5種二氯苯酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的毒性效應(yīng)研究

關(guān)鍵詞斑馬魚(yú)；胚胎；急性毒性；慢性毒性中圖分類(lèi)號(hào)X174文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 0517-6611（2025）08-0076-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.08.016開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

AbstractIdetaaticesofchooC），-chol（-，co， DCP），2，6-dilropl（2-C），nd-dlo-C）obfsbste-statcosueoda to studytheacuteand chronic toxicityof dichlorophenolsonzebrafish embryos.Theresultsshowedthattheacutetoxicity（96 h ）of 3，4- DCP，2，5-DCP，3，5-DCP，2，6-DCP，and 2，3-DCP on zebrafish embryos was 0.31，0.36，0.47，0.53 and ，respectively.The highest no observedeffeccoctration（NOEC）of3，4CP，2-CP，3，-DCP，26-CP，and2-CPozebrafshebrysafer32dofee was15，24，24，38 and ，respectively.The above research showed that dichlorophenols showed certain toxic effects on zebrafish embryos and embryonic development.

KeywordsZebrafish；Embryo；Acute toxicity；Chronic toxicity

隨著科技的快速發(fā)展，氯酚類(lèi)化合物被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域[1-4]。在生產(chǎn)和使用的過(guò)程中，大量的氯酚類(lèi)化合物通過(guò)水體和大氣傳播進(jìn)入自然環(huán)境中，目前在許多地區(qū)的地下水中被頻繁檢出[5-7]。研究表明，氯酚是一類(lèi)有毒的化學(xué)污染物，具有生物降解性差、毒性強(qiáng)等特點(diǎn)[2.8-9]，同時(shí)具有“致畸、致癌、致突變\"等特性[10]，可通過(guò)生活飲用水和生物鏈的累積，在人體內(nèi)逐漸富集，從而威脅到人類(lèi)的生命健康[11]。目前氯酚類(lèi)化合物對(duì)水生生物胚胎毒性的研究報(bào)道比較缺乏，因此開(kāi)展氯酚類(lèi)化合物對(duì)水生生物的生態(tài)毒理學(xué)研究十分有必要。

斑馬魚(yú)（Daniorerio）是水生毒性試驗(yàn)最常見(jiàn)的模式生物，近年來(lái)斑馬魚(yú)胚胎憑借生物樣本大、易獲取、不受動(dòng)物倫理的限制、胚胎透明且發(fā)育快、基因背景明確且與人體基因組同源性高等特點(diǎn)[12]，逐漸代替了成魚(yú)急性毒性試驗(yàn)。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）在1996年也將斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育方法列人測(cè)定單一化學(xué)毒性的標(biāo)準(zhǔn)方法之一[13]。試驗(yàn)期間，通過(guò)對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的反應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行觀察來(lái)判斷受試物的毒性作用類(lèi)型（如遺傳毒性、神經(jīng)毒性、物理作用等）[14-18]筆者以5種二氯苯酚同分異構(gòu)體為受試物，研究其對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的急性毒性和慢性毒性效應(yīng)，旨在為水生環(huán)境毒理學(xué)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1受試生物野生型AB品系斑馬魚(yú)，購(gòu)自上海費(fèi)曦生物科技有限公司，親魚(yú)體長(zhǎng) ，飼養(yǎng)于斑馬魚(yú)循環(huán)系統(tǒng)中，每日光照 ，水溫 ，每天喂食2次實(shí)驗(yàn)室孵化的豐年蝦和紅蟲(chóng)。交配期間，按照雄雌比 2 ： 1 將種魚(yú)放置在產(chǎn)卵盒，中間使用隔板分開(kāi)，次日早上打開(kāi)隔板，用微光刺激斑馬魚(yú)觸發(fā)交配[9]；收集 內(nèi)的受精卵，使用電動(dòng)立體顯微鏡進(jìn)行鏡檢，篩選健康的受精胚胎，進(jìn)行胚胎急性和慢性毒性試驗(yàn)。

1.2主要試劑 和2，3-DCP5種二氯苯酚均由阿拉丁試劑（上海）有限公司提供，試劑純度大于 9 7 % ，其基本信息見(jiàn)表1。

1.3主要儀器與設(shè)備斑馬魚(yú)繁育盒（上海海圣生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；十萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒托利多，XS205DU）；多參數(shù)測(cè)定儀（梅特勒托利多，SevenExcellence）；水硬度計(jì)（HANNA，HI97735）；培養(yǎng)箱（Panasonic，MLR-325-PC）；電動(dòng)立體顯微鏡（萊卡，M205C）。

1.4急性毒性試驗(yàn)急性毒性試驗(yàn)參照OECDTG 設(shè)計(jì)，采用半靜態(tài)暴露方法，每 更換1次試驗(yàn)溶液，每次更換 3 / 4 試驗(yàn)溶液。試驗(yàn)周期為 。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)設(shè)置1個(gè)對(duì)照組和5個(gè)受試物濃度組 （ 0 . 1 ， 0 . 2 ， 0 . 4 ， 0 . 8 和 ）。試驗(yàn)容器為6孔板，每個(gè)孔添加20粒胚胎和 試驗(yàn)溶液，將6孔板置于 恒溫培養(yǎng)箱中。試驗(yàn)24、48、72和 時(shí)在電動(dòng)立體顯微鏡下觀察斑馬魚(yú)胚胎的中毒癥狀和致死情況。斑馬魚(yú)胚胎狀態(tài)以卵凝結(jié)、體節(jié)未形成、尾部未分離和無(wú)心跳為死亡終點(diǎn)。

1.5慢性毒性試驗(yàn)慢性毒性試驗(yàn)參照OECDTG210[21]設(shè)計(jì)，采用半靜態(tài)暴露方法，每 更換1次試驗(yàn)溶液，每次更換3/4試驗(yàn)溶液，試驗(yàn)周期為 。根據(jù)胚胎急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，胚胎慢性試驗(yàn)設(shè)置1個(gè)對(duì)照組和5個(gè)受試物濃度組（15、24、38、47和 ），試驗(yàn)容器為1L的結(jié)晶皿，每個(gè)結(jié)晶皿中添加20粒胚胎和1L試驗(yàn)溶液，每個(gè)濃度設(shè)置4個(gè)平行。將結(jié)晶血置于 恒溫培養(yǎng)箱中，光照周期為 。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，統(tǒng)計(jì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)的死亡率，測(cè)定其體長(zhǎng)（全長(zhǎng)）和體重（濕重）。

1.6數(shù)據(jù)處理利用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件和Excel2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算半數(shù)致死濃度（ ） 9 5 % 置信區(qū)間，模擬回歸方程[22]。采用單因素分析研究各組斑馬魚(yú)仔魚(yú)體長(zhǎng)、體重（濕重）和死亡率的差異。根據(jù)各處理組和對(duì)照組的差異顯著性，確定最高無(wú)可觀察效應(yīng)濃度（noobservedeffect concentration，NOEC）。

2 結(jié)果與分析

2.1受試物對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的急性毒性通過(guò)對(duì)不同受試物的試驗(yàn)胚胎死亡率的分析，得到各個(gè)時(shí)間段" L C ， 9 5% 置信區(qū)間和回歸方程。由表2可知，對(duì)于同一種二氯苯酚，隨著染毒時(shí)間的增加，斑馬魚(yú)胚胎的 不斷降低。5種受試物對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的 急性毒性大小順序?yàn)? 。試驗(yàn)早期斑馬魚(yú)胚胎由透明變成白色半透明死卵，中后期出現(xiàn)心臟停正跳動(dòng)和發(fā)育期間體節(jié)缺失、尾部未分離等癥狀。

2.2受試物對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的慢性毒性

2.2.1染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)死亡率的影響。染毒 后，斑馬魚(yú)仔魚(yú)的死亡率見(jiàn)圖1。從圖1可以看出，在達(dá)到一定濃度后，斑馬魚(yú)的死亡率隨著受試物濃度的增加而升高。當(dāng)3，4-DCP和2，5-DCP的濃度為 時(shí)，斑馬魚(yú)的死亡率較CK顯著上升（ ；當(dāng)2，6-DCP和2，3-DCP的濃度為 時(shí)，斑馬魚(yú)仔魚(yú)的 死亡率與CK相比存在顯著差異（ 。由此可見(jiàn)，

3，4-DCP、2，5-DCP、3，5-DCP、2，6-DCP和2，3-DCP對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)死亡率的最高NOEC分別為38、38、47、47和 注： 表示與CK相比差異顯著（ ；**表示與CK相比差異極顯著（ ）。

圖1染毒二氯苯酚32d后斑馬魚(yú)仔魚(yú)的死亡率

2.2.2染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)體長(zhǎng)的影響。染毒32d后，5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對(duì)斑馬魚(yú)體長(zhǎng)的毒性效應(yīng)見(jiàn)表3。由表3可知，5種受試物對(duì)斑馬魚(yú)體長(zhǎng)發(fā)育具有明顯的抑制作用，并隨著受試物濃度的升高，其生長(zhǎng)變得緩慢，存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)3，4-DCP的濃度為 和 的濃度 ？ DCP和2，3-DCP的濃度 時(shí)，斑馬魚(yú)仔魚(yú)的體長(zhǎng)與CK相比均無(wú)顯著差異。由此可見(jiàn)， 、 和 對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)體長(zhǎng)的最高NOEC分別為15、24、24、38和

2.2.3染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)體重的影響。染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)體重的毒性效應(yīng)見(jiàn)表4。由表4可知，5種受試物對(duì)斑馬魚(yú)體重具有明顯的抑制作用，并隨著受試物濃度的升高，其體重（濕重）下降更明顯，存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)3，4-DCP、2，5-DCP和3，5-DCP的濃度為15和

單位：

2，6-DCP和2，3-DCP的濃度為15、24和 時(shí)，斑馬魚(yú)仔魚(yú)的體重（濕重）與CK相比均無(wú)顯著差異（ 。由此可見(jiàn)， 和2，3-

DCP對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)體重（濕重）的最高NOEC分別為24、24、24、38 和 。

3結(jié)論與討論

該研究結(jié)果表明， DCP和2，3-DCP對(duì)斑馬魚(yú)胚胎急性毒性的 分別為0.31、0.36、0.47、0.53和 DCP、2，6-DCP和2，3-DCP對(duì)斑馬魚(yú)胚胎 慢性毒性的最高 NOEC分別為15、24、24、38和

該研究結(jié)果表明，二氯苯酚類(lèi)化合物對(duì)水體環(huán)境中的魚(yú)類(lèi)具有較高的生物毒性，對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育也存在明顯的抑制作用。參照文獻(xiàn)[23-24]報(bào)道，二氯苯酚類(lèi)化合物對(duì)海洋微藻和發(fā)光細(xì)菌的生物毒性大小順序?yàn)? 或 。不同生物對(duì)二氯苯酚化合物的敏感性存在一定差異，但均體現(xiàn)出二氯苯酚對(duì)水生生物存在生物毒性效應(yīng)。因此，經(jīng)過(guò)工業(yè)、農(nóng)業(yè)與醫(yī)藥等生產(chǎn)活動(dòng)產(chǎn)生氯酚類(lèi)殘留物的廢水排放前需要進(jìn)行凈化分解處理，減少對(duì)水生生態(tài)環(huán)境的危害。該研究評(píng)價(jià)了二氯苯酚類(lèi)化學(xué)物質(zhì)對(duì)試驗(yàn)魚(yú)胚胎的急性毒性和慢性毒性效應(yīng)，為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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