ＨＰＬＣ法測(cè)定二色補(bǔ)血草中沒食子酸的含量

宋小妹　孟會(huì)寧　苗彥霞　王小平

（陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046）お

摘 要：目的：建立二色補(bǔ)血草中沒食子酸的含量測(cè)定方法。方法：用HPLC法測(cè)定，流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸（5∶95）；檢測(cè)波長273nm。結(jié)果：沒食子酸在125.1ng～750.6ng之間呈良好線性關(guān)系。平均回收率（n=6）為99.86%，RSD=0.66%。結(jié)論：該方法穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，可用于二色補(bǔ)血草中沒食子酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；二色補(bǔ)血草；沒食子酸

中圖分類號(hào)：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）01-0033-02

二色補(bǔ)血草又名燎眉蒿、掃帚草、匙葉草、血見愁、禿子花、蒼蠅花、白花菜棵，為白花丹科（Plumbaginaceae）補(bǔ)血草屬植物二色補(bǔ)血草［Limonium bicolor （Bunge） Kuntze］帶根全草。性平，味甘苦。具有補(bǔ)血、止血、散瘀、調(diào)經(jīng)、益脾、健胃等功效；主治崩漏、尿血、月經(jīng)不調(diào)等。二色補(bǔ)血草的化學(xué)成分十分復(fù)雜，含有氨基酸、無機(jī)元素、維生素、黃酮類、鞣質(zhì)、多糖、生物堿、有機(jī)酸等多種成分^[1，2]，其中沒食子酸具有顯著的消炎作用，能抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌的生長^[3，4]。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定了二色補(bǔ)血草中沒食子酸的含量，結(jié)果表明，該方法簡便快速，穩(wěn)定可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010A型高效液相色譜儀（島津有限公司），Hypersil ODS（25um，4.6 mm×250 mm）色譜柱，電子天平（薩多利斯GB204，瑞典）。

1.2 試藥

二色補(bǔ)血草，購自陜西眉縣，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院生藥教研室王繼濤教授鑒定為白花丹科二色補(bǔ)血草［Limonium bicolor （Bunge） Kuntze］的全草。沒食子酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100831-200302）。甲醇為色譜純；其它試劑均為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果^[5，6]

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS（250nm×4.6nm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1％磷酸（5：95）；檢測(cè)波長：273nm；流速：1mL/min；柱溫：室溫。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取沒食子對(duì)照品6.255mg，置于50mL量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，搖勻，即得（每1mL含沒食子酸0.1251mg）。

2.3 供試品溶液的制備

取二色補(bǔ)血草2.5g，精密稱定，加50％甲醇適量，加熱回流提取2h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解置25mL量瓶中，50%甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取對(duì)照品溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL與6.0mL，分別置于10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，照高效液相色譜法（《中國藥典》2005版一部，附錄Ⅵ D）測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=2959.5X-11264，r=0.9999。結(jié)果表明，沒食子酸在125.1ng～750.6ng之間呈良好線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0、30、60、90、120min進(jìn)樣，測(cè)定沒食子酸的含量，其RSD值為0.41％，結(jié)果表明：供試品溶液在2h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定沒食子酸的含量，其RSD值為0.62％，結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取樣品適量（5份），精密稱取，分別按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定沒食子酸含量，其RSD值為0.45％，結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量（0.057%）的樣品6份，分別精密加入一定量的沒食子酸對(duì)照品溶液（每1mL中含沒食子酸0.1251mg），按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定沒食子酸含量，平均回收率為99.86%，RSD值為0.66％，結(jié)果見表1。

2.9 樣品的含量測(cè)定

吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，由回歸方程計(jì)算沒食子酸量的含量。見表2。

3 結(jié)論

（1）由于沒食子酸的極性相對(duì)較大，為了與其它物質(zhì)較好分離，必須使用極性大的流動(dòng)相。通過流動(dòng)相的考察，確定甲醇-0.1%磷酸溶液（5∶95）。

（2）本研究以沒食子酸作為定量指標(biāo)，采用HPLC法對(duì)二色補(bǔ)血草中的沒食子酸的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該方法穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，可用于二色補(bǔ)血草中沒食子酸的定量分析。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 朱蓉，陳新民.二色補(bǔ)血草化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，1991，22（9）：390-392.

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［3］ 王振恒，張繼，哈飛，等.二色補(bǔ)血草資源綜合開發(fā)利用［J］.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2005，18（7）：1077.

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［6］ 潘小姣.HPLC法測(cè)定三效微型灌腸劑中沒食子酸的含量［J］.廣西中醫(yī)藥，2007，30（6）：56-57.

（責(zé)任編輯：王尚勇）