不同提取方法對番石榴葉有效成分、抗氧化及α-糖苷酶抑制活性的影響

摘 要：為了聯(lián)合評價浸漬法、熱回流法、超聲輔助乙醇和超聲輔助低共溶試劑法（UADEE）對番石榴葉的提取效果，通過掃描電鏡觀察番石榴葉樣品的顯微結構，以香草醛-冰醋酸比色法、NaNO2-Al（NO3）3 比色法、福林酚法分別測定番石榴葉提取液的總皂苷、總黃酮、總酚含量，采用HPLC 法測定番石榴葉中黃酮單體的含量，LC-MS 法分析其代謝物，并評估其抗氧化與α-糖苷酶抑制活性。結果表明：UADEE 對番石榴葉細胞內部結構的破壞性最強，樣品總皂苷、總黃酮與總酚含量分別為79.28、80.51、120.52 mg/g，黃酮成分番石榴苷、萹蓄苷、瑞諾苷含量分別為7.96、7.74、3.99 mg/g，顯著高于其他3 組（Plt;0.05）；UADEE 處理組中黃酮類、三萜類、酚類成分在番石榴葉總代謝物中分別占9.830%、27.267%、1.013%。UADEE 組樣品清除DPPH 自由基的IC50 值和抑制α-葡萄糖苷酶的IC50 值分別為45.18、904.67 μg/mL，活性顯著強于其他3 組（Plt;0.05）。本研究結果為番石榴葉有效成分的高效提取及其加工產品的開發(fā)提供實驗依據。

關鍵詞：番石榴葉；超聲輔助低共熔溶劑法；有效成分；DPPH 自由基清除率；α-糖苷酶抑制活性

中圖分類號：S667.9 文獻標志碼：A

番石榴（Psidium guajava Linn.）為桃金娘科番石榴屬植物，番石榴葉片可入藥，具清熱解毒、生津止渴、澀腸止瀉等功效?，F(xiàn)代藥理研究證實了其顯著的抗氧化和降血糖等活性[1]，在天然抗氧化劑和降糖劑等開發(fā)中具有廣闊前景。有效成分是中草藥發(fā)揮藥效的物質基礎，番石榴葉中主要有效成分包括三萜、黃酮、鞣質、多糖等，其中三萜類物質主要有齊墩果酸、烏蘇酸和積雪草酸等[2]，黃酮類成分主要有槲皮素、番石榴苷、萹蓄苷、瑞諾苷等[3]。

提取工藝是影響有效成分提取率的關鍵因素，目前番石榴葉有效成分的提取多采用浸提法[4]、回流提取法[5]、超聲輔助法[6]等方法。提取溶劑的極性極大地影響了其對有效成分的提取率，而低共熔溶劑（deep eutectic solvents， DES）具有極性可調諧性，對各種極性的化合物均具有增溶作用。DES 作為綠色溶劑提取和分離天然產物中多酚類[7]、黃酮類、皂苷類[8]、三萜酸[9]等不同極性的化合物，在中藥提取分離領域具有很大潛力，目前已應用于番石榴葉總黃酮（total flavonoids）的提取[10]，但未見用于總酚（total phenols）和總皂苷（total saponins）的提取。此前通過提取分離純化的方式，從番石榴葉醇提取物及乙酸乙酯萃取物中，主要鑒定出混源萜類化合物[11]，以及黃酮類成分如山奈酚、槲皮素等[12-13]。但這一分離純化過程耗時耗力，且難以發(fā)現(xiàn)其中痕量成分。近年來，液質聯(lián)用技術（liquid chromatograph-massspectrometer，LC-MS）已成為探究化學成分的有效手段，但目前未見采用LC-MS 技術進行番石榴葉成分的研究。

為了對番石榴葉的有效成分進行高效提取，本研究以總黃酮、總皂苷、總酚及黃酮成分槲皮素、番石榴苷、萹蓄苷、瑞諾苷與主要代謝物的含量為定量評價指標，結合功能活性DPPH 自由基清除能力與α-糖苷酶抑制率，探究不同提取方法對番石榴葉主要有效成分含量的影響，為番石榴葉食療產品的開發(fā)提供理論基礎，從而促進番石榴副產物的綜合利用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料

供試植物材料番石榴葉片采集于廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所，經水果研究中心陳豪軍正高級農藝師鑒定，葉片長8～10 cm，寬3～5 cm。

1.1.2 儀器與試劑

試驗所用儀器： ThermoVanquish 高效液相色譜儀、Orbitrap Exploris 120質譜儀（Thermo Fisher Scientific，USA）、SU8100掃描電子顯微鏡、MC1000 離子濺射儀（Hitachi，Japan）、UV-1800PC 紫外可見光分光光度計、DHG-9070A 恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）、L3.5TB1 熱泵干燥機（威爾信）、H1850-R 型冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）、CP214 電子分析天平（奧豪斯儀器有限公司）、XL-30C 型萬能高速粉碎機（濟南歐萊博科學儀器有限公司）、RE-5210A 旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、GTSONIC-T20 超聲波清洗儀（廣東固特超聲股份有限公司）、FlexiVap氮吹儀（維根技術（北京）有限公司）、恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）、Milli-Q超純水儀（美國Millipore 公司）。

試驗所用試劑：蘆丁（批號：Y2411Y17051）、熊果酸（批號：L03A6Y1）、番石榴苷（批號：P09J7F8764）、萹蓄苷（批號：P21S10S98394）、瑞諾苷（批號：P25J10S91433）、槲皮素（批號：C01J10Y91727）、沒食子酸（批號：J01IB218870）、對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）（批號：JS239376）、α-葡萄糖苷酶（批號：S07HS193826）、阿卡波糖（批號：S25M11X109783，上海源葉生物科技有限公司）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）[西格瑪奧德里奇貿易有限公司（上海）]、2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）（上海麥克林生化科技有限公司）、乙腈（Thermo FisherScientific）、甲酸（TCL，色譜純）、甲酸銨（ Sigma-Aldrich ， 純度≥ 99.0% ） ； 氯化膽堿[HOC2H4N（CH3）3Cl，ChCl]、乙二醇[（CH2OH）2，EG]、香草醛、冰醋酸、高氯酸、福林酚溶液、硝酸鋁、亞硝酸鈉、磷酸、甲醇、乙醇均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 番石榴葉提取

（1）浸漬法（maceratedextraction，ME）。將番石榴葉洗凈、去除枝梗泥沙等雜質后經50 ℃烘干，粉碎，過40 目篩，得粉末備用。精密稱取2.00 g 番石榴葉粉末，以50 mL 體積分數(shù)為70%的乙醇為提取溶劑，置于錐形瓶中旋渦攪拌均勻，靜置15 h，提取3 次。

（2）熱回流法（heat reflux extraction，HRE）。精密稱取2.00 g 番石榴葉粉末，以50 mL 體積分數(shù)為70%的乙醇為提取溶劑，置于圓底燒瓶中旋渦攪拌均勻，90 ℃水浴下加熱回流1.5 h，提取3 次。

（ 3 ） 超聲輔助乙醇法（ ultrasound-assistedalcohol extraction，UAAE）。稱取2.00 g 番石榴葉粉末放入錐形瓶中，以50 mL 體積分數(shù)為70%的乙醇為提取溶劑，旋渦攪拌后，50 ℃下以465 W超聲功率提取1.5 h，提取3 次。

（4）超聲輔助低共熔溶劑法（ultrasound-assisteddeep eutectic solvents extraction，UADEE）。

參考王慧[14]的試驗方法，氯化膽堿（ChCl）經80 ℃恒溫干燥24 h 后，按物質的量濃度比例1∶1 與乙二醇（EG）于圓底燒瓶中混合，90 ℃恒溫水浴攪拌，直至DES 體系變得透明、均一、穩(wěn)定。將所配DES 溫度降至室溫，密封干燥14 d以上后，溶解于去離子水中，充分搖勻、靜置，配制得含水率為40%（按體積分數(shù)計）的均一透明DES 水溶液（ChCl：EG）。

稱取2.00 g 番石榴葉粉末放入錐形瓶中，以50 mL 配制的DES 水溶液為提取溶劑，旋渦攪拌，50 ℃下以465 W 超聲功率提取1.5 h，提取3 次。

1.2.2 掃描電子顯微鏡觀察

參照陳紅惠等[15]的方法，利用掃描電子顯微鏡（scanning electronmicroscope，SEM）觀察提取前后的番石榴葉樣品。稱取適量干燥番石榴葉粉末進行ME、HRE、UAAE 和UADEE 處理，過濾后收集濾渣，60 ℃熱風干燥箱中烘干至粉末狀。將處理后樣品用導電膠粘于樣品臺噴金30 s，在3.0 kV 電壓，高真空條件下，進行SEM 觀察。

1.2.3 總黃酮、總皂苷、總酚含量測定

番石榴葉總黃酮含量通過NaNO2-Al（NO3）3 比色法[16]測定，以蘆丁為對照品，在505 nm 處測定其吸光度。擬合標準曲線為Y=3.9184X+0.0043（R2=0.9983）；總皂苷含量通過香草醛-冰醋酸比色法[17]測定，以熊果酸為對照品，在548 nm 處測定吸光度，擬合標準曲線為Y=0.0098X+0.0517（R2=0.9905）；總酚含量采用福林酚法[18]測定，以沒食子酸為對照品，在765 nm 處測定吸光度，擬合標準曲線為Y=0.0107X+0.003（R2=0.9975）。

1.2.4 高效液相色譜法（HPLC）分析番石榴葉黃酮成分

（1）色譜條件。參照方皓等[3]的方法進行測定，色譜柱：Agilent eclipse plus C18 柱（4.6 mm×100 mm，3.5 μm）；流動相：乙腈（A）?0.2%磷酸水溶液（B）；梯度洗脫程序：起始為11% A，89% B；15 min 時A 為13.5%，B 為86.5%；30 min 時A 為18%，B 為82%，保持至40 min；65 min 時A 為49%，B 為51%；70 min 時A 為11%，B 為89%；檢測波長：360 nm；進樣量：10 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃。

（2）對照品溶液的制備。分別精密稱定各對照品適量，加甲醇制成濃度為1 mg/mL 的番石榴苷、萹蓄苷、瑞諾苷、槲皮素對照品儲備溶液，依次精密吸取各對照品儲備溶液200、150、100、50、25、10 μL 于6 個10 mL 容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得系列混合對照品溶液。

（3）標準曲線建立。根據標準品的峰面積（Y）與進樣質量濃度（X）進行線性回歸，得到標準品回歸方程，番石榴苷：Y=7.345X+0.052（R2=0.999，線性范圍為0.330～10.530 mg/L）；萹蓄苷：Y=3.396X62.936（R2=0.999，線性范圍為0.324～10.940 mg/L）；瑞諾苷Y=7.613X+0.075（R2=0.999，線性范圍為0.334～10.190 mg/L）；槲皮素：Y=11.599X～0.344（R2=0.999，線性范圍為0.366～10.480 mg/L）。根據標準曲線方程分別計算樣品中4 種黃酮成分的含量。

1.2.5 液質聯(lián)用技術（LC-MS）分析番石榴葉代謝物

（1）色譜條件。Thermo Vanquish 超高效液相系統(tǒng)，使用ACQUITY UPLC? HSS T3 色譜柱（2.1×150 mm，1.8 μm，Waters，Milford，MA，USA），流速為0.25 mL/min，柱溫為40 ℃，進樣量為2 μL。正離子模式，流動相為0.1%甲酸水（A2）和0.1%甲酸乙腈（B2）；負離子模式，流動相為5 mol/L 甲酸銨水（A3）和乙腈（B3），梯度洗脫程序為：正離子模式起始為98% A2，2%B2，負離子模式起始為98% A3，2% B3，保持至1 min；9 min 時A2 為50%，B2 為50%，A3 為50%，B3 為50%；12 min 時A2 為2%，B2 為98%，A3 為2%，B3 為98%，保持至13.5 min；14 min時A2 為98%，B2 為2%，A3 為98%，B3 為2%；保持至20 min。

（2）質譜條件。Thermo Orbitrap Exploris 120質譜檢測器，電噴霧離子源（ESI）。正負離子噴霧電壓分別為3.50 kV、?2.50 kV，毛細管溫度為325 ℃，一級全掃描分辨率為60000，離子掃描范圍為m/z 100～1000，二級裂解分辨率為15000。

1.2.6 DPPH 自由基清除能力的測定

取不同處理組的番石榴葉提取液各1 mL，用氮氣吹干，分別復溶于一定體積的80%乙醇溶液中，制成待測樣品溶液。參照JIANG 等[19]的方法測定：于酶標板中分別加入100 μL 樣品溶液與100 μL0.15 mmol/L 的DPPH-乙醇溶液，混勻，室溫避光反應30 min，517 nm 處測定吸光度（As1）。以100 μL 體積分數(shù)為80%的乙醇溶液分別代替DPPH-乙醇溶液作為樣品對照（Ab1）、代替樣品溶液作為空白對照（Ac1），以BHT 和Vc 作為陽性對照。樣品DPPH 自由基清除率計算方式見公式（1），繪制清除率與樣品溶液的質量濃度關系曲線，根據曲線計算樣品的IC50 值。以IC50 值表示樣品的DPPH 自由基清除能力。計算公式：

式中，As1 為樣品組吸光度；Ab1 為樣品對照組吸光度；Ac1 為空白對照組吸光度。

1.2.7 α-葡萄糖苷酶抑制能力的測定

取不同處理組的番石榴葉提取液各1 mL，用氮氣吹干后，分別復溶于一定體積的蒸餾水中，制成待測樣品溶液。參照李云嵌等[18]的方法測定：取樣品溶液50 μL 與α-葡萄糖苷酶溶液25 μL 混合，于37 ℃水浴反應10 min 后加入5 mmol/L PNPG 溶液50 μL，37 ℃下恒溫水浴15 min，加入0.2 mol/LNa2CO3 溶液100 μL 終止反應，于405 nm 下測定吸光值（As2）。以25 μL 蒸餾水代替α-葡萄糖苷酶溶液作為樣品對照（Ab2），以50 μL 蒸餾水代替樣品溶液作為空白對照（Ac2），阿卡波糖為陽性對照。樣品溶液的α-葡萄糖苷酶抑制率通過公式（2）計算，繪制抑制率與樣品溶液的質量濃度關系曲線，根據曲線計算樣品的IC50 值。以IC50值表示樣品的α-葡萄糖苷酶抑制能力。計算公式：

式中，As2 為樣品組吸光度；Ab2 為樣品對照組吸光度；Ac2 為空白對照組吸光度。

1.3 數(shù)據處理

實驗數(shù)據以平均值± 標準差表示， 采用GraphPad Prism 9.0 軟件作圖，應用SPSS 20.0 軟件進行單因素ANOVA 分析。

2 結果與分析

2.1 提取方法對番石榴葉內部結構的影響

樣品結構的破壞程度與不同提取方式有直接關系。由圖1 可知，對照組樣品（干燥番石榴葉粉末）細胞壁結構完整，均勻致密；ME 組樣品表面呈現(xiàn)疏松結構，但細胞壁結構大部分完整；HRE 組樣品表面有少數(shù)部位穿孔，形成小的空穴，說明HRE 對物料結構破壞力較小，有效成分從物料中溶出有限；UAAE 和UADEE 組樣品表面出現(xiàn)更大的空穴結構。

2.2 提取方法對番石榴葉總黃酮、總皂苷、總酚提取效果的影響

本研究中不同組別番石榴葉有效成分如表1所示。UADEE 組番石榴葉總皂苷、總黃酮、總酚含量顯著高于ME、HRE、UAAE 組（Plt;0.05）。在總皂苷和總黃酮的提取中，UAAE 與HRE 組的提取效果差異不顯著，均顯著優(yōu)于ME 組（Plt;0.05）；但在總酚提取中，UAAE 與ME 組差異不顯著，提取效果顯著優(yōu)于HRE 組（Plt;0.05）。

2.3 提取方法對番石榴葉黃酮成分提取效果的影響

本研究中各組樣品的HPLC 色譜圖如圖2 所示，4 種黃酮成分含量如圖3 所示。UADEE 組4種黃酮成分總含量（21.57 mg/L）顯著高于其他3組（Plt;0.05）。ME 組的番石榴苷、萹蓄苷、瑞諾苷含量分別為1.88、1.82、0.87 mg/L，UAAE和UADEE 組中這3 種黃酮成分含量均顯著高于ME 組（Plt;0.05）。其中番石榴苷含量在UAAE、UADEE 組中分別為4.03、7.96 mg/L，萹蓄苷含量分別為3.94、7.74 mg/L，瑞諾苷含量分別為1.92、3.99 mg/L。ME、UADEE 組中槲皮素含量最高，分別為2.05、1.86 mg/L，顯著高于HRE組（1.49 mg/L）和UAAE 組（0.51 mg/L）（Plt;0.05）。

2.4 番石榴葉代謝物檢測分析

為探討提取方式對番石榴葉主要有效成分黃酮、皂苷和酚類物質的影響，基于LC-MS 對番石榴葉提取液進行非靶向檢測，得到提取液的正負離子采集譜圖（圖4）。代謝物的鑒定首先根據精確分子量進行確認，后續(xù)將MS/MS 碎片模式與Human Metabolome Database （HMDB） （http：//www.hmdb.ca）、LipidMaps （http：//www.lipidmaps.org）、mzClound （https：//www.mzcloud.org）以及帕諾米克自建標準品數(shù)據庫確認注釋獲得代謝物。從番石榴葉提取液中鑒定出黃酮類代謝物44 種，三萜類代謝物10 種，酚類代謝物13 種。采用峰面積歸一法計算黃酮類成分、三萜類成分和酚類成分相對含量，如圖5 所示，ME、HRE、UAAE和UADEE 處理組中黃酮類成分在番石榴葉總代謝物中分別為9.830% 、9.714% 、11.493% 和12.208%；三萜類成分分別為15.815%、21.706%、26.286%和27.267%；酚類成分分別為0.731%、0.930%、0.773%和1.013%。番石榴葉中相對含量最高的10 種黃酮類成分為槲皮素、木犀草素、楊梅苷、染料木素、異牡荊素、水飛薊素、表兒茶素、黃芩素、去甲基陳皮素和蘆丁，最主要的三萜類物質為熊果酸、山楂酸、黃柏酮、雷公藤紅素和Fasciculic acid B，主要的酚類物質為鞣花酸、香蘭素、羥基酪醇、高原兒茶酸和姜酮酚。不同提取方法對番石榴葉不同代謝物的提取效果具有明顯差異，UADEE 處理的提取液中槲皮素、染料木素、蘆丁、熊果酸的含量高于其他3 種處理方法，而楊梅苷、異牡荊素和山楂酸的含量則較低。

2.5 不同提取方法對番石榴葉生物活性的影響

番石榴葉提取物DPPH 清除率和α-葡萄糖苷酶抑制率的IC50 值如圖6 所示，各組樣品DPPH清除率和α-葡萄糖苷酶抑制率差異顯著。4 個提取處理中，UADDE 組DPPH 自由基的清除能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性均最強（Plt;0.05），IC50值分別為45.18 μg/mL 和904.67 μg/mL，DPPH 清除能力與陽性對照組Vc 水平相當，但弱于抗氧化劑BHT，α-葡萄糖苷酶抑制活性顯著弱于陽性降糖藥物阿卡波糖。

3 討論

本研究結合內部顯微結構、功能成分及其生物活性，聯(lián)合評價ME、HRE、UAAE 與UADEE四種提取方法對番石榴葉的提取效果。結果表明UAAE 與UADEE 兩種處理極大地破壞了細胞內部結構，這是由于植物細胞壁在超聲的機械效應和化學效應下發(fā)生破裂，使物料結構疏松，從而加速植物中有效成分的擴散和溶出[20]。超聲波的空化效應，促使溶劑更大程度地滲入細胞中，不斷刺激胞內腺體，增加傳質速率[21]。皂苷、黃酮和酚類物質是番石榴葉的主要有效成分，提取溶劑對目標成分的溶解度是影響提取率的關鍵因素之一。黃酮和酚類的提取通常采用回流法或超聲輔助有機試劑法，皂苷的提取通常采用超聲波輔助表面活性劑增溶技術[15， 22-23]，如薯蕷皂苷、三七花總皂苷和苦瓜皂苷等。本研究中UADEE 組的總黃酮提取率為8.05%，高于目前研究中回流或超聲提取等方法的番石榴葉總黃酮提取率（0.497%～5.12%[5， 24-25]），但低于蔣利榮等[10]研究中UADEE 法的總黃酮提取率（ 15.97%～22.06%）。馬連榮等[26]、鄢文等[27]測定番石榴葉中總皂苷含量為7.08 mg/mL 和15.14 mg/mL，本研究中各組總皂苷含量為46.61～79.28 mg/g，其中UADEE 組提取率比ME 組提高70.09%，比UAAE組提高21.58%，而陳冉等[8]利用UADEE 提取雞骨草總皂苷，提取率比傳統(tǒng)有機試劑提取法提高96.4%，這些差異可能與DES 氫鍵配體受體的組成及DES 溶劑含水率等因素有關。

番石榴葉中的代表性黃酮類成分為槲皮素、番石榴苷、萹蓄苷（廣寄生苷）和瑞諾苷等，其含量是衡量番石榴葉藥材品質優(yōu)劣的一個重要指標。方皓等[3]以60%乙醇超聲提取30 min 后測到這4 種黃酮成分的總含量約為58.3 mg/g，本研究UADEE 組4 種黃酮成分總含量為21.57 mg/L，顯著高于其他3 組（Plt;0.05），與總黃酮測定結果趨勢一致； 其中番石榴苷和萹蓄苷總含量為15.70 mg/g，高于朱曉艾等[28]采用64.6%乙醇提取81 min 的含量，測出的番石榴苷和萹蓄苷最高總含量為6.74 mg/g。ME 組提取體系缺乏濃度差，HRE 組較高的提取溫度則會導致皂苷發(fā)生脫羧、脫糖、脫水反應而轉化；某些穩(wěn)定性差的酚類、黃酮類物質也易受溫度的影響，發(fā)生氧化、聚合或分解等反應，從而影響提取率[29-30]；而組成DES的組分間協(xié)同效應使其對番石榴葉有效成分具有增溶作用，因而造成提取效果的差異。此前研究者們從番石榴葉分離得到一系列黃酮及其各類糖苷與苷元，包括槲皮素、芹菜素、楊梅素、兒茶素、膠藤素、去甲氧基莢果蕨素、山奈酸、萹蓄苷、金絲桃苷、異槲皮苷等[13， 31-32]。本研究基于LC-MS 非靶向測定出黃酮類成分44 種，三萜類成分10 種、酚類成分13 種。槲皮素是多種黃酮苷的苷元，據報道，蘆丁、槲皮素等代謝物在DES中的溶解度是在水中的十倍至數(shù)十萬倍[33]，本實驗中UADEE 組提取到的蘆丁和槲皮素含量顯著高于UAAE 組。熊果酸是番石榴葉中主要的三萜類成分，被證實是番石榴葉主要的降血糖活性成分，本研究中UADEE 對熊果酸的效果最優(yōu)；多酚成分鞣花酸具有與槲皮素相當或更高的抗氧化活性[34]，其可能也是番石榴葉發(fā)揮抗氧化活性的有效成分。以上研究進一步豐富了番石榴葉的藥效物質基礎。此外，本研究結果表明提取方法對番石榴葉不同代謝物的溶出具有重要影響，為番石榴葉特定成分的提取與利用提供參考。

DPPH 目前被廣泛用于抗氧化劑清除自由基能力的快速評價，α-葡萄糖苷酶被認為是Ⅱ型糖尿病的重要靶標[35]。此前趙玉靜等[12]發(fā)現(xiàn)番石榴葉醇提液中的6 個黃酮類化合物，均具有顯著抗氧化活性。張婷婷[2]研究中表明三萜皂苷類物質為番石榴葉降血糖活性物質。本研究發(fā)現(xiàn)各組番石榴葉提取物DPPH 清除率和α-葡萄糖苷酶抑制率差異顯著，HRE 組DPPH 的清除能力最弱，ME 組的α-葡萄糖苷酶抑制率最低，UADDE 組DPPH 自由基的清除能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性均最強（Plt;0.05）。這與番石榴葉有效成分總皂苷、總黃酮和總酚含量測定結果趨勢一致，表明這3 種成分可能是番石榴葉抗氧化和降糖功能的發(fā)揮的活性成分。綜上，不同提取方式下（ME、HRE、UAAE、UADEE）番石榴葉有效成分含量與生物活性差異顯著，綜合而言，UADEE 法對番石榴葉的有效成分提取效果最佳，研究結果可為提高番石榴副產物的綜合利用率提供實驗依據。

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基金項目 廣西農業(yè)科學院科技發(fā)展基金項目（桂農科2022JM92）；廣西農業(yè)科學院基本科研業(yè)務專項（桂農科2025YP140，桂農科2021YT144）。