淄博市難治性幽門螺桿菌耐藥性及耐藥基因分析

摘要：目的 比較細(xì)菌培養(yǎng)法和核酸檢測(cè)法對(duì)胃黏膜組織樣本中幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）的檢出率，通過檢測(cè)Hp對(duì)克拉霉素和左氧氟沙星的耐藥基因型與“金標(biāo)準(zhǔn)”培養(yǎng)法的耐藥表型進(jìn)行一致性比較，從而評(píng)估Hp對(duì)克拉霉素和左氧氟沙星耐藥性快速檢測(cè)的價(jià)值。方法 以2022年1月—2023年2月在淄博市第一醫(yī)院消化內(nèi)科就診的呼氣試驗(yàn)陽性且已經(jīng)經(jīng)過一次或以上四聯(lián)根除Hp治療的84例患者為研究對(duì)象，取胃黏膜組織樣本進(jìn)行Hp培養(yǎng)、Hp核酸檢測(cè)和克拉霉素、左氧氟沙星耐藥基因檢測(cè)，并對(duì)分離菌株進(jìn)行耐藥表型檢測(cè)。結(jié)果 84例胃黏膜組織樣本，培養(yǎng)法檢出Hp陽性60例（71.43%），陰性24例（28.57%），核酸檢測(cè)法檢出Hp陽性79例（94.05%），陰性5例（5.95%），兩種方法檢測(cè)Hp陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001）；60例培養(yǎng)陽性的Hp，對(duì)甲硝唑的耐藥率最高為88.3%，其次是對(duì)左氧氟沙星和克拉霉素，耐藥率均為73.3%，對(duì)四環(huán)素和呋喃唑酮的耐藥率均為1.7%，未發(fā)現(xiàn)對(duì)利福平和阿莫西林耐藥菌株，敏感率由高到低依次是對(duì)利福平、阿莫西林、呋喃唑酮、四環(huán)素、克拉霉素、左氧氟沙星、甲硝唑；核酸檢測(cè)法檢測(cè)Hp耐克拉霉素基因23S rDNA突變位點(diǎn)，與藥敏結(jié)果比較，一致率是91.67%，核酸檢測(cè)耐左氧氟沙星基因突變位點(diǎn)261A和271T，與藥敏結(jié)果比較，一致率為96.67%。結(jié)論 淄博地區(qū)檢出的Hp對(duì)克拉霉素和左氧氟沙星的耐藥率均已超過70%，不建議將其用于首次根除治療失敗的患者治療。核酸檢測(cè)法檢測(cè)Hp和耐藥基因與培養(yǎng)法一致性較高，可以用于對(duì)克拉霉素和左氧氟沙星的耐藥性快速檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌；耐藥性；耐藥基因；克拉霉素；左氧氟沙星

中圖分類號(hào)：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Drug resistance and resistance gene analysis of Helicobacter pylori in Zibo City

Wang Ping1， Li Shiguang2， Chen Qun1， Feng Xinqian1， and Li Qing1

（1 Clinical Laboratory， Zibo First Hospital， Zibo Key Laboratory of Molecular Immunology of Laboratory Medicine， Zibo 255200; 2 Department of Gastroenterology， Zibo First Hospital， Zibo 255200）

Abstract Objective The detection rate of Helicobacter pylori （Hp） in gastric mucosal tissue samples was compared between the bacterial culture method and the nucleic acid detection method. The consistency of the resistance genotypes of Hp to clarithromycin and levofloxacin was compared with that of the \"gold standard\" culture method to evaluate the value of rapid detection for Hp to clarithromycin and levofloxacin resistance. Methods" "A total of 84 patients with positive breath tests and one or more quadruple eradications of Hp from January 2022 to February 2023 in the Department of Gastroenterology， Zibo First Hospital， were enrolled in the study. Gastric mucosal tissue samples were taken for Hp culture， Hp nucleic acid detection， clarithromycin and levofloxacin resistance gene detection， and isolated strains were entered testing for resistant phenotypes is performed. Results" " Of the 84 gastric mucosal tissue samples， 60 （71.43%） positive and 24 （28.57%） negative Hp were detected by the culture method， while 79 （94.05%） positive and 5 （5.95%） negative Hp were detected by the nucleic acid detection method， and the difference was statistically significant （Plt;0.001）. The highest resistance rate to metronidazole was 88.3% in 60 positive Hp cultures， followed by levofloxacin and clarithromycin （73.3%）， tetracycline and furazolidone （1.7%）. No strains resistant to rifampicin and amoxicillin were found， and the susceptibility to antibiotics from high to low was rifampicin， amoxicillin， furazolidone， tetracycline， clarithromycin， levofloxacin and metronidazole. The consistent rate of 23S rDNA mutation of Hp nikramycin gene detected by nucleic acid assay was 91.67%， and that of 261A and 271T mutation of Hp levofloxacin resistance gene detected by nucleic acid assay was 96.67%. Conclusion" " Hp resistance to clarithromycin and levofloxacin had exceeded 70%. As a result， it was not recommended to use it in the treatment of patients who have failed the first eradication treatment in Zibo. Nucleic acid testing for Hp and resistance genes was consistent with culture， and it can be used for rapid detection of resistance to clarithromycin and levofloxacin.

Key words Helicobacter pylori; Resistance; Resistance genes; Clarithromycin; Levofloxacin

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）是一種寄居在人胃內(nèi)的革蘭陰性菌，可引起不同程度的胃腸道疾病，如消化不良、慢性胃炎、消化性潰瘍和胃惡性腫瘤等。Hp感染還與多種胃腸道外疾病如缺鐵性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫病、心血管疾病、腦血管疾病等密切相關(guān)[1]。我國Hp平均感染率約為60%，有些地區(qū)甚至可達(dá)80%，消化道慢性疾病及惡性腫瘤發(fā)病率也較高[2-3]。根除Hp可以有效緩解Hp感染引起的消化道疾病，且可減緩胃黏膜萎縮及腸上皮化生，從而可降低惡性腫瘤的發(fā)生率[3-4]。目前能用于Hp根除治療的抗生素主要有阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、四環(huán)素、利福平、左氧氟沙星和甲硝唑，然而隨著越來越多抗生素的不合理使用及Hp的不規(guī)范治療導(dǎo)致了Hp的耐藥率現(xiàn)持續(xù)上升的趨勢(shì)，并且在我國不同的地區(qū)，Hp的耐藥性呈現(xiàn)明顯的地域差異，主要的傳播途徑是家庭成員之間的傳播[5]。因此，針對(duì)某地區(qū)的Hp常用抗生素的藥物敏感性檢測(cè)可以指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，從而能提高Hp的根除成功率[6]。近幾年，Hp對(duì)于甲硝唑、左氧氟沙星和克拉霉素的耐藥性呈持續(xù)上升，Hp對(duì)于甲硝唑的耐藥機(jī)制復(fù)雜，難以檢測(cè)。目前能用核酸檢測(cè)法檢測(cè)耐藥性的藥物只有克拉霉素和左氧氟沙星，Hp對(duì)克拉霉素的耐藥主要是Hp23S rDNA基因突變導(dǎo)致的[7]，而Hp對(duì)左氧氟沙星的耐藥主要是Hp gyrA基因中喹諾酮耐藥決定區(qū)突變導(dǎo)致的，以261A和271T突變位點(diǎn)最為常見[8]。本研究通過Hp培養(yǎng)和耐藥基因突變的檢測(cè)對(duì)難根除性Hp患者提供個(gè)體化治療依據(jù)，并通過兩種耐藥性檢測(cè)方法的比較為后續(xù)要根除Hp感染的患者選擇更合適檢測(cè)方法，從而有效提高Hp根除率。本研究已通過淄博市第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，并取得所有患者的知情同意。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2022年1月—2023年2月淄博市第一醫(yī)院收治的難根除性Hp患者84例作為研究對(duì)象。其中，患者（男47例，女37例）年齡為8～67歲，平均年齡為（51.15±14.25）歲。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者呼氣試驗(yàn)陽性，且已經(jīng)經(jīng)過1次以上療程規(guī)范的四聯(lián)療法進(jìn)行Hp根除治療（14 d為一療程），根除治療結(jié)束1月以上呼氣試驗(yàn)仍為陽性者；②患者已經(jīng)過1次以上療程的四聯(lián)療法進(jìn)行Hp根除治療（14 d為一療程），根除治療結(jié)束1月以上且消化道癥狀改善不明顯者。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：①心肝腎功能等嚴(yán)重受損者；②有胃出血、穿孔、幽門梗阻及癌癥等嚴(yán)重并發(fā)癥者；③妊娠或哺乳期婦女；④精神病患者。

1.2 儀器與材料

1.2.1 儀器

Autof ms1000全自動(dòng)微生物質(zhì)譜檢測(cè)儀（鄭州安圖工程股份有限公司），Steri-Cycle大氣培養(yǎng)箱（賽默飛世爾），MPI多功能微生物培養(yǎng)系統(tǒng)（廣州尤德生物科技有限公司），EZ bead型全自動(dòng)核酸純化儀（見微生物科技有限公司）和SLAN-96擴(kuò)增儀（上海宏石醫(yī)療科技有限公司）。

1.2.2 材料

Hp培養(yǎng)專用哥倫比亞馬血平板、巧克力平板、藥敏血平板及轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基（蘇州啟新生物科技有限公司）；E-test條[包括克拉霉素（CLA）、甲硝唑（MNZ）、呋喃唑酮（FRZ）、四環(huán)素（TE）、阿莫西林（AMX）、左氧氟沙星（LEV）、利福平（RD），溫州市康泰生物科技有限公司]；提取試劑（見微生物科技有限公司）、Hp檢測(cè)試劑盒、Hp左氧氟沙星耐藥突變檢測(cè)試劑盒、Hp克拉霉素耐藥突變檢測(cè)試劑盒（蘇州長(zhǎng)柏生物科技有限公司）；一次性無菌接種環(huán)（江蘇新康醫(yī)療器械有限公司）和一次性研磨器（南通市百思泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司）。

1.2.3 質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的質(zhì)控采用細(xì)菌生長(zhǎng)法，購買的新批次培養(yǎng)基用標(biāo)準(zhǔn)菌株幽門螺桿菌ATCC43504劃線，按照Hp培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，觀察72 h后的菌落形態(tài)，菌落呈針尖樣（直徑為0.5～1.0 mm）、濕潤(rùn)、半透明狀可判斷為菌株生長(zhǎng)良好，即為培養(yǎng)基合格。藥敏試紙條的質(zhì)控菌株采用肺炎鏈球菌ATCC49619和脆弱擬桿菌ATCC25285，質(zhì)控方法及范圍參考CLSI" M100 S31[9]。具體質(zhì)控范圍及質(zhì)控孵育條件見表1。

1.3 方法

1.3.1 Hp培養(yǎng)

對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行內(nèi)鏡檢查，取胃體部潰瘍部位組織2～3塊，放入Hp轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基內(nèi)，室溫暫存，24 h內(nèi)送微生物實(shí)驗(yàn)室，用一次性無菌接種環(huán)挑取胃黏膜組織無菌操作放置于一次性研磨器中研磨1 min，加入500 μL無菌生理鹽水混勻，然后取200 μL勻漿涂抹于含馬血哥倫比亞培養(yǎng)基上，并用1次性無菌接種環(huán)三區(qū)劃線，置于微需氧環(huán)境（6% O2，8% CO2，86%N2，高濕度）中，在 37 ℃孵箱培養(yǎng)3 d。其余300 μL勻漿于-35 ℃冷凍保存，備用。

1.3.2 菌株鑒定

將培養(yǎng)出的細(xì)菌株純化培養(yǎng)后使用飛行質(zhì)譜儀鑒定。

1.3.3 藥敏試驗(yàn)

將培養(yǎng)72 h且確定為Hp的菌株配制成6×108 個(gè)/mL的菌懸液，均勻涂抹于Hp藥敏培養(yǎng)基上[8]，采用E-test條法[9]進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[4]，孵育環(huán)境同分離培養(yǎng)，3 d后觀察藥敏結(jié)果[10-11]，折點(diǎn)范圍參考CLSI M45 A3[10]和EUCAST 2014年藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[12]。

1.3.4 耐藥基因檢測(cè)

將冷凍保存的胃黏膜組織研磨后的勻漿取出，融化后恢復(fù)至室溫，混勻后用移液器取300 μL勻漿加入核酸提取板中進(jìn)行核酸提取，分別取2 μL提取產(chǎn)物加入Hp檢測(cè)試劑、Hp耐左氧氟沙星基因突變檢測(cè)試劑、Hp耐克拉霉素基因突變檢測(cè)試劑中，按照試劑說明書在SLAN-96擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增。Hp陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)為：FAM熒光CT值≤38，內(nèi)標(biāo)HEX熒光CT值≤38；克拉霉素判讀標(biāo)準(zhǔn)為：FAM熒光CT值≤38，克拉霉素敏感，HEX熒光CT值≤38，克拉霉素耐藥；左氧氟沙星判讀標(biāo)準(zhǔn)：261A突變位點(diǎn)FAM熒光CT值≤38，左氧氟沙星敏感，HEX熒光CT值≤38，左氧氟沙星耐藥，271T突變位點(diǎn)結(jié)果判讀同261A。

質(zhì)量控制：試劑盒內(nèi)陽性質(zhì)控判讀為陽性，陰性質(zhì)控判讀為陰性，且每一次擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)HEX熒光CT值均≤38。

1.3.5 不一致結(jié)果處理

若培養(yǎng)法為敏感，但耐藥基因檢測(cè)陽性；或培養(yǎng)法為耐藥，但耐藥基因檢測(cè)陰性樣本判定為結(jié)果不一致，若出現(xiàn)兩種方法不一致的情況，用培養(yǎng)出的菌株重復(fù)檢測(cè)耐藥基因進(jìn)行驗(yàn)證。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用Whonet5.6版細(xì)菌藥敏統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)Hp藥敏結(jié)果。用SPSS 22.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)、百分?jǐn)?shù)和百分之五十、百分之九十位數(shù)表示，率的比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)McNemar，兩種檢測(cè)方法的一致性分析采用κ值（κgt;0.75表明一致性極好，κ=0.4～0.75表明一致性尚可，κlt;0.4表明一致性差）來表示。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)法和核酸檢測(cè)法Hp檢出陽性率比較

共收集84例胃黏膜標(biāo)本，培養(yǎng)法檢出Hp陽性60例（71.43%），陰性24例（28.57%），核酸檢測(cè)法檢出Hp陽性79例（94.05%），陰性5例（5.95%），兩種方法檢測(cè)Hp陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001），見表2。

2.2 60株Hp的藥敏結(jié)果

60例培養(yǎng)陽性的Hp，對(duì)甲硝唑的耐藥率最高為88.3%，其次是對(duì)左氧氟沙星和克拉霉素，耐藥率均為73.3%，對(duì)四環(huán)素和呋喃唑酮的耐藥率均為1.7%，未發(fā)現(xiàn)對(duì)利福平和阿莫西林耐藥菌株，對(duì)抗生素的敏感率由高到低依次是利福平、阿莫西林、呋喃唑酮、四環(huán)素、克拉霉素、左氧氟沙星和甲硝唑，見表3。

2.3 60例Hp多重耐藥分布情況

60例培養(yǎng)陽性的Hp中，30株對(duì)左氧氟沙星、克拉霉素和甲硝唑耐藥，三重耐藥率50%；9株對(duì)左氧氟沙星和甲硝唑耐藥，3株對(duì)克拉霉素和甲硝唑耐藥，1株對(duì)左氧氟沙星和克拉霉素耐藥，二重耐藥率21.7%，見表4。

2.4 60例Hp耐藥基因檢測(cè)結(jié)果

克拉霉素耐藥基因陽性43株，陰性17株；左氧氟沙星耐藥基因陽性43株，陰性17株，見表5。

2.6 60例Hp耐藥表型與基因型一致性比較

核酸檢測(cè)法檢測(cè)Hp克拉霉素耐藥基因23S rDNA 突變位點(diǎn)，與藥敏結(jié)果比較，一致率是91.67%，一致性檢驗(yàn)κ值=0.791，Plt;0.001；核酸檢測(cè)左氧氟沙星耐藥突變位點(diǎn)261A和271T，與藥敏結(jié)果比較，一致率為96.67%，κ值=0.918，Plt;0.001。一致性檢驗(yàn)結(jié)果表明兩種檢驗(yàn)?zāi)退幮缘姆椒ㄒ恢滦暂^好，見表6～7。

3 討論

我國Hp感染率高，且與當(dāng)?shù)氐男l(wèi)生條件、經(jīng)濟(jì)狀況、生活習(xí)慣等息息相關(guān)[13]。在目前市面上眾多檢測(cè)Hp的方法中，培養(yǎng)法是Hp診斷和藥敏的“金標(biāo)準(zhǔn)”，并且可以獲得多種抗生素的耐藥性結(jié)果，臨床可通過藥敏結(jié)果選擇適合的四聯(lián)診療方案；然而，培養(yǎng)法劣勢(shì)是檢測(cè)成本和技術(shù)要求高（常規(guī)開展有一定困難），培養(yǎng)陽性率偏低，耗時(shí)較長(zhǎng)。核酸檢測(cè)法可通過檢測(cè)Hp產(chǎn)生的尿素酶基因，從而判斷患者是否Hp感染，優(yōu)勢(shì)是簡(jiǎn)便快速，陽性率較高，且能同時(shí)對(duì)耐藥率較高的克拉霉素和左氧氟沙星進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)，除了胃黏膜組織樣本外，還能對(duì)患者的糞便進(jìn)行Hp檢測(cè)，屬于無創(chuàng)傷性檢查。本研究中，通過對(duì)呼氣試驗(yàn)陽性的患者同時(shí)用兩種方法進(jìn)行Hp陽性率比較，結(jié)果顯示核酸檢測(cè)法陽性率明顯高于培養(yǎng)法。原因是培養(yǎng)法既對(duì)Hp菌量要求較高，也對(duì)培養(yǎng)條件要求苛刻，且上消化道的雜菌也會(huì)影響Hp的生長(zhǎng)，而核酸檢測(cè)法是基于Hp菌體產(chǎn)生的尿素酶，是靶向基因擴(kuò)增，因此不受其它雜菌的影響，陽性率更高。

我國Hp的發(fā)生率高，耐藥率也高，有一項(xiàng)調(diào)查我國四聯(lián)根除Hp治療效果的研究顯示，二聯(lián)抗生素克拉霉素和阿莫西林的Hp根除成功率為83.5%，而甲硝唑和克拉霉素的Hp根除成功率僅為54.7%[14]。導(dǎo)致Hp根除失敗的原因除了患者本身依從性低、口腔細(xì)菌殘留導(dǎo)致的二次感染、體外來源的二次感染和質(zhì)子泵抑制劑抑酸不充分外，還有細(xì)菌耐藥的發(fā)生。有研究顯示，Hp對(duì)甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星呈現(xiàn)較高的耐藥性，這與在日常治療過程中以上3種抗生素的過度暴露有關(guān)[6]。國內(nèi)另一項(xiàng)研究顯示，Hp對(duì)甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星的耐藥率分別為78%、34%和35%[15]，而本研究中Hp對(duì)甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星的耐藥率分別為88.3%、73.3%和73.3%，明顯高于之前研究。分析原因除了Hp耐藥性有明顯的地域差異外[16]，還有本研究的對(duì)象已經(jīng)過1次或1次以上根除治療而呼氣試驗(yàn)仍為陽性的患者，為難治性Hp感染的患者，而上述研究的對(duì)象為未經(jīng)過治療的Hp患者。因此，本研究中Hp對(duì)此3種抗生素的耐藥率明顯高于前研究。此外，Hp藥敏方法的不同可能也會(huì)導(dǎo)致耐藥性結(jié)果的差異，美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standard Institute， CLSI）推薦的Hp標(biāo)準(zhǔn)藥敏方法為瓊脂平板稀釋法，但由于該方法操作復(fù)雜，目前沒有成熟且上市的試劑盒可用，不適用于臨床常規(guī)開展，《第六次全國幽門螺桿菌感染處理共識(shí)報(bào)告（非根除治療部分）》中“感染的診斷”陳述6中提到“H．pylori表型耐藥檢測(cè)方法包括瓊脂稀釋法、濃度梯度（E-test）法、紙片擴(kuò)散法和微量肉湯稀釋法”，本研究采用E-test條法替代瓊脂平板稀釋法[4]。李紅等[11]做的研究結(jié)果顯示，Hp對(duì)甲硝唑的藥敏結(jié)果偏耐藥，因此Hp對(duì)甲硝唑的耐藥率比之前的研究更高些。另有研究顯示，Hp對(duì)抗生素二重耐藥率為23%，三重耐藥率為20%[17]，而本研究中Hp對(duì)抗生素的二重耐藥率為21.7%，三重耐藥率為50%，本研究中Hp多重耐藥率高的原因除了方法學(xué)導(dǎo)致的Hp對(duì)甲硝唑高耐藥性外，依然是本項(xiàng)研究的對(duì)象是難治性Hp感染的患者，而多次根除失敗的患者體內(nèi)感染的Hp 90%是多重耐藥菌[18]，因此，本研究中Hp的多重耐藥率更高。本研究中60例Hp對(duì)甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星的MIC50分別是32、8和32 μg/mL，MIC90分別是32、256和32 μg/mL，以折點(diǎn)范圍為基線，此結(jié)果均已在耐藥范圍，因此這3種藥物均已不推薦用作Hp的根除經(jīng)驗(yàn)治療一線用藥。

Hp根除治療失敗的很重要的一個(gè)原因是對(duì)抗生素的高耐藥性，根據(jù)藥敏結(jié)果選擇合適的抗生素進(jìn)行精準(zhǔn)治療是Hp根除治療的指導(dǎo)原則[19]，如果能給臨床醫(yī)生提供精準(zhǔn)的藥敏結(jié)果，即便是在抗生素高耐藥的地區(qū)，也可獲得較好的治療效果[20-21]。有研究指出，在確定使用針對(duì)Hp的抗生素的根除方案前，都應(yīng)采用分子生物學(xué)方法或藥敏試驗(yàn)檢測(cè)Hp對(duì)所用抗生素的敏感性[22]。近幾年，Hp對(duì)甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素的耐藥性持續(xù)上升，Hp對(duì)甲硝唑的耐藥機(jī)制復(fù)雜，核酸法難以檢測(cè)，目前只能用核酸法檢測(cè)Hp對(duì)克拉霉素和左氧氟沙星耐藥的耐藥基因。Hp對(duì)克拉霉素的耐藥主要是Hp23S rDNA基因突變導(dǎo)致的[6]，而Hp對(duì)左氧氟沙星的耐藥主要是 Hp gyrA基因中喹諾酮耐藥決定區(qū)突變導(dǎo)致的，以261A和271T突變位點(diǎn)最為常見[8]。由于本研究發(fā)現(xiàn)耐克拉霉素和左氧氟沙星基因突變與耐藥表型有較高的相關(guān)性，使得通過分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)耐藥基因突變來推測(cè)耐藥表型成為可能。核酸檢測(cè)耐藥基因突變法的優(yōu)勢(shì)是陽性率比培養(yǎng)法高，耗時(shí)遠(yuǎn)低于培養(yǎng)法，劣勢(shì)是該方法只能檢測(cè)針對(duì)耐克拉霉素和左氧氟沙星的突變位點(diǎn)，其他藥物不能獲得其耐藥性，且對(duì)左氧氟沙星有多個(gè)耐藥基因突變位點(diǎn)，該方法只能檢測(cè)其中比例較高的2個(gè)位點(diǎn)，不能涵蓋所有的突變位點(diǎn)。有研究顯示：商品化的核酸檢測(cè)耐藥基因突變法診斷Hp對(duì)左氧氟沙星和克拉霉素耐藥的靈敏度和特異度均＞90%[23]。本研究結(jié)果顯示：與金標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法相比較，核酸檢測(cè)耐克拉霉素基因的符合率為91.7%，核酸檢測(cè)耐左氧氟沙星基因的符合率為96.7%，且陽性率為94.0%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于“金標(biāo)準(zhǔn)”細(xì)菌培養(yǎng)法的71.4%。本研究中有5例耐克拉霉素基因和2例耐左氧氟沙星基因突變與耐藥表型不一致，且這7例均已通過菌株檢測(cè)耐藥基因進(jìn)行了確認(rèn)，與胃黏膜所做結(jié)果一致。宋順佳等[24]的研究結(jié)果顯示35株左氧氟沙星耐藥的Hp中有17.1%的菌株gyrA基因未發(fā)生任何位點(diǎn)突變。而潘美伶等[2，5]的研究中有32株克林霉素敏感的Hp中檢出4例23S rDNA基因突變菌株，占比12.5%。綜上所述，耐藥表型與耐藥基因的檢出并不完全一致，分析原因?yàn)椋孩倌退幓虻捅磉_(dá)不足以導(dǎo)致Hp對(duì)抗菌藥物耐藥；②這兩種藥物可能存在其它耐藥基因檢測(cè)位點(diǎn)；③部分Hp菌株可能存在其它的耐藥機(jī)制導(dǎo)致其對(duì)抗菌藥物耐藥而未檢出耐藥基因；④由于培養(yǎng)法Hp細(xì)菌菌落很小，且細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)環(huán)境及培養(yǎng)基新鮮程度高度相關(guān)，因此在判讀藥敏結(jié)果時(shí)會(huì)存在個(gè)體差異。綜上所述，無論是培養(yǎng)法還是耐藥基因檢測(cè)法檢測(cè)Hp的耐藥性都有其方法學(xué)的缺陷，可能導(dǎo)致臨床靶向治療的失敗，因此，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合培養(yǎng)法和耐藥基因檢測(cè)結(jié)果等多種方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行抗菌藥物的選擇。

參 考 文 獻(xiàn)

國家消化系疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心（上海）、國家消化道早癌防治中心聯(lián)盟、中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)Hp和消化性潰瘍學(xué)組、全國Hp研究協(xié)作組. 中國居民家庭幽門螺桿菌的防控和管理專家共識(shí)[J]. 中華消化雜志， 2021， 41（4）： 221-233.

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文章編號(hào)：1001-8689（2024）09-1038-07

收稿日期：2023-07-27

項(xiàng)目基金：山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No. sdLDL-C， No. 2018WS008）；淄博市醫(yī)藥衛(wèi)生科研項(xiàng)目（No. 20231800128）

作者簡(jiǎn)介：王萍，女，生于1983年，碩士，主管技師，主要研究方向?yàn)榕R床微生物，E-mail： apple830310@163.com

*通信作者，E-mail： LQDL@263.net