天麻芎苓止眩片對血管內(nèi)皮細胞自噬的影響及機制

中圖分類號R285 文獻標(biāo)志碼A 文章編號 1001-0408（2025）14-1737-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.14.08

ABSTRACTOBJECTIVEToexploretheeffectsofTianma xiongling zhixuantabletonautophagyinvascularendothelial cels ofratsanditspotentialmechanism.METHODsTherataorticendothelialcels（RAECs）weredivided intonormalgroup，model group，blank serum group，traditional Chinese medicine（TCM）medicatedserum group，autophagy blocker group，autophagy agonist group，and TCMcombined with autophagy agonist group.Except for normal group，other groups were given 10μg/mL lipopolysaccharide for24 hours to induce RAECs inflammation injury model. Blank serum group was treated with 10% blank serum；TCM medicated serum group received 10% medicated serum derived from Tianma xiongling zhixuan tablet；autophagy blocker group was treated with 20μmol/L of PD98059；autophagy agonist group was administered 50μmol/L Honokiol. Lastly， the TCM combined with autophagy agonist group was given both 10% medicated serum derived from Tianma xiongling zhixuan tablet and 50μmol/L Honokiol.The morphological characteristics of RAECs in each group were observed.Thecell viabilityof each group，thecontentsof endothelin-1（ET-1）andnitricoxide（NO），mitochondrialreactiveoxygenspecies，mitochondrial membrane potential，andtheexpresion levelsofPTEN-iduced kinase1（PINK1），Parkin，ubiquitin-binding protein（p62），and microtubule-associated protein1lightchain 3（LC3）were detected.RESULTSCompared with model group，the levelsofET-1，mitochondrial reactiveoxygen species， and therelative expressions of PINK1，Parkin，and LC3 proteins in the autophagy blocker group and TCM medicated serum group were decreased or down-regulated significantly（ Plt;0.05 or Plt;0.01 ）；thecell viabilityrate（onlyautophagy blocker group），NO level，mitochondrial membrane potential，and the relative expression level of p62 protein were increased or upregulated significantly（ ΔPlt;0.05 or Plt;0.01 ）；thepathological damageofRAECswas significantly improved，thenumberof cellsincreasedsignificantly，andthetypicalpavingstone-likecharacteristicswererestored.ThelevelsofET-1，mitochondrial reactiveoxygenspecies，and therelativeexpresionlevelsofParkinandLC3proteinsintheautophagyagonistgroup were increased or up-regulated significantly（ ΔPlt;0.05 or Plt;0.01 ），while cell viability rate was decreased significantly （Plt;0.05 ），the damage ofRAECswas agravated.Compared withthe autophagy agonist group，thecellviabilityrateandtherelativeexpresion level of p62 protein in TCM combined autophagy agonist group were increased or up-regulated significantly（ ΔPlt;0.05 or Plt;0.01 ）， whilethelevelsofET-1，therelativeexpressionlevelsofPINK1，Parkin，andLC3proteins weredown-regulatedsigniicantly Plt; 0.01），the damageofRAECs was reversed toacertain extent.CONCLUSIONS Tianma xiongling zhixuantablet protects vascular endothelialfunctionbyregulatingmitochondrialautophagy，themechanismofwhichmaybeassociatedwiththeregulationof PINK1/Parkin signaling pathway and the inhibition of mitochondrial autophagy.

KEYWORDSTianmaxionglingzhixuan tablet；vascularendothelialcellinjury；mitochondrialautophagy；PINK1/Parkin signalingpathway

高血壓是臨床常見的心血管疾病，全世界范圍內(nèi)有13億高血壓患者，每年有 1000 萬人因收縮壓過高導(dǎo)致死亡；我國 30～79 歲成年人高血壓患病人數(shù)約2.567億，患病率達 27%^[1] 。血管內(nèi)皮功能障礙是高血壓患者血管表型的標(biāo)志，常表現(xiàn)為血管舒縮因子分泌失衡，加速血壓升高進程，并加重靶器官的損害2。自噬是維持血管內(nèi)皮細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和存活的重要機制，自噬失衡被認為是血管內(nèi)皮功能改變的主要表現(xiàn)之一[3]

天麻芎苓止眩片主要由天麻、鉤藤、川芎、茯苓、陳皮等中藥組成，為湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）的院內(nèi)制劑，具有平肝熄風(fēng)、化痰逐瘀的功效，臨床主要用于治療高血壓，降壓效果明顯、安全。本研究前期動物實驗證實，天麻芎苓止眩片能減輕血管內(nèi)皮自噬，逆轉(zhuǎn)血管內(nèi)皮損傷，但其分子機制尚未完全闡明。PTEN誘導(dǎo)激酶1（PTEN-induced kinase1，PINK1）/Parkin（一種E3泛素連接酶）通路是研究線粒體自噬相關(guān)疾病的經(jīng)典通路。有研究顯示，調(diào)控PINK1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬，可有效減輕血管內(nèi)皮細胞損傷[。本研究利用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)構(gòu)建高血壓狀態(tài)下大鼠主動脈內(nèi)皮細胞（rataorticendo-thelialcells，RAECs）炎癥損傷模型，觀察PINK1/Parkin信號通路在線粒體自噬中的變化，探討天麻芎苓止眩片對該通路表達的影響，以期揭示天麻芎苓止眩片對血管內(nèi)皮細胞損傷的作用機制。

1材料

1.1主要儀器

本研究所用主要儀器包括SW-CJ-2FD型潔凈工作臺（蘇州蘇凈儀器自控設(shè)備有限公司），L530R型臺式低速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司），Galaxy 170R 型 CO₂ 培養(yǎng)箱（德國Eppendorf公司），MSX-2型細胞成像分析系統(tǒng)（廣州市明美光電技術(shù)有限公司），AX223ZH型電子分析天平（美國OHAUS公司），PURELOABClassicUVF型超純水儀（英國ELGA公司），Z32HK型高速冷凍離心機（德國HAIMER公司），Enspire型多功能酶標(biāo)儀（美國PerkinElmer公司），LSM880型激光共聚焦顯微鏡（德國CarlZeissAG公司）。

1.2 主要藥品與試劑

天麻芎苓止眩片（湘藥制字Z20150970，批號20220312，規(guī)格 0.5g/ 片）由我院制劑中心提供。RAECs專用培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液（PBS）（批號分別為CMR075、WH0022K510）均購自武漢普諾賽生命科技有限公司；胰蛋白酶消化液（批號J202303）購自美國Hyclone公司；LPS（批號L4391-1）購自美國Sigma公司;CCK-8檢測試劑盒（批號BA08918147）購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素1（endothelin-1，ET-1）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（批號分別為FY9044-B-2308R02、FY3435-B-2308R03）均購自江蘇菲亞生物科技有限公司；線粒體超氧化物檢測試劑盒（批號M36008）購自美國Invitrogen公司；線粒體膜電位檢測試劑盒、自噬阻斷劑PD98059、自噬激活劑Honokiol（批號分別為HY-15534、HY-12028-41867、HY-N0003-25245）均購自美國MCE公司；兔抗大鼠微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein1lightchain3，LC3）Par-kin、PINK1、選擇性自噬接頭蛋白62（ubiquitin-bindingprotein62，p62）抗體（貨號分別為27H8816、T127090、85H3726、43Z8688）均購自江蘇親科生物研究中心；辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔二抗（貨號T127090）購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

1.3實驗大鼠與細胞

SPF級雄性SD大鼠12只， 6～8 周齡，體重 220～ 250g ，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2019-0004。大鼠飼養(yǎng)于我院實驗動物中心SPF級動物房，飼養(yǎng)溫度 20～26^°C ，相對濕度 40%～70% ，所有大鼠自由進食、飲用蒸餾水，隔日更換一次墊料。本研究經(jīng)我院實驗動物倫理委員會批準，批件號：ZYFY20200518-02。RAECs（批號CP-R075）購自武漢普諾賽生命科技有限公司。

2 方法

2.1 藥液和含藥血清的制備

取天麻芎苓止眩片，粉碎，精密稱取粉末 9g ，置于50mL 具塞錐形瓶中，加入 30mL 甲醇，稱量后超聲提取30min ，放置室溫，補足失重；取上清液，以 8000r/min 離心 5min ，經(jīng) 0.22μm 微孔濾膜過濾，得到大鼠等效劑量3倍量的天麻芎苓止眩片藥液。

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，按隨機數(shù)字表法分為空白組和中藥組，每組6只。根據(jù)天麻芎苓止眩片成人每日用量 12g ，按體表面積折算法計算大鼠等效給藥劑量，即中藥組大鼠按 0.8g/（kg?d） 灌胃相應(yīng)藥液，空白組大鼠給予等體積蒸餾水，每日2次，連續(xù) 3d 。末次給藥 ¹h 后，大鼠行腹主動脈取血，以 4500r/min 離心 10min ，收集血清，置于 56^°C 水浴鍋滅活處理 30min 后，再以1200r/min 離心 5min ；收集上清液，經(jīng) 0.22μm 微孔濾膜過濾除菌后，分裝后置于 -80^°C 冰箱，備用。

2.2 天麻芎苓止眩片含藥血清最佳干預(yù)濃度篩選

取對數(shù)生長期的RAECs，以胰酶消化，細胞稀釋至1×10⁵ 個/mL，以每孔 100μL 接種至96孔板中。細胞分為6組，分別為正常組、模型組和 5%.10%.15%.20% 含藥血清組，每組設(shè)4個復(fù)孔。除正常組外，其余各組分別加入 10μg/mL 的LPS干預(yù) 24h ，建立RAECs炎癥損傷模型。各組分別給予“2.1\"項下空白組血清（正常組、模型組）和相應(yīng)濃度含藥血清進行干預(yù)， 24h 后，按每孔5000個細胞接種至96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng) 24h 后，每孔加入含 20μL CCK-8工作液的新鮮完全培養(yǎng)基200μL ，繼續(xù)孵育 2～3h ，采用多功能酶標(biāo)儀于 450nm 波長處檢測各孔吸光度 （A） 值，計算細胞存活率：細胞存活率 0

2.3 分組、造模與給藥

待RAECs生長至 70%～80% 融合程度時，加入0.25% 胰蛋白酶，離心、重懸細胞后，以每孔5000個細胞接種至96孔細胞培養(yǎng)板中，置于 CO₂ 細胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h 。次日吸去全部舊培養(yǎng)基，補充足量新鮮完全培養(yǎng)基，將細胞隨機分為正常組、模型組、空白血清組、中藥含藥血清組、自噬阻斷劑組、自噬激動劑組、中藥聯(lián)合自噬激動劑組，每組設(shè)4個復(fù)孔。除正常組外，其余各組分別加入 10μg/mL 的LPS干預(yù) 24h ，建立RAECs炎癥損傷模型，并以細胞形態(tài)學(xué)、細胞活力、炎癥因子水平提示造模成功與否?？瞻籽褰M加入 10% 空白血清，中藥含藥血清組加入 10% 天麻芎苓止眩片含藥血清，自噬阻斷劑組加人 20μmol/L PD98059，自噬激動劑組加人50μmol/L Honokiol[]，中藥聯(lián)合自噬激動劑組加入 10% 天麻芎苓止眩片含藥血清和 50μmol/L Honokiol。以上各組均繼續(xù)干預(yù) 24h 后，收集細胞樣本，用于后續(xù)各項指標(biāo)檢測。

2.4 RAECs形態(tài)學(xué)觀察

取對數(shù)生長期的RAECs，以每孔5000個接種至96孔細胞培養(yǎng)板中，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后，按“2.3\"項下方法分組、造模、給藥，采用細胞成像分析系統(tǒng)觀察各組RAECs的形態(tài)及結(jié)構(gòu)變化。

2.5 RAECs活力測定

取“2.3\"項下RAECs的96孔板，吸棄上清后，每孔加入 10% CCK-8工作液 20μL ，持續(xù)孵育 2～3h 后，采用多功能酶標(biāo)儀于 450nm 波長處檢測各孔 A 值，按“2.2\"項下公式計算細胞存活率。

2.6上清液中ET-1、NO水平檢測

收集“2.3”項下分組、造模、給藥后的RAECs上清液，按照ELISA試劑盒說明書檢測ET-1、NO水平。

2.7線粒體活性氧檢測

取“2.3\"項下RAECs的96孔板，加入 5μmol/L 線粒體超氧化物紅色熒光探針工作液，于室溫避光孵育30min ，用PBS洗滌5次，加入1：800濃度的Hoechst33342工作液，再于室溫避光孵育 20min 后，用PBS洗滌3次；使用激光共聚焦顯微鏡于 510nm 激發(fā)波長處標(biāo)記線粒體活性氧（紅色），于 350nm 激發(fā)波長處標(biāo)記細胞核（藍色），拍攝熒光圖像，通過ImageJ1.53軟件分析細胞質(zhì)區(qū)域內(nèi)的平均熒光強度，用以反映線粒體活性氧水平。

2.8 線粒體膜電位檢測

取“2.3\"項下RAECs的96孔板，加入 10μg/mL 線粒體膜電位熒光探針工作液，于 37^°C 避光孵育 45min ，用PBS洗3次；采用激光共聚焦顯微鏡分別于 585nm 和514nm 激發(fā)波長處進行熒光檢測并拍照，綠色熒光為受損的線粒體膜電位，紅色熒光為正常的線粒體膜電位，并以紅綠熒光強度的比值反映線粒體膜電位的變化情況。

2.9 PINK1/Parkin信號通路相關(guān)蛋白檢測

采用Westernblot法進行檢測。取對數(shù)生長期的RAECs，按“2.3\"項下方法分組、造模、給藥，24h后棄液，加入細胞蛋白裂解液，于冰上裂解 ⁴h ，以 12000r/min 離心 15min ；取上清，提取總蛋白，將蛋白與上樣緩沖液混勻、變性后，經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，加入PINK1、Parkin、p62、LC3蛋白一抗（稀釋度均為1：800）， 4^°C 孵育過夜，加入HRP標(biāo)記的二抗（稀釋度為 1：5 000 ，室溫振搖孵育 。采用ECL化學(xué)發(fā)光及蛋白成像分析系統(tǒng)掃描，采用ImageJ1.53軟件分析，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白0 β -actin）的灰度值比值表示目標(biāo)蛋白的相對表達量。上述實驗重復(fù)3次。

2.10 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS27.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料滿足正態(tài)分布，以 表示，方差齊性時多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；方差不齊時多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H 檢驗，進一步兩兩比較采用Mann-Whitney U 檢驗。檢驗水準 α=0.05 。

3結(jié)果

3.1不同濃度含藥血清對RAECs活力的影響

與正常組[ （100.00±6.82）%] 比較，模型組細胞存活率[ （67.05±4.58）%] 顯著降低（ ΔPlt;0.01 ），提示LPS誘導(dǎo)造模成功。與模型組比較， 5% 含藥血清組細胞存活率[（72.99±2.85）%] 未能顯著提升 （Pgt;0.05） ， 10% 、 15% 、20% 含藥血清組細胞存活率[ （81.76±4.53）% 一 （84.06± 2.63）% 一 （85.16±1.65）% 均顯著升高 （Plt;0.01 ，且3組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ），故選擇 10% 含藥血清進行后續(xù)研究。

3.2含藥血清對RAECs形態(tài)學(xué)的影響

細胞成像分析結(jié)果顯示，正常組RAECs生長狀態(tài)良好，呈典型的鋪路石樣結(jié)構(gòu)。與正常組比較，模型組、空白血清組RAECs均顯著受損，細胞數(shù)量減少，胞體裂解，鋪路石樣結(jié)構(gòu)減少或消失。與模型組比較，自噬阻斷劑組RAECs顯著緩解，而自噬激動劑組RAECs損傷進一步加重；中藥含藥血清組RAECs數(shù)量顯著增加，同時細胞恢復(fù)鋪路石樣結(jié)構(gòu)。與自噬激動劑組比較，中藥聯(lián)合自噬激動劑組能一定程度逆轉(zhuǎn)自噬激動劑所致的RAECs形態(tài)結(jié)構(gòu)受損。結(jié)果見圖1。

3.3含藥血清對RAECs存活率的影響

與正常組比較，模型組、空白血清組RAECs存活率顯著降低 （Plt;0.01 ）。與模型組比較，自噬阻斷劑組RAECs存活率顯著升高 （Plt;0.01） ，自噬激動劑組RAECs存活率顯著降低 （Plt;0.05 ）。與自噬激動劑組比較，中藥聯(lián)合自噬激動劑組RAECs存活率顯著升高（Plt;0.01） 。結(jié)果見表1。

表1各組RAECs存活率和上清液中ET-1、NO水平比較 0

a：與正常組比較， Plt;0.01 ；b：與模型組比較， Plt;0.05 ;c：與模型組比較， Plt;0.01 ;d：與自噬激動劑組比較， Plt;0.01 ;e：與自噬激動劑組比較， Plt;0.05

3.4含藥血清對上清液中ET-1及NO水平的影響

與正常組比較，模型組、空白血清組上清液中ET-1水平顯著升高 ??NO 水平顯著降低 （Plt;0.01 ）。與模型組比較，自噬阻斷劑組上清液中ET-1水平顯著降低、NO水平顯著升高 （Plt;0.01 ，自噬激動劑組上清液中ET-1水平顯著升高 （Plt;0.05） ，中藥含藥血清組上清液中ET-1水平顯著降低、NO水平顯著升高（ Φ^-（0.01 或 Plt;0.05 。與自噬激動劑組比較，中藥聯(lián)合自噬激動劑組上清液中ET-1水平顯著降低 Plt;0.05 ）。結(jié)果見表1。

3.5含藥血清對RAECs線粒體活性氧的影響

正常組、模型組、空白血清組、中藥含藥血清組、自噬阻斷劑組、自噬激動劑組、中藥聯(lián)合自噬激動劑組RAECs線粒體活性氧水平分別為 20.17±2.88，54.30± 2.85，51.56±4.88，45.62±3.37，33.38±4.89，64.14±3.76， 57.25±4.96 。與正常組比較，模型組、空白血清組RAECs線粒體活性氧水平均顯著升高 （Plt;0.01 ）。與模型組比較，自噬阻斷劑組和中藥含藥血清組RAECs線粒體活性氧水平均顯著降低 （Plt;0.01 ，自噬激動劑組RAECs線粒體活性氧水平顯著升高 （Plt;0.01） 。結(jié)果見圖2。

3.6含藥血清對RAECs線粒體膜電位的影響

正常組、模型組、空白血清組、中藥含藥血清組、自噬阻斷劑組、自噬激動劑組、中藥聯(lián)合自噬激動劑組RAECs線粒體紅綠熒光強度比值分別為 4.07±0.84 、0.29±0.03 、 0.28±0.05 ！ 1.27±0.14 ！ 2.11±0.12，0.18± 0.03，0.51±0.10 。與正常組比較，模型組、空白血清組RAECs線粒體紅綠熒光強度比值均顯著降低（ Plt; 0.01）。與模型組比較，自噬阻斷劑組和中藥含藥血清組RAECs線粒體紅綠熒光強度比值均顯著升高（ Plt; 0.01）。結(jié)果見圖3。

3.7含藥血清對PINK1/Parkin信號通路相關(guān)蛋白表達的影響

與正常組比較，模型組、空白血清組RAECs中PINK1、Parkin、LC3蛋白相對表達量均顯著升高，p62蛋白相對表達量顯著降低 （Plt;0.01 ）。與模型組比較，自噬激動劑組RAECs中Parkin、LC3蛋白相對表達量均顯著升高 （Plt;0.01） ），自噬阻斷劑組RAECs中PINK1、Par-kin、LC3蛋白相對表達量均顯著降低，p62蛋白相對表達顯著升高（ ΔPlt;0.01 ）;中藥含藥血清組RAECs中PINK1、Parkin、LC3蛋白相對表達量均顯著降低，p62蛋白相對表達量顯著升高 （Plt;0.01） 。與自噬激動劑組比較，中藥聯(lián)合自噬激動劑組RAECs中PINK1、Parkin、LC3蛋白相對表達量均顯著降低， 蛋白相對表達量顯著升高中 Φ^- ）。結(jié)果見圖4、表2。

I：正常組；I：模型組;II：空白血清組;V：中藥含藥血清組;V：自噬阻斷劑組;V：自噬激動劑組；VII：中藥聯(lián)合自噬激動劑組。

圖3各組RAECs線粒體膜電位檢測免疫熒光圖

圖4各組RAECs中通路相關(guān)蛋白表達電泳圖

I：正常組;ⅡI：模型組；ⅢI：空白血清組;IV：中藥含藥血清組；V：自噬阻斷劑組；VI：自噬激動劑組；VII：中藥聯(lián)合自噬激動劑組。

表2各組RAECs中通路相關(guān)蛋白表達比較

a：與正常組比較， Plt;0.01 ;b：與模型組比較， Plt;0.01 ;c：與自噬激動劑組比較， Plt;0.01 。

4討論

血管內(nèi)皮位于血漿與血管平滑肌細胞之間，可以合成與分泌多種活性物質(zhì)，保證血管正常收縮與舒張]研究表明，降低內(nèi)皮細胞中的活性氧與炎癥因子水平可以改善血管內(nèi)皮細胞損傷[12]。本研究通過LPS干預(yù)建立RAECs炎癥損傷模型來探討天麻芎苓正眩片對血管內(nèi)皮細胞損傷的保護機制。結(jié)果顯示，經(jīng)LPS干預(yù)后，與正常組比較，模型組上清液中ET-1水平顯著升高、NO水平顯著降低；經(jīng)天麻芎苓止眩片含藥血清干預(yù)后，與模型組比較，中藥含藥血清組以上指標(biāo)均明顯逆轉(zhuǎn)，說明天麻芎苓止眩片可保護血管內(nèi)皮細胞。

線粒體自噬在維持內(nèi)皮細胞正常功能中發(fā)揮重要作用：自噬不足時，胞質(zhì)內(nèi)易堆積多余或變性蛋白質(zhì)和衰老細胞器，引起細胞代謝紊亂，甚至損傷血管內(nèi)皮組織；自噬被過度激活時會通過非選擇性降解正常的線粒體和線粒體相關(guān)蛋白，進一步加重線粒體損傷和能量代謝障礙[3]，形成能量代謝紊亂等惡性循環(huán)，最終引起血管結(jié)構(gòu)和功能惡化，引發(fā)高血壓[4]。PINK1/Parkin信號通路通過調(diào)節(jié)線粒體自噬，在線粒體質(zhì)量控制中發(fā)揮重要作用[15。正常生理狀態(tài)下，具有正常膜電位的健康線粒體通過TOM（線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶）/TIM23（線粒體內(nèi)膜前導(dǎo)序列轉(zhuǎn)位酶）復(fù)合體將PINK1導(dǎo)人線粒體內(nèi)膜后降解，使PINK1維持在低水平；線粒體損傷降低線粒體內(nèi)膜電位，從而直接抑制PINK1進人線粒體。因此，PINK1不斷在線粒體外膜表面積累，并從細胞質(zhì)中大量募集E3泛素連接酶Parkin[]。LC3和p62是線粒體自噬的關(guān)鍵下游蛋白，當(dāng)發(fā)生線粒體損傷時，激活的PINK1/Parkin信號通路通過招募p62并與LC3結(jié)合，從而激活自噬溶酶體系統(tǒng)進行降解[1]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)天麻芎苓止眩片含藥血清干預(yù)后，RAECs中PINK1、Parkin、LC3蛋白表達下調(diào)，p62表達上調(diào);免疫熒光染色結(jié)果顯示，含藥血清可降低線粒體活性氧水平，升高線粒體膜電位，調(diào)控過度自噬，保護線粒體功能。進一步與自噬激動劑組和自噬阻斷劑組比較發(fā)現(xiàn)，PINK1/Parkin信號通路是線粒體自噬調(diào)控的關(guān)鍵通路，同時，通過對比中藥聯(lián)合自噬激動劑組與自噬激動劑組發(fā)現(xiàn)，含藥血清能逆轉(zhuǎn)自噬激動劑造成的自噬增強，與自噬阻斷劑的作用趨勢一致，進一步證明天麻芎苓止眩片含藥血清具有抑制線粒體自噬的作用。

綜上所述，天麻芎苓止眩片可通過調(diào)控線粒體自噬來保護血管內(nèi)皮功能，其作用機制可能與調(diào)控PINK1/Parkin信號通路、抑制線粒體自噬有關(guān)。

參考文獻

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