（一)-（S)-B-973B對MPP+誘導(dǎo)的 SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制

[中圖分類號] R742.5 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

The protective effect and mechanism of（一）-（S）-B-973B on SH-SY5Y cell injury induced by 1-methyl-4-phenyl pyridineLI Huanhuan ， QIAO Zhen，WANG Ji ，CAO Xiu ，DU Xixun（State Key （Cultivation） Disciplines of Physiology，Qingdao University，Qingdao 266O71，China）

[ABSTRACT] ObjectiveTo investigate the protective effect and mechanism of （-） -（S）-B-973B，an allosteric modulator of α7 nicotinic acetylcholine receptor，on SH-SY5Ycellinjury induced by 1-methyl-4-phenyl pyridine （ .MPP⁺ ）.Methods CCK-8 assay was used to investigate the effect of O，100，200，300，500，1 000， 2 000μmol/L MPP+ on the viability of SH-SY5Y cells （groups A1 -G1 ，respectively），the effect ofO，O.1，1，3，10，30 and 100μmol/L （204號 （-） -（S）-B-973B on the viability of SH-SY5Y cells（groupsA2-G2，respectively），and the effectof O，O.1，1，and 3 μmol/L （204號 （-） -（S）-B-973B on the viability of SH-SY5Y cells induced by MPP + （groups B3一E3，respectively）. SH-SY5Y cels were divided into control group （group A）， MPP⁺ group （group B）， （-） -（S）-B-973B group（group C）， （-）-（S）-B-973B+MPP⁺ group（group D）. Flow cytometry was used to observe the effect of on mitochondrial transmembrane potential in groups A-D cells.Western blotting was used to measure the expression level of the superoxide dismutase 1 （SODl） and Bcl-2/Bax ratio in groups A-D cells. ResultsCCK-8 assay showed that compared with group Al，groups C1-G1 had a significant reduction in cell viability （ ?F=11.11，t=3.60-6.91，Plt;0.05） ；compared with group A2，the groups E2-G2 had a significant reduction in cell viability （F=131.90，t=3.26-20.35，Plt;0.05） ， suggesting that （-） -（S）-B-973B with a concentration of above 10μmol/L had significant toxicity to SH-SY5Y cells；compared with group B3，group D3 had a significant increase in cell viability （F=20.49，t=2.41，Plt;0.05） . Flow cytometry showed that compared with group A，group B had a significant reduction in mitochondrial transmembrane potential ?F=4.51，t=2.98，Plt;0.05） ，and compared with group B，group D had a significant increase in mitochondrial transmembrane potential （ t=3.36，Plt;0.05） .Western blottingshowed thatcompared with group A，groupBhadasignificantreduction inthe protein expresion levelof SODl（ F= （20 4.61，t=4.19，Plt;0.05） ，and compared with group B，group D had a significant increase in the protein expression level of SOD1 （t=2.89，Plt;0.05） ；there was no significant difference in Bcl-2/Bax ratio between groups B-D （ Pgt;0.05 ）．Conclusion This studyshows that （-） -（S）-B-973Bexertsa protectiveeffect against SH-SY5Y cell injury induced by MPP⁺ ，possibly by enhancing mitochondrial function and exerting an anti-oxidative stress effect.

[KEY WORDs]Parkinsondisease；Alpha7 nicotinicacetylcholine receptor;Celine；Tumor；Membrane potential;Mito londrial；Oxidative stress；Apoptosis

帕金森?。≒D）是常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病之一，多發(fā)于中老年人[1-2]。迄今為止，PD的發(fā)病機(jī)制仍不明確，涉及細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、線粒體功能障礙、蛋白質(zhì)異常聚集等多個方面[3]。隨著老齡化社會的到來，PD已嚴(yán)重影響我國人民健康水平，迫切需要尋找新的治療藥物[4]

煙堿型乙酰膽堿受體（nAChR）是一類神經(jīng)元受體蛋白，在神經(jīng)元的質(zhì)膜以及神經(jīng)肌肉接頭的突觸前和突觸后形成配體門控的離子通道[5-7]。其中α7nAChR是中樞神經(jīng)系統(tǒng)含量最高的nAChR亞型之一，可以調(diào)控多巴胺、去甲腎上腺素、乙酰膽堿（ACh）、γ-氨基丁酸、谷氨酸等多種神經(jīng)遞質(zhì)釋放，進(jìn)一步參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元發(fā)育、突觸可塑性等生理過程[8-10]。有研究證實(shí)，PNU-282987 激活α7nAChR以后，可以通過ERK/p53信號通路保護(hù)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞對抗1-甲基-4-苯基吡啶離子（ MPP⁺ ）誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[1]。而（-）-（S）-B-973B是一種 α7 nAChR變構(gòu)激動劑（ago-PAM），可不依賴于配體ACh而直接激活該受體，或使ACh與 α7 nAChR結(jié)合的親和力增加，增強(qiáng)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞[12]，但目前 （-）-（S）-B973B 激活 α7 nAChR后是否具有PD治療的潛在作用尚不明確。本研究通過使用不同濃度的（一）-（S）-B-973B處理SH-SY5Y細(xì)胞后，檢測（一）-（S）-B-973B對 MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞活力、線粒體跨膜電位差、SOD1蛋白水平及 Bcl-2/Bax 蛋白比值的影響，旨在為PD的臨床治療提供新的藥物靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、試劑及儀器

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所。GAPDH抗體購于武漢愛博泰克生物科技有限公司，SOD1抗體購于美國SantaCruz公司，Bcl-2抗體、Bax抗體購于上海愛必信生物科技有限公司，CCK-8試劑、線粒體跨膜電位差檢測試劑盒（JC-1）、胰蛋白酶消化液（不含酚紅和EDTA）、蛋白磷酸酶抑制劑購于北京索萊寶科技有限公司，蛋白酶抑制劑購買于瑞士Roche公司，RIPA強(qiáng)裂解液、SDS-PAGEloadingbuffer（Re-ducing 5×） 購于江蘇康為世紀(jì)生物科技股份有限公司，SDS-PAGE濃縮膠緩沖液、分離膠緩沖液購于美國Sigma公司，PVDF膜、ECL發(fā)光液購于德國Millipore公司。

1.2 SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)

將SH-SY5Y細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶當(dāng)中，使用含有 10% 胎牛血清和 1% 青-鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基（完全培養(yǎng)基）中，置于含體積分?jǐn)?shù) 0.05CO₂ 培養(yǎng)箱中 下進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度為 60%～70% 時用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 MPP⁺ 和（一）-（S）-B-973B處理濃度的篩選

將培養(yǎng)瓶中的SH-SY5Y細(xì)胞重懸后，以 5× 10³ 個/孔細(xì)胞接種于96孔板中，每孔加入 100μL 完全培養(yǎng)基，分為 A1～G1 組和 A2～G2 組。 A1～ G1組細(xì)胞中分別加入 0，100，200，300，500，1 000， 2 000μmol/L 的 MPP⁺ 培養(yǎng) 24h 。 A2～G2 組細(xì)胞中分別加入 0，0，1，1，3，10，30，100μmol/L 的（-）-（S）-B-973B培養(yǎng) 24h 。各組細(xì)胞處理結(jié)束后棄去原培養(yǎng)基，每孔加入 100μL 預(yù)先配制的CCK-8稀釋液， 下避光孵育 ；使用酶標(biāo)儀檢測波長 450nm 處的吸光值并計(jì)算細(xì)胞活力。

1.4 不同濃度 （-）-（S）-B-973B 對 MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞存活率的影響

將培養(yǎng)瓶中的SH-SY5Y細(xì)胞重懸后，以 5× 10³ 個/孔細(xì)胞接種于96孔板中，每孔加入 100μL 完全培養(yǎng)基，分為 A3～E3 組。A3組細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng) 48h，B3～E3 組細(xì)胞中先分別加入0、0.1，1，3μmol/L 的 （-）-（S）-B-973B 培養(yǎng) 24h ，再分別加入 200μmol/LMPP⁺ 繼續(xù)培養(yǎng) 24h 。藥物處理結(jié)束以后棄去原培養(yǎng)基，每孔加人 100μL 的CCK-8稀釋液， 下避光孵育 ，使用酶標(biāo)儀檢測波長 450nm 處的吸光值，并計(jì)算細(xì)胞活力。

1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)線粒體跨膜電位差

將培養(yǎng)瓶中的SH-SY5Y細(xì)胞重懸后，以 5× 10⁴ 個/孔細(xì)胞接種于12孔板中，每孔加入 1mL 完全培養(yǎng)基，分為 A{～D 組。A組細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng) 48h;B 組細(xì)胞中每孔先加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng) 24h ，再加入 200μmol/L 的 MPP⁺ 培養(yǎng) 24h;C 組細(xì)胞中每孔加入 1μmol/L 的（—）-（S）-B-973B培養(yǎng) ^48h ;D組細(xì)胞中每孔先加入 1μmol/L 的（-）-（S）-B-973B培養(yǎng) 24h 后，棄去原培養(yǎng)基，再加人 1μmol/L 的（—）-（S）-B-973B和 200μmol/L MPP⁺ 共培養(yǎng) 24h 。各組細(xì)胞處理結(jié)束后，棄去原培養(yǎng)基，PBS沖洗1次后，每孔加入 500μL 完全培養(yǎng)基和 500μL JC-1染色工作液， 下避光孵育20min ;棄去原培養(yǎng)基，使用 1×JC^-1 染色緩沖液沖洗2次；每孔加入 150μL 不含EDTA 的胰酶消化1min ，隨后加入 300μL 完全培養(yǎng)基以終止消化；將細(xì)胞移至EP管中，離心后棄去上清液，每管分別加人 400μL1×JC-1 染色緩沖液，采用流式細(xì)胞儀分別檢測波長 480nm （綠色）、 594nm （紅色）下的熒光強(qiáng)度。通過FlowJo軟件計(jì)算紅色和綠色熒光強(qiáng)度的比值，表示線粒體跨膜電位的差值。

1.6 Westernblotting實(shí)驗(yàn)檢測各組的細(xì)胞當(dāng)中SOD1、Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)水平

將SH-SY5Y細(xì)胞以 1×10⁵ 個/孔接種于6孔板，分為 A～D 組，處理結(jié)束后，棄去原培養(yǎng)基，PBS沖洗1次以后，每孔加入預(yù)先配好的 80μL 裂解液（RIPA、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑比例為10：2：1） ，冰上靜置 20min ；收集每孔細(xì)胞于 1.5mL EP管中，使用研磨儀研磨細(xì)胞樣品3次，每次 15s 隨后于 4^°C 下 12 000r/min 離心細(xì)胞樣品 20min 5取上清液，加入對應(yīng)體積的 5× loadingbuffer，于100^°C 金屬浴中變性 10min ；采用BCA試劑盒檢測蛋白濃度并計(jì)算上樣體積，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，依次進(jìn)行轉(zhuǎn)膜 （300mA，90min） 、封閉（ 10% 脫脂奶粉， 2h） 、一抗（GAPDH：1：10 000，SOD1：1：1000，Bcl-2：1：1000，Bax：1：1000） 孵育、二抗（204 （1：10 000） 孵育，條帶曝光顯影，使用ImageJ軟件進(jìn)行灰度值分析，以GAPDH為內(nèi)參計(jì)算各目的蛋白的相對表達(dá)量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPadPrism8.O軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Dunnett Ψ_t 檢驗(yàn)。以 Plt;0.05 為差異有顯著性。所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次。

2結(jié)果

2.1不同濃度 MPP⁺ 對SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞活力影響

A1～G1 組細(xì)胞的細(xì)胞活力分別為！ （100.70± ）.72）%_v（84.97±5.36）%_v（74.19±5.17）%_v（70.08± 6.16）% 、 （62.92±6.14）% 、（ 56.67±5.74）% （49.87±5.02）% 。隨著 MPP⁺ 濃度升高，細(xì)胞活力逐漸降低 （F=11.11，Plt;0.05） ；與A1組相比，Bl組無顯著差異 （Pgt;0.05） ， C1～G1 組細(xì)胞的細(xì)胞活力顯著降低 （t=3.60～6.91 ， 。說明在200μmol/L 及以上濃度時， MPP⁺ 對于SH-SY5Y細(xì)胞均具有顯著毒性，選用 200μmol/L 濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 不同濃度（一）-（S）-B-973B對SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞活力影響

A2～G2 組細(xì)胞活力分別為 （100.00±5.76）% 、（110.30±2.45）% 、 （102.60±2.13）% 一 （104.10± 3.19）% ！ （86.72±1.52）% 派 （64.31±0.92）% 以及（17.06±0.69）% 。隨著 （-）-（S）-B-973B 濃度升高，細(xì)胞活力呈顯著性下降趨勢（ Φ^′F=131.90， Plt; 0.05）；與A2組相比， B2～D2 組細(xì)胞活力無顯著差異 （Pgt;0.05） ， E2～G2 組細(xì)胞活力顯著下降（ Φ_t= 3.26～20.35，Plt;0.05） 。說明在 10μmol/L 及以上濃度時，（一）-（S）-B-973B對SH-SY5Y細(xì)胞均具有顯著毒性。

2.3（-）-（S）-B-973B對 MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞活力影響

A3～E3 組細(xì)胞活力分別為 （100.00±5.76）% 、（65.07±2.97）%. 、 （67.25±1.72）% （ 84.92± 1.06）%.（66.43±2.47）% 。隨著（—）-（S）-B-973B濃度升高，各組細(xì)胞活力呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢 （F=20.49，Plt;0.05） ；其中與A3組相比較，B3組細(xì)胞活力顯著降低 （t=7.63，Plt;0.05） ，與B3組相比，D3組細(xì)胞活力顯著升高 （t=2.41，Plt;0.05） ，B3組、C3組、E3組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ ?Pgt;0.05） 。說明 1μmol/L 的（—）-（S）-B-973B對MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞具有保護(hù)作用，因此選用 1μmol/L 的（一）-（S）-B-973B用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.4（—）-（S）-B-973B對 MPP⁺ 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示， A～D 組細(xì)胞線粒體跨膜電位差值分別為 3.27±0.12，2.60±0.17，3.08± 0.22，3.35±0.09 ，各組間比較差異有顯著性（ F= 4.51，Plt;0.05） ；其中與A組相比，B組線粒體跨膜電位差值顯著降低 Ω_t=2.98，Plt;0.05 ，C組無顯著差異 （Pgt;0.05） ；與B組相比，D組線粒體跨膜電位差值顯著升高 （t=3.36，Plt;0.05） 。見圖1。

2.5（-）-（S）-B-973B對 MPP⁺ 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y細(xì)胞SODl、Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的影響

Westernblotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， A～D 組細(xì)胞中SOD1蛋白相對表達(dá)量分別為 1.03±0.15.0.81± 0.09?0.95±0.07?0.97±0.09 ，各組間比較差異具有顯著性 （F=6.14，Plt;0.05） ；其中與A組相比，B組SOD1蛋白表達(dá)顯著降低 （t=4.19，Plt;0.05）， C組無顯著差異 （Pgt;0.05） ；與B相比，D組SOD1蛋白表達(dá)水平明顯升高 （t=2.89，Plt;0.05） 。 A～D 組細(xì)胞中 Bcl-2/Bax 蛋白的比值分別為 1.23±0.15 、0.99±0.09，0.90±0.10，0.77±0.14 ，各組間比較差異有顯著性 （F=7.50，Plt;0.05） ，但 B～D 組間兩兩比較，差異無顯著性 （Pgt;0.05） 。見圖2。

A組 B組 C組 D組 A 強(qiáng) 8 1005 10 9 2 100.085 1001 P 982 ： 4.2 中 10 y 2 1 2 102 12 Q3 Q4 Q3 Q4 Q3 Q4 Q3 1010.027 3.24 100.042 8.38 1010.057 8.20 1010.25 5.39 [ T rm m r] T T ]1rrmm 102 10 心 100 107 108 10210 10 10 10 10gt; 108 102 103 10 100 1 心 108 102 103 104 10 10 107 108 FL5-HFITC-H FL5-H：FITC-H FL5-HFITC-H FL5-HFITC-H

3討論

PD是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，近年來新發(fā)病例數(shù)顯著增加。目前臨床上常用的治療藥物有左旋多巴、多巴胺受體激動劑等[13-14]。但隨著疾病的不斷進(jìn)展，大多數(shù)藥物在使用后期會產(chǎn)生一定的耐藥性及運(yùn)動相關(guān)副作用，因此，尋找新的藥物靶點(diǎn)對于緩解PD患者病情進(jìn)展至關(guān)重要。既往研究發(fā)現(xiàn)，作為配體門控離子通道超家族的成員之一，α7nAChR在PD細(xì)胞及動物模型中均顯示出一定的神經(jīng)保護(hù)作用[15-16]，在 MPP⁺ 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y細(xì)胞中，PNU-282987可以激活 α7nACh ，通過介導(dǎo)ERK/p53信號通路對抗細(xì)胞凋亡[11]；在1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（MPTP）誘導(dǎo)的大鼠模型中， a7 nAChR被激活后可通過抑制炎癥因子的釋放對抗黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元損傷[17-18]；在MPTP誘導(dǎo)的PD小鼠模型中，敲除 之后，能夠加劇小鼠多巴胺能神經(jīng)元的丟失[19-21]。因此，激活 a7 nAChR為靶向PD的神經(jīng)治療提供了新思路。而（一）-（S）-B-973B已經(jīng)被證明是 α7nAChR 的agoPAM，具備獨(dú)特的作用機(jī)制[22]。其作為激動劑發(fā)揮作用時可不依賴于配體ACh而直接激活該受體，作為變構(gòu)調(diào)節(jié)劑發(fā)揮作用時可以使ACh更易于與α7nAChR結(jié)合，最終導(dǎo)致離子通道的開放，引起細(xì)胞膜去極化，促進(jìn)ACh等神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞[12]。那么（一）-（S）-B-973B在PD細(xì)胞模型中是否同樣具有神經(jīng)保護(hù)作用？

MPP⁺ 是一種制備PD細(xì)胞模型的經(jīng)典神經(jīng)毒素[23]。本研究首先篩選了不同濃度 MPP⁺ 對 SH-SY5Y 細(xì)胞的細(xì)胞活力影響，結(jié)果顯示，隨著 MPP⁺ 濃度升高，細(xì)胞活力逐漸降低，在 200μmol/L 及以上濃度時， MPP⁺ 對 SH-SY5Y細(xì)胞均具有顯著毒性，本研究后續(xù)選用了對SH-SY5Y細(xì)胞具有顯著毒性的濃度，即 200μmol/L 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本研究又對（一）-（S）-B-973B的后續(xù)使用濃度進(jìn)行了篩選，結(jié)果顯示，隨著（一）-（S）-B-973B濃度升高，細(xì)胞活力顯著下降，并且在 10μmol/L 及以上濃度時，（一）-（S）-B-973B對SH-SY5Y細(xì)胞均具有顯著性毒性。以藥物無毒性為依據(jù)，本研究后續(xù)選用了10μmol/L 以下濃度處理 MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞，結(jié)果顯示，隨著 （-）-（S）-B-973B 濃度升高，各組的細(xì)胞活力呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，并在1μmol/L 時細(xì)胞活力最高，說明了 1μmol/L 濃度的 （-）-（S）-B-973B 可以逆轉(zhuǎn) MPP⁺ 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞損傷，于是后續(xù)實(shí)驗(yàn)便選用了 1μmol/L 濃度的 。線粒體跨膜電位差是指線粒體內(nèi)膜外側(cè)電位減去內(nèi)膜內(nèi)側(cè)電位值，通過線粒體跨膜電位差值反映線粒體去極化程度，如果該數(shù)值降低，提示線粒體功能受到損失[24-25]。本研究流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與A組相比，B組線粒體跨膜電位差值顯著降低，表明經(jīng) MPP⁺ 誘導(dǎo)后，細(xì)胞線粒體功能顯著受損，與B組相比，D組線粒體跨膜電位差值顯著升高，表明（一）-（S）-B-973B逆轉(zhuǎn)了 MPP⁺ 誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體跨膜電位差的降低，顯著改善了線粒體功能障礙。為了進(jìn)一步探究線粒體損傷后是否導(dǎo)致了脂質(zhì)過氧化水平的升高，本研究又進(jìn)一步檢測了細(xì)胞內(nèi) SOD1蛋白表達(dá)水平。SOD1是生物體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成部分，其降低可導(dǎo)致超氧陰離子在細(xì)胞內(nèi)積聚，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平增強(qiáng)，細(xì)胞代謝紊亂。本研究結(jié)果顯示，與A組相比，B組細(xì)胞中SOD1蛋白表達(dá)水平顯著下降，表明經(jīng) MPP⁺ 誘導(dǎo)后，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平升高；與B組相比，D組細(xì)胞中SOD1蛋白表達(dá)水平顯著升高，表明（一）-（S）-B-973B可逆轉(zhuǎn) MPP⁺ 誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)SOD1蛋白表達(dá)水平的降低，降低了細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平。研究顯示， a7 nAChR被激活后可通過PI3K/AKT信號級聯(lián)反應(yīng)，調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)[]。Bcl-2蛋白家族由很多“促凋亡\"和“抗凋亡\"蛋白組成，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞線粒體膜的通透性，在細(xì)胞凋亡過程中起關(guān)鍵性作用。其中Bax屬于促進(jìn)凋亡蛋白， Bcl-2 屬于抑制凋亡蛋白，當(dāng)細(xì)胞內(nèi) Bcl-2/Bax 蛋白比值降低時提示細(xì)胞發(fā)生了凋亡[26-27]。本研究結(jié)果顯示， B～D 組細(xì)胞中Bcl-2/Bax蛋白比值比較差異無顯著性，說明（一）-（S）-B-973B對 MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)無明顯影響，（一）-（S）-B-973B可能不通過Bcl-2/Bax途徑抑制細(xì)胞凋亡過程。

綜上所述，（一）-（S）-B-973B能夠顯著性提升MPP⁺ 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞存活能力，增強(qiáng)細(xì)胞的線粒體功能，提高細(xì)胞的抗氧化能力，可能是一種有前途的PD治療藥物。本研究為（一）-（S）-B-973B的開發(fā)以及后續(xù)動物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)的開展提供了數(shù)據(jù)參考。

作者聲明：李煥煥、王吉、曹秀參與了研究設(shè)計(jì)；李煥煥、喬振、杜希恂參與了論文的寫作和修改。所有作者均閱讀并同意發(fā)表該論文，且均聲明不存在利益沖突。

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（本文編輯 耿波）