中藥健脾四胃方劑對斷奶湖羊生長性能、瘤胃發(fā)酵及菌群組成的影響

摘 要： 旨在研究中藥健脾四胃復方制劑對斷奶湖羊生長性能、瘤胃發(fā)酵及菌群組成的影響。選取100只健康，體況良好，平均體重（14.55±0.21） kg的2月齡湖羊，采用單因素試驗設(shè)計，隨機分為5組，每組4個重復，每重復5只羊。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，復方A1和A2組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.3%、0.5%的健脾四胃方劑A，復方B1和B2組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.3%、0.5%的健脾四胃方劑B。結(jié)果表明：與對照組相比，復方A2組平均日增重顯著提高（P＜0.05），料重比顯著降低（P＜0.05）；復方A1、B2組的氨態(tài)氮（NH 3-N）含量顯著提高（P＜0.05），微生物蛋白（MCP）含量顯著降低（P＜0.05），復方A2組的的pH極顯著降低（P＜0.01），丙酸含量極顯著提高（P＜0.01）、乙酸與丙酸的比值極顯著降低（P＜0.01），總揮發(fā)性脂肪酸極顯著提高（P＜0.01）；復方A1、A2組的瘤胃微生物的物種數(shù)與Chao 1 指數(shù)顯著提高（Plt;0.05），Shannon 指數(shù)極顯著提高（Plt;0.01），螺旋體門 （Spirochaetota）的相對豐度極顯著降低（Plt;0.01），且復方A2組的廣古菌門（Euryarchaeota）的相對豐度極顯著提高（Plt;0.01）；復方A1、A2組的理研菌科RC9菌屬（Rikenellaceae_RC9_gut_group）、真/優(yōu)桿菌屬（Eubacterium_ventriosum_group）相對豐度顯著降低（Plt;0.05），未知屬擬桿菌目RF16菌（Bacteroidales_RF16_group）相對豐度顯提高（Plt;0.05）；復方A2組的月形單胞菌屬（Selenomonas）相對豐度顯著降低（Plt;0.05），奎因氏菌屬（Quinella）相對豐度顯著提高（Plt;0.05）。以上結(jié)果表明，在飼糧中添加中藥健脾四胃復方制劑可以促進斷奶湖羊的生長性能，改善瘤胃發(fā)酵，提高瘤胃菌群的多樣性和豐富度。

關(guān)鍵詞： 中藥復方；斷奶湖羊；生產(chǎn)性能；瘤胃發(fā)酵；瘤胃菌群

中圖分類號：S853.9;S826.5

文獻標志碼：A"""" 文章編號： 0366-6964（2025）01-0466-13

收稿日期：2024-01-15

基金項目：國家自然科學基金（32060768）；國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助

作者簡介：李 瑋（1999-），男，黑龍江哈爾濱人，碩士生，主要從事反芻動物營養(yǎng)研究，E-mail：1219960380@qq.com

*通信作者：宋小珍，主要從事牛羊營養(yǎng)調(diào)控及中藥添加劑開發(fā)研究，E-mail：songxz1234@163.com

Effects of Chinese Medicine Jianpisiwei Formulas on Growth Performance， Rumen Fermentation

and Microbiota Composition of Weaned Hu Sheep

LI" Wei WU" Xilong ZHAO" Xingrui XU" Lanjiao YANG" Xiaobin2， SONG" Xiaozhen^1*

（1.Jiangxi Provincial Key Laboratory of Animal Nutrition/Engineering Research Center for

Nutritional Feed Development， Jiangxi Agricultural University， Nanchang 330045，" China;

2.Jiangxi

Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Company Limited， Nanchang 331700， China）

Abstract： "The aim of this experiment was to study the effects of Chinese medicine Jianpisiwei formulas on the growth performance， rumen fermentation and microbiota composition of weaned Hu sheep. A total of 100 healthy 2-month-old Hu sheep with average body weight of （14.55±0.21） kg were randomly divided into 5 groups with 4 replicates in each group and 5 sheep per replicate. The control group was fed with basal diet，" A1 and A2 groups were fed basal diet supplemented with 0.3% and 0.5% Jianpisiwei formula A， the B1 and B2 groups were fed basal diet supplemented with 0.3% and 0.5% Jianpisiwei formula B. The results showed that compared with the control group， the average daily weight gain of the A2 group was significantly increased （Plt;0.05）， the feed-to-gain ratio was significantly decreased （Plt;0.05）， the content of ammonia nitrogen （NH 3-N） in the A1 and B2 groups was significantly increased （Plt;0.05）， the content of microbial protein （MCP） was significantly decreased （Plt;0.05）， the pH value of the the A2 group was significantly decreased （Plt;0.01）， and the content of propionic acid was significantly increased （Plt;0.01）. The ratio of acetic acid to propionic acid was significantly decreased （Plt;0.01）， the total volatile fatty acids were significantly increased （Plt;0.01）， the number of species and Chao 1 index in the the A1 and A2 groups were significantly increased （Plt;0.05）， the Shannon index was significantly increased （Plt;0.01）， the relative abundance of Spirochaetota was significantly decreased （Plt;0.01）， and the relative abundance of Euryarchaeota in the A2 group was significantly increased （Plt;0.01）；The relative abundance of Rikenellaceae_RC9_gut_group and Eubacterium_ventriosum_group in the A1 and A2 groups decreased significantly （Plt;0.05）， while the relative abundance of Bacteroidales_RF16_group increased significantly （Plt;0.05）. The relative abundance of Selenomonas in the A2 group was significantly decreased （Plt;0.05）， while the relative abundance of Quinella increased significantly （Plt;0.05）. The above results indicated that the addition of Chinese medicine Jianpisiwei formulas to the diet could promote the growth performance， improve rumen fermentation， and increase the diversity and richness of rumen flora in weaned Hu sheep.

Key words： Chinese medicine formula; Hu sheep; production performance; rumen fermentation; rumen flora

*Corresponding author： SONG Xiaozhen，E-mail： songxz1234@163.com

斷奶是羔羊生長發(fā)育的關(guān)鍵階段^［1］。斷奶期羔羊的消化和免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，加之母子分離、飼養(yǎng)方式以及飼糧結(jié)構(gòu)的改變，極易引起羔羊斷奶應(yīng)激。斷奶應(yīng)激使羔羊內(nèi)分泌激素失調(diào)，免疫力下降，胃腸健康受損，導致湖羊飼料轉(zhuǎn)化率下降，生長性能低下，同時還會影響羔羊后期育肥，降低養(yǎng)殖效益^［2-3］。為了緩解湖羊斷奶應(yīng)激，提高羔羊的生產(chǎn)性能，一些抗應(yīng)激、改善胃腸消化、提高免疫功能的飼料添加劑被大量開發(fā)研究。中藥源自天然，含有多種活性物質(zhì)，在提高畜禽生產(chǎn)性能、增強免疫力、改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)等方面發(fā)揮著重要作用^［4］，在畜牧養(yǎng)殖減抗替抗過程中被廣為關(guān)注和研究。據(jù)報道，飼料中添加2%的健脾中藥（山楂、陳皮、五味子等）可顯著提高50日齡“冀合白豬”的日增重，降低料重比^［5］。中藥復方制劑（生地、馬齒莧、蒼術(shù)、苦參、山楂等）可改善1日齡雛雞的消化機能，增強食欲，從而促進生長^［6］。本試驗使用的中藥健脾四胃方劑A由山藥、山楂、蒼術(shù)等組方而成，其中山藥有補脾養(yǎng)胃的作用，可用于治療脾胃虛弱、食欲不振、脾虛泄瀉；其活性成分為多糖和總黃酮^［7］。山楂為消導藥，具有消食健胃，主治消化不良，其活性成分為多糖、有機酸、總黃酮^［8］。蒼術(shù)為健脾藥，具有燥濕健脾，止痛止瀉的作用，其活性成分為多糖和精油，可保護胃腸道、提高免疫功能^［9］。方劑A采用山藥和山楂合用補脾健胃，主治斷奶后羔羊因脾胃虛弱而導致的消化不良、食欲不振。方劑B由山楂、木香、萊菔子等組成，木香為行氣藥，具有行氣止痛，消除胃腸鼓脹的作用，其活性成分為萜類化合物、類固醇、類黃酮，可以緩解機體疼痛，抵抗炎癥^［10］。萊菔子為消食藥，具有消食除脹、增強胃腸活動的作用，其活性成分為酚類化合物、硫苷類、有機酸類^［11］。方劑B主治益氣健脾，針對斷奶后羔羊的脾虛氣虛，免疫力低下。本試驗擬選用這兩個中藥方劑，針對斷奶湖羊消化道發(fā)育不完善、免疫力低下等問題，研究不同復方制劑、不同添加水平對斷奶湖羊生長性能、瘤胃發(fā)酵及瘤胃菌群組成的影響，為中藥飼料添加劑的研發(fā)及其在斷奶羔羊健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

中藥健脾四胃復方制劑A由山藥、山楂、蒼術(shù)、木香、萊菔子、青皮、甘草等按等比例組成，中藥健脾四胃復方制劑B由山楂、木香、萊菔子、青皮、黃芪、甘草等按2∶2∶1∶1∶1∶1組成，均由江西中成人藥業(yè)有限公司提供。

1.2 試驗設(shè)計

試驗采取單因素設(shè)計，選取100只健康、體重（14.55±0.21）kg且遺傳背景相近的2月齡湖羊，隨機分為5組，每組20只羊，每組4個重復，每個重復5只羊，對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，復方A1組（基礎(chǔ)飼糧+0.3%的健脾四胃方劑A），復方A2組（基礎(chǔ)飼糧+0.5%的健脾四胃方劑A），復方B1組（基礎(chǔ)飼糧+0.3%的健脾四胃方劑B），復方B2組（基礎(chǔ)飼糧+0.5%的健脾四胃方劑B）。試驗期共70 d，其中預試期10 d，正試期60 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧與飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧參照我國《肉羊飼養(yǎng)標準》（NY/T 816—2004）設(shè)計配方，精粗比為4∶6，其組成及營養(yǎng)水平如表1所示。

飼養(yǎng)試驗于2022年11月到2023年1月在江西春暉羊業(yè)有限公司完成，每日飼喂2次（8：00和16：00），先精料后粗料各組試驗羊自由采食、飲水，羊舍每周清糞并消毒1次。依據(jù)每日剩料情況，調(diào)整飼喂量。飼養(yǎng)試驗期間各組飼喂方式、試驗環(huán)境及管理模式均與羊場相同。

1.4 檢測指標與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

在正式試驗期第1天和第60天飼喂前空腹稱重，統(tǒng)計試驗羊的初重和末重，飼養(yǎng)期間每日準確記錄投料量及剩料量，計算每組的平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）、平均日增重（ADG）。

平均日增重=（末重-初重）/試驗天數(shù)；

平均日采食量=總采食量/試驗天數(shù)；

料重比=平均日采食量/平均日增重。

1.4.2 瘤胃發(fā)酵及微生物菌群組成

于正試期第60天，從每個重復隨機選擇2頭羊，將胃管式采液器，從羔羊口腔緩慢插入瘤胃，用50 mL注射器抽取瘤胃液。為了避免唾液污染，丟棄前30 mL瘤胃液，后續(xù)采集的瘤胃液于4層紗布過濾，取濾液用2 mL凍存管分裝置于液氮中保存，用于測定瘤胃微生物區(qū)系組成；另取過濾后的瘤胃液20 mL于凍存管中保存于-80℃冰箱以待瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測定。

瘤胃pH使用S-320型酸度計測定；菌體蛋白（MCP）含量采用試劑盒（G-CLONE，中國）測定，測定方法按照試劑盒說明書進行；氨態(tài)氮（NH 3N）濃度參考馮宗慈和高民^［12］的方法進行測定，使用氣相色譜儀（Agilent GC8860 GC，美國）測定瘤胃液中揮發(fā)性脂肪酸的含量。

根據(jù)前期的生長性能及瘤胃發(fā)酵指標的結(jié)果選擇健脾四胃復方A進行瘤胃菌群組成測定。利用16S rRNA測序技術(shù)測定對照組、A1、A2組共12個樣本的瘤胃菌群多樣性。瘤胃液微生物DNA的提取、基因組文庫構(gòu)建和測序等均由北京諾禾致源生物信息技術(shù)有限公司進行。提取瘤胃液樣品總DNA后，對細菌16S rRNA V3～V4高變區(qū)兩側(cè)的引物進行PCR擴增，所采用的細菌通用引物序列為341F（5′-CCTAYGGGRBGCASCAG-3′）和806R（5′-GGACTACNNGGGTATCTAAT-3′） PCR。利用QIIME2測序平臺進行微生物多樣性檢測，分析在門水平和屬水平下的群落物種組成及豐度。

1.4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS26.0統(tǒng)計軟件行方差分析，Duncan氏法進行多重比較，并進行Spearman相關(guān)性分析斷奶湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)與菌群組成的相關(guān)性。試驗結(jié)果用平均值和標準誤表示，Plt;0.05表示差異顯著，Plt;0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，與對照組相比，各健脾組的初重、末重、平均日采食量都無顯著變化（P＞0.05）；復方A2組平均日增重顯著提高（P＜0.05），料重比顯著降低（P＜0.05），其他健脾組平均日增重、料重比變化不顯著（P＞0.05）。

2.2 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊瘤胃發(fā)酵指標的影響

由表3可知，與對照組相比，復方A2組的pH極顯著降低（P＜0.01）；復方A1、B2組的NH 3-N含量顯著提高（P＜0.05）；復方A1、B2組的MCP含量顯著降低（P＜0.05）；復方B1、B2組乙酸含量顯著低于復方A2組（P＜0.05）；復方A2組的丙酸含量極顯著提高（P＜0.01），乙酸與丙酸的比值極顯著降低（P＜0.01）；復方A2組的總揮發(fā)性脂肪酸極顯著提高（P＜0.01）；其他瘤胃發(fā)酵指標無顯著變化（P＞0.05）。

2.3 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊瘤胃菌群多樣性的影響

2.3.1 稀釋曲線分析

稀釋曲線用來評價對樣品（瘤胃液）的測序量是否能夠包含所有微生物種類，并間接反映樣品中菌群的相對豐度。如圖1所示，稀釋曲線趨于平緩，說明測序數(shù)據(jù)量合理，能夠反映大部分細菌區(qū)系的變化。

2.3.2 操作分類單元（OTU）聚類分析

由圖2可知，三個組總共有操作分類單元（OTU）7 625個。其中對照組的OTU數(shù)量為3 610個，復方A1組的OTU數(shù)量為3 879個，復方A2組的OTU數(shù)量為4 289個，其中三組共有的OTU有1 445個，占OTU總數(shù)量的18.95%。對照組獨有的OTU數(shù)量為1 443個，占OTU總數(shù)量的18.92%，復方A2組獨有的OTU數(shù)量為1 886個，占OTU總數(shù)量的24.73%，復方A1組獨有的OTU數(shù)量為1 588個，占OTU總數(shù)量的20.83%。

2.3.3 Alpha多樣性分析

由表4知，與對照組相比，復方A1、A2組的物種數(shù)與Chao 1 指數(shù)顯著提高（Plt;0.05），Shannon 指數(shù)極顯著提高（Plt;0.01），兩試驗組之間差異不顯著（P＞0.05）。且三個組的Coverage 值均大于99%，說明測序樣品取樣充分，能準確反映肉羊瘤胃微生物菌群的種類與結(jié)構(gòu)組成。

2.4 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊瘤胃菌群組成分析

2.4.1 湖羊瘤胃門水平物種組成分析

表5與圖3為3個組瘤胃液中相對豐度最高的前10種菌門的分析結(jié)果。結(jié)果顯示，3個組湖羊瘤胃液中的優(yōu)勢菌門均為擬桿菌門（Bacteroidota）和厚壁菌門（Firmicutes），兩種菌門占總細菌的92%～93%。與對照組相比，復方A2組的廣古菌門（Euryarchaeota）的相對豐度極顯著提高（Plt;0.01），復方A1組的廣古菌門（Euryarchaeota）的相對豐度變化不顯著（P＞0.05）；復方A1、A2組的螺旋體門 （Spirochaetota）的相對豐度極顯著降低（Plt;0.01）；其他菌門相對豐度無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.4.2 湖羊瘤胃屬水平物種組成分析

表6與圖4為3個組瘤胃液中相對豐度最高的前15種菌屬的分析結(jié)果。結(jié)果顯示3個組湖羊瘤胃液中的優(yōu)勢菌屬均為理研菌科RC9菌屬（Rikenellaceae_RC9_gut_group）和普雷沃氏菌屬（Prevotella）。與對照組相比，復方A1、A2組的理研菌科RC9菌屬（Rikenellaceae_RC9_gut_group）、真/優(yōu)桿菌屬（Eubacterium_ventriosum_group）相對豐度顯著降低（Plt;0.05）；復方A2組的月形單胞菌屬（Selenomonas）相對豐度顯著降低（Plt;0.05）；復方A1、A2組的未知屬擬桿菌目RF16菌（Bacteroidales_RF16_group）相對豐度顯提高（Plt;0.05）；復方A2組奎因氏菌屬（Quinella）相對豐度顯著提高（Plt;0.05）；其他菌屬相對豐度無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.5 瘤胃菌群與瘤胃發(fā)酵參數(shù)的相關(guān)性分析

通過 Spearman 相關(guān)性分析，對斷奶湖羊羔羊瘤胃顯著變化的屬水平菌群的相對豐度與瘤胃發(fā)酵參數(shù)之間進行關(guān)聯(lián)分析（圖 5）。結(jié)果顯示，瘤胃pH與乙酸、丙酸、總揮發(fā)性脂肪酸呈顯著負相關(guān)（Plt;0.01），與乙丙比呈顯著正相關(guān)（Plt;0.01）。乙丙比與Quinella呈負相關(guān)（Plt;0.05）。

3 討 論

3.1 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊生產(chǎn)性能的影響

本試驗結(jié)果表明，添加0.5%的健脾四胃復方制劑A可改善羔羊生產(chǎn)性能，可能與復方A的健脾益氣功效有關(guān)。有研究報道，山藥多糖可以提高仔豬的生長性能促進其生長^［13］，山楂黃酮可以提高斷奶仔豬的生長性能^［14］，蒼術(shù)多糖能刺激早期斷奶仔豬淋巴細胞增殖和抗體產(chǎn)生，提高仔豬抗病能力，降低腹瀉率^［15］。付戴波等^［16］研究發(fā)現(xiàn)，以藿香和蒼術(shù)為主藥組成的中藥復方可以提高熱應(yīng)激條件下錦江黃牛的日增重，并降低料重比，促進肉牛的生長。吳道義等^［17］通過在中藥組方（山楂、神曲、麥芽、貫眾等）中添加微生態(tài)制劑對其進行發(fā)酵，制備成中藥微生態(tài)制劑飼喂貴州黑山羊，研究發(fā)現(xiàn)，中藥微生態(tài)制劑能夠提高貴州黑山羊生長性能。這些結(jié)果與本研究一致。

3.2 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊瘤胃參數(shù)的影響

瘤胃pH是維持動物瘤胃正常發(fā)酵的重要指標之一，其變化與揮發(fā)性脂肪酸產(chǎn)生與緩沖液分泌的動態(tài)平衡有關(guān)^［18］，其正常變化范圍為6.0～7.5^［19］。本研究顯示，各組湖羊瘤胃pH為6.90～7.25，均在正常范圍內(nèi)，表明飼糧中添加健脾四胃復方添加劑不會影響斷奶湖羊瘤胃微生物的正常代謝，且與對照組相比，復方A2組的瘤胃pH極顯著降低。有研究報道，山藥多糖對腸道微生態(tài)具有一定的調(diào)節(jié)作用^［20］。初步推測可能是中藥健脾四胃方劑中所含的多糖等活性成分促進了斷奶湖羊瘤胃微生物降解代謝，產(chǎn)生了更多的揮發(fā)性脂肪酸，從而使pH降低。VFA （主要包括乙酸、丙酸、丁酸）是反芻動物主要的能量來源^［21-22］，反芻動物 70%～80% 的能量由 VFA提供。其中，丙酸發(fā)酵可提高能量利用率，對肉羊生長有利^［23-24］。本試驗結(jié)果表明，復方A2組丙酸含量極顯著提高、乙丙比極顯著下降、總揮發(fā)性脂肪酸極顯著提高。這提示添加中藥健脾四胃方劑A可能促進了羔羊營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。這與本試驗中復方A2組日增重的增加結(jié)果一致。有研究報道，中藥多糖可以改變瘤胃的發(fā)酵模式^［25］，飼喂富含多酚和皂苷的植物提取物可以提高總VFA和丙酸含量，降低乙酸/丙酸的比值^［26］。在飼糧中添加0.75%的蒼術(shù)精油可以提高錦江黃牛瘤胃的蛋白質(zhì)、纖維等物質(zhì)的降解率^［27］。

NH 3-N由日糧中各種含氮物質(zhì)經(jīng)瘤胃降解產(chǎn)生，過高或過低都會對瘤胃微生物產(chǎn)生不利影響，其有效濃度為5.0～30.0 mg·dL^-1［28］。本研究顯示，各健脾組湖羊的瘤胃液NH 3-N濃度為6.30～8.35 mg·dL^- 均屬于正常范圍，且復方A1、B2的NH 3-N含量顯著高于對照組。仉連平等^［29］在湖羊羔羊的基礎(chǔ)日糧中添加中草藥添加劑（當歸、黃芪、白術(shù)、山楂等）發(fā)現(xiàn)，中草藥制劑提高了瘤胃液中NH 3-N含量，與本試驗結(jié)果一致。本試驗瘤胃NH 3-N含量升高可能是因為中藥健脾四胃方劑中含有的活性成分促進瘤胃中蛋白質(zhì)的降解，從而為瘤胃微生物提供了充足的氮源。瘤胃液中的MCP主要由瘤胃細菌和原生動物使用NH 3-N合成^［30］，其含量用于衡量瘤胃發(fā)酵。本研究顯示，復方A1、B2的MCP含量顯著低于對照組。有研究發(fā)現(xiàn)，Prevotella_1豐度與MCP顯著正相關(guān)^［31］，這可能是中藥健脾四胃方劑在一定程度上減少了瘤胃中利用氨合成MCP的微生物，從而導致MCP含量的下降。

3.3 中藥健脾四胃復方制劑對湖羊瘤胃菌群組成的影響

本試驗通過16S rRNA測序技術(shù)，對斷奶湖羊瘤胃液菌群進行檢測。Mao等^［32］研究顯示，測序覆蓋率大于97%意味著樣本取樣充分。本試驗測序結(jié)果顯示，對照組、復方A1組、復方A2組的覆蓋指數(shù)都在99%以上，說明測序樣品取樣充分，本次測序結(jié)果能夠真實地反映斷奶湖羊瘤胃微生物種類和結(jié)構(gòu)多樣性。α多樣性指數(shù)中，Shannon和Simpson指數(shù)體現(xiàn)微生物菌群的多樣性，Shannon指數(shù)與菌群多樣性呈正相關(guān)，而Simpson指數(shù)與菌群多樣性呈負相關(guān)；物種數(shù)和Chao1指數(shù)體現(xiàn)微生物菌群的豐富度，且和菌群豐富度呈正相關(guān)。本試驗中復方A1組與復方A2組的物種數(shù)與Chao1指數(shù)均顯著提高，且Shannon指數(shù)極顯著提高，可能是因為中藥健脾四胃方劑A中所含有的活性成分對斷奶湖羊瘤胃微生物的調(diào)控作用使其瘤胃液中菌群豐富度和多樣性得到提高。

在門水平上，本試驗結(jié)果顯示，對照組和A1、A2組斷奶湖羊的瘤胃優(yōu)勢菌門均為Firmicutes和Bacteroidota，這與Wang等^［33］研究一致。且健脾四胃方劑A對斷奶湖羊瘤胃優(yōu)勢菌門的相對豐度無顯著影響。此外，本試驗中復方A2組Euryarchaeota的相對豐度顯著增加，且隨著飼糧中健脾四胃方劑A添加劑量的增加Euryarchaeota的相對豐度逐漸上升，推測原因可能是健脾四胃方劑A為其生長提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)，促進其生長。有研究報道，在牦牛飼料利用率和甲烷排放等方面廣古菌門發(fā)揮重要作用^［34］，低水平的甲烷排放與廣古菌門的存在密切相關(guān)^［35］，說明健脾四胃方劑A可能還在減少湖羊甲烷的排放，減少環(huán)境污染方面具有積極意義。有研究顯示在脾虛泄瀉模型大鼠中，Spirochaetota相對豐度顯著提高^［36］，本試驗中，復方A1、復方A2組Spirochaetota相對豐度顯著降低，且隨著飼糧中健脾四胃方劑A添加劑量的增加Spirochaetota相對豐度逐漸下降，可能是因為其所含有的活性成分促進了胃腸蠕動，起到了健脾的功效，抑制了螺旋體門菌群的生長。

在屬水平上，本試驗結(jié)果顯示，對照組和復方A1、A2組的斷奶湖羊瘤胃優(yōu)勢菌群為Rikenellaceae_RC9_gut_group和Prevotella。Rikenellaceae_RC9_gut_group屬于Rikenellaceae科，在碳水化合物或蛋白質(zhì)的發(fā)酵中發(fā)揮作用^［37］。有研究發(fā)現(xiàn)Rikenellaceae_RC9_gut_group相對豐度的增加與處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生有著密切關(guān)系^［38］。本試驗中復方A1、A2組的Rikenellaceae_RC9_gut_group相對豐度顯著下降，可能是因為中藥健脾四胃復方制劑A具有健脾理氣的作用，調(diào)節(jié)了斷奶湖羊瘤胃微生態(tài)的平衡，促進了斷奶湖羊瘤胃與其競爭關(guān)系菌群的生長發(fā)育，導致其相對豐度下降，對斷奶湖羊的健康起到了保護作用。此外，Wang等^［39］研究發(fā)現(xiàn)，瘤胃液中丙酸濃度與Firmicutes和Rikenellaceae_RC9_gut_group的相對豐度呈負相關(guān)。本試驗中瘤胃液中丙酸含量與Rikenellaceae_RC9_gut_group的相對豐度無顯著相關(guān)性。Prevotella是瘤胃中的優(yōu)勢細菌，在纖維降解中起著關(guān)鍵作用^［40］，雖然本試驗中對照組和復方A1、A2組斷奶湖羊Prevotella相對豐度無顯著差異，但是復方A2組高于對照組，可能是A2組的成分為Prevotella的生長繁殖提供營養(yǎng)。此外，復方A2組Prevotella相對豐度的提高促進了纖維的降解率，與本試驗瘤胃發(fā)酵復方A2組VFA的提高相互印證。Selenomonas屬于革蘭陰性厚壁菌，是一種淀粉降解菌^［41］，本試驗中隨著健脾四胃方劑A添加劑量的增加Selenomonas相對豐度逐漸下降，且復方A2組Selenomonas的相對豐度顯著下降，可能是健脾四胃方劑A中所含的活性成分抑制了Selenomonas的繁殖。有研究報道，用大麥和小麥顆粒誘導奶牛亞急性瘤胃酸中毒（SARA）發(fā)現(xiàn)，Selenomonas數(shù)量顯著增加^［42］，這提示中藥健脾四胃復方制劑A可能對斷奶湖羊SARA的發(fā)生具有一定的預防作用。Selenomonas屬下含有反芻獸月形單胞菌（Selenomonas ruminantium），有研究結(jié)果顯示Selenomonas ruminantium與丙酸呈負相關(guān)^［43］，與本試驗中復方A2組Selenomonas相對豐度與丙酸含量有負相關(guān)趨勢相似。此外，本試驗中復方A1、A2組Eubacterium_ventriosum_group的相對豐度顯著下降，Bacteroidales_RF16_group的相對豐度顯著提高。有研究發(fā)現(xiàn)，多糖和黃酮類化合物可以調(diào)節(jié)腸道菌群吸收和代謝^［44］。本試驗結(jié)果瘤胃菌群的變化可能是中藥健脾四胃復方制劑A中所含有的多糖以及黃酮類物質(zhì)等作用下發(fā)生相對豐度的增減。Quinella為韋榮菌科的一屬細菌，有研究報道，添加復方精油能夠顯著提高韋榮球菌屬的相對豐度^［45］。本試驗中隨著健脾四胃方劑A添加劑量的增加Quinella相對豐度逐漸提高，且復方A2組Quinella的相對豐度顯著提高，可能與中藥健脾四胃復方制劑A中精油類物質(zhì)為其提供了營養(yǎng)物質(zhì)，促進了Quinella的生長。瘤胃細菌群落極其復雜，是外界因素與動物自身相互作用的結(jié)果，其影響機制有待進一步研究。

4 結(jié) 論

在飼糧中添加0.5%的中藥健脾四胃復方制劑A，可提高斷奶湖羊瘤胃微生物的豐富度和多樣性，促進瘤胃丙酸型發(fā)酵，提高湖羊的生長性能。

參考文獻（References）：

［1］ 郭云霞，丁亞偉，徐艷輝，等.益生菌固態(tài)發(fā)酵料對羔羊斷奶前、后血液免疫、抗氧化指標及糞便消化酶的影響［J］.中國獸醫(yī)學報，2023，43（4）：777-785.

GUO Y X，DING Y W，XU Y H，et al.Effects of solid-state fermentation feed on blood immunity，antioxidant indexes and fecal digestive enzymes of lambs before and after weaning［J］.Chinese Journal of Veterinary Science，2023，43（4）：777-785.（in Chinese）

［2］ 王海玉，郭云霞，段春輝，等.復合益生菌對哺乳羔羊生長性能及斷奶應(yīng)激的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2023，35（8）：5250-5260.

WANG H Y，GUO Y X，DUAN C H，et al.Effects of compound probiotics on growth performance and weaning stress of lactating lambs［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2023，35（8）：5250-5260.（in Chinese）

［3］ 李 炯，唐亞楠，魏 賾，等.果寡糖對哺乳羔羊生長性能及斷奶應(yīng)激的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2024，36（1）：397-405.

LI J，TANG Y N，WEI Z，et al.Effects of fructooligosaccharides on growth performance and weaning stress of suckling lambs［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2024，36（1）：397-405.（in Chinese）

［4］ 郝晨曲，馬 云，馮 帆，等.中草藥飼料添加劑主要生物學功能及應(yīng)用［J］.草業(yè)科學，2020，37（8）：1638-1645.

HAO C Q，MA Y，F(xiàn)ENG F，et al.Primary biological function and application of Chinese herbal feed additives［J］.Pratacultural Science，2020，37（8）：1638-1645.（in Chinese）

［5］ 黃 源.健胃中藥對生長豬生產(chǎn)性能的影響研究［J］.浙江畜牧獸醫(yī)，2023，48（6）：1-3，9.

HUANG Y.The effect of stomach-strengthening Chinese medicine on performance of growing pigs［J］.Zhejiang Journal Animal Science and Veterinary Medicine，2023，48（6）：1-3，9.（in Chinese）

［6］ 李姣清，賴美辰，翁茁先，等.中藥復方制劑對雛雞生產(chǎn)性能、腸道結(jié)構(gòu)及微生物菌群的影響［J］.中國畜牧雜志，2020，56（5）：147-15 156.

LI J Q，LAI M C，WENG Z X，et al.Effects of Chinese herbal compound preparation on growth performance，intestinal structure and microbial flora of chicks［J］.Chinese Journal of Animal Science，2020，56（5）：147-15 156.（in Chinese）

［7］ LI Y，JI S Y，XU T，et al.Chinese yam （Dioscorea）：nutritional value，beneficial effects，and food and pharmaceutical applications［J］.Trends Food Sci Technol，2023，134：29-40.

［8］ MENG C，CENG L，ZHOU Z Y，et al.Traditional uses，phytochemistry，pharmacology，and safety concerns of hawthorn （Crataegus genus）：a comprehensive review［J］.J Ethnopharmacol，2023，319：117229-117229.

［9］ WANG M D，CHEN P X，YIN M，et al.Phytochemical and chemotaxonomic study on Atractylodes lancea［J］.Biochem Syst Ecol，2023，111：104734.

［10］ SONG Y Y，ZHANG T T，TANG H，et al.The complete mitochondrial genome of Aucklandia lappa Decne.（Asteraceae，Aucklandia Falc.）［J］.Mitochondrial DNA B，202 6（6）：1691-1693.

［11］ AHMAD T，CAWOOD M，IQBAL Q，et al.Phytochemicals in Daucus carota and their health benefits—review article［J］.Foods，2019，8（9）：424.

［12］ 馮宗慈，高 民.通過比色測定瘤胃液氨氮含量方法的改進［J］.畜牧與飼料科學，2010，31（6）：37.

FENG Z C，GAO M.Improvement of a colorimetric method for determination of ammonia nitrogen in rumen fluid［J］.Animal Husbandry and Feed Science，2010，31（6）：37.（in Chinese）

［13］ 張金洲，苗志國，趙偉鑫，等.山藥多糖對仔豬生長性能與腸道菌群的影響［J］.中國飼料，2020（23）：57-61.

ZHANG J Z，MIAO Z G，ZHAO W X，et al.Effect of yam polysaccharide on growth performance and intestinal microflora of piglets［J］.China Feed，2020（23）：57-61.（in Chinese）

［14］ 趙倩明，魏元浩.山楂黃酮對斷奶仔豬生長性能、免疫和抗氧化能力的影響［J］.豬業(yè)科學，2022，39（8）：88-90.

ZHAO Q M，WEI Y H.Effects of hawthorn flavonoids on growth performance，immunity and antioxidant capacity of weaned piglets［J］.Swine Industry Science，2022，39（8）：88-90.（in Chinese）

［15］ XU C L，ZHAO Y F，SHANG X Y，et al.The effects of supplementing diets with Atractylodes macrocephala Koidz rhizomes on growth performance and immune function in piglets［J］.J Anim Feed Sci，2012，21（2）：302-312.

［16］ 付戴波，瞿明仁，宋小珍，等.中藥復方制劑對熱應(yīng)激肉牛生產(chǎn)性能及養(yǎng)分消化率的影響［J］.中國畜牧雜志，2013，49（1）：53-56.

FU D B，QU M R，SONG X Z，et al.Effects of Chinese herbal compound preparation on performance and nutrient digestibility of beef cattle under heat stress［J］.Chinese Journal of Animal Science，2013，49（1）：53-56.（in Chinese）

［17］ 吳道義，馬金萍，宋德榮，等.中藥微生態(tài)制劑對貴州黑山羊生長性能及血清生化指標的影響［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2022（5）：101-104.

WU D Y，MA J P，SONG D R，et al.Effects of microecological preparation of traditional Chinese medicine on growth performance and serum biochemical indexes of Guizhou black goats［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，2022（5）：101-104.（in Chinese）

［18］ CHEN Q，CUI Y F，ZHANG Z X，et al.Effect of alfalfa supplementary change dietary non-fibrous carbohydrate （NFC） to neutral detergent fiber （NDF） ratio on rumen fermentation and microbial function in Gansu alpine fine wool sheep （Ovis aries）［J］.Anim Biotechnol，2024，35（1）：2262539.

［19］ AN Y W，WANG H R，ZI C Z，et al.Effects of adding Sophora alopecuroides to high concentrate diet on rumen fermentation parameters and microbial diversity of sheep［J］.Front Vet Sci，2023，10：1200272.

［20］ 張文杰，賴星海，陳佳薇.山藥多糖治療肥胖糖尿病腎病大鼠的效果觀察及對其腎功能和腸道微生態(tài)的影響［J］.中國微生態(tài)學雜志，202 33（1）：37-42.

ZHANG W J，LAI X H，CHEN J W.Effect of yam polysaccharides in the treatment of obese diabetic nephropathy rats and its effect on renal function and intestinal microecology［J］.Chinese Journal of Microecology，202 33（1）：37-42.（in Chinese）

［21］ TIAN G Y，ZHANG X Z，HAO X Y，et al.Effects of curcumin on growth performance，ruminal fermentation，rumen microbial protein synthesis，and serum antioxidant capacity in housed growing lambs［J］.Animals （Basel），2023，13（9）：1439.

［22］ ZHANG Q Y，ZHAO Y L，LI Y H，et al.Dietary polysaccharide-rich extract from noni （Morinda citrifolia L.） fruit modified ruminal fermentation，ruminal bacterial community and nutrient digestion in cashmere goats［J］.Animals （Basel），2023，13（2）：221.

［23］ TAETHAISONG N，PAENGKOUM S，NAKHARUTHAI C，et al.Effect of purple neem foliage as a feed supplement on nutrient apparent digestibility，nitrogen utilization，rumen fermentation，microbial population，plasma antioxidants，meat quality and fatty acid profile of goats［J］.Animals （Basel），2022，12（21）：2985.

［24］ BHATT R S，SAHOO A，GADEKAR Y P.Production performance of lambs on milk replacer during pre-weaning followed by post-weaning linseed and calcium soap supplementation［J］.Anim Feed Sci Technol，2018，240：140-156.

［25］ CHEN H，GUO B B，YANG M R，et al.Response of growth performance，blood biochemistry indices，and rumen bacterial diversity in lambs to diets containing supplemental probiotics and Chinese medicine polysaccharides［J］.Front Vet Sci，202 8：681389.

［26］ SHILWANT S，HUNDAL J S，SINGLA M，et al.Ruminal fermentation and methane production in vitro，milk production，nutrient utilization，blood profile，and immune responses of lactating goats fed polyphenolic and saponin-rich plant extracts［J］.Environ Sci Pollut Res，2022，30（4）：10901-10913.

［27］ 徐振松，瞿明仁，宋小珍，等.蒼術(shù)精油對錦江黃牛瘤胃體外發(fā)酵及養(yǎng)分降解率的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2014，26（8）：2373-2378.

XU Z S，QU M R，SONG X Z，et al.Effects of Rhizoma atractylodis oil on rumen fermentation and nutrient degradability in vitro in Jinjiang yellow cattle［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2014，26（8）：2373-2378.（in Chinese）

［28］ THAO N T，WANAPAT M，CHERDTHONG A，et al.Effects of eucalyptus crude oils supplementation on rumen fermentation，microorganism and nutrient digestibility in swamp buffaloes［J］.Asian-Australas J Anim Sci，2014，27（1）：46-54.

［29］ 仉連平，王 珂，于 軒，等.中草藥添加劑對湖羊羔羊育肥效果的研究［J］.飼料研究，2022，45（14）：10-14.

ZHANG L P，WANG K，YU X，et al.Study on fattening effect of Chinese herbal medicine additives on Hu sheep lambs［J］.Feed Research，2022，45（14）：10-14.（in Chinese）

［30］ SHI R H，DONG S Z，MAO J，et al.Dietary neutral detergent fiber levels impacting dairy cows’ feeding behavior，rumen fermentation，and production performance during the period of peak-lactation［J］.Animals （Basel），2023，13（18）：2876.

［31］ LI S J，ZENG H F，WANG C J，et al.Effect of methionine hydroxy analog on Hu sheep digestibility，rumen fermentation，and rumen microbial community in vitro［J］.Metabolites，2023，13（2）：169.

［32］ MAO S Y，ZHANG M L，LIU J H，et al.Characterising the bacterial microbiota across the gastrointestinal tracts of dairy cattle：membership and potential function［J］.Sci Rep，2015，5（1）：16116.

［33］ WANG D D，TANG G F，YU J J，et al.Litter size influences rumen microbiota and fermentation efficiency，thus determining host early growth in goats［J］.Front Microbiol，2023，14：1098813.

［34］ ZHOU Z M，F(xiàn)ANG L，MENG Q X，et al.Assessment of ruminal bacterial and archaeal community structure in yak （Bos grunniens）［J］.Front Microbiol，2017，8：179.

［35］ SHA Y Z，HU J，SHI B G，et al.Characteristics and functions of the rumen microbial community of cattle-yak at different ages［J］.Biomed Res Int，2020，2020：3482692.

［36］ 閆志強，翟少欽，張邑帆，等.脾虛泄瀉大鼠腸道菌群的組成和多樣性［J］.湖南農(nóng)業(yè)大學學報：自然科學版，202 47（5）：580-586.

YAN Z Q，ZHAI S Q，ZHANG Y F，et al.The composition and diversity of intestinal flora in rats with spleen deficiency diarrhea［J］.Journal of Hunan Agricultural University：Natural Sciences，202 47（5）：580-586.（in Chinese）

［37］ YAN X T，YAN B Y，REN Q M，et al.Effect of slow-release urea on the composition of ruminal bacteria and fungi communities in yak［J］.Anim Feed Sci Technol，2018，244：18-27.

［38］ 喬怡倩，聶夢珂，李 揚，等.慢性應(yīng)激對腸道屏障及結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響［J］.中華腫瘤防治雜志，2022，29（20）：1475-1483.

QIAO Y Q，NIE M K，LI Y，et al.Effect of chronic stress on intestinal barrier and liver metastasis of colorectal cancer［J］.Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment，2022，29（20）：1475-1483.（in Chinese）

［39］ WANG H B，HE Y，LI H，et al.Rumen fermentation，intramuscular fat fatty acid profiles and related rumen bacterial populations of Holstein bulls fed diets with different energy levels［J］.Appl Microbiol Biotechnol，2019，103（12）：4931-4942.

［40］ EMERSON E L，WEIMER P J.Fermentation of model hemicelluloses by Prevotella strains and Butyrivibrio fibrisolvens in pure culture and in ruminal enrichment cultures［J］.Appl Microbiol Biotechnol，2017，101（10）：4269-4278.

［41］ 張 林，夏海斌，徐 潔，等.飼糧非纖維性碳水化合物/中性洗滌纖維水平對奶牛瘤胃體外發(fā)酵參數(shù)和微生物區(qū)系的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2022，34（9）：5824-5839.

ZHANG L，XIA H B，XU J，et al.Effects of dietary non-fiber carbohydrate/neutral detergent fiber levels on rumen fermentation parameters and microflora of dairy cows in vitro［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2022，34（9）：5824-5839.（in Chinese）

［42］ PLAIZIER J C，LI S C，DANSCHER A M，et al.Changes in microbiota in rumen digesta and feces due to a grain-based subacute ruminal acidosis （SARA） challenge［J］.Microb Ecol，2017，74（2）：485-495.

［43］ 賈 鵬.荷斯坦泌乳牛的甲烷排放特征及減排調(diào)控的機制研究［D］.蘭州：蘭州大學，2023.

JIA P.Characteristics and regulation of enteric methane emissions from lactating Holstein dairy cows［D］.Lanzhou：Lanzhou University，2023.（in Chinese）

［44］ BAI Y F，YUE Z L，WANG Y N，et al.Synergistic effect of polysaccharides and flavonoids on lipid and gut microbiota in hyperlipidemic rats［J］.Food Funct，2023，14（2）：921-933.

［45］ 何佳楠，何叔年，康樺華，等.復方植物精油對黃羽肉雞生產(chǎn)性能和腸道菌群的影響［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學，2023，50（6）：116-125.

HE J N，HE S N，KANG H H，et al.Effect of compound plant essential oil on performance and intestinal microflora of yellow-feathered broilers［J］.Guangdong Agricultural Sciences，2023，50（6）：116-125.（in Chinese）

（編輯 范子娟）