miRNA-381-3p/MuRF1軸對低氧性肺動脈高壓小鼠 心肺損傷的影響

摘要：目的探討微小RNA-381-3p（miR-381-3p）/肌肉環(huán)指蛋白1（MuRF1）軸在低氧性肺動脈高壓（HPH）小鼠心肺損傷中的作用及可能機制。方法將60只C57BL/6小鼠隨機分為對照（NC）組、HPH組、 .HPH+ 類似物對照（HPH+agomir control）組、 .HPH+miR-381-3p 類似物組 （HPH+miR-381-3p agomir）組，每組15只。采用低壓低氧人工艙建立HPH小鼠模型，HPH模型構(gòu)建前3周，按分組要求將 miR-381-3p agomir和相當(dāng)劑量對照 agomircontrol 溶解在無RNA酶的PBS中，按照每次 10mg/kg 的劑量尾靜脈注射，每周2次，持續(xù)3周。心臟超聲檢測小鼠右心功能;心導(dǎo)管測定小鼠右心室收縮壓（RVSP）;HE染色評估肺血管重塑;酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定肺泡灌洗液炎性因子水平;實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測miR-381-3p和MuRF1mRNA表達；預(yù)測 miR-381-3p 的靶點并進行富集通路分析;雙螢光素酶報告基因?qū)嶒灆z測miR-381-3p對MuRF1的靶向調(diào)控作用。結(jié)果與NC組相比，HPH組和HPH+agomir control組miR-381-3pmRNA表達降低，而MuRF1mRNA表達增高 （Plt;0.05 ；與HPH組和HPH+agomir control 組相比， HPH+miR-381-3p agomir組 miR-381-3p 表達增加，而MuRF1mRNA表達降低（ Plt; 0.05）。與NC組相比，HPH組和HPH+agomir control組RVSP、右心室前壁厚度（RVAW）、右心室肥厚指數(shù)（RVHI）、右心室膠原容積分數(shù)（CVF）、遠端肺動脈壁厚度比（WT）、肺動脈壁面積比（WA）增加，肺泡灌洗液白細胞介素（IL）-1β、IL-6、腫瘤壞死因子（TNF）- α 增加，右心室內(nèi)徑（RVID）降低 （Plt;0.05） ；與HPH組和 HPH+ agomir control組相比， HPH+miR-381-3p agomir組RVSP、RVAW、RVHI、右心室CVF、WT、WA，肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF- α_?∝ 降低，RVID增加 （Plt;0.05 ）。數(shù)據(jù)庫預(yù)測了 miR-381-3p 的下游靶基因，MuRF1是潛在的作用靶點，肌細胞中的細胞骨架通路（Cytoskeleton in muscle cells）居靶基因顯著富集的首位。與WT-MuRF1+mimic control組相比，WT-MuRF1+miR-381-3pmimic組螢光素酶活性降低 （Plt;0.05 ）；而Mut-MuRF1+mimiccontrol組和 Mut-MuRF1+miR- 381-3pmimic 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論過表達 miR-381-3p 可改善HPH小鼠心肺損傷，其機制可能與miR-381-3p靶向抑制MuRF1有關(guān)。

中圖分類號：R544.16，R541.3 文獻標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20251127

Abstract： ObjectiveTo explore the effect of microRNA-381-3p （miR-381-3p）/MuRF1 axis on cardiopulmonary injuryin hypoxia-induced pulmonary hypertension（HPH） mice and itspotential mechanisms.MethodsSixtymice were randomlyasignedto four groups：the normal control group （NC），the hypobaric hypoxia-induced pulmonaryhypertension （HPH） group，the HPH + agomir control group and the HPH + miR-381-3p agomir analog group （HPH + miR-381-3p agomir），with15 miceineach group.TheHPHmousemodel wasestablishedusingalow-pressureand hypoxicartificial chamber.Three weeksprior totheestablishmentof the HPHmodel，miR-381-3pagomiranditscoresponding control agomir were prepared bydissolving them inRNA-free phosphate-bufferedsaline （PBS）according to theexperimental requirements.Thesesolutionswereadministered viatail veininjectionatadoseof1O mg/kg，twice weklyforthree consecutive weeks. Right heart function was assessed using echocardiography. Right ventricular systolic pressure （RVSP） was measuredviacardiaccatheterization.Pulmonaryvascular remodeling was evaluated through hematoxylinandeosin （HE）staining.Levelsof inflammatorycytokinesin bronchoalveolarlavage fluid werequantifiedusingenzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Real-time quantitative fluorescent PCR（RT-qPCR） was employed to analyze the mRNA expressionlevelsofmiR-381-3pandMuRF1.Potentialtargetsof miR-381-3pwerepredicted，andpathwayenrichment analysis wasconducted.Adual-luciferase reporter gene assaywas performed to confirm the directregulatory efectof miR381-3p on MuRF1.ResultsCompared with the NC group，the mRNA expresion of miR-381-3p was significantly decreased in both the HPH group and the HPH+agomir control group，whereas the mRNA expression of MuRF1 was significantly increased（ Plt;0.05 ）. In contrast， compared with the HPH group and the HPH+agomir control group，the mRNA expression of miR-381-3p was significantly increased in the HPH + miR-381-3p agomir group，while the mRNA expression of MuRF1 was significantly decreased （ Plt;0.05 ）.Additionally，compared with the NC group，RVSP，right ventricular anteriorwall thickness （RVAW），rightventricular hypertrophyindex （RVHI），rightventricularcollagenvolumefraction （CVF），distal pulmonaryarterywall thickness ratio（WT），pulmonaryarterywallarea ratio （WA），aswellas IL- 1β ， IL-6 and TNF- α levels inalveolar lavage fluid were significantly increased in the HPH groupand the HPH+agomir control group， whereas theright ventriculardiameter（RVID）wassignificantlydecreased（ Plt;0.05 ）.Conversely，comparedwiththe HPH groupandthe HPH+agomircontrolgroup，RVSP，RVAW，RVHI，rightventricular CVF，WT，WaandRVIDweredecreased in the HPH+miR-381-3p agomir group，and IL- ^1|3 ， IL-6， and TNF- α levels of alveolar lavage fluid were significantly decreased （ Plt;0.05 ）.Furthermore，the downstream target genes of miR-381-3p were predicted in the database，and MuRF1 wasapotentialtarget，andthe Cytoskeletonin musclecellsrankedfirstinthesignificantenrichmentof target genes. Compared with WT-MuRF1+mimiccontrol group，the luciferase activitywas decreased in the WT-MuRF1+miR-381-3p mimic group （ Plt;0.05 ）.There was no significant diference in the luciferase activity between the Mut-MuRF1+mimic control groupand the Mut-MuRF1+miR-381-3p mimic group.ConclusionOverexpression of miR-381-3pcan improve cardiopulmonary injury in HPH mice，and the mechanism may berelated to the targeted inhibition of MuRF1 by miR381-3p.

Key words：hypoxia; hypertension，pulmonary; muscle-specific ring finger protein 1; microRNA-381-3p; myocardial fibrosis; pulmonary artery remodeling

低氧性肺動脈高壓（HPH）屬于肺動脈高壓（PAH）第三類別，為低氧或肺疾病相關(guān) PAH^[1] 。持續(xù)的肺血管收縮和肺血管重塑是HPH進展及惡化的重要原因，也是HPH患者對多種擴血管藥物不敏感的重要原因[2]，因此尋找有效治療靶點是HPH研究的重要方向。越來越多的證據(jù)表明，微小RNA（miRNA，miR）在HPH的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[3]。研究顯示，miR-381-3p在非小細胞肺癌中的表達與腫瘤細胞惡性生物學(xué)行為有著密切的關(guān)系[4，但miR-381-3p在HPH進展中的作用尚少見報道。本課題組前期研究證實，敲除肌肉環(huán)指蛋白1（MuRF1）可改善HPH小鼠肺血管重塑和繼發(fā)性右心功能障礙[5]。采用TargetScan數(shù)據(jù)庫（http：//www.targetscan.org）、miRanda數(shù)據(jù)庫（www.miranda.org）和miRDB（www.mirdb.org）數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-381-3p的下游靶基因，發(fā)現(xiàn)MuRF1是潛在的作用靶點。基于此，本研究利用我院低壓低氧人工實驗艙建立HPH小鼠模型，旨在探討miR-381-3p能否通過靶向調(diào)控MuRF1改善HPH誘發(fā)的心肺損傷。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物SPF級雄性8周齡C57BL/6小鼠60只，體質(zhì)量 22～25_g ，購自新疆醫(yī)科大學(xué)動物中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（新）2018-0002，動物使用許可證號：SYXK（軍）2017-0050。所有小鼠飼養(yǎng)于實驗動物科，光照保持 ^12h 明暗交替，溫度 22～26°C ，相對濕度為 45% 260% ，小鼠可自由獲取食物和水。本研究通過動物倫理委員會審核批準(zhǔn)（批號：2023RR0212）。

1.1.2試劑與儀器白細胞介素（IL）-1β、IL-6、腫瘤壞死因子- 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒、HE染色試劑盒、天狼星染色試劑盒購自南京建成生物有限公司；Lipofectamine Δ^TM3000 轉(zhuǎn)染試劑盒、Trizol試劑、TaqManTM逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、實時熒光定量PCR（RT-qPCR）試劑盒購于賽默飛世爾科技（中國）有限公司；雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司。用于動物實驗的miR-381-3p類似物（miR-381-3pagomir）由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成，其對照（agomircontrol）為無功能的雙鏈RNA。用于細胞實驗的miR-381-3p模擬物（miR-381-3pmimic）及對照（mimiccontrol）由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。小動物超聲儀購于加拿大富士VisualSonics公司，普通光學(xué)顯微鏡購于日本奧林巴斯（Olympus）公司，7500型熒光定量PCR儀購于美國應(yīng)用生物系統(tǒng)（ABI公司。

1.2 研究方法

1.2.1實驗分組與HPH模型構(gòu)建按照隨機數(shù)字表法將C57BL/6小鼠分為對照（NC）組、HPH組、 .HPH+ 類似物對照（HPH+agomir control）組、 HPH+miR-381-3p 類似物（ HPH+ miR-381- ?3p agomir）組，每組15只。HPH組、HPH+agomircontrol組 .HPH+miR-381-3p agomir組小鼠置于低壓低氧人工實驗艙中造模，NC組小鼠置于常壓常氧環(huán)境。按分組要求，HPH模型構(gòu)建前3周，將 miR-381-3p agomir和相當(dāng)劑量對照agomircontrol溶解在無RNA酶的PBS中，按照每次10mg/kg 的劑量尾靜脈注射，每周2次，持續(xù)3周。按照文獻方法建立HPH小鼠模型。HPH造模依托我院低壓低氧人工艙進行，每日白天 8h 為低壓低氧環(huán)境，大氣壓控制在55kPa ，氧濃度為 10% ，此種條件下維持4周，各組小鼠均無死亡。

1.2.2小動物心臟超聲檢測小鼠右心功能小鼠心前區(qū)備皮，異氟烷吸入麻醉，使用M型小鼠超聲系統(tǒng)測定右心功能，記錄和分析舒張末期右心室內(nèi)徑（RVID，前后徑）和舒張末期右心室前壁厚度（RVAW）。

1.2.3心導(dǎo)管測定小鼠右心室收縮壓（RVSP）小鼠右側(cè)頸部備皮， 0.3% 的戊巴比妥鈉按照 30mg/kg 的劑量腹腔麻醉，切開頸部皮膚，逐步暴露頸外靜脈，PE微導(dǎo)管進行頸外靜脈穿刺，PE微導(dǎo)管與Powerlab生理記錄儀連接，根據(jù)波形變化可判斷導(dǎo)管所處的位置。當(dāng)記錄儀上顯示振幅較大的心室波時，表明導(dǎo)管進入右心室，監(jiān)測并記錄小鼠RVSP（間接反映小鼠肺動脈壓）。

1.2.4右心室肥厚指數(shù)評估脫頸法處死小鼠，迅速分離小鼠心臟，分離出左心室（LV）、室間隔（S）、右心室（RV，稱取各部分質(zhì)量，計算右心室肥厚指數(shù) （RVHI）=RV 質(zhì)量/（LV質(zhì)量 +S 質(zhì)量）。

1.2.5天狼星染色評估右心膠原纖維沉積分離小鼠右心室，PBS緩沖液清洗， 4% 多聚甲醛固定 48h 。按相應(yīng)試劑盒要求進行常規(guī)染色，封片。觀察天狼星染色切片，紅色代表膠原組織。計算膠原容積分數(shù)（CVF） （膠原面積/總面積） 100% 。

1.2.6HE染色評估肺血管重塑分離小鼠肺臟， 4% 多聚甲醛固定 48h 。常規(guī)包埋，切片，按HE試劑盒要求常規(guī)染色。隨機選取遠端肺動脈（直徑約 50～150μm） 分析，每只小鼠10條。評估遠端肺動脈壁厚度比（WT）和遠端肺動脈壁面積比（WA）， WT= [（管外直徑-管內(nèi)直徑）/管外直徑] 1×100% ，WA=（血管中膜面積/血管壁總面積） ×100% ○

1.2.7ELISA測定肺泡灌洗液炎性因子水平充分暴露并分離小鼠氣管和左肺。結(jié)扎氣管并剪一個V形切口，刺入套管針，注射 0.5mL PBS緩沖液至左肺，抽出后再打入，反復(fù)灌洗，收集灌洗液。低溫離心取上清液，按照試劑盒說明書檢測IL-1β、IL-6、TNF- σ_∝ 水平。

1.2.8 RT-qPCR檢測 miR-381-3p 和 表達水平常規(guī)勻漿并提取小鼠肺組織總RNA。采用SYBRPremixExTaq，在CFX96實時PCR操作系統(tǒng)上以cDNA為模板，進行實時定量PCR檢測。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性 10s ·95°C 變性15s，60℃退火30s，72℃延伸60s，共40個循環(huán)。

以U6作為 的內(nèi)參對照，以 β-actin 作為MuRF1mRNA的內(nèi)參對照。反應(yīng)體系（ 20μL “ 2× StarScriptII Green One Step RT-qPCR Buffer 10μL ，StarScript I OneStep Enzyme Mix 2.0μL ，ROXReference Dye 0.4μL ，RNA模板 2.0μL ，上、下游引物各 0.4μL，ddH₂O4.8μL_o 以 2^-ΔΔCt 法計算目的基因相對表達量。RT-qPCR所需引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列見表1。

1.2.9miR-381-3p的靶點預(yù)測及用于注釋、可視化和集成探索數(shù)據(jù)庫（DAVID）分析分別采用TargetScan、miRanda和miRDB數(shù)據(jù)庫預(yù)測 miR-381-3p 的下游靶基因，篩選出3個數(shù)據(jù)庫的共同靶基因，將共同靶基因?qū)朐诰€KEGG通路富集分析工具DAVID（https：//www.david.ncifcrf.gov/）并進行富集通路分析，篩選出相關(guān)的富集通路。

1.2.10雙螢光素酶報告基因?qū)嶒灆z測miR-381-3p對MuRF1的靶向調(diào)控作用構(gòu)建MuRF1野生型（WT-MuRF1）3^′ -非翻譯區(qū)（UTR）及MuRF1突變型（Mut-MuRF1） 3^′ -UTR，并將其克隆到螢光素酶基因下游的螢光素酶報告載體pGL3中。實驗分為WT-MuRF1+mimiccontrol組、WT-MuRF1 + miR-381-3pmimic組、Mut-MuRF1+mimiccontrol組、Mut-MuRF1+miR-381- ?3p mimic組 ）。用LipofectamineTM3000 在HEK-293T細胞中共轉(zhuǎn)染 20pmol 的miR-194-5pmimic或mimiccontrol與 100ng 的WT-MuRF1或Mut-MuRF1。采用雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒評估各組螢光素酶活性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用 GraphPadPrism10.2.3 進行數(shù)據(jù)分析。計量資料用x+s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Turkey檢驗。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HPH小鼠肺組織中miR-381-3p和MuRF1mRNA表達情況NC組、HPH組、 HPH+ agomircontrol組和 HPH+miR-381-3p agomir 組 miR-381-3p 表達量分別為 0.95±0.21、0.36±0.23、0.34±0.15 2.56±0.46 （ n=15 ， F=197.500 ， Plt;0.01 ）；MuRF1mRNA表達量分別為 1.15±0.21，4.12±0.58，4.38± 0.37，2.31±0.24 （ n=15 ， F=245.500 Plt;0.01 ）；與NC組相比，HPH組和 HPH+ agomir control組 miR-381-3p 表達降低，MuRF1mRNA表達增高 （Plt;0.05 ；與

HPH組和HPH+agomircontrol組相比， HPH+miR- 381-3pagomir組 miR-381-3p 表達增加，MuRF1mRNA表達降低 （Plt;0.05 ）。

2.2過表達 miR-381-3p 對HPH小鼠右心功能和RVSP的影響與NC組相比，HPH組和 HPH+ agomircontrol組RVSP、RVAW、RVHI增加，而RVID降低 ?Plt;0.05 ）;與HPH組和HPH+agomir control組相比， HPH+miR-381-3p agomir組RVSP、RVAW、RVHI降低，而RVID增加 （Plt;0.05 。見表2。

2.3過表達 miR-381-3p 對HPH小鼠右心室膠原沉積的影響天狼星染色結(jié)果顯示，NC組小鼠右心室心肌纖維排列整齊，無明顯膠原纖維沉積；HPH組和HPH+agomircontrol組小鼠心肌纖維排列紊亂，有大量的膠原纖維沉積； HPH+miR-381-3p agomir組較HPH組和HPH+agomir control組膠原纖維沉積減少，見圖1。NC組、HPH組、 HPH+ agomircontrol組和 HPH+miR-381-3p agomir組右心室CVF1 （% ）分別為 2.38±1.03 、 25.51±6.82 一！ 22.83±4.45 、8.84±2.18 C n=15 F=102.300 ， Plt;0.01 ）。HPH組和HPH+ agomircontrol組右心室CVF值較NC組增加0 $＼stackrel { ＼cdot } { P } lt; 0 . 0 5 ＼$ ；而 HPH+miR-381-3p agomir組右心室CVF值較HPH組和 HPH+agomir control組降低（Plt;0.05 ）。

2.4過表達 miR-381-3p 對HPH小鼠肺血管重塑的影響與NC組相比， HPH 組和 HPH+ agomir control組WT、WA增加 （Plt;0.05） ；與HPH組和 HPH+ agomir control組相比， HPH+miR-381-3p agomir 組WT、WA降低 （Plt;0.05 ）。見圖2、表3。

2.5過表達 miR-381-3p 對肺泡灌洗液炎性因子的影響與NC 組相比，HPH組和HPH+agomir control組肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF- ∝ 水平增加（ （Plt; 0.05）；與 HPH 組和 HPH+agomir control 組相比，HPH+miR-381-3p agomir組肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF- σ?α∝ 水平降低（ Plt;0.05 。見表4。

2.6miR-381-3p的靶點預(yù)測及DAVID分析通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測 miR-381-3p 的下游靶基因833個，miRanda數(shù)據(jù)庫預(yù)測 miR-381-3p 的下游靶基因4054個，miRDB數(shù)據(jù)庫預(yù)測 miR-381-3p 的下游靶基因338個，將3個數(shù)據(jù)庫進行整合，得到共同靶基因數(shù)132個，其中MuRF1（又稱為 Trim63 ）是潛在的作用靶點。將132個靶基因?qū)隟EGG通路富集分析工具DAVID中，結(jié)果提示，“肌細胞中的細胞骨架通路\"（Cytoskeleton inmusclecells）居靶基因顯著富集的首位 P=0.0012 。見圖3、4。

2.7 miR-381-3p對MuRF1的靶向調(diào)控作用 miR-381-3p 與MuRF1 3^′ -UTR的結(jié)合位點如* ^?*Plt;0.01 ;a與NC組比較，b與HPH組比較，與HPH+agomir control組比較 Plt;0.05;1 mmHg=0.133 kPa;表3、4同。

圖5所示。螢光素酶報告實驗結(jié)果顯示，WT-MuRF1+mimic control 組、WT-MuRF1 + miR-381-3pmimic組、Mut-MuRF1 + mimiccontrol組和Mut-MuRF1+miR-381-3p mimic組螢光素酶活性分別為1.06±0.14、0.41±0.04、 0.96±0.11 、1.13±0.16（ n=6 F= 43.710， Plt;0.01 ）。與WT-MuRF1+mimiccontrol組相比， WT-MuRF1+miR-381-3pmimic 組螢光素酶活性降低 （Plt;0.05） ；而Mut-MuRF1+mimic control組和 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

HPH是一種以肺動脈內(nèi)皮細胞功能障礙、肺動脈平滑肌細胞異常增殖和血管結(jié)構(gòu)重構(gòu)為特征的慢性疾病，最終可導(dǎo)致右心心力衰竭和死亡7]。血管重構(gòu)是HPH進展中一個重要步驟，最終可導(dǎo)致嚴重的心肺損傷[8]。HPH的發(fā)病涉及多個相互關(guān)聯(lián)的因素，轉(zhuǎn)錄失衡、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯和翻譯后修飾均參與了HPH發(fā)展，這些步驟可能是肺血管重塑及肺動脈平滑肌細胞異常增殖的關(guān)鍵[9]。進一步尋找影響HPH肺血管重塑及繼發(fā)性右心功能損傷的新靶點對于改善HPH診療具有重要的意義。miRNA是內(nèi)源性非編碼小RNA，通過與靶mRNA的 3^′ -UTR結(jié)合以抑制翻譯或誘導(dǎo)mRNA降解，從而調(diào)節(jié)基因表達，參與各種生物學(xué)過程，如細胞增殖、死亡、遷移和分化[10]。既往研究報道了 miR-381-3p 參與膿毒癥心肌病及非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程[4.11]，miR-381-3p在HPH誘發(fā)的肺血管重塑及繼發(fā)性右心功能損傷中的作用尚不清楚。RVSP是反映肺動脈壓的間接指標(biāo)，肺動脈壓和RVSP進行性增高是HPH進展的重要機制[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，HPH小鼠較對照小鼠RVSP增高，表明肺動脈壓增高是HPH發(fā)生發(fā)展的基本病理生理改變；而尾靜脈注射 miR-381- 3pagomir的HPH小鼠較注射agomircontrol的HPH小鼠RVSP降低，表明過表達miR-381-3p可降低HPH小鼠肺動脈壓力，miR-381-3p在HPH進展中發(fā)揮重要的保護作用。

在HPH早期，慢性缺氧導(dǎo)致肺動脈壓力增高，病理性右心室心肌肥厚是應(yīng)對后負荷壓力增加的代償性反應(yīng)，以維持右心室充盈壓力和輸出量；隨著肺動脈壓力增高和肺動脈重塑的進展，引發(fā)右心室后負荷持續(xù)增加，右心代償能力不足，出現(xiàn)心肌纖維化，表現(xiàn)為右心室膠原纖維沉積和毛細血管的丟失[13-15]。心肌纖維化與心臟肥厚密切相關(guān)，互為促發(fā)因素[1。本研究發(fā)現(xiàn)，HPH小鼠較對照小鼠RVAW、RVHI、CVF增加，RVID降低，表明HPH誘發(fā)右心室心肌結(jié)構(gòu)和功能的變化，不僅表現(xiàn)為心肌細胞肥大導(dǎo)致的右心室肥厚，還表現(xiàn)為心肌膠原組織增加；而尾靜脈注射miR-381-3pagomir的HPH小鼠較注射 agomircontrol 的HPH小鼠RVAW、RVHI、

CVF降低，RVID增加，表明過表達 miR-381-3p 不僅可改善HPH誘發(fā)的右心室肥厚，還可以減少右心室膠原纖維沉積，過表達miR-381-3p的治療藥物開發(fā)可能是HPH患者心臟保護藥物研發(fā)的新方向。

越來越多的證據(jù)顯示，肺血管重塑在HPH進展中起最為關(guān)鍵性作用[17]。本研究結(jié)果顯示，HPH組WT、WA較對照組增加，表明肺動脈管壁變厚、管腔狹窄是HPH進展的重要病理學(xué)病變；尾靜脈注射miR-381-3pagomir的HPH小鼠WT、WA較注射agomircontrol的HPH小鼠降低，表明過表達miR-381-3p可改善HPH小鼠肺血管重塑。炎癥通路的激活是HPH的早期事件和多個信號級聯(lián)的起源[18]在HPH發(fā)病早期，血清IL-1β、IL-6、TNF- σ?α∝ 水平增加，血管內(nèi)皮屏障損傷的情況下，這些炎性因子可直接與平滑肌接觸，促進肺血管重塑和HPH進展[19]。本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，HPH組肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF- α_?∝ 水平升高，表明炎癥信號級聯(lián)反應(yīng)促進了肺動脈周圍炎癥環(huán)境的形成，可能加重肺動脈重塑;而尾靜脈注射 miR-381-3p agomir的HPH小鼠肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF- ∝ 水平較注射agomircontrol的HPH小鼠降低，表明過表達miR-381-3p可降低HPH小鼠肺泡灌洗液中的炎性因子水平，減輕肺動脈周圍炎癥環(huán)境對于改善肺血管重塑可能具有重要意義。

MuRF1可表達于平滑肌細胞、心肌細胞和骨骼肌細胞中，在血管平滑肌舒縮功能障礙、心肌或骨骼肌萎縮、高血壓病等多種肌細胞相關(guān)性疾病中發(fā)揮重要作用[5.20-22]。筆者前期研究證實，與對照組相比，HPH小鼠肺組織中MuRF1表達增加，而敲除MuRF1可抑制HPH進展[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，HPH組和HPH+agomircontrol組較NC組小鼠MuRF1mRNA表達增高，與前期研究結(jié)果一致。本研究預(yù)測了miR-381-3p的下游靶基因，MuRF1是潛在的作用靶點，肌細胞中的細胞骨架通路（Cytoskeletoninmusclecells）居靶基因顯著富集的首位。既往文獻報道了MuRF1作為泛素-蛋白酶體系統(tǒng)中一種特異的泛素連接酶（E3）介導(dǎo)細胞骨架相關(guān)蛋白降解[21-22]，推測MuRF1可能是此通路調(diào)控的重要上游分子靶點。雙螢光素酶報告實驗進一步驗證了miR-381-3p與MuRF1 3^′ -UTR之間的結(jié)合關(guān)系，提示miR-381-3p能改善HPH誘發(fā)的心肺損傷，其機制可能與靶向抑制MuRF1有關(guān)， miR-381-3p/MuRF1 通路可能是HPH發(fā)生發(fā)展的重要機制。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)miR-381-3pagomir可降低肺動脈壓間接指標(biāo)RVSP水平，并改善HPH小鼠右心室重塑和肺血管重塑，其機制可能與miR-381-

3p靶向抑制MuRF1有關(guān)。 miR-381-3p 類似物或激動劑可能是改善HPH的重要治療藥物，本研究為以miR-381-3p和MuRF1為代表的新靶點的藥物研發(fā)提供了實驗證據(jù)。

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（2025-03-19收稿2025-04-07修回）

（本文編輯李志蕓）