2型糖尿病患者血清人附睪蛋白4與蛋白尿的相關(guān)性研究

[摘要]"目的"探討人附睪蛋白4（human"epididymis"protein"4，HE4）與2型糖尿?。╰ype"2"diabetes"mellitus，T2DM）患者蛋白尿的相關(guān)性。方法"選取2020年1月至2023年7月九江市第一人民醫(yī)院收治的147例T2DM患者作為觀察組，根據(jù)蛋白尿嚴(yán)重程度將觀察組分為正常白蛋白尿組（101例）、微量白蛋白尿組（25例）、大量白蛋白尿組（21例）；同期選取性別、年齡相匹配的50名健康體檢者作為對照組。比較分析各組納入者的HE4和臨床指標(biāo)變化，采用單因素和多因素線性回歸分析探討HE4與蛋白尿的相關(guān)性。結(jié)果"相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖顯示HE4是連接血液白蛋白、尿微量白蛋白、尿微量白蛋白/尿肌酐（urinary"microalbumin-to-creatinine"ratio，UACR）及腎臟功能生物標(biāo)志物的一個重要節(jié)點；與對照組比較，觀察組患者的HE4水平顯著升高（Plt;0.01），單因素和多因素線性回歸分析均顯示HE4與UACR呈正相關(guān)；Logistic回歸結(jié)果顯示校正年齡、性別、估算腎小球濾過率（estimated"glomerular"filtration"rate，eGFR）、白蛋白（albumin，ALB）、血尿素氮（blood"urea"nitrogen，BUN）、血肌酐（serum"creatinine，SCr）、尿酸（uric"acid，UA）、乳酸脫氫酶（actate"dehydrogenase，LDH）等混雜因素后，HE4水平升高是蛋白尿發(fā)生的危險因素（OR=1.110，95%CI：1.005～1.226）。"""""""""結(jié)論"HE4與UACR呈正相關(guān)，其水平升高可增加T2DM患者的蛋白尿發(fā)生風(fēng)險。

[關(guān)鍵詞]"蛋白尿；人附睪蛋白4；2型糖尿??；糖尿病腎病

[中圖分類號]"R587.2""""""[文獻標(biāo)識碼]"A"""""nbsp;[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.33.001

Correlation"between"serum"human"epididymis"protein"4"levels"and"proteinuria"in"type"2"diabetes"patients

BO"Chunyan1，"ZHANG"Shipei2，"CHU"Jinshen2，"XUE"Guohui2，"WAN"Fang3，"CAO"Junda4，"CHEN"Keqi2，"CHEN"Jing2，"LIU"Xiaofeng2，"CHEN"Xueli2

1.Department"of"Nutrition，"Jiujiang"NO.1"People’s"Hospital，"Jiujiang"332000，"Jiangxi，"China;"2.Department"of"Clinical"Laboratory，"Jiujiang"NO.1"People’s"Hospital，"Jiujiang"332000，"Jiangxi，"China;"3.Department"of"Endocrinology，"Jiujiang"NO.1"People’s"Hospital，"Jiujiang"332000，"Jiangxi，"China;"4.Department"of"Cardiology，"Jiujiang"NO.1"People’s"Hospital，"Jiujiang"332000，"Jiangxi，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"correlation"of"human"epididymis"protein"4"（HE4）"with"proteinuria"in"patients"with"type"2"diabetes"mellitus"（T2DM）."Methods"A"total"of"147"T2DM"patients"from"January"2020"to"July"2023"in"Jiujiang"NO.1"People’s"Hospital"were"enrolled"in"observation"group."According"to"the"severity"of"proteinuria，"observation"group"was"divided"into"three"groups："Normal"albuminuria"group"（101"cases），"microalbuminuria"group"（25"cases），"and"massive"albuminuria"group"（21"cases）."50"healthy"examinees"with"gender"and"age"matching"during"the"same"period"were"selected"as"control"group."HE4"levels"and"clinical"indicators"in"each"group"were"compared"and"analyzed."Correlation"between"HE4"and"proteinuria"was"analyzed"by"using"univariate"and"multivariate"linear"regression."Results"The"correlation"network"diagram"reveals"that"HE4"functions"was"a"pivotal"node"linking"serum"albumin，"urinary"microalbumin，"urinary"microalbumin-to-creatinine"ratio"（UACR），"and"renal"function"biomarkers."Compared"to"control"group，"HE4"levels"significantly"elevated"in"observation"group"（Plt;0.01）."Both"univariate"and"multivariate"linear"regression"analysis"demonstrate"a"positive"correlation"between"HE4"and"UACR."Logistic"regression"analysis"shew"that"after"adjusting"for"confounding"factors"including"age，"gender，"estimated"glomerular"filtration"rate"（eGFR），"albumin"（ALB），"blood"urea"nitrogen"（BUN），"serum"creatinine"（SCr），"uric"acid"（UA），"lactate"dehydrogenase"（LDH）"etc."elevated"HE4"levels"was"a"risk"factor"for"proteinuria"（OR=1.110，"95%CI："1.005-1.226）."Conclusion"Elevated"HE4"levels"in"patients"with"T2DM"is"positivly"correlated"with"UACR."Increase"its"level"increases"the"risk"of"proteinuria"in"T2DM"patients.

[Key"words]"Proteinuria;"Human"epididymis"protein"4;"Type"2"diabetes"mellitus;"Diabetic"nephropathy

2型糖尿?。╰ype"2"diabetes"mellitus，T2DM）是一種非傳染性慢性代謝性疾病，典型特征是高血糖[1]。T2DM患者機體代謝紊亂、炎癥和纖維化可誘發(fā)多器官系統(tǒng)繼發(fā)并發(fā)癥，其中最常見的為腎臟疾病[2]。糖尿病腎病已成為終末期腎病的重要原因，影響高達40%的T2DM患者[3]。蛋白尿進行性增加是T2DM患者腎臟受損的主要標(biāo)志，常規(guī)用藥治療并綜合管理血脂、血糖和血壓等多種代謝指標(biāo)后，部分T2DM患者仍出現(xiàn)蛋白尿性腎損傷進展。雖然蛋白尿的發(fā)病機制尚未明確，但其發(fā)生發(fā)展與T2DM患者機體高血糖狀態(tài)下炎癥介質(zhì)激活和腎小管對蛋白質(zhì)重吸收功能的損傷有密切關(guān)系[4]。

人附睪蛋白4（human"epididymis"protein"4，HE4）是一種分泌型糖基化蛋白，由乳清酸性蛋白四二硫鍵核心結(jié)構(gòu)域2基因編碼。研究顯示HE4反映上皮細(xì)胞的促炎狀態(tài)，是成纖維細(xì)胞纖維化過程的中介"""物[5]；腎小管間質(zhì)中HE4過表達與腎小管間質(zhì)纖維化呈正相關(guān)，可作為診斷慢性腎臟病的生物標(biāo)志物，預(yù)測慢性腎臟病的急性腎損傷[6-8]。Zhang等[9]研究顯示HE4水平升高是糖尿病腎病的獨立危險因素，與T2DM患者腎功能下降和糖尿病腎病發(fā)病風(fēng)險增加有關(guān)。然而HE4與蛋白尿是否相關(guān)尚無定論。本研究擬探討T2DM患者HE4水平與蛋白尿的相關(guān)性，以期為蛋白尿的發(fā)生和治療提供新的思路。

1""資料與方法

1.1""一般資料

選取2020年1月至2023年7月九江市第一人民醫(yī)院收治的147例T2DM患者作為觀察組，其中男94例，女53例，平均年齡（58.9±12.8）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡gt;18歲；②T2DM符合《中國2型糖尿病防治指南（2020年版）》[10]診斷標(biāo)準(zhǔn)；③一般臨床資料及實驗室檢查資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并冠心病、心力衰竭、心臟移植患者；②合并尿路感染、幽門螺桿菌感染、呼吸道感染、糖尿病足伴感染等；③機械通氣患者；④合并惡性腫瘤患者。參考《糖尿病腎臟疾病臨床診療中國指南》[11]的隨機尿微量白蛋白/尿肌酐（urinary"microalbumin-to-"creatinine"ratio，UACR）標(biāo)準(zhǔn)，觀察組中UACRlt;30mg/g的患者納入正常白蛋白尿組（n=101），30mg/g≤UACR≤300mg/g的患者納入微量白蛋白尿組（n=25），UACRgt;300mg/g的患者納入大量白蛋白尿組（n=21）。同期選取性別、年齡相匹配的50名健康體檢者作為對照組，其中男24名，女26名，平均年齡（57.0±11.8）歲。本研究納入者的性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。本研究經(jīng)九江市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過（倫理審批號：JJSDYRMYY-YXLL-"2021-260）。

1.2""方法

采集納入者清晨空腹靜脈血，采用新產(chǎn)業(yè)全自動化學(xué)發(fā)光儀（MAGLUMI"X8）測定血清HE4；日立7600型全自動生化分析儀測定堿性磷酸酶（alkaline"phosphatase，ALP）、總蛋白（total"protein，TP）、白蛋白（albumin，ALB）、血糖（glucose，Glu）、血肌酐（serum"creatinine，SCr）、血尿素氮（blood"urea"nitrogen，BUN）、尿酸（uric"acid，UA）、總膽固醇（total"cholesterol，TC）、乳酸脫氫酶（actate"dehydrogenase，LDH）等生化指標(biāo)；羅氏Cobas"8000全自動免疫分析儀測定血清空腹C肽（C-peptide，C-P）、空腹胰島素（fasting"insulin，F(xiàn)INS）；邁瑞糖化血紅蛋白分析儀（H50）測定糖化血紅蛋白（glycosylated"hemoglobin，HbA1c）；希森美康Sysmex"XN2000-A1全自動血液分析儀流水線檢測白細(xì)胞（white"blood"cell，WBC）計數(shù)、紅細(xì)胞（red"blood"cell，RBC）計數(shù)；采集納入者的尿液，日立7600型全自動生化分析儀檢測Ｎ-乙酰-β-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-glucosaminidase，NAG）、尿肌酐（urinary"creatinine，UCr）、尿微量白蛋白（urinary"microalbumin，mALB）、尿β2微球蛋白，UACR計算公式：UACR=mALB/UCr；中國簡化腎臟病膳食改善（Modification"of"Diet"in"Renal"Disease，MDRD）公式計算估算腎小球濾過率（estimated"glomerular"filtration"rate，eGFR），女性：eGFR=175×{[SCr（μmol/L）/"88.4]–1.234}×年齡–0.179×0.79；男性：eGFR=175×"{[SCr（μmol/L）/88.4]–1.234}×年齡–0.179。

1.3""統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS"25.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析。采用R語言igraph包繪制生物標(biāo)志物間的多維相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t檢驗，不符合正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（Q1，Q3）]表示，比較采用秩和檢驗；組間比較采用單因素方差檢驗或K-W檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用c2檢驗；數(shù)據(jù)間相關(guān)性分析采用斯皮爾曼檢驗；HE4與蛋白尿的關(guān)系采用單因素線性回歸分析；HE4與蛋白尿風(fēng)險的相關(guān)性采用邏輯回歸探討。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2""結(jié)果

2.1""不同蛋白尿分組T2DM患者的臨床資料比較

正常白蛋白尿組、微量白蛋白尿組、大量白蛋白尿組患者的尿β2微球蛋白、NAG、eGFR、TP、ALB、BUN、SCr、UA、RBC比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05），見表1。

2.2""線性回歸分析T2DM患者HE4與蛋白尿的關(guān)系

單因素線性回歸分析顯示，HE4與UACR呈正相關(guān)；多因素線性回歸分析校正eGFR、ALB、BUN、SCr、LDH后，HE4仍與UACR呈正相關(guān)；模型調(diào)整后R2可達0.876，提示本模型可解釋T2DM患者中87.6%的UACR變異。見表2。

2.3""HE4水平在納入者中的表達變化

與對照組的HE4水平[48.5（40.3，57.5）pmol/L]比較，觀察組患者的HE4水平[93.0（56.8，133.3）pmol/L]顯著升高（Plt;0.01），且HE4表達隨尿白蛋白含量的增加有增高趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。HE4在各組納入者中的表達見圖1。

2.4""HE4影響蛋白尿發(fā)生風(fēng)險的Logistic回歸分析

以UACRgt;30mg/g發(fā)生蛋白尿為因變量，以HE4為自變量，校正協(xié)變量為年齡、性別、eGFR、SCr、BUN、LDH、ALB，Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)HE4水平升高是蛋白尿發(fā)生的危險因素（OR=1.110，95%CI：1.005～1.226），見表3。

2.5""血清中HE4與腎臟疾病相關(guān)生物標(biāo)志物的關(guān)系

為探索血清HE4表達與腎臟疾病的關(guān)系，繪制HE4和腎臟疾病相關(guān)生物標(biāo)志物的相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖，見圖2，結(jié)果顯示HE4是連接血液白蛋白、mALB、UACR及腎臟功能生物標(biāo)志物的一個重要節(jié)點，提示HE4可能在腎臟排泄白蛋白的過程中發(fā)揮重要作用。

3""討論

T2DM患者長期高血糖狀態(tài)導(dǎo)致微血管病變，腎損傷是主要臨床表現(xiàn)之一。研究顯示糖尿病腎病占所有慢性腎臟疾病近1/2，已成為T2DM患者死亡的主要驅(qū)動因素[12]。蛋白尿與T2DM患者機體血糖變異、血脂異常密切相關(guān)，可反映全身性血管內(nèi)皮功能障礙，是早期腎臟受損的重要標(biāo)志物[13-14]。既往研究證實近端腎小管間質(zhì)纖維化、腎小管細(xì)胞萎縮導(dǎo)致的蛋白質(zhì)重吸收功能受損在T2DM患者蛋白尿的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[15]。HE4在腎小管細(xì)胞間質(zhì)中過表達是成纖維細(xì)胞纖維化過程中的中介物，可反映腎小管間質(zhì)纖維化程度[5-6]。

為探索HE4與蛋白尿的關(guān)系，本研究繪制HE4腎臟疾病相關(guān)生物標(biāo)志物的相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HE4是連接血液白蛋白、mALB、UACR及腎功能生物標(biāo)志物的重要節(jié)點。進一步分析結(jié)果顯示T2DM患者HE4水平顯著升高，單因素和多因素線性回歸均顯示HE4與UACR均呈正相關(guān)；HE4在活化的成纖維細(xì)胞中表達分泌，通過磷酸化和核易位激活核因子κB（nuclear"factor"kappa-B，NF-κB）轉(zhuǎn)錄激活基團P65而激活NF-κB通路，上調(diào)組織抑制劑金屬蛋白酶1抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解，導(dǎo)致組織纖維化加劇，這種HE4/NF-κB信號通路激活可被達格列凈所抑制，以改善造影劑誘導(dǎo)的急性腎損傷[6，16]。動物模型研究結(jié)果表明沉默HE4可通過調(diào)節(jié)補體成分3/基質(zhì)金屬蛋白酶/蛋白酶軸緩解狼瘡性腎炎腎纖維化[17]。

本研究構(gòu)建HE4影響蛋白尿發(fā)生風(fēng)險的Logistic回歸模型，結(jié)果顯示校正年齡、性別、eGFR、SCr、BUN、LDH、ALB等混雜因素后，HE4水平升高是蛋白尿發(fā)生的危險因素。此外，腎小管間質(zhì)內(nèi)的微炎癥和細(xì)胞外基質(zhì)的擴張是糖尿病腎病進展的共同途徑，HE4反映上皮細(xì)胞的促炎狀態(tài)，腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-6可通過上調(diào)HE4表達和NF-κB介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)促進腎臟纖維化，這從另一方面解釋HE4與蛋白尿的密切關(guān)系[18]。筆者推測HE4水平升高可加重腎小管間質(zhì)纖維化，影響腎小管對蛋白質(zhì)的重吸收，進而導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生。這種推測為蛋白尿的發(fā)生機制和防治提供新的思路，未來將構(gòu)建動物模型進一步驗證。

綜上所述，HE4與UACR呈正相關(guān)，其水平升高可增大T2DM患者發(fā)生蛋白尿的風(fēng)險。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2024–07–25）

（修回日期：2024–11–07）