氟苯尼考在黃羽肉雞體內(nèi)的殘留消除規(guī)律

關(guān)鍵詞氟苯尼考；黃羽肉雞；殘留消除；休藥其中圖分類號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 0517-6611（2025）08-0194-06doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2025.08.040

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

AbstractObetie]Tostudyesieelnationreglarityoflofencolinllo-feathredlenddeteetdraalpod.[Method]36 healthychickens（bodyweight ）were selected and randomly divided into 6 groups. The first group was used as the blank control group，and the other 5 groups were given .The drug was given with concentrated water twice a day for5 days. The muscle，liver，kidney and sebum of yellow-feathered broiler were collected ，1d， ，5 dand after drug withdrawal，respectively.The residueaountofofecolandfofecoleinisueplesasteindbghpefoanceliqudcromatogahadeas spectrometry，ndteithdrawalperiodascaluatedbyW.4softare.esultrfencondflofenicolmineremiedinliver cle，kidneyand sebum of yelow-feathered broilers immediatelyafter withdrawal，andtheresidue reachedits peak at ，and the residual amountwaslargestinkidney.Thewithdrawal periodofflorfenicolinmuscle liver kidneyandsebumof yellow-featheredbroilerswas 3.46 d， 4.16 d and ，respectively.[Conclusion]According to the Guidelines for the Elimination Test of Veterinary Drug Residues of the MinistryofAgricultureandRuralAfairs，thwithdrawalperiodof thetesteddrugflrfenicolinchickenswasrecommendedtobe5days. KeywordsFlorfenicol； Yellow-feathered broiler；Residue depletion；Drug withdrawal period

氟苯尼考，又名氟甲礬霉素，是動(dòng)物專用酰胺醇類抗生素[1]。該藥于20世紀(jì)90年代初上市，于1999 年在我國(guó)批準(zhǔn)為國(guó)家二類新獸藥2；因其具有抗菌譜廣、安全高效、不易產(chǎn)生耐藥等特點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用于全球畜禽（豬、牛、雞）及水產(chǎn)（甲殼類動(dòng)物、淡水魚、海水魚）等養(yǎng)殖動(dòng)物的細(xì)菌性疾病治療[3-6]，因其治療效果好，而經(jīng)常被當(dāng)作飼料添加劑直接喂養(yǎng)動(dòng)物。養(yǎng)殖動(dòng)物服用氟苯尼考后，大部分氟苯尼考藥物會(huì)被吸收，呈全身性分布，且產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物如氟苯尼考胺、氟苯尼考醇等。毒理學(xué)研究證實(shí)氟苯尼考及其代謝物可誘導(dǎo)肝毒性、生殖毒性、胚胎毒性、血液毒性和免疫毒性等[7-9]，氟苯尼考及其代謝物的殘留給人類的健康產(chǎn)生潛在危害，也會(huì)影響?zhàn)B殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此，對(duì)于氟苯尼考在動(dòng)物源性食品中殘留量的控制及合理制定休藥期顯得尤為重要。

我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部最新發(fā)布的GB31650—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》[10]明確規(guī)定，氟苯尼考的最高殘留限量值是以氟苯尼考和氟苯尼考胺之和計(jì)算。該研究以農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸藥殘留消除試驗(yàn)指導(dǎo)原則》[\"為參考，選擇 2 0 % 的氟苯尼考粉，通過(guò)飲水添加的方式對(duì)黃羽肉雞進(jìn)行持續(xù)給藥，建立氟苯尼考和氟苯尼考胺的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）的分析方法，并對(duì)黃羽肉雞組織中的氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算相應(yīng)休藥期，為黃羽肉雞的科學(xué)給藥提供依據(jù)

1材料與方法

1.1試驗(yàn)藥物和試劑氟苯尼考粉，含量為 2 0 . 0 % ，生產(chǎn)批號(hào)DXU211210，河北遠(yuǎn)征禾木藥業(yè)有限公司；氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品，含量為 9 9 . 6 % ，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)品，含量為 9 9 . 7 % ，天津阿爾塔科技有限公司；氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為 ，天津阿爾塔科技有限公司；甲醇、乙晴，色譜級(jí)，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；正已烷、甲酸、甲酸銨、乙酸乙酯，分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2主要儀器液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，LCMS-8045型，購(gòu)自島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司；臺(tái)式高速離心機(jī)，2-16R型，購(gòu)自湖南恒諾儀器設(shè)備有限公司；超聲波清洗機(jī)，PHS-3E型，購(gòu)自上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；水浴氮吹儀，YST-24型，購(gòu)自上海滬析實(shí)業(yè)有限公司。

1.3試驗(yàn)動(dòng)物36只70＼～80日齡健康黃羽肉雞（公母各半），購(gòu)自安徽健朗畜牧育種有限公司，體重約 ，每只雞分別以腳標(biāo)進(jìn)行標(biāo)識(shí)，在飼養(yǎng)觀察欄進(jìn)行7d的適應(yīng)期后進(jìn)行臨床檢查，確定試驗(yàn)雞健康程度再進(jìn)行殘留消除試驗(yàn)；試驗(yàn)雞在適應(yīng)期及試驗(yàn)期間按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食。飼料和飲水確保不添加任何藥物的全價(jià)飼料。

1.4給藥與樣品采集36只試驗(yàn)雞隨機(jī)分為6組，公母各半，依據(jù)《獸藥殘留消除試驗(yàn)指導(dǎo)原則》\"進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)。第一組作為空白對(duì)照組，其余5組以每天2次集中飲水給藥方式，連續(xù)給藥5d，劑量為 。停藥后 、5d、7d分別隨機(jī)從給藥組選擇6只（公母各半）及空白對(duì)照組1只，屠宰取雞的肌肉、肝臟、腎臟和皮脂組織。采集完的樣品做好標(biāo)記，于 保存。

1.5氟苯尼考和氟苯尼考胺含量檢測(cè)

1.5.1組織樣品預(yù)處理。組織樣品自然解凍后，取 （ 1 . 0 0 ± 0.01）g組織于 離心管中，加入氯霉素-D5內(nèi)標(biāo)工作液 ，再加入3m L氨化乙酸乙酯進(jìn)行提取，旋渦 水浴超聲 離心 ，取上清液于另一 離心管中，重復(fù)提取2次，合并3次提取液，氮吹近干用標(biāo)定的移液管，移取 （204 3 0 % 乙腈水溶液定容，旋渦 ，水浴超聲 。加入 飽和正己烷脫脂，渦動(dòng) 離心 ，棄去上層，下層提取液重復(fù)脫脂一次。取下層液過(guò) 濾膜，待LC-MS/MS分析，測(cè)定組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的濃度。

1.5.2 LC-MS/MS檢測(cè)條件。

1.5.2.1 色譜條件。色譜柱為 Shim-pack GIST HP（2.1 ， ）；流動(dòng)相A為 0 . 0 1 % 甲酸- 甲酸銨水溶液，B為 0 . 0 1 % 甲酸 甲酸銨甲醇；柱溫4 0% ；流速 ；進(jìn)樣量 ；梯度洗脫，程序參數(shù)見表1。

1.5.2.2質(zhì)譜條件。離子源為 （氟苯尼考胺）和 （氟苯尼考和氯霉素-D5）；掃描方式為MRM；干燥氣溫度 ；干燥氣流速 ；霧化器壓力 ；氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測(cè)參數(shù)見表2。

1.5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。采用雞空白組織制備氟苯尼考和氟苯尼考胺空白組織添加樣品，制得雞肝中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 4 ， 2 5 ， 2 0 0 ， 2 5 0 ， 4 0 0 ， 5 0 0 ， 1 0 0 0 ， ，肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 ，皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 ，雞腎中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為5、15、20、70、150、 的組織樣品，渦旋 ，按照“1.5.2”檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)。以測(cè)定后的氟苯尼考和氟苯尼考胺特征離子峰面積與氯霉素-D5內(nèi)標(biāo)特征離子峰面積之比 （ C ） 為縱坐標(biāo)，以所對(duì)應(yīng)的藥物濃度之比（S）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù) （ r ） 。

1.5.4定量限和檢出限。采用雞空白組織添加氟苯尼考和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)品，使得雞肝中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 ，肌肉、皮脂和雞腎中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 的空白組織添加樣品，渦旋 ，按照“1.5.1\"組織樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理，并按照“1.5.2”檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)，每種濃度的組織樣品分別進(jìn)樣、檢測(cè)5次，記錄色譜圖并進(jìn)行積分，分析信噪比，以信噪比 S / N ？ 3 時(shí)的氟苯尼考和氟苯尼考胺添加濃度為檢出限（LOD），滿足 S / N ？ 1 0 檢出的最低濃度為定量限（LQD），并分析定量限的精密度和準(zhǔn)確度。

1.5.5回收率和精密度的測(cè)定。采用雞空白組織添加氟苯尼考和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)品， 雞肝臟空白組織添加樣品， 雞肌肉空白組織添加樣品 雞皮脂空白組織添加樣品，制備5、 雞腎臟空白組織添加樣品，按照“1.5.1”組織樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理，并按照“1.5.2”檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)；同時(shí)以現(xiàn)配隨行的基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，計(jì)算上述每個(gè)組織4個(gè)濃度的添加回收率。同一組織4個(gè)濃度中每個(gè)濃度單日內(nèi)設(shè)5個(gè)平行，進(jìn)行連續(xù)3d重復(fù)試驗(yàn)，計(jì)算變異系數(shù)。

1.6統(tǒng)計(jì)與分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行分析，得出在最后一次給藥后的 時(shí)氟苯尼考和氟苯尼考胺在雞組織中的殘留量，試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ SD）表示。采用WT1.4軟件按 9 5 % 置信區(qū)間計(jì)算氟苯尼考?xì)埩魳?biāo)志物（以氟苯尼考和氟苯尼考胺總量計(jì)）在肝臟、肌肉、皮脂、腎臟中的休藥期。

2 結(jié)果與分析

2.1組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的特異性檢測(cè)分析組織樣品，對(duì)空白組織基質(zhì)、氟苯尼考和氟苯尼考胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液、添加氟苯尼考的空白組織、氟苯尼考胺和給藥后氟苯尼考和氟苯尼考胺肉雞組織樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，組織中內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定。特征離子色譜圖（圖1）中目標(biāo)化合物氟苯尼考和氟苯尼考胺的保留時(shí)間（4.46、 ）處沒(méi)有雜質(zhì)干擾，藥峰與雜質(zhì)峰分離良好，表明該方法有較好的特異性，氟苯尼考和氟苯尼考胺穩(wěn)定出峰時(shí)間分別在 。

2.2組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍從表3可以看出，肝臟中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 4 ～ 線性關(guān)系良好，肌肉、雞腎、皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù) ？ ，符合檢測(cè)要求。

2.3組織中氟苯尼考、氟苯尼考胺檢出限和定量限該方法中氟苯尼考和氟苯尼考胺在雞肝中的檢出限為 ，定量限為 ；在肌肉、腎臟和皮脂中的檢出限均為 ，定量限均為 。

2.4組織中氟苯尼考、氟苯尼考胺回收率和精密度從表4可以看出，組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加回收率均超過(guò) 9 0 % ，變異系數(shù)均不超過(guò) 10 % 。

2.5氟苯尼考和氟苯尼考胺在黃羽肉雞體內(nèi)不同組織中殘留消除規(guī)律氟苯尼考以 劑量每天2次飲水給藥，連續(xù)給藥5d，停藥后氟苯尼考和氟苯尼考胺在黃羽肉雞肌肉、肝臟、腎臟和皮脂中的殘留量見表5。結(jié)果顯示，給藥結(jié)束后 ，雞各組織中氟苯尼考的殘留量最高，隨后迅速降低。氟苯尼考?xì)埩袅孔罡叩慕M織是腎臟，平均殘留量為

，其次為皮脂，平均殘留量為 ，肝臟中的殘留量為 ，殘留量最小的是肌肉，平均殘留量為 。氟苯尼考胺殘留量最高的組織是腎臟，平均殘留量為 ，其次為肝臟，平均殘留量為 ，皮脂的平均殘留量為 ，殘留量最小的是肌肉，平均殘留量為 0

給藥結(jié)束1d后，肝臟、肌肉、腎臟和皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量迅速下降。至3d時(shí)，肝臟組織中的氟苯尼考和肌肉中的氟苯尼考胺均未檢出。給藥結(jié)束后5和7d，肝臟、肌肉、腎臟和皮脂組織中氟苯尼考總殘留量均低于各組織最大殘留限量（MRL）[]的規(guī)定值。

表3氟苯尼考和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、相關(guān)系數(shù)

2.6黃羽肉雞不同組織中氟苯尼考休藥期的計(jì)算參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》（GB31650—2019）[1]中規(guī)定的氟苯尼考限量（肝臟中為 ，肌肉中為 ，皮脂中為 ，腎臟中為 ，利用WT1.4軟件對(duì)測(cè)定的氟苯尼考?xì)埩袅繑?shù)據(jù)進(jìn)行處理，氟苯尼考在黃羽肉雞體各組織中的殘留消除擬合情況見圖2。結(jié)果顯示，氟苯尼考在黃羽肉雞肝臟、肌肉、皮脂、腎臟中的休藥期分別為3.46、4.75、4.68和 。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸藥殘留消除試驗(yàn)指導(dǎo)原則》[\"]中以最高的殘留限量擬定休藥期的規(guī)定，推薦受試藥物氟苯尼考在雞體內(nèi)的休藥期為 。

3討論

3.1組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留檢測(cè)方法該研究參考《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB31658.5—2021）[12]，在該方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了適量?jī)?yōu)化，在提取時(shí)減少了乙酸的處理以及MCX固相萃取柱凈化處理，試驗(yàn)結(jié)果表明，減少乙酸的處理對(duì)樣品提取回收率沒(méi)有影響。該方法中氟苯尼考和氟苯尼考胺在肝臟中的檢出限為 ，定量限為 ；在肌肉、皮脂、腎臟中的檢出限均為 ，定量限均為 。肝臟中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 線性關(guān)系良好，肌肉、皮脂和腎臟中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù) ，符合檢測(cè)要求。該試驗(yàn)采用具有高靈敏度的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)氟苯尼考和氟苯尼考胺進(jìn)行殘留檢測(cè)?？紤]到基質(zhì)效應(yīng)對(duì)準(zhǔn)確度的影響，采用內(nèi)標(biāo)法校正，提高方法的準(zhǔn)確度，保證樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)的可靠性。

3.2雞組織中氟苯尼考?xì)埩粝?guī)律氟苯尼考的殘留不僅有原型藥物，還有氟苯尼考胺、氟苯尼考醇和一些尚不清楚的代謝物形式，但在動(dòng)物組織中的主要代謝產(chǎn)物為氟苯尼考胺，故通常以氟苯尼考和氟苯尼考胺作為動(dòng)物體內(nèi)氟苯尼考的殘留標(biāo)示物[13-14]。氟苯尼考在動(dòng)物體內(nèi)分布呈全身性，但主要集中在肝臟、腎臟、肌肉、皮脂中。在該研究中經(jīng)過(guò)5d的自由飲水給藥后，黃羽肉雞體內(nèi)肝臟、肌肉、皮脂和腎臟中均有氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留檢出，這與前人的研究結(jié)果相同[15-16]，試驗(yàn)在給藥結(jié)束后6h，肝臟、肌肉、腎臟和皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺的殘留量均達(dá)到最高，這與米璐等[17-18]報(bào)道的氟苯尼考?xì)埩艨偭吭诮o藥后0d在各個(gè)組織中達(dá)到頂峰的結(jié)果相似。該研究中給藥結(jié)束后6h氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留總量的分布規(guī)律為腎臟 ： gt; 肝臟 gt; 皮脂 gt; 肌肉，且氟苯尼考胺在腎臟和肝臟中的殘留量均大于氟苯尼考，這與宋志超等[1]研究得出的肝臟和腎臟中氟苯尼考胺的殘留量明顯較高的結(jié)果一致，說(shuō)明經(jīng)口服后氟苯尼考進(jìn)入肝臟和腎臟組織中，更容易在酶的作用下代謝分解成氟苯尼考胺等代謝產(chǎn)物[19]。該研究中氟苯尼考在皮脂中的平均殘留量雖然不高，但代謝最慢，到給藥結(jié)束后5d氟苯尼考?xì)埩艨偭坎诺陀贛RL值，這可能與氟苯尼考親脂特性及肉雞的脂肪含量較高等有關(guān)[20]

3.3休藥期有研究發(fā)現(xiàn)，不同的氟苯尼考產(chǎn)品、不同劑量在不同品種上的休藥期也有所不同。在白羽雞中，以 劑量連續(xù)口服喂藥5d，得出氟苯尼考在白羽肉雞體內(nèi)休藥期為 [21]。在北京油雞中，以公雞 和母雞 劑量口服飼喂氟苯尼考粉，休藥期不低于

。在羅斯雄雞中，給藥劑量 ，連續(xù)口服給藥3d，氟苯尼考的休藥期為 。在三黃肉雞中，氟苯尼考磺酸鹽按 劑量肌肉注射給藥，每天一次，連續(xù) 氟苯尼考的休藥期建議為 。在京海黃雞中，口服給藥劑量分別為25、50和 ，在雞肌肉中氟苯尼考及其代謝產(chǎn)物氟苯尼考胺總殘留量的休藥期分別為 $1 、 3 、 7 ＼mathrm { ＼ d } ^ { [ 1 5 ] }$ 休藥期的差異可能是與不同的動(dòng)物品種、養(yǎng)殖環(huán)境、給藥方式、給藥劑量和動(dòng)物健康狀況等因素有關(guān)?！吨袊?guó)獸藥典》（2015年版）中規(guī)定的氟苯尼考在雞體內(nèi)休藥期為 該研究中，按 連續(xù)給藥5d，氟苯尼考的休藥期為 。該研究可為黃羽肉雞生產(chǎn)上出欄前應(yīng)急治療用藥提供參考和依據(jù)。

4結(jié)論

受試藥物氟苯尼考粉按照 劑量每天2次集中飲水給藥，連續(xù)給藥 。按照 采集組織樣品（肌肉、肝臟、腎臟、皮脂），利用建立的LC-MS/MS方法測(cè)定氟苯尼考和氟苯尼考胺在雞組織的殘留量，用WT1.4軟件對(duì)氟苯尼考在雞各組織中殘留量數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，按照 9 5 % 置信區(qū)間計(jì)算獲得黃羽肉雞肌肉、肝臟、腎臟、皮脂中的休藥期分別為4.75、3.46、4.16和 。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸藥殘留消除試驗(yàn)指導(dǎo)原則》中以最高的殘留限量擬定休藥期的規(guī)定，推薦此次受試藥物氟苯尼考在黃羽肉雞體內(nèi)的休藥期為 。

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