異甘草素緩解胺碘酮誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究

Experimental study on the alleviation of amiodarone induced damage to human umbilical vein endothelial cells by isoliquiritigenin

Abstract" Objective：The aim of this study was to observe the protective effect of isoliquiritigenin（ISL） on damaged human umbilical vein endothelial cells（HUVECs） induced by amiodarone（AM）?induced venous inflammation.Methods：HUVECs were divided into three groups：control group，AM group（treated with AM at a concentration of 30 μmol/L for 24 h），and ISL group（pretreated with ISL at a concentration of 10 μmol/L for 1 h followed by AM at a concentration of 30 μmol/L treatment for 24 h）.The CCK?8 assay was used to determine the effective concentration of ISL.The scratch assay was performed to evaluate cell migration ability.Flow cytometry was used to assess cell apoptosis.Polymerase chain reaction（PCR） was conducted to detect the expression of proliferation factor PCNA and apoptotic factor Casepase?3.The expression of inflammatory factors tumor necrosis factor?α（TNF?α） and interleukin?6（IL?6），and adhesion factors intercellular cell adhesion molecule?1（ICAM?1） and vascular cell adhesion molecule?1（VCAM?1） were measured.Protein levels of ICAM?1 and VCAM?1 were detected using Western Blot.Results：Compared with the AM group，ISL pretreatment promoted cell proliferation and migration，inhibited cell apoptosis，and downregulated related inflammatory factors.Conclusion：ISL shows promising application prospects in preventing and treating clinical venous inflammation，and can be considered as a potential therapeutic drug for preventing venous inflammation.

Keywords" amiodarone； endothelial cells； isoliquiritigenin； venous inflammation； inflammatory factors； experimental study

摘要" 目的：通過胺碘酮誘導(dǎo)靜脈炎，觀察異甘草素對受損的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。方法：將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為空白對照組、胺碘酮組（胺碘酮30 μmol/L處理24 h）、異甘草素組（異甘草素10 μmol/L預(yù)處理1 h后胺碘酮30 μmol/L處理24 h）3組。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑（CCK?8）法確定異甘草素作用濃度，劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡程度，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測增殖因子增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、凋亡因子Casepase?3、炎癥因子腫瘤壞死因子（TNF?α）、白細(xì)胞介素?6（IL?6）、黏附因子細(xì)胞間黏附分子?1（ICAM?1）和血管細(xì)胞黏附因子?1（VCAM?1）的表達(dá)；蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測黏附因子ICAM?1和VCAM?1蛋白表達(dá)。結(jié)果：與胺碘酮組比較，異甘草素預(yù)處理可促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移，抑制細(xì)胞凋亡，下調(diào)相關(guān)炎癥因子表達(dá)。結(jié)論：異甘草素在預(yù)防和治療臨床靜脈炎方面有很好的應(yīng)用前景，可作為一種潛在的預(yù)防靜脈炎的治療藥物。

關(guān)鍵詞" 胺碘酮；內(nèi)皮細(xì)胞；異甘草素；靜脈炎；炎癥因子；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1009-6493.2024.23.006

研究顯示，全球80%的住院病人需要接受靜脈輸液治療，靜脈炎成為最常見的并發(fā)癥，其典型癥狀包括靜脈條索狀改變，周圍皮膚紅、腫、熱、痛，嚴(yán)重情況下可導(dǎo)致皮膚壞死[1]。靜脈炎的發(fā)生可能由藥物或非藥物因素引起[2]，而病人的年齡不受限制，該并發(fā)癥會(huì)增加病人的不適感，延長住院時(shí)間，并且浪費(fèi)醫(yī)療資源[3]。目前，藥物引發(fā)的靜脈炎發(fā)病機(jī)制尚不明確，缺乏有效的科學(xué)護(hù)理和預(yù)防措施。胺碘酮（amiodarone）是常用的抗心律失常藥物，通過外周靜脈注射胺碘酮可導(dǎo)致靜脈炎的發(fā)生率高達(dá)8.0%～54.5%[3]。研究表明，胺碘酮會(huì)抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的增殖，增加炎癥因子的釋放，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致血管壁受損[4]。異甘草素（isoliquiritigenin，ISL）是一種從甘草根中提取的類黃酮化合物[5]，其具有多種生物活性，如抗炎[6]、抗氧化應(yīng)激[7]、抗癌[8]及保護(hù)神經(jīng)[9]等。研究表明，異甘草素在多種炎癥疾病模型中具有抗炎作用，如巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥模型[10]、脂多糖誘導(dǎo)的炎癥[7]及膜性腎小球腎炎模型[11]等。然而，在護(hù)理研究領(lǐng)域，靜脈炎的護(hù)理預(yù)防和治療缺乏深入的分子層面研究。因此，本研究主張中西醫(yī)結(jié)合護(hù)理，利用胺碘酮誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的體外靜脈炎模型，分析異甘草素干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表型的變化以及炎癥因子、黏附因子等表達(dá)的變化，旨在探討異甘草素與胺碘酮引發(fā)靜脈炎的關(guān)系，并為臨床靜脈炎的預(yù)防和治療提供基于分子層面的護(hù)理思路和方向。

1" 材料和方法

1.1 使用試劑

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（購于上海生命科學(xué)研究所細(xì)胞資源中心）；胎牛血清（FBS）、青霉素混合物、胰蛋白酶、AnnexinFITC/PI凋亡檢測試劑盒（北京SOLEBO公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑（cell counting kit?8，CCK?8）、異甘草素（美國MCE公司）；胺碘酮（上海賽諾菲公司）；兔抗增殖相關(guān)因子（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、Casepase?3、山羊抗兔二抗（武漢愛博泰克生物科技有限公司）；一抗黏附因子細(xì)胞間黏附分子?1（intercellular cell adhesion molecule?1，ICAM?1）和血管細(xì)胞黏附因子?1（vascular cell adhesion molecule?1，VCAM?1）（沈陽萬科生物科技有限公司）；核蛋白提取試劑盒（江蘇凱基生物有限公司）；Trizol試劑盒、TB Green?Premix Ex Taq? Ⅱ（日本Takara公司）；PAGE凝膠快速制備試劑盒（上海雅酵生物科技公司）；PVDF膜（美國milliPore公司）蛋白Maker（聚合美）；DMEMI640培養(yǎng)基（美國Hyclone公司）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

在含10%的胎牛血清和1%的青霉素鏈霉素混合物的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于二氧化碳培養(yǎng)箱（37 ℃，5%二氧化碳）?？瞻讓φ战M：不予干預(yù)；胺碘酮組：胺碘酮30 μmol/L處理24 h（按說明書制備）；異甘草素組：10 μmol/L異甘草素預(yù)處理1 h后，胺碘酮30 μmol/L處理24 h。課題組對胺碘酮對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的濃度和時(shí)間進(jìn)行了初步研究[4]，本研究在此基礎(chǔ)上繼續(xù)探討異甘草素的保護(hù)作用。

1.3 細(xì)胞活力的測定

1.3.1 確定異甘草素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞無毒作用的最佳濃度

將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞以每孔1×104接種在96孔板中，設(shè)置異甘草素濃度梯度，終止培養(yǎng)后，每孔加入10 μL CCK?8試劑，孵育2 h，使用酶標(biāo)儀檢測各組吸光度值（450 nm波長），吸光度值=各孔OD值-調(diào)零孔OD值。分別檢測12、24 h吸光度值。

1.3.2 確定異甘草素對胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的最佳濃度

取上述對正常細(xì)胞無害的異甘草素濃度，先預(yù)處理1 h后加入胺碘酮（30 μmol/L）處理24 h，重復(fù)上述方法檢測OD值。

1.4 劃痕實(shí)驗(yàn)

提前用Marker筆在6孔板各孔背后畫5條平行線，將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞均勻接種在6孔板中，分為空白對照組、胺碘酮組和異甘草素組。在各孔中使用10 μL無菌槍頭垂直之前的平行線劃線，形成劃痕。3組細(xì)胞用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）緩慢沖洗2次，再加入無血清培養(yǎng)基，共培養(yǎng)12、24 h。使用Image J8.0分析0、12、24 h的劃痕面積。

1.5 流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)

將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞均勻接種在6孔板中，將細(xì)胞分為空白對照組、胺碘酮組和異甘草素預(yù)處理組。用不含乙二胺四乙酸（EDTA）的胰酶消化細(xì)胞，置于1.5 mL Ep管中，用4 ℃預(yù)冷的PBS洗滌2次。收集1×105的細(xì)胞并置于流式管中，每管加入100 μL的Binding Buffer重懸細(xì)胞；然后加入5 μL AnnexinV FITC，在室溫下用錫紙暗孵育5 min，然后在每管中加入5 μL碘比丙啶溶液（PI），在流式細(xì)胞儀上測試。

1.6 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）

將各組細(xì)胞使用Trizol試劑提取細(xì)胞總核糖核酸（RNA），用紫外分光光度計(jì)檢測D260/D280值。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)于mRNA的DNA分子（cDNA），甘油醛?3?磷酸脫氫酶（glyceraldehyde?3?phosphate dehydrogenase，GAPDH）作為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增的內(nèi)參。用2-T△△CT計(jì)算相對信使RNA（mRNA）量。引物序列見表1。

1.7 蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）

使用全蛋白試劑盒從各組細(xì)胞中提取總蛋白，并采用二喹啉甲酸法（BCA）試劑盒測定蛋白濃度，對蛋白進(jìn)行變形處理。配膠后加入蛋白樣品，進(jìn)行SDS‐PAGE凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜，加入5%脫脂奶粉，室溫封閉1 h，隨后加入一抗（β?actin 1∶4 500，PCNA 1∶1 000，Casepase?3 1∶1 000，ICAM?1 1∶1 000，VCAM?1 1∶5 000），4 ℃過夜。次日TBST洗膜3次，加入羊抗兔IgG二抗（1∶8 000），孵育1 h，再次洗膜后采用電化學(xué)發(fā)光法（ECL）試劑盒顯色。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)均為符合正態(tài)分布的定量資料，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)之間比較采用單因素方差分析。實(shí)驗(yàn)中的連續(xù)型變量采用重復(fù)測量方差分析。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1 異甘草素預(yù)處理增加胺碘酮所致靜脈炎細(xì)胞活力，恢復(fù)受損細(xì)胞形態(tài)

采用CCK?8法分別檢測12 h和24 h異甘草素細(xì)胞活力，結(jié)果表明，12 h不同濃度異甘草素（0～100 μmol/L）及24 h異甘草素濃度0～20 μmol/L對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞均無明顯損傷（均Pgt;0.05），詳見圖1、圖2。因此選擇異甘草素（0～20 μmol/L）作為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞無毒性作用濃度展開后續(xù)實(shí)驗(yàn)。再次采用CCK?8法檢測使用異甘草素（0～20 μmol/L）預(yù)處理1 h后用胺碘酮處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后細(xì)胞活力，尋找異甘草素最佳作用濃度。結(jié)果表明，當(dāng)異甘草素組所取的濃度為10 μmol/L時(shí)，細(xì)胞活力明顯上升，顯著增高為94.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。因此，選用異甘草素（10 μmol/L，1 h）預(yù)處理，胺碘酮（30 μmol/L，24 h）作為本研究的異甘草素組。詳見圖3。

2.2 異甘草素增強(qiáng)胺碘酮誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力，促進(jìn)細(xì)胞增殖

采用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察不同時(shí)間細(xì)胞的愈合情況，12 h各組細(xì)胞劃痕面積與0 h相比，胺碘酮組抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，而異甘草素組促進(jìn)了人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，隨著時(shí)間增加，24 h各組細(xì)胞劃痕面積在顯微鏡下可更明顯觀察到結(jié)果，發(fā)現(xiàn)異甘草素預(yù)處理可以提高胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力。同時(shí)還采用RT?PCR實(shí)驗(yàn)檢測PCNA的蛋白表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證異甘草素對胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力。結(jié)果顯示，胺碘酮組下調(diào)了PCNA蛋白的表達(dá)，而異甘草素組PCNA的表達(dá)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），詳見表2。因此，本研究發(fā)現(xiàn)異甘草素可以促進(jìn)胺碘酮誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，從而促進(jìn)細(xì)胞的愈合。

2.3 異甘草素減輕胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡

采用流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況，Annexin V FITC/PI實(shí)驗(yàn)顯示，空白對照組凋亡率為（4.10±0.26）%，胺碘酮組為（17.82±0.36）%，而異甘草素組凋亡率下降至（11.31±0.45）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），表明異甘草素可以減少胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。此外，采用RT?PCR法檢測Casepase?3蛋白的表達(dá)，胺碘酮組與空白對照組比較，Casepase?3的蛋白表達(dá)明顯增加，異甘草素組與胺碘酮組比較，凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），詳見表3。因此，在基因和蛋白水平上，進(jìn)一步證明異甘草素可以降低胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。

2.4 異甘草素對胺碘酮誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有抗炎作用

采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)檢測各組炎癥因子：腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素?6及黏附因子ICAM?1、VCAM?1逆轉(zhuǎn)錄酶mRNA表達(dá)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)胺碘酮組與空白對照組比較，炎癥因子及黏附因子的表達(dá)量明顯升高，而異甘草素組的表達(dá)量有所下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。詳見表4。蛋白免疫印跡法檢測黏附因子（ICAM?1、VCAM?1）蛋白表達(dá)，胺碘酮組與空白對照組比較，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中蛋白表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），經(jīng)過異甘草素預(yù)處理后，細(xì)胞中的蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），提示異甘草素具有抗炎性活性，可以保護(hù)胺碘酮對細(xì)胞的抑制作用。詳見圖4、圖5、表5。

3" 討論

靜脈炎的本質(zhì)是血管內(nèi)膜發(fā)生炎癥，其炎癥體征均由血管內(nèi)皮細(xì)胞通過局部血管屏障功能變化介導(dǎo)[12]。病理機(jī)制分為血管內(nèi)皮損傷、白細(xì)胞黏附、白細(xì)胞遷移、炎癥反應(yīng)、組織損傷及修復(fù)五大步驟[13]。當(dāng)血管受到機(jī)械或化學(xué)物質(zhì)刺激、細(xì)菌或其他微生物感染時(shí)，靜脈內(nèi)壁上的血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)受損[14]。在細(xì)胞損傷處，內(nèi)皮細(xì)胞將釋放炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子和趨化因子。伴隨著炎癥介質(zhì)的釋放，選擇素、整合素和黏附分子會(huì)促使白細(xì)胞，尤其是中性粒細(xì)胞黏附于內(nèi)皮細(xì)胞表面。之后，內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)進(jìn)一步釋放趨化因子，吸引附近的白細(xì)胞向炎癥部位遷移，并穿過血管內(nèi)皮間隙進(jìn)入靜脈壁組織。細(xì)胞蛋白質(zhì)介導(dǎo)的靜脈內(nèi)炎癥反應(yīng)和受損組織自我修復(fù)過程也會(huì)發(fā)生。輸注胺碘酮的病人常常會(huì)出現(xiàn)靜脈周圍紅、腫、熱等損傷，這可能與藥物自身性質(zhì)相關(guān)。胺碘酮pH值為4.7，是刺激性藥物，含有碘成分，輸液時(shí)可能產(chǎn)生沉積從而刺激血管壁，引起炎癥。本研究發(fā)現(xiàn)，相對于胺碘酮組，異甘草素組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞活力增加，遷移能力增強(qiáng)，促炎因子、凋亡基因和蛋白表達(dá)減少。這說明護(hù)士需掌握輸注藥物的理化性質(zhì)，預(yù)防輸液過程中靜脈炎的發(fā)生。

劃痕實(shí)驗(yàn)是模擬“傷口”形狀，在細(xì)胞表面劃線形成劃痕，然后觀察細(xì)胞愈合能力的實(shí)驗(yàn)方法。本研究發(fā)現(xiàn)，相比胺碘酮組，異甘草素組顯著提高了胺碘酮誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力，這一結(jié)果與以前的研究結(jié)果[4]一致。流式細(xì)胞術(shù)是一種用于對細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)高速分析和定量分選的技術(shù)。細(xì)胞凋亡也稱程序性細(xì)胞死亡，是疾病發(fā)生的早期預(yù)警信號(hào)，可以通過內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)炎癥平衡維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[15?16]。研究指出，血管緊張素誘導(dǎo)高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化都是通過誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡引起內(nèi)皮功能障礙和炎癥[17?18]。本研究中，胺碘酮組細(xì)胞凋亡率、相關(guān)基因和蛋白表達(dá)最高，經(jīng)過異甘草素預(yù)處理后可以減少細(xì)胞凋亡，表明胺碘酮破壞了機(jī)體穩(wěn)定的環(huán)境，加速了內(nèi)皮細(xì)胞受損，而異甘草素具有抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。此外，本研究還檢測了一些炎癥因子和黏附因子的基因和蛋白的表達(dá)量，因?yàn)镮CAM?1和VCAM?1介導(dǎo)白細(xì)胞的黏附和外滲，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[19]，研究證實(shí)多種細(xì)胞因子通過核轉(zhuǎn)錄因子?κB（NF?κB）信號(hào)通路上調(diào)ICAM?1的表達(dá)[20]及抑制黏附因子的表達(dá)治療炎癥疾病[21]。之前的靜脈炎相關(guān)研究僅檢測了炎癥因子，本研究進(jìn)一步關(guān)注黏附分子的變化，在靜脈炎的病理改變過程中探索相關(guān)細(xì)胞因子以進(jìn)行多方面驗(yàn)證。

目前，關(guān)于藥物引起靜脈炎的原因主要包括輸注藥物濃度、藥物的理化性質(zhì)、輸液時(shí)間、輸液量和輸液速度。然而，針對靜脈炎的防治措施尚未有公認(rèn)和明確的特效方法，常用的方法主要分為物理治療和藥物治療兩大類[22]。相關(guān)指南建議，可以采用經(jīng)外周靜脈穿刺中心靜脈置管（PICC）的方法來預(yù)防因化療藥物引起的靜脈炎[23]，但由于輸注胺碘酮時(shí)大多為緊急情況，沒有充足時(shí)間完成置管操作，同時(shí)考慮病人經(jīng)濟(jì)的影響，他們可能不愿意選擇這種輸液方式，因此亟須解決非化療藥物外周輸注時(shí)引起的靜脈炎問題。目前大多數(shù)學(xué)者通過甘露醇誘導(dǎo)靜脈炎的動(dòng)物模型進(jìn)行研究[24?25]。莊惠人等[26]利用胺碘酮誘導(dǎo)靜脈炎的動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)酚妥拉明加林可霉素利多卡因凝膠治療效果優(yōu)于硫酸鎂濕敷。研究表明，中藥具有抗炎作用[27?28]，尤其異甘草素在治療炎癥性疾病方面有積極作用，異甘草素可以通過激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α（PGC?1α）/核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）通路提高抗氧化應(yīng)激能力，減輕炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，抑制核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體，為急性肝損傷的治療提供了新思路[29]。此外，在研究盲腸結(jié)扎穿刺法（CLP）引起的膿毒癥小鼠腦損傷過程中，研究人員發(fā)現(xiàn)異甘草素可以通過抑制NF?κB信號(hào)通路的激活減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生[30]。與上述研究相比，本研究僅從表型上探究了異甘草素的相關(guān)作用，并未從可能發(fā)生的機(jī)制入手。

4" 小結(jié)

本研究從基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)出發(fā)，豐富了護(hù)士對靜脈炎防治機(jī)制的認(rèn)識(shí)。然而，此研究的局限性在于僅進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)的表型驗(yàn)證，未對可能發(fā)生的機(jī)制進(jìn)行探討，所得結(jié)論未在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中得到應(yīng)用，為進(jìn)一步深入研究異甘草素對兔耳靜脈炎的保護(hù)作用，并挖掘其潛在的應(yīng)用價(jià)值，計(jì)劃將異甘草素附載于納米材料中制備成凝膠，以進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，為臨床實(shí)踐提供更準(zhǔn)確、科學(xué)的參考。

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