超聲波提取五味子中原兒茶酸的工藝研究

李　艷　楊道賓　海　鵬　游雪莉

【摘要】目的：優(yōu)選五味子中原兒茶酸的最佳提取工藝。方法：采用正交實驗法考察各因素對提取工藝的影響，以原兒茶酸的提取含量為考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法(HPLC)分析檢測。結(jié)果：最佳提取工藝條件為乙醇濃度40%，提取50min，固液比1：60。結(jié)論：最佳優(yōu)選工藝條件簡便易行，重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】五味子；原兒茶酸；超聲波；提取工藝

【中圖分類號】R931.5【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)08-0011-02

五味子為落葉木質(zhì)藤本植物，其藥材主要含有揮發(fā)性成分、木脂素類及酸性成分。有文獻(xiàn)報道，五味子中含有的原兒茶酸^[1]，能降低心肌耗氧量，拮抗腎上腺素所致的耗氧量增加，提高心肌耐氧能力，減慢心律，改善缺血中心區(qū)的乳酸和K⁺的產(chǎn)生，顯著縮小心肌梗塞范圍^[2-3]。

1材料

1.1主要儀器LC-2010AHT高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測器(日本島津公司)，KQ-50型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑五味子(產(chǎn)地四川廣元青川)；原兒茶酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110809-200503)；甲醇為色譜純；水為三次蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1五味子中原兒茶酸含量的測定

2.1.1色譜條件色譜柱：日本島津公司Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6 mm，5.0(m)，流動相：甲醇-水-冰醋酸(6:92.8:1.2)，流速：1.0mL/min，紫外檢測波長：295nm，柱溫：30℃。理論塔板數(shù)按原兒茶酸峰計算大約為5000，采用外標(biāo)法峰面積定量，色譜圖如圖1。

2.1.2 供試品溶液的制備將五味子在60℃的烘箱中干燥12小時后研細(xì)過篩，精密稱取粉碎的五味子粉末0.5g，按L₁₆(4³)^[4]正交試驗表所列進(jìn)行實驗，加入乙醇，兩滴冰醋酸，稱定重量，超聲波提取后，待溶液冷卻到室溫后，再稱定重量，用相應(yīng)濃度的乙醇補足減失的重量，搖勻。用0.45(m的濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.3對照品溶液的制備精密稱取16.0mg原兒茶酸對照品，用甲醇定容于50mL容量瓶中，搖勻，制得320μg/mL的原兒茶酸貯備液，取5.00mL于50mL的容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，制得32.0μg.mL^-1的原兒茶酸的工作液。

2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取原兒茶酸的工作液，置10mL容量瓶中，用甲醇定容，分別配制成3.20，6.40，19.2，32.0，51.2，64.0，96.0μg/mL原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)液。分別自動進(jìn)樣5(L，記錄色譜圖，分別測定峰面積，以原兒茶酸峰面積(S)對進(jìn)樣濃度(μg/mL))作線性回歸，得回歸方程為s＝－1548＋9.181×10³（r＝0.9999），說明濃度在3.2～96μg/mL范圍內(nèi)，濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.1.5精密度試驗自動進(jìn)樣32.0μg/mL原兒茶酸對照品標(biāo)準(zhǔn)液5(L，重復(fù)6次，按上述色譜條件進(jìn)行測定，RSD為0.72%，表明儀器精密度良好。

2.1.6加樣回收率試驗精密稱取同批號藥材約0.5g，準(zhǔn)確加入原兒茶酸對照品標(biāo)準(zhǔn)液(32.0μg/mL)2.0mL，按“2.1.3”制備5組供試品溶液，自動進(jìn)樣5μL，按樣品含量測定方法測定，計算回收率。結(jié)果，平均回收率為100.3﹪，RSD為1.2﹪。

2.1.7樣品含量測定取待測樣品溶液，自動進(jìn)樣5μL，按照上述色譜條件下進(jìn)樣測定。重復(fù)進(jìn)樣3次，取平均值，根據(jù)線性回歸方程，用外標(biāo)法計算樣品中原兒茶酸的含量。

2.2正交試驗設(shè)計

2.2.1超聲波輔助正交試驗以加入乙醇濃度(A)，固液比(B)，超聲時間(C)作為考察因素，以原兒茶酸在五味子中的含量為指標(biāo)，選用L₁₆(4³)正交法進(jìn)行試驗,試驗因素水平見表1。

2.2.2 正交試驗的結(jié)果及分析按照L₁₆(4³)正交表安排試驗，以原兒茶酸在五味子中的含量為指標(biāo)，直視法分析結(jié)果詳見表2，表3。

從表2中數(shù)據(jù)直觀分析，不同因素水平綜合評分A₂>A₄>A₃>A₁,B₄>B₂>B₃>B₁,C₄>C₂>C₃>C₁, 4個因素的極差大小順序為R_B>R_A>R_C,，固液比對原兒茶酸含量影響最大，乙醇濃度影響較小，超聲提取時間影響最小。

由表3方差分析結(jié)果可知，因素B對原兒茶酸提取有重要影響，影響因素達(dá)到顯著差異水平，因素A、C則無顯著性影響。綜合以上因素，確定最佳提取工藝為A₂B₄C₄，即使用的乙醇濃度為40%，固液比1:60，超聲波提取時間為50min。

2.3驗證試驗按正交試驗結(jié)果的最佳提取工藝方案重復(fù)試驗5次，結(jié)果原兒茶酸的平均含量為0.623mg/g，RSD為1.6﹪，表明該工藝重現(xiàn)性良好。

3討論

五味子中原兒茶酸的最佳提取工藝參數(shù)：提取的乙醇濃度40%，固液比1：60，超聲波輔助提取時間50min。該提取工藝穩(wěn)定可靠，精密度高，操作簡便，可用于五味子中原兒茶酸的提取和五味子的質(zhì)量控制，適合于廠家的常規(guī)提取和測定應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]戴好富,周俊,彭再剛,等.北五味子的水溶性化學(xué)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2001,13(1):24-26.

[2]饒曼人,劉廣余,高長忠,等.原兒茶酸對缺血心肌代謝及心肌梗塞范圍的影響[J].中國藥理學(xué)報,1988,9(1):27.

[3]張遵儀,韓鵬飛,梁滿達(dá),等.原兒茶酸衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與冠脈流量、心肌耗氧量關(guān)系的探討[J].藥學(xué)學(xué)報,1980,l5(11):641-643.

[4]李勝華,伍賢進(jìn),郁建平,等.超聲波提取翻白草中熊果酸工藝優(yōu)化研究[J].食品科學(xué), 2007,28(8):160-163.

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(收稿日期：2009.02.11)