慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)及其與心功能和預(yù)后的關(guān)系

摘要目的：探討慢性心力衰竭病人血清微小RNA-181b-5p（miR-181b-5p）、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）肺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物1（LUCAT1）表達(dá)及其與心功能和預(yù)后的關(guān)系。方法：選取2020年1月—2021年1月在我院治療的慢性心力衰竭病人80例（觀察組），根據(jù)美國(guó)紐約心臟病協(xié)會(huì)（NYHA）心功能分級(jí)將病人分為Ⅱ級(jí)組（34例）、Ⅲ級(jí)組（28例）和Ⅳ級(jí)組（18例）；根據(jù)病人預(yù)后情況分為預(yù)后良好組（52例）和預(yù)后不良組（28例）。另選取同期門(mén)診健康體檢者40名作為對(duì)照組。比較各組血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平及臨床資料；Pearson法分析miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平的相關(guān)性；Logistic回歸分析慢性心力衰竭病人預(yù)后的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平對(duì)慢性心力衰竭病人預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果：觀察組血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平高于對(duì)照組，且隨著NYHA心功能分級(jí)的升高而升高（P＜0.05）。Pearson相關(guān)分析顯示，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平呈正相關(guān)（r＝0.780，P＜0.001）。多因素Logistic回歸分析顯示，miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、N末端B型利鈉肽（NT-proBNP）、左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）是慢性心力衰竭病人預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）是慢性心力衰竭病人預(yù)后的保護(hù)因素（P＜0.05）。血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1二者聯(lián)合預(yù)測(cè)慢性心力衰竭病人預(yù)后的ROC曲線下面積（AUC）為0.950，敏感度為89.29%，特異度為98.08%，優(yōu)于單獨(dú)預(yù)測(cè)（Z二者聯(lián)合 vs miR-181b-5p＝2.808，Z二者聯(lián)合 vs lncRNA LUCAT1＝3.602，P值分別為0.005，0.035）。結(jié)論：慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平與心功能及預(yù)后密切相關(guān)，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性心力衰竭病人預(yù)后有較好的臨床價(jià)值。

關(guān)鍵詞慢性心力衰竭；微小RNA-181b-5p；長(zhǎng)鏈非編碼RNA；肺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物1；預(yù)后

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.18.019

慢性心力衰竭是以心室重構(gòu)、心肌炎癥、血流動(dòng)力學(xué)異常、心臟功能障礙等多種心臟異常為特征的復(fù)雜臨床綜合征［1］。隨著人口進(jìn)入老齡化，慢性心力衰竭發(fā)病率和死亡率不斷增加，給病人和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［2］。因此，尋找早期診斷及預(yù)測(cè)預(yù)后的生物標(biāo)志物，對(duì)慢性心力衰竭的治療具有重要的臨床意義。微小RNA（miRNA）是一種內(nèi)源性非編碼小RNA，在細(xì)胞增殖、分化、遷移、分泌和凋亡等不同生理?xiàng)l件下發(fā)揮著關(guān)鍵作用［3］。有研究表明，miR-181b-5p不僅參與細(xì)胞過(guò)程，且與炎癥反應(yīng)、血管性疾病、腫瘤發(fā)生等眾多生物學(xué)進(jìn)程有關(guān)［4-5］。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）是一種新型的非編碼RNA，通過(guò)與蛋白質(zhì)、RNA和DNA相互作用調(diào)節(jié)基因表達(dá)［6］。lncRNA肺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物1（LUCAT1）位于人類(lèi)5號(hào)染色體q14.3區(qū)反義鏈，最早在吸煙的肺癌病人中發(fā)現(xiàn)，且與肺癌病人的不良預(yù)后有關(guān)［7］。有研究顯示，抑制lncRNA LUCAT1表達(dá)可減輕心肌細(xì)胞損傷，進(jìn)而發(fā)揮保護(hù)心肌的作用［8］。目前，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平及其與預(yù)后的關(guān)系研究報(bào)道較少。本研究通過(guò)檢測(cè)慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平，分析二者與慢性心力衰竭病人病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系，以期為慢性心力衰竭病人的診治和預(yù)后改善提供參考。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選取2020年1月—2021年1月在我院治療的慢性心力衰竭病人80例（觀察組），根據(jù)美國(guó)紐約心臟病協(xié)會(huì)（NYHA）心功能分級(jí)［9］將病人分為Ⅱ級(jí)組（34例）、Ⅲ級(jí)組（28例）和Ⅳ級(jí)組（18例）；以電話及門(mén)診復(fù)查的方式對(duì)慢性心力衰竭病人進(jìn)行1年隨訪，觀察病人預(yù)后，根據(jù)病人預(yù)后情況分為預(yù)后良好組（52例）和預(yù)后不良組（28例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合慢性心力衰竭的診斷標(biāo)準(zhǔn)［10］；年齡18～80歲；入院后經(jīng)超聲心動(dòng)圖進(jìn)一步檢查并確診；所有研究對(duì)象對(duì)本研究?jī)?nèi)容知曉，并自愿簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有先天性心臟病、急性心肌炎等疾?。徊±Y料不完整；惡性腫瘤晚期；自身免疫性疾病等。本研究遵循《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》。另選取同期門(mén)診健康體檢者40名作為對(duì)照組。

1.2方法

1.2.1樣本收集

抽取慢性心力衰竭病人入院次日清晨、對(duì)照組體檢當(dāng)天空腹靜脈血3～5 mL于干燥試管，以3 500 r/min離心10 min（離心半徑12 cm），分離血清后，分裝于無(wú)菌EP管中，于－20 ℃冰箱中保存，待檢。

1.2.2血清miR-181b-5p和lncRNA LUCAT1水平檢測(cè)

采用RNA提取試劑盒（上海生工生物有限公司）提取血清樣品總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（德國(guó)Qiagen公司）按說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測(cè)血清miR-181b-5p和lncRNA LUCAT1相對(duì)表達(dá)量。根據(jù)ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒（南京諾唯贊生物科技股份有限公司）說(shuō)明書(shū)配制反應(yīng)體系，反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火1 min，72 ℃延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。在ABI 7500 Fast系統(tǒng)上進(jìn)行qRT-PCR。以U6、GAPDH作為內(nèi)參，根據(jù)2－△△Ct法計(jì)算miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1基因的相對(duì)表達(dá)量。基因引物經(jīng)軟件設(shè)計(jì)后由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。

1.2.3觀察指標(biāo)

慢性心力衰竭病人入院次日清晨、對(duì)照組體檢當(dāng)天采用超聲心動(dòng)圖測(cè)定左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）。采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（貨號(hào)：ml061452）檢測(cè)N末端B型利鈉肽（NT-proBNP），試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較行SNK-q檢驗(yàn)；定性資料以例數(shù)、百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。Pearson法分析慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平的相關(guān)性；Logistic回歸分析慢性心力衰竭的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-181b-5p和lncRNA LUCAT1水平對(duì)慢性心力衰竭病人預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組臨床資料比較

與對(duì)照組比較，觀察組LVEF降低，NT-proBNP、LVEDD、LVESD升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。詳見(jiàn)表2。

2.2不同NYHA心功能分級(jí)的慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平比較

隨著NYHA心功能分級(jí)的升高，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平逐漸升高（P＜0.05）。詳見(jiàn)表3。

2.3慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平的相關(guān)性分析

Pearson法分析顯示，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平呈正相關(guān)（r＝0.780，P＜0.001）。詳見(jiàn)圖1。

2.4不同預(yù)后的慢性心力衰竭病人臨床資料比較

與預(yù)后良好組比較，預(yù)后不良組LVEF降低，NT-proBNP、LVEDD、LVESD升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。詳見(jiàn)表4。

2.5不同預(yù)后的慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平比較

與預(yù)后良好組比較，預(yù)后不良組miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達(dá)水平增加（P＜0.001）。詳見(jiàn)表5。

2.6慢性心力衰竭病人預(yù)后的影響因素

以慢性心力衰竭病人預(yù)后為因變量（預(yù)后不良＝1，預(yù)后良好＝0），以血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、NT-proBNP、LVEF、LVEDD、LVESD為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示：miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、NT-proBNP、LVEDD、LVESD是慢性心力衰竭病人預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），LVEF是慢性心力衰竭病人預(yù)后的保護(hù)因素（P＜0.05）。詳見(jiàn)表6。

2.7血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1對(duì)慢性心力衰竭病人預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

血清miR-181b-5p預(yù)測(cè)慢性心力衰竭病人預(yù)后的ROC曲線下面積（area under curve，AUC）為0.763；血清lncRNA LUCAT1預(yù)測(cè)慢性心力衰竭病人預(yù)后的AUC為0.882；二者聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)慢性心力衰竭病人預(yù)后的AUC為0.950，聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1單獨(dú)檢測(cè)（Z二者聯(lián)合 vs miR-181b-5p＝2.808，Z二者聯(lián)合 vs lncRNA LUCAT1＝3.602，P值分別為0.005，0.035）。詳見(jiàn)表7、圖2。

3討論

慢性心力衰竭為中老年人的常見(jiàn)心血管疾病，涉及不同的病理生理途徑，是多種心血管疾病發(fā)展到終末期的臨床表現(xiàn)［11］。慢性心力衰竭病人病情不斷發(fā)展，快速準(zhǔn)確的疾病診斷、及時(shí)的醫(yī)療干預(yù)，對(duì)病人的臨床治療和預(yù)后改善具有重要的意義。因此，迫切需要尋找與慢性心力衰竭臨床和預(yù)后相關(guān)的新型血清標(biāo)志物，準(zhǔn)確識(shí)別病人病情變化，及時(shí)調(diào)整治療策略。

miRNA是由細(xì)胞分泌并在體液中廣泛存在，具有高度的序列保守性、時(shí)序性表達(dá)和組織特異度，使其成為有研究?jī)r(jià)值的生物標(biāo)志物［12］。劉蓉芳等［13］研究顯示，miRNA在心肌中特異度表達(dá)，并參與慢性心力衰竭的發(fā)生發(fā)展。關(guān)于miR-181b-5p的研究，目前在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能較多，參與胃癌、卵巢癌、前列腺癌、口腔鱗癌、肝癌等多種癌癥的發(fā)生發(fā)展［14］。Qin等［15］研究表明，miR-181b-5p在膽囊癌腫瘤組織中顯著上調(diào)，miR-181b-5p抑制劑加劇了膽囊癌細(xì)胞活力在缺氧條件下的降低。Chang等［16］研究證實(shí)，miR-181b-5p在心肌病引起的心力衰竭中表達(dá)顯著上調(diào)，促進(jìn)了心肌細(xì)胞自噬和凋亡。本研究結(jié)果顯示，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p高于對(duì)照組，且隨著NYHA心功能分級(jí)升高，其表達(dá)水平逐漸升高；預(yù)后不良組血清miR-181b-5p高于預(yù)后良好組，提示血清miR-181b-5p水平可初步判斷慢性心力衰竭病人的病情嚴(yán)重程度和預(yù)后。

lncRNA參與心肌肥大、心肌纖維化、心律失常、心臟炎癥和血管新生等病理變化，是控制心臟生理和病理調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的核心樞紐［17］。lncRNA LUCAT1在腎癌、卵巢癌、胃癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，是潛在的腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估生物標(biāo)志物［18］。Kuai等［19］研究顯示，成年克羅恩病血清lncRNA LUCAT1上調(diào)表達(dá)，且與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可作為判斷該疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后情況的生物標(biāo)志物。陳婉斐等［20］研究顯示，lncRNA LUCAT1在糖尿病心肌病中高表達(dá)，敲除lncRNA LUCAT1可減輕高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷。本研究結(jié)果顯示，慢性心力衰竭病人lncRNA LUCAT1表達(dá)水平隨著NYHA心功能分級(jí)的升高顯著上調(diào)，預(yù)后不良組lncRNA LUCAT1表達(dá)水平高于預(yù)后良好組，提示血清lncRNA LUCAT1水平可能成為慢性心力衰竭病人臨床和預(yù)后的潛在標(biāo)志物；進(jìn)一步研究顯示，血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平呈正相關(guān)；ROC曲線顯示，miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1二者聯(lián)合預(yù)測(cè)慢性心力衰竭病人預(yù)后的效能優(yōu)于單獨(dú)預(yù)測(cè)，二者對(duì)慢性心力衰竭病人預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。

有研究表明，NT-proBNP可廣泛用于慢性心力衰竭的診斷、療效評(píng)估、預(yù)后預(yù)測(cè)和危險(xiǎn)分層等，隨著NYHA心功能分級(jí)加重NT-proBNP水平升高［21］。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，慢性心力衰竭病人NT-proBNP升高（P＜0.05），預(yù)后不良組NT-proBNP水平高于預(yù)后良好組（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、NT-proBNP、LVEDD、LVESD是慢性心力衰竭病人預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），LVEF是慢性心力衰竭病人預(yù)后的保護(hù)因素（P＜0.05）。提示應(yīng)密切關(guān)注相關(guān)影響因素，及時(shí)采取干預(yù)措施，改善病人預(yù)后。

綜上所述，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平與病情嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性心力衰竭病人預(yù)后有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。然而miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1參與慢性心力衰竭發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步深入探討。

參考文獻(xiàn)：

［1］ZHOU X，TAO Y F，CHEN Y Q，et al.Serum chemerin as a novel prognostic indicator in chronic heart failure［J］.Journal of the American Heart Association，2019，8（15）：e012091.

［2］楊洋，張澤宇，劉熠芳，等.慢性心力衰竭患者衰弱評(píng)估工具及影響因素的研究進(jìn)展［J］.護(hù)理學(xué)雜志，2021，36（22）：110-113.

［3］LAI Y J，DONG L H，JIN H F，et al.Exosome long non-coding RNA SOX2-OT contributes to ovarian cancer malignant progression by miR-181b-5p/SCD1 signaling［J］.Aging，2021，13（20）：23726-23738.

［4］LV P Y，GAO P F，TIAN G J，et al.Osteocyte-derived exosomes induced by mechanical strain promote human periodontal ligament stem cell proliferation and osteogenic differentiation via the miR-181b-5p/PTEN/AKT signaling pathway［J］.Stem Cell Research amp; Therapy，2020，11（1）：295.

［5］羅靖，彭麗佳，邵建林，等.MiR-181b-5p在膽綠素治療腦缺血再灌注損傷中的靶基因預(yù)測(cè)及鑒定［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，46（10）：1248-1254.

［6］林其玲，陳暢.lncRNA LUCAT1通過(guò)靶向調(diào)控miR-199a-5p/HIF-1α促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞的增殖和遷移［J］.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2020，27（3）：273-281.

［7］LIU H Z，LIU G Y，PANG W W，et al.LncRNA LUCAT1 promotes proliferation of ovarian cancer cells by regulating miR-199a-5p expression［J］.European Review for Medical and Pharmacological Sciences，2020，24（4）：1682-1687.

［8］LI T，QIAN D，GUOYAN J，et al.Downregulated long noncoding RNA LUCAT1 inhibited proliferation and promoted apoptosis of cardiomyocyte via miR-612/HOXA13 pathway in chronic heart failure［J］.European Review for Medical and Pharmacological Sciences，2020，24（1）：385-395.

［9］KOH N，GOH V J，TEOH C K，et al.Angiotensin receptor-neprilysin inhibitor improves New York Heart Association class and N-terminal-pro B-type natriuretic peptide levels：initial experience in a Singapore single-centre cohort［J］.Singapore Medical Journal，2021，62（7）：359-361.

［10］MCDONAGH T A，METRA M，ADAMO M，et al.2021 ESC guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure［J］.European Heart Journal，2021，42（36）：3599-3726.

［11］BRENNAN E J.Chronic heart failure nursing：integrated multidisciplinary care［J］.British Journal of Nursing（Mark Allen Publishing），2018，27（12）：681-688.

［12］GARCIA GARCIA DE PAREDES A，VILLANUEVA C，BLANCO C，et al.Serum miR-181b-5p predicts ascites onset in patients with compensated cirrhosis［J］.JHEP Reports：Innovation in Hepatology，2021，3（6）：100368.

［13］劉蓉芳，譚雄，張輝，等.心康沖劑調(diào)控慢性心衰大鼠miRNA1、miRNA133/caspases抗心肌凋亡［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2019，25（8）：1047-1051.

［14］吳源，白淑榮，任紅梅，等.MiR-181b-5p靶向PDCD4基因調(diào)控高糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2020，40（19）：4195-4199.

［15］QIN Y Y，ZHENG Y L，HUANG C，et al.Downregulation of miR-181b-5p inhibits the viability，migration，and glycolysis of gallbladder cancer by upregulating PDHX under hypoxia［J］.Frontiers in Oncology，2021，11：683725.

［16］CHANG L H，CHAI X M，CHEN P M，et al.MiR-181b-5p suppresses starvation-induced cardiomyocyte autophagy by targeting Hspa5［J］.International Journal of Molecular Medicine，2019，43（1）：143-154.

［17］黃思，張圳，萬(wàn)靜靜，等.長(zhǎng)鏈非編碼RNA在心力衰竭中的作用及臨床意義［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，42（4）：411-419.

［18］白易，李仲珉，張雅敏.長(zhǎng)鏈非編碼RNA LUCAT1在惡性腫瘤中作用及機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2022，29（3）：239-244.

［19］KUAI X Y，YU S Y，CUI X F，et al.LncRNA LUCAT1 as a plasma biomarker for assessing disease activity in adult patients with Crohn′s disease［J］.Gastroenterology Research and Practice，2021，2021：5557357.

［20］陳婉斐，泮慧俐，李珍珍，等.抑制lncRNA LUCAT1表達(dá)通過(guò)靶向調(diào)控miR-204-3p減輕高糖誘導(dǎo)的心肌H9c2細(xì)胞損傷［J］.中國(guó)病理生理雜志，2020，36（10）：1761-1768.

［21］姜紅峰，彭紹蓉，黃蔡華，等.高敏C反應(yīng)蛋白和N末端B型鈉尿肽前體在原發(fā)性高血壓進(jìn)展慢性心力衰竭中的作用［J］.中華老年心腦血管病雜志，2021，23（1）：38-41.

（收稿日期：2023-02-06）

（本文編輯薛妮）