生防菌株YM3-3的鑒定和抑菌能力測(cè)定及發(fā)酵條件優(yōu)化

中圖分類號(hào)：Q939.9；S513 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2097-2172（2025）04-0365-08

doi：10.3969/j.issn.2097-2172.2025.04.014

Identification， Antagonistic AbilityEvaluation， and Fermentation Optimization ofBiocontrol Strain YM3-3

WANG Chunming1， GUO Cheng1， ZHOU Tianwang1， HONG Liu’， XU Shenghai ， XU Yongfeng （1.Institute of Plant Protection，Gansu Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou Gansu 73oo7o， China； 2.Wuwei Agricultural Technology Extension Centre，Wuwei Gansu 733Ooo， China； 3. Zhangye Plant Protection Station， Zhangye Gansu 734Ooo， China）

Abstract：To providebiocontrol strainresources for high-eficiencyandsafe microbial pesticides，theendophytic Bacilus subtilisY3-3，strainithidaliocontrolotentialsolatefromaizlaveasdentifidndtermentationondisee optimized.Thisstudyprovidedtechnicalparametersandatheoreticalbasisoncontrolmaizediseasesasbiocontrolagents.The inhibitionfstoicEoe melonis，V andFusariumoxysporumf.sp.vesinfectum.）wasmeasuredbytheduralculture methodTheresultsshowed that ithadgood antagonistic effect，and the inhibition rate against 1O pathogenic fungi was （53.19±3.78） % to （81.94±1.54） % ，showing good biocontrol potential.Acdigtooicalndeealys，sdntfdilustiId optimizethefermentationconditions，theoptimizationexperimentofcultureconditions wascariedout.Theresultsshowedthatthe optimalulturete，mpeature，atioalspeed，p，ndlqdvomeer3d27C，5Orin7nd9Oespectielye optimal combination of fermentation medium was15 g/L mannitol， 2 . 5 g / L peptone，7.5 g/L potassium nitrate，and 5 . 0 g / L calcium carbonate.

KeyWords：Bacilussubtilis；YM3-3；Antagonisticability；Fermentationcondition； Orthogonal test； Culturecondition； ）ptimization

自前，我國(guó)農(nóng)作物病蟲害防治主要以化學(xué)農(nóng)藥為主[1-2]。但是，長(zhǎng)期大量的應(yīng)用化學(xué)農(nóng)藥，對(duì)土壤、大氣和水體等環(huán)境造成嚴(yán)重污染，對(duì)人、畜健康造成危害[2]。同時(shí)，大量使用化學(xué)農(nóng)藥還導(dǎo)致病蟲抗藥性上升，化學(xué)農(nóng)藥防治效果逐步降低，防治難度不斷增加。利用微生物或者微生物制劑防治病蟲害和清除農(nóng)藥殘留是現(xiàn)今微生物學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)[3-4]。芽孢桿菌（Bacillus spp.）作為目前生物防治中研究較多的一類細(xì)菌［5]，由于其生長(zhǎng)快、營(yíng)養(yǎng)簡(jiǎn)單、極易分離培養(yǎng)、能產(chǎn)生抗逆性強(qiáng)的芽孢這一典型特征，更有利于作為生防菌劑進(jìn)行劑型加工、生產(chǎn)和在環(huán)境中存活與定殖[6-10]。有研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌生防菌劑在穩(wěn)定性和與化學(xué)農(nóng)藥相容性等方面明顯優(yōu)于其他生防菌「]。尤其枯草芽孢桿菌在防病、促生、提高產(chǎn)量等方面展現(xiàn)了優(yōu)越的應(yīng)用前景，是理想的生防菌篩選對(duì)象，已引起了植保工作者的極大關(guān)注[2]。楊興有等[13]發(fā)現(xiàn)，1株枯草芽孢桿菌（Bacillus.subtilis）菌株TBWR1，對(duì)煙草青枯病的防效可達(dá) 7 1 . 1 0 % ，與對(duì)照相比，TBWR1能顯著提高煙草株高、葉長(zhǎng)、根長(zhǎng)和莖粗。胡金雪等[14]研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌對(duì)馬鈴薯瘡痂病的防效可達(dá) 4 9 . 3 5 % ，與空白對(duì)照相比可增產(chǎn) 1 4 . 5 1 % 。對(duì)于生防菌的開發(fā)和應(yīng)用，不管是利用菌株的代謝產(chǎn)物還是菌株本身，都必須對(duì)其發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化，這將為其進(jìn)一步應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)「15]。有效活菌數(shù)是枯草芽孢桿菌在工業(yè)發(fā)酵中的重要指標(biāo)[16-17]，通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā)酵條件能有效提高活菌數(shù)［17-18]。因此，本研究從玉米葉片內(nèi)分離得到1株對(duì)多種病原真菌具有良好抑制效果的拮抗菌株YM3-3，通過(guò)形態(tài)學(xué)及16SrDNA和gyrB序列分析明確其分類地位，以有效活菌數(shù)為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，以期為開發(fā)安全、環(huán)保的微生物農(nóng)藥提供菌種資源，為玉米病害的防治和生防菌劑的開發(fā)和利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試培養(yǎng)基NA培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基的具體成分參考方中達(dá)[9的方法并制作。

1.1.2發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基試驗(yàn)共涉及以下8種基礎(chǔ)培養(yǎng)基，具體成分見表1。

1.1.3供試菌株供試菌株分別為YM3-3（分離自玉米葉片）、玉米穗腐病病原菌（擬輪枝鐮孢菌Fusariumverticillioides）、玉米大斑病菌（Exserohilumturcicum）、西瓜蔓枯病菌（Mycosphaerellamelonis）、蘋果腐爛病菌（Valsamali）、蘋果輪紋病菌（Physalosporapiricola）、茄子菌核病菌（Sclero-tiniasclerotiorum）、馬鈴薯立枯絲核病菌（Rhizocto-niasolani）、番瓜綿腐病菌（Pythiunaphaniderma-tum）、辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）和棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.vesinfectum），以上供試菌株均由甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1菌株YM3-3鑒定參考東秀珠等［20]的方法，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，結(jié)合16SrDNA和gyrB序列分析對(duì)其進(jìn)行鑒定，具體參考王春明等[21的方法。1.2.2生防菌株YM3-3抑菌能力測(cè)定參考蔣晶晶等［8]的方法，采用平板對(duì)峙法進(jìn)行抑菌能力測(cè)定。

1.2.3菌株YM3-3發(fā)酵條件優(yōu)化種子液制備參考蔣晶晶等[8]和臧超群等［22]的方法進(jìn)行，將保存的菌株YM3-3接入NA平板活化， 下培養(yǎng)24h。后將活化好的菌株接入NA培養(yǎng)液中，150 ！ 條件下振蕩培養(yǎng) 4 8 h ，備用。發(fā)酵液濃度計(jì)算采用稀釋涂布平板法進(jìn)行[8]，每個(gè)稀釋濃度均重復(fù)3次，于 恒溫倒置培養(yǎng) 3 d ，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)（即活菌數(shù)）。不同培養(yǎng)基對(duì)YM3-3菌株生長(zhǎng)量影響分別向裝有 的A、B、C、D、E、F、G、H培養(yǎng)液的三角瓶中加入 1 m L 種子液，每處理重復(fù)3次。 、 1 5 0 r / m i n 條件下振蕩培養(yǎng)3 d ，測(cè)定各處理活菌數(shù)。不同培養(yǎng)條件對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響參考蔣晶晶等[8]的方法略做修改，分別進(jìn)行不同培養(yǎng)時(shí)間（1、2、3、4、5、6 、 7 、 8 、 9 、 1 0 d） 、溫度 （ 2 0 、 2 5 、 2 7 、 3 0 、 3 5 、 ）、轉(zhuǎn)速（90、120、150、180、 2 1 0 r / m i n ）、起始 Δ p H （3、4、5、6、7、8、9、10）、裝液量（30、50、70、90、110、 1 3 0 m L 、碳源（蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖、可溶性淀粉、甘油、甘露醇）、氮源（尿素、硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫銨、氯化銨）和無(wú)機(jī)鹽（碳酸鈣、硫酸鈣、氯化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鎂）對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響篩選試驗(yàn)。培養(yǎng)時(shí)間、溫度、轉(zhuǎn)速、起始 、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等各試驗(yàn)中的每處理裝液量均為 1 0 0 m L ，接種量均為 1 m L 種子液；裝液量試驗(yàn)則按裝液量 1 % 接入種子液；以上各試驗(yàn)的每處理重復(fù)3次。在 （溫度試驗(yàn)除外）1 5 0 r / m i n （轉(zhuǎn)速試驗(yàn)除外）條件下振蕩培養(yǎng)3d（培養(yǎng)時(shí)間除外），測(cè)定各處理的活菌數(shù)。

1.2.4發(fā)酵培養(yǎng)基最佳組合正交試驗(yàn)依據(jù)上述單因素試驗(yàn)結(jié)果，在單因素篩選出的最佳發(fā)酵條件下，選取了碳源（甘露醇）、有機(jī)氮（蛋白陳）無(wú)機(jī)氮（硝酸鉀）和無(wú)機(jī)鹽（碳酸鈣）4個(gè)因素的3個(gè)水平（表2），設(shè)計(jì) 正交試驗(yàn)，對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化。

① 表中A因子的 0 . 5 0 % 、 1 . 0 0 % 和 1 . 5 0 % 分別指每100m L 培養(yǎng)液中含甘露醇的量，單位為 g ；B、C、D因子的0 . 2 5 % 、 0 . 5 0 % 、 0 . 7 5 % 分別指每 培養(yǎng)液中含蛋白胺、硝酸鉀、碳酸鈣的量，單位均為

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用 E x c e l2 0 1 0 和SPSS20.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1菌株YM3-3鑒定結(jié)果

菌株YM3-3菌落在NA培養(yǎng)基上顯示乳白色、表面有褶皺，邊緣不規(guī)則（圖1A），菌體桿狀、中生芽孢， （圖1B）。用 軟件構(gòu)建基于16SrDNA和 g y rB 的系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2），YM3-3與枯草芽孢桿菌（QH-668、QH-664、NN11、DY3）聚在一個(gè)分支，故將其鑒定為枯草芽孢桿菌。

100BacillussubtilisQH-668 77]Bacillus subtilis QH-664 65Bacillus subtilis NH11 100 Bacillus subtilis DY3 100 BacillusvelezensisLBUM288 -BacillusvelezensisBCRC17467 100 100 79-BacillusamyloliquefaciensWZS01 93-Bacillusamyloliquefaciens T23 60fBacilluspumilusNMTD17 BacilluspumilusBP-hd-1 100Bacilluspumilus ATCC27142 91Bacillus pumilus 17 91Bacillus pumilusBKS1-108 -PriestiamegateriumNRCB001 -BacilluscereusXWH120710-1 100 BacilluscereusYB50 0.020

2.2 YM3-3抑菌能力測(cè)定結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果可知，菌株YM3-3對(duì)玉米大斑病菌、玉米穗腐病病原菌（擬輪枝鐮孢菌）等10種植物病原真菌均有一定的抑制效果（表3、圖3），抑制率為 （ 5 3 . 1 9 ± 3 . 7 8 ） % ～ （ 8 1 . 9 4 ± 1 . 5 4 ） % ，抑菌帶寬度為 （ 4 . 0 ± 0 . 5 ）～（ 8 . 8 ± 0 . 7 ） m m 。尤其對(duì)玉米大斑病菌的抑制效果最好，平均抑制率達(dá) 8 1 . 9 4 % ：其次對(duì)玉米穗腐病病原菌 （擬輪枝鐮孢菌）、西瓜蔓枯病菌、蘋果輪紋病菌、蘋果腐爛病菌和茄子菌核病菌也具有較強(qiáng)的抑制效果，平均抑制率均在6 0 . 0 0 % 之上，平均抑菌帶寬度也均在 6 . 0 m m 之上。綜合抑制率和抑菌帶寬度可知，菌株YM3-3對(duì)玉米大斑病菌、玉米穗腐病病原菌（擬輪枝鐮孢菌）茄子菌核病菌和西瓜蔓枯病菌的抑制效果較好。

2.3發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基篩選結(jié)果

如圖4所示，菌株YM3-3在8種培養(yǎng)液中均可生長(zhǎng)，在相同培養(yǎng)條件下培養(yǎng)液A中活菌數(shù)最多，其常用對(duì)數(shù)值為8.94，顯著高于其他各處理0 （ Plt;0 . 0 5 ） ；其次是培養(yǎng)液C、H，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值分別為8.22、7.94；G培養(yǎng)液中活菌數(shù)最少，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值僅為7.03。因此，培養(yǎng)液A可作為后續(xù)發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

2.4不同培養(yǎng)條件對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響2.4.1培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響菌株YM3-3在培養(yǎng) 內(nèi)均能生長(zhǎng)（圖5A），最

[-1為處理，-2為對(duì)照；A為玉米穗腐病病原菌（擬輪枝鐮孢菌），B為玉米大斑病菌，C為西瓜蔓枯病菌，D為蘋果輪紋病，E為斗果腐爛病菌，F(xiàn)為茄子菌核病菌，G為馬鈴薯立枯絲核病菌，H為番瓜綿腐病，I為辣椒疫霉病菌，J為棉花枯萎病菌]。

2.4.2培養(yǎng)溫度對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響菌株YM3-3在供試的不同溫度下均能正常生長(zhǎng)（圖5B），最佳培養(yǎng)溫度為 ，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值為8.94，其與 3 0 % 條件下活菌數(shù)（常用對(duì)數(shù)值為8.86）差異不顯著（ Pgt;0 . 0 5 ），但與其他各處理差異顯著（ Plt;0 . 0 5 ）。

2.4.3轉(zhuǎn)速對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響菌株YM3-3在供試的不同轉(zhuǎn)速下均能生長(zhǎng)（圖5C），最佳轉(zhuǎn)速為 1 5 0 r / m i n ，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值達(dá)為8.57，與 1 2 0 r / m i n 條件下活菌數(shù)（常用對(duì)數(shù)值為8.38）差異不顯著（ P gt; 0 . 0 5 ），但與90、180、 條件下各處理均差異顯著（ Plt;0 . 0 5 ）。

2.4.4起始 Δ p H 對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響 Δ p H 為3＼～10時(shí)，菌株YM3-3均能生長(zhǎng)（圖5D），最佳 為7，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值達(dá)8.94； Δ p H 為3時(shí)，活菌數(shù)最低（常用對(duì)數(shù)值為7.47），與其他處理差異顯著（ Plt;0 . 0 5 ；但 為6、7、8時(shí)，活菌數(shù)差異不顯著（ Pgt;0 . 0 5 ）。進(jìn)一步分析可知， 為8、9、10時(shí)活菌數(shù)顯著高于 為3、4、5時(shí)活菌數(shù)（ Plt;0 . 0 5 ，說(shuō)明該菌株能適應(yīng)偏堿環(huán)境。

2.4.5裝液量對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響裝液量的多少在發(fā)酵過(guò)程中起著很大的作用，此次試驗(yàn)中裝液量為30、50、70、90、110、 1 3 0 m L 時(shí)，菌株均能很好的生長(zhǎng)（圖5E）；裝液量為 9 0 m L 時(shí)活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值最高，為9.62，顯著高于其他各處理（ Plt;0 . 0 5 ）。

2.4.6碳源對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響菌株YM3-3在供試的7種碳源中均能生長(zhǎng)（圖5F），最佳碳源為甘露醇，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值為8.60；其次為甘油，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值為8.53；可溶性淀粉居第3，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值為8.52，三者活菌數(shù)差異均不顯著（ Pgt;0 . 0 5 ）。

2.4.7氮源對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響菌株YM3-3在供試的6種氮源中均能生長(zhǎng)（圖5G），最佳氮源為硝酸鉀，活菌數(shù)常用對(duì)數(shù)值為8.57，與蛋白肺作為氮源時(shí)活菌數(shù)差異不顯著 Pgt;0 . 0 5 ）。硝酸銨作為氮源時(shí)，活菌數(shù)最少（常用對(duì)數(shù)值為6.89），與其他處理均差異顯著（ Plt;0 . 0 5 ）。

2.4.8無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌株YM3-3生長(zhǎng)量的影響無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌株生長(zhǎng)具有一定的影響，當(dāng)培養(yǎng)液中含有一定濃度時(shí)，有利于其繁殖，本次試驗(yàn)中加入無(wú)機(jī)鹽碳酸鈣 0 . 5 0 % 時(shí)，菌液中的活菌數(shù)最多（常用對(duì)數(shù)值為8.82），與其他各處理差異顯著（ Plt;0 . 0 5 ）（圖5H）。

綜合考慮各試驗(yàn)條件下活菌數(shù)及成本等因素，菌株YM3-3的最佳培養(yǎng)時(shí)間為 3 d ，最佳培養(yǎng)溫度為 ，最佳轉(zhuǎn)速為 1 5 0 r / m i n ，最佳 為7，最佳裝液量為 9 0 m L ；最佳碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽分別為甘露醇、硝酸鉀/蛋白脈、碳酸鈣。由于有機(jī)氮和無(wú)機(jī)氮在菌株發(fā)酵過(guò)程中對(duì)菌株的生長(zhǎng)和代謝作用不同，故后續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)基成分優(yōu)化中對(duì)有機(jī)氮（蛋白肺）和無(wú)機(jī)氮（硝酸鉀）進(jìn)行一定配比優(yōu)化。

2.5培養(yǎng)基成分最佳組合正交試驗(yàn)結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果（表4）可知，9個(gè)組合中第7個(gè)組合中活菌數(shù)量最高，菌落數(shù)量常用對(duì)數(shù)值達(dá)10.91以上。利用SPSS軟件對(duì)正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基最佳組合中極差R依次排列為 ，說(shuō)明各因素在該菌株發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生活菌數(shù)量影響大小順序依次為蛋白陳、甘露醇、碳酸鈣、硝酸鉀。從表5方差分析可知，甘露醇、蛋白陳及碳酸鈣對(duì)該菌株發(fā)酵過(guò)程中活菌數(shù)量的影響極顯著（ Plt;0 . 0 1 ），硝酸鉀對(duì)其影響較為顯著0 ？ Plt;0 . 0 5 ？ 。且根據(jù)表4中，A列 值最大，B列 值最大，C列 值最大，D列 值最大，故得出最佳發(fā)酵組合為 ，與正交試驗(yàn)中組合7對(duì)應(yīng)。綜合分析可看出，發(fā)酵培養(yǎng)基的最優(yōu)組合為 1 . 5 0 % 甘露醇、 0 . 2 5 % 蛋白陳、 0 . 7 5 % 硝酸鉀和0 . 5 0 % 碳酸鈣，即 1 5 . 0 g / L 甘露醇、 蛋白肺、 硝酸鉀、 5 . 0 g / L 碳酸鈣。

3討論與結(jié)論

生防細(xì)菌抗菌譜的寬窄直接決定著生防菌的應(yīng)用前景，許多分離得到的生防菌由于其抗菌譜太窄在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中受到很大的限制，因此篩選廣譜性的生防菌已成為植物病害生物防治的關(guān)鍵所在[23]。本研究篩選出的菌株YM3-3抑菌譜較廣，對(duì)供試的涉及9個(gè)屬10個(gè)種的植物病原真菌均有不同程度的抑制作用，是一株具有良好生防潛能的內(nèi)生細(xì)菌，根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察及16SrDNA和gyrB序列分析將其鑒定為枯草芽孢桿菌（Bacilussubtilis）。

對(duì)于不同的微生物，其生長(zhǎng)代謝都有自己所適宜的條件，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類及其濃度，培養(yǎng)時(shí)間、溫度、通氣量等因素均影響微生物的生長(zhǎng)代謝[15]。這些因素不僅相互促進(jìn)，也相互制約。如宋卡魏等[24]研究表明，枯草芽孢桿菌（菌株B68）發(fā)酵最佳碳源為葡萄糖，添加一定量的氯化鈉和碳酸鈣能促進(jìn)芽孢的產(chǎn)生；蔣晶晶等[8]研究表明，貝萊斯芽孢桿菌（Bacillusvelezenis）（菌株X1-6-1）發(fā)酵最佳碳源為可溶性淀粉，最佳氮源為牛肉膏，最佳無(wú)機(jī)鹽為氯化鎂；劉曉霞等[25]研究表明，枯草芽孢桿菌（菌株ATCC6051）發(fā)酵最佳碳源為蛋白脈 2 . 5 % ），最佳碳源為檸檬酸 2 . 0 % ），最佳無(wú)機(jī)鹽為硫酸鉀 （ 2 . 4 % ；郭世杰等[8]研究表明，枯草芽孢桿菌（菌株EBS03）發(fā)酵最佳碳源為甘露醇0 1 . 8 % ，最佳氮源為蛋白陳（ 2 . 1 % ），最佳無(wú)機(jī)鹽為硫酸鎂！ （ 1 . 9 % ） 。由此可知，不僅不同種類的生防細(xì)菌發(fā)酵最適培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件等差異較大，而且同種生防細(xì)菌的發(fā)酵最適培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件也存在差異［8]。因此，本研究對(duì)枯草芽孢桿菌YM3-3菌株進(jìn)行了發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件篩選和培養(yǎng)基組分優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果表明，最佳培養(yǎng)條件為培養(yǎng)時(shí)間 3 d 、培養(yǎng)溫度為 、轉(zhuǎn)速為1 5 0 r / m i n 、 為7、裝液量為 9 0 m L ；發(fā)酵培養(yǎng)基的最優(yōu)組合為： 1 . 5 0 % 甘露醇、 0 . 2 5 % 蛋白陳、0 . 7 5 % 硝酸鉀和 0 . 5 0 % 碳酸鈣，即 甘露醇、2 . 5 g / L 蛋白肺、 7 . 5 g / L 硝酸鉀、 5 . 0 g / L 碳酸鈣，這與郭世杰等[18]對(duì)最佳碳源和最佳氮源的研究研究結(jié)果一致，但與其含量和最佳培養(yǎng)條件有差異。

綜上所述，菌株YM3-3具有廣譜的抗菌活性，是1株具有優(yōu)良生防潛能的枯草芽孢桿菌。通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵條件，可以顯著提高其活菌數(shù)和生防效果，為開發(fā)安全、高效的微生物農(nóng)藥提供了有力支持。未來(lái)的研究將進(jìn)一步探討其生防機(jī)制，為其在實(shí)際生產(chǎn)中的廣泛應(yīng)用提供更多的科學(xué)依據(jù)。生防細(xì)菌主要通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)、產(chǎn)生抗菌物質(zhì)、促生、誘導(dǎo)等方式直接或間接對(duì)作物起到防病或促生作用［26-31]。在本次研究中并未對(duì)其產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)種類及發(fā)酵過(guò)程中活菌數(shù)與抑菌物質(zhì)積累量、抑菌活性的相關(guān)性等進(jìn)行研究，因此在后續(xù)試驗(yàn)中還需對(duì)其進(jìn)一步進(jìn)行研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃忠誠(chéng)．防治水稻立枯病的復(fù)合微生物制劑及其生產(chǎn)方法和用途與流程[P].中國(guó)：CN201710310252.8，2017.

[2] 陳志誼.芽孢桿菌類生物殺菌劑的研發(fā)與應(yīng)用[J].中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2015，31（5）：723-732.

[3]楊森．一株用于生物防治的Burkholderia菌的基因以造和生長(zhǎng)茶件研究［D」．四女：四北大字，2006.

[4]楊森，孫高利，董兆麟，等．一株Burkholderia細(xì)菌的抗植物病源真菌及生物學(xué)特性的研究[J]．西北大學(xué)學(xué)報(bào)（自然版），2008，38（5）：779-782.

[5]陳麗麗，何玲玲，趙雅，等．地衣芽孢桿菌W10對(duì)煙草的促生作用及機(jī)制[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（5）：152-154.

[6]孫正祥，紀(jì)春艷，李云鋒，等．香蕉枯萎病拮抗細(xì)菌的分離篩選與鑒定[J]．中國(guó)生物防治，2008，24（2）：143-147.

[7]OOSTENDORP M， IKORA R A. Seed treatment with an-tagonistic rhizobacteria for the suppression of Heteroderaschachtii early root infec-tion of sugur beet[J]. RevueNematol，1989，12（1）：77-83.

[8]蔣晶晶，王春明，陳明，等．內(nèi)生拮抗細(xì)菌X1-6-1的鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化及抑菌作用研究[J]．甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，55（3）：113-120.

[9]KIM S Y， LEE S Y， WEON H Y， et al. Complete genomesequence of Bacillus velezensis M75，a biocontrol agenta-gainst fungal plant pathogens， isolated from cotton waste[J].Journal of Biotechnology，2017，241： 112-115.

[10]馬龍，馬興，賈蕊鴻，等．一株馬鈴薯黑痣病拮抗菌的篩選鑒定及其生長(zhǎng)條件研究[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，52（4）：90-95.

[11]OOSTENDORP M， SIKORA R A. Seed treatment withantagonisticrhizobacteriaforthesuppressionofHeterodera schachtii early root infection of sugur beet[J].Revue Nematol，1989，12（1）：77-83.

[12]楊佐忠，枯草桿菌拮抗體在植物病害生物防治中的應(yīng)用[J].四川林業(yè)科技，2001（9）：41-43.

[13]楊興有，丁安明，余祥文，等．煙草青枯病拮抗菌TBWR1的篩選鑒定及防病促生能力[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，51（10）：58-65.

[14]胡金雪，樊建英，相叢超，等．枯草芽孢桿菌對(duì)馬鈴薯的促生防病效應(yīng)[J]．中國(guó)瓜果，2023，36（10）：121-128.

[15]臧超群.葡萄霜霉病生防細(xì)菌SY286及控病機(jī)理研究[D]．沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[16]王晴，朱成誠(chéng)，王欣悅，等．具有生防潛力的枯草芽孢桿菌KC-1培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]．黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，33（4）：67-76.

[17]韓云哲，黃哲禹，李鐘民，等．光合細(xì)菌分離鑒定及其培喬基配方研究LJ」．延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32（4）： 265-268.

[18]郭世杰，白紅燕，張東風(fēng)，等．防治棉花黃萎病的枯草芽孢桿菌EBSO3發(fā)酵條件優(yōu)化[J]．中國(guó)棉花，2024，51（4）：35-40.

[19]方中達(dá)．植物病理研究方法[M].北京：科學(xué)出版社，2001.

[20]東秀珠，蔡妙英．常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M]．北京：科學(xué)出版社，2001.

[21]王春明，郭成，周天旺，等．一種新發(fā)生的玉米細(xì)菌性葉腐病病原菌分離鑒定[J].植物保護(hù)，2023，49（4）： 256-262.

[22]臧超群，安福濤，劉長(zhǎng)遠(yuǎn)，等．生防細(xì)菌SY286發(fā)酵條件優(yōu)化[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2015，31（25）：157-163.

[23]喬宏萍．小麥內(nèi)生細(xì)菌對(duì)小麥全蝕病的生物防治研究[D]．楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2006.

[24]宋卡魏，王星云，張榮意．培養(yǎng)條件對(duì)枯草芽孢桿菌B68芽孢產(chǎn)量的影響[J]．中國(guó)生物防治，2007，23（3）： 255-259.

[25]劉曉霞，伏漪，王宗成，等．立枯絲核菌拮抗菌枯草芽孢桿菌ATCC6051發(fā)酵條件優(yōu)化及抑菌物質(zhì)分析[J].核農(nóng)學(xué)報(bào)，2024，38（7）：1326-1334.

[26]石晶盈，陳維信，劉愛媛．植物內(nèi)生菌及其防治植物病害的研究進(jìn)展[J]．生態(tài)學(xué)報(bào)，2006，26（7）：2395-2401.

[27]KEEL C，DEFAGO G. Interactions between beneficialsoil bacteria and root pathogens：Mechanisms and Eco-logical impact[M].London， United Kingdom： BlackwellScientific Publishiers，1997.

[28]陳秀蓉，南志標(biāo)．細(xì)菌多樣性及其在農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中的作用[J].草業(yè)科學(xué)，2002，19（9）：34-38.

[29]李娟，湯瑩，趙旭．酸堿度和含水量對(duì)枯草芽孢桿菌生物有機(jī)肥活性和效應(yīng)研究[J]．寒旱農(nóng)業(yè)科學(xué)，2024，3（10）：955-959.

[30]柳利龍，張愛琴，張環(huán)，等．當(dāng)歸根際土壤中木霉菌的分離鑒定及拮抗作用[J]．寒旱農(nóng)業(yè)科學(xué)，2024，3（8）：774-778.

[31］王馨芳，張婉霞，史美玲，等．貝萊斯芽孢桿菌BQ對(duì)黨參根腐病病原菌抑制效應(yīng)初探[J].寒旱農(nóng)業(yè)科學(xué)，2024，3（2）：167-173；197.