中圖分類號(hào):S436.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1001-4330(2025)05-1234-08
0 引言
【研究意義】伽師瓜是新疆喀什地區(qū)伽師縣出產(chǎn)的厚皮晚熟甜瓜,與哈密瓜、吐魯番葡萄、庫(kù)爾勒香梨并列成為新疆具有地理標(biāo)志的四大品牌病毒病預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)和及時(shí)采取措施防治措施有重要意義。【前人研究進(jìn)展】自然條件下有 80% 以上的植物病毒以昆蟲為介體傳播[5],其中蚜蟲是重要的傳毒媒介,由昆蟲傳播的植物病毒病中 57% 是由蚜蟲傳播[]。葫蘆科作物的主要病毒如WMV、ZYMV、CMV 和CABYV[7]等,在田間主要通過(guò)蚜蟲進(jìn)行傳播。在新疆侵染甜瓜的病毒主要有WMV、CMV、SqMV、ZYMV、CABYV[8-12]等。杜慧平[13]、周本國(guó)[14]、毛曉紅[15]等研究顯示,在田間大白菜、煙草以及西葫蘆等作物病毒病發(fā)生規(guī)律與蚜蟲的發(fā)生規(guī)律有密切關(guān)系。陳利蘋[16]等研究證實(shí)了蚜蟲遷飛中蚜蟲種類的不同亦會(huì)出現(xiàn)不同的蚜蟲遷飛高峰期。羅文凡[17-18]等調(diào)查發(fā)現(xiàn),日平均氣溫大于 26°C 以及月降雨量大于15mm的環(huán)境對(duì)蚜蟲種群數(shù)量增長(zhǎng)有抑制作用。【本研究切入點(diǎn)】近年來(lái),新疆喀什地區(qū)甜瓜產(chǎn)業(yè)受甜瓜病毒病為害日益嚴(yán)重[19]。病毒作為分子寄生物,目前尚無(wú)有效的化學(xué)防治藥劑和抗性品種,主要通過(guò)調(diào)整甜瓜的播種日期或采用扣防蟲網(wǎng)等方式減少蚜傳病毒病的為害。目前對(duì)喀什地區(qū)伽師縣甜瓜病毒病發(fā)生規(guī)律的系統(tǒng)研究鮮見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。需調(diào)查分析喀什地區(qū)伽師縣甜瓜地有翅蚜數(shù)量、甜瓜蚜傳病毒病發(fā)病率以及氣象因子的相關(guān)性,制定合理的甜瓜蚜傳病毒病的防控措施。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】鑒定喀什地區(qū)伽師縣田間有翅蚜和甜瓜植物樣本中攜帶病毒種類,研究甜瓜蚜傳病毒的發(fā)生和流行規(guī)律,為當(dāng)?shù)刂贫ㄓ行У奶鸸涎羵鞑《静》乐未胧┨峁┛茖W(xué)支撐。
1 材料與方法
1.1 材料
1. 1.1 試驗(yàn)地概況
2022年選擇我國(guó)甜瓜產(chǎn)區(qū)具有代表性生態(tài)區(qū)的新疆喀什地區(qū)伽師縣作為監(jiān)測(cè)點(diǎn),于當(dāng)年5~8 月正播甜瓜生育期,在伽師縣園藝場(chǎng)(75份)和英買里鄉(xiāng)(134份)各選擇1個(gè)甜瓜地塊系統(tǒng)調(diào)查甜瓜蚜傳病毒病發(fā)生情況(田間共采集209份甜瓜樣本)。監(jiān)測(cè)點(diǎn)屬于典型的暖溫帶內(nèi)陸干旱氣候,年平均氣溫 11.79C ,全年日照時(shí)數(shù)為2923.7h,無(wú)霜期大約 233d,?10°C 積溫 4371°C 。降水年際變化大,年平均降水量 64~68mm ,分布不均勻,集中分布在5~8月,占年降水量的73% 。年均蒸發(fā)量 2 051.5mm ,蒸降比為 42:1 。蚜傳病毒病發(fā)生調(diào)查:伽師縣園藝場(chǎng)甜瓜地面積0.33hm2 ,伽師縣英買里鄉(xiāng)甜瓜地面積 0.67hm2 ,2個(gè)地塊相距 1km 。伽師縣園藝場(chǎng)甜瓜地周圍主要是西梅果園和蔬菜拱棚;伽師縣英買里鄉(xiāng)甜瓜地周圍主要是小麥和棉花。調(diào)查當(dāng)年甜瓜均采用直播方式種植,8月初采收結(jié)束。2個(gè)地塊均未施用殺蟲劑和殺菌劑等化學(xué)農(nóng)藥。
1.1. 2 田間病葉采集及病情調(diào)查
于甜瓜植株長(zhǎng)至4~5片真葉時(shí),在監(jiān)測(cè)點(diǎn)地塊中選擇3行長(zhǎng)勢(shì)基本一致的甜瓜苗作為調(diào)查對(duì)象每天觀察,從第1次甜瓜植株出現(xiàn)甜瓜病毒病癥狀開始,每隔7d調(diào)查(固定的3行)甜瓜植株的病毒病發(fā)病率。調(diào)查時(shí)采集有花葉、黃化病毒病癥狀的甜瓜植株病葉,每個(gè)病株采集1片病葉,3行共采集有病毒病侵染造成典型黃化癥狀的病葉 15~20 片。采集到的每片病葉單獨(dú)裝入自封袋編號(hào)記錄,記錄信息包括采集時(shí)間、采集地點(diǎn)、采集時(shí)甜瓜植株的癥狀以及寄主。將裝有病葉的自封袋及時(shí)放至于 -80% 冰箱保存,用于后續(xù)的分子生物學(xué)檢測(cè)。
發(fā)病率 Σ=Σ (發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)) × 100%
1.2 方法
1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
2022年5~8月采用五點(diǎn)法,在監(jiān)測(cè)點(diǎn)地塊里上述固定的3行甜瓜苗中放置高為 40~50cm 的支撐物,在支撐物上面放黃色的水盆(裝 2/3 的純凈水),2d收集1次盆中的蚜蟲,并將收集到的蚜蟲分裝在帶有 1000μL RNA保存液的1.5mL離心管中,編號(hào)后凍存于- 20% 冰箱,用于后續(xù)的分子生物學(xué)檢測(cè)。
在監(jiān)測(cè)點(diǎn)里使用黃板通過(guò)定時(shí)定點(diǎn)式采樣法,統(tǒng)計(jì) 48h 后黃板上收集到的有翅蚜數(shù)量,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)試驗(yàn)地有翅蚜的數(shù)量。
1.2. 2 蚜傳病毒病分子生物學(xué)檢測(cè)與鑒定
1. 2. 2.1 樣本RNA提取
提取植物樣本總RNA使用多糖多酚植物總RNA提取試劑盒(成都福際公司生產(chǎn)),操作程序嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。提取有翅蚜總RNA使用的是成都福際公司生產(chǎn)的動(dòng)物樣本總RNA提取試劑盒,操作程序嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。提取的總RNA質(zhì)量采用 1.0% 的瓊脂凝膠電泳法檢測(cè),確定RNA的完整程度和含量達(dá)到后續(xù)試驗(yàn)后,將其放入 -80°C 的超低溫冰箱中,備用。
1.2.2.2 樣本cDNA合成
采用北京鼎國(guó)公司的cDNA第一鏈合成試劑盒(Cat#:TER016-2)對(duì)上述步驟提取到的總RNA合成cDNA,操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。
1. 2.2. 3 引物設(shè)計(jì)
根據(jù)Genebank上登錄的已知病毒保守基因序列和CMV、WMV和CABYV三種甜瓜病毒的序列,使用PrimerPremier6.O和Primer3Plus引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增引物,引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板,進(jìn)行PCR檢測(cè),反應(yīng)體系(20μL ):cDNA模板 1μL ,正、反向引物各 1μL,2× TaqPCRMasterMix10 μL ,RNase -freeddH O 7μL CMV和WMV的反應(yīng)程序: 94°C4min 94°C30s 55°C30s,72°C35s,35 次個(gè)循環(huán); 72°C7min,4°C 保存;CABYV的反應(yīng)程序: 94°C4min 94°C30s,52°C 30s ,72°C40s,35 次循環(huán); 72°C 7min,4% 保存PCR產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物均采用 1% 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。表1
表1 用于RT-PCR擴(kuò)增的特異性引物信息
Tab.1 Specificprimer informationfor RT-PCRamplification
1. 2.2. 4 樣本帶毒統(tǒng)計(jì)
采用分子生物學(xué)檢測(cè),統(tǒng)計(jì)電泳后有無(wú)條帶,分析田間甜瓜樣本及有翅蚜樣本攜帶CMV、WMV和CABYV三種甜瓜病毒病以及樣本的帶毒率。
1.3 數(shù)據(jù)處理
氣象數(shù)據(jù)來(lái)源為歐洲中期天氣預(yù)報(bào)中心(ECMWF)/美國(guó)國(guó)家航空航天局(NASA)歷史再分析數(shù)據(jù)集,由羲和能源氣象大數(shù)據(jù)平臺(tái)(ht-tps://www.xihe-energy.com)提供。數(shù)據(jù)采用MicrosoftExcel2010 整理,使用R軟件(https://www.R-project.org/)中的ggplot2包和Origin8.6進(jìn)行作圖。
2 結(jié)果與分析
2.1 引物的特異性鑒定
研究表明,利用自主設(shè)計(jì)的CMV、WMV以及CABYV的特異性引物,用 1.0% 的瓊脂糖凝膠電泳后得到,擴(kuò)增清晰、條帶單一,大小分別為545、517、647bp的條帶,條帶大小與預(yù)期相符。監(jiān)測(cè)點(diǎn)采集到的甜瓜病株和有翅蚜中擴(kuò)增到CMV、WMV以及CABYV三種病毒。圖1
注:M,2000bpDNAmarker;1-5,部分CMV樣本;6-10,部分WMV樣本;11-15,部分CABYV樣本; + ,陽(yáng)性對(duì)照;-,陰性對(duì)照
圖1 部分樣本RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果 Fig.1Partial sampleRT-PCR amplificationresults
Notes:M,2OOO bp DNA marker;1-5,partly CMV sample;6- 10,partlyWMVsamplel;11-15,partlyCABYVsample; + ,positive control;-,negative control
2.2田間甜瓜植株攜帶CMV、WMV和CABYV三種蚜傳病毒病的分子生物學(xué)檢測(cè)
研究表明,CMV、WMV和CABYV三種蚜傳病毒病在監(jiān)測(cè)點(diǎn)的甜瓜葉片中均被檢出,其中,在伽師縣園藝場(chǎng)甜瓜地CMV平均檢出率為55.37% ,WMV平均檢出率為 49.03% ,CABYV平均檢出率為 45.71% ;伽師縣英買里鄉(xiāng)甜瓜地CMV平均檢出率為 51.86% ,WMV平均檢出率為39.72% ,CABYV平均檢出率為 26.22% 。CMV在2塊試驗(yàn)地的甜瓜植株中平均檢出率最高,其次為WMV,最后是CABYV。表2
2.3田間有翅蚜攜帶CMV、WMV和CABYV病毒病的分子生物學(xué)檢測(cè)
研究表明,CMV、WMV和CABYV三種蚜傳病毒病在監(jiān)測(cè)點(diǎn)的有翅蚜中均被檢出,其中,伽師縣園藝場(chǎng)甜瓜地CMV平均檢出率為 16.37% ,WMV平均檢出率為 17.45% ,CABYV平均檢出率為 12.51% ;伽師縣英買里鄉(xiāng)甜瓜地CMV平均檢出率為 23.13% ,WMV平均檢出率為 15.31% ,CABYV平均檢出率為 15.39% 。CMV在2個(gè)試驗(yàn)地的有翅蚜中平均檢出率最高,其次為WMV,最后是CABYV。圖2,表3
表2 伽師縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)甜瓜樣本中三種病毒檢出情況
Tab.2 Detection of three viruses in melon samples at monitoring points in Jiashi County
Notes:LeftpictureisYuanyichang;RightpictureisYingmaili Township
圖2 伽師縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)有翅蚜樣本中三種病毒檢出情況
Fig 2 Detection of three viruses in winged aphid samples from monitoring sites in Gashi Cour
2.4 田間有翅蚜數(shù)量與甜瓜發(fā)病率的關(guān)系
研究表明,5月30日至6月27日,有翅蚜的數(shù)量逐步增加,有翅蚜第1次增加高峰期為6月20日,6月27日達(dá)到整個(gè)調(diào)查期內(nèi)的最高峰;6月27日后有翅蚜數(shù)量開始逐漸減少。田間甜瓜的發(fā)病率總體呈逐漸上升趨勢(shì),6月27日田間植株發(fā)病率增加相對(duì)較高。田間有翅蚜數(shù)量與甜瓜發(fā)病率呈正相關(guān)( P=0.40 。圖3~4
表3伽師縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)有翅蚜樣本中三種病毒檢出情況
Tab.3 Detection of three viruses in winged aphid samples from monitoring sites in Jiashi Coun
注:(左圖)園藝場(chǎng);(右圖)英買里鄉(xiāng)
Notes:Left pictureisYuanyichang;RightpictureisYingmaili Township
2.5 主要?dú)庀笠蜃优c田間有翅蚜數(shù)量、甜瓜病毒病發(fā)病率的關(guān)系
研究表明,氣溫與田間有翅蚜數(shù)量呈正相關(guān)( P=0.41 ),氣溫與甜瓜發(fā)病率呈正相關(guān)( P= 0.75);濕度、降水量、地面風(fēng)速與甜瓜發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)(濕度 P=-0.56 ,降水量 P=-0.72 ,地面風(fēng)速 P=-0.38 )。圖4
3討論
3.1彭斌[20]從采自伽師縣英買里鄉(xiāng)的甜瓜樣本中鑒定到CABYV,王東[21對(duì)新疆伽師縣12個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的厚皮甜瓜(通常稱伽師瓜)病毒病種類進(jìn)行鑒定,鑒定出WMV、CMV以及ZYMV,未檢測(cè)到CGMMV、CABYV和MABYV。研究于2022年在喀什地區(qū)伽師縣2個(gè)點(diǎn)設(shè)置監(jiān)測(cè)點(diǎn)后,發(fā)現(xiàn)甜瓜生長(zhǎng)期在監(jiān)測(cè)點(diǎn)田間有翅蚜和甜瓜植株上均能檢測(cè)到CMV、WMV和CABYV三種病毒病原,同時(shí)發(fā)現(xiàn)甜瓜進(jìn)入采摘期時(shí),在監(jiān)測(cè)點(diǎn)田間有翅蚜和甜瓜植株內(nèi)均以CABYV檢出率最高。
3.2研究在監(jiān)測(cè)點(diǎn)采集到的蚜蟲以瓜蚜、桃蚜為主,關(guān)于有翅蚜數(shù)量與氣溫和植株發(fā)病率的關(guān)系,已報(bào)道的蚜傳病毒病發(fā)生規(guī)律基本一致[3.4.22]。所調(diào)查的2塊甜瓜地在有翅蚜數(shù)量、甜瓜發(fā)病率上存在一定的差異,結(jié)合甜瓜地塊周圍的生境,推測(cè)因園藝場(chǎng)甜瓜地緊鄰溫室大棚,蚜蟲數(shù)量較多,從而導(dǎo)致甜瓜病毒病發(fā)生相對(duì)嚴(yán)重。研究所調(diào)查和檢測(cè)的蚜蟲均為有翅蚜。
4結(jié)論
4.1在新疆喀什地區(qū)伽師縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)田間有翅蚜和甜瓜植株上均能檢測(cè)到CMV、WMV和CABYV三種病毒,平均檢出率均以CMV最高,WMV次之,CABYV最少。在植物樣本中存在病毒復(fù)合侵染的情況,前期以CMV、WMV單獨(dú)侵染或復(fù)合侵染為主,后期以三種病毒復(fù)合侵染為主。前期田間感染甜瓜病毒病的植株發(fā)病時(shí)以花葉為主,后期大量染病植株出現(xiàn)CABYV侵染后的黃化典型癥狀。染病植株的田間癥狀與室內(nèi)病毒檢出結(jié)果一致。
4.2田間有翅蚜數(shù)量與植株發(fā)病率呈正相關(guān);分析有翅蚜動(dòng)態(tài)變化和植株發(fā)病率的關(guān)系后,調(diào)查當(dāng)年甜瓜蚜傳病毒病的隱癥期為 7~15d 。氣溫與田間有翅蚜數(shù)量、甜瓜病毒病發(fā)病率呈正相關(guān);相對(duì)濕度、降水量、地面風(fēng)速等氣象因子與甜瓜病毒病發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)。
4.3有翅蚜是田間植物病毒有效的傳播介體,阻斷有翅蚜對(duì)甜瓜植株的取食,可有效預(yù)防甜瓜病毒病的發(fā)生??κ驳貐^(qū)伽師縣種植正播甜瓜時(shí)結(jié)合氣象條件,于4月中旬完成播種;種植麥茬復(fù)播瓜時(shí)在甜瓜出苗前完成扣防蟲網(wǎng),以減少蚜蟲的危害,有效避免甜瓜蚜傳病毒病的發(fā)生,從而減輕甜瓜病毒病造成的經(jīng)濟(jì)損失。
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Analysis of occurrence law of Aphid -borne virus diseases (CMV,WMV and CABYV) of muskmelon
Asiyamu Abudukeyimu1,Yushanjiang Maimaiti2,HAN Sheng2,CAO Xueping2 Maihemutijiang Mijiti1, ZHOU Tingting2
(1. Ministry of Agriculture and Rural Affairs /Collge of Agronomy, Xinjiang Agricultural University, Key Laboratory of Preventionand Control of Invasive Alien Speciesin Agricultureamp;Forestryof the North-western Desert Oasis ((Co-Established by Ministry and Province),Urumqi 830052,China; 2. Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northwestern Oasis, Ministry of Agriculture and Rural Afairs/Xinjiang Key Laboratory of Agricultural Biosafety,Institute of Plant Protection, Xinjiang Uyghur Autonomous Region Academy of Agricultural Sciences,Urumqi 830091,China)
Abstract:【Objective】 To systematically investigate three kinds of melon aphid -borne viral diseases in representative melon production areas of Xinjiang in order to explore the incidence of melon aphid-borne virus diseases,this study findings can provide some guidance to formulate scientific prevention and control measures of melon virus diseases.【Methods】Molecular techniques were used to identifythe virus species in the collected winged aphid and melon plant samples. The incidence of CMV,WMV and CABYV aphids were determined by the number of aphids and the incidence of a disease in the field.2O9 melon samples collcted in the field were detected by qRT-PCR.【Results】 The results showed that the average detection rates of CMV,WMV and CABYV were 53.62% , 44.38% and 35.97% respectively. The average detection rates of CMV,WMV and CAMYV of the 270 samples were19.75%, 16.38% and 13.95% respectively. The number of aphids in the field were positively correlated with the incidence of a disease ( P=0.40 ). Air temperature was positively correlated with aphid number and incidence of a disease (aphid number P=0.41 ,incidence P= 0. 75 ) .The incidence of a disease was negatively correlated with moisture,amount of precipitation and surface wind speed (humidity P=-0.56 ,precipitation and ground wind speed P=-0.38 ).【Conclusion】 CMV,WMV and CABYV are all detected in melon plants and winged aphids in Jiashi County of Kashi, and the detection rate of CMV is the highest.The number of winged aphids is positively correlated with the incidence of a disease. The mean air temperature is positively correlated with the number of winged aphids and the incidence of a disease.
Key words:melon;virus diseases;incidence rate;occurrence regularity