozen sectionassay for studying hematopoietic interactions in situ:the role of stromal bone marrow macrophages in erythroblast binding.J Cell Sci,1996,109(Pt 12):2937-2945

〔19〕DeMali KA,Wennerberg K,Burridge K.Integrin signaling to the actin cytoskeleton.Curr Opin Cell Biol,2003,15(5):572-582

〔20〕Leimberg MJ,Prus E,Konijn AM,et al.Macrophages function as a ferritin iron source for cultured human erythroid precursors.J Cell Biochem,2008,103(4):1211-1218

〔21〕Skutelsky E,Danon D.On the expulsion of the erythroid nucleus and its phagocytosis.Anat Rec,1972,173(1):123-126

〔22〕Lee JC,Gimm JA,Lo AJ,et al.Mechanism of protein sorting during erythroblast enucleation:role of cytoskeletal connectivity.Blood,2004,103(5):1912-1919

〔23〕Iavarone A,King ER,Dai XM,et al.Retinoblastoma promotes definitive erythropoiesis by repressing Id2 in fetal liver macrophages.Nature,2004,432(7020):1040-1045

〔24〕Liu XS,Li XH,Wang Y,et al.Disruption of palladin leads to defects in definitive erythropoiesis by interfering with erythroblastic island formation in mouse fetal liver.Blood,2007,110(3):870-876

〔25〕Rhodes MM,Kopsombut P,Bondurant MC,et al.Adherence to macrophages in erythroblastic islands enhances erythroblast proliferation and increases erythrocyte production by a different mechanism than erythropoietin.Blood,2008,111(3):1700-1708

〔26〕Gutiérrez L,Lindeboom F,Langeveld A,et al.Homotypic signalling regulates Gata1 activity in the erythroblastic island. Development. 2004,131 (13):3183-3193

〔27〕Sirén AL,Fratelli M,Brines M,et al.Erythropoietin prevents neuronal apoptosis after cerebral ischemia and metabolic stress.Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(7):4044-4049

〔28〕Sawada K,Krantz SB,Dessypris EN,et al.Human colony-forming units-erythroid do not require accessory cells,but do require direct interaction with insulin-like growth factor I and/or insulin for erythroid development.J Clin Invest,1989,83(5):1701-1709

〔29〕Rich IN,Vogt C,Pentz S.Erythropoietin gene expression in vitro and in vivo detected by in situ hybridization.Blood Cells,1988,14(2-3):505-520

〔30〕Tordjman R,Delaire S,Plou t J,et al.Erythroblasts are a source of angiogenic factors.Blood,2001,97(7):1968-1974

〔31〕Angelillo-Scherrer A,Burnier L,Lambrechts D,et al.Role of Gas6 in erythropoiesis and anemia in mice.J Clin Invest,2008,118(2):583-596

〔32〕Hongmei Tang,Song Chen,Haikun Wang,et al.TAM receptors and the regulation of erythropoiesis in mice.Haematologica,2009,94(3):326-334

〔33〕Means RT.Hepcidin and cytokines in anaemia.Hematology,2004,9(5-6):357-362

〔34〕Dai C,Chung IJ,Jiang S,et al.Reduction of cell cycle progression in human erythroid progenitor cells treated with tumour necrosis factor alpha occurs with reduced CDK6 and is partially reversed by CDK6 transduction.Br J Haematol,2003,121(6):919-927

〔35〕Maddala R,Reddy VN,Epstein DL,et al.Growth factor induced activation of Rho and Rac GTPases and actin cytoskeletal reorganization in human lens epithelial cells.Mol Vis,2003,9:329-336

〔36〕Zamai L,Secchiero P,Pierpaoli S,et al.TNF related apoptosis-inducing ligand(TRAIL)as a negative regulator of normal human erythropoiesis.Blood,2000,95(12):3716-3724

〔37〕Secchiero P,MelloniE,HeikinheimoM,et al.TRAIL regulates normal erythroid maturation through an ERK-dependent pathway.Blood,2004,103(2):517-522

〔38〕Nemeth E,Ganz T.Regulation of iron metabolism by hepcidin.Annu Rev Nutr,2006,26:323-342

〔39〕Hanspal M.Importance of cell-cell interactions in regulation of erythropoiesis.Curr Opin Hematol,1997,4(2):142-147

〔40〕Rosemblatt M,Vuilett-Gaugler MH,Leroy C,et al.Coexpression of two fibronectin receptors,VLA-4 and VLA-5,by immature human erythroblastic precursor cells.J Clin Invest,1991,87(1):6-11

〔41〕Vuillett-Gaugler MH,Breton-Gorius J,Vainchenker W,et al.Loss of attachement to fibronectin with terminal erythroid differentiation.Blood,1990,75(4):865-873

〔42〕 EshghiS,VogelezangMG,HynesRO,etal.Alpha4beta1 integrin and erythropoietin mediate temporally distinct steps in erythropoiesis:integrins in red cell development.J Cell Biol,2007,177(5):871-880

〔43〕Zen Q,Cottman M,Truskey G,Fraser R,Telen M.Critical factors in basal cell adhesion molecule/lutheran-mediated adhesion to laminin.J BiolChem.1999;274:728-734