布托啡諾調(diào)節(jié)Fas/FasL信號(hào)通路對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

摘要 目的：探討布托啡諾調(diào)節(jié)脂肪酸合成酶（Fas）/脂肪酸合成酶配體（FasL）信號(hào)通路對(duì)急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法：126只無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、AMI組、布托啡諾低劑量組（12.5 μg/kg）、布托啡諾高劑量組（50.0 μg/kg）、尿激酶組、rh-FasL組、布托啡諾高劑量＋rh-FasL組，每組18只。除空白組外，其余組大鼠均采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法復(fù)制AMI模型。建模成功1 h后，進(jìn)行給藥處理，每日1次，連續(xù)干預(yù)7 d。彩色多普勒超聲顯像儀檢測(cè)大鼠左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）、左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）、左室短軸縮短率（LVFS）、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）的變化；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）法檢測(cè)大鼠血清中白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTnⅠ）水平；2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色檢測(cè)大鼠心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)；蘇木精-伊紅（HE）染色檢測(cè)大鼠心肌組織病理變化；DNA斷裂的原位末端標(biāo)記（TUNEL）染色檢測(cè)大鼠心肌細(xì)胞凋亡；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)大鼠心肌組織中Bim、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）、Fas、FasL蛋白表達(dá)。結(jié)果：與空白組比較，AMI組大鼠心肌組織病理?yè)p傷嚴(yán)重，LVESD、LVEDD、IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平、心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)、心肌細(xì)胞凋亡率、Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)升高，LVFS、LVEF及Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠心肌組織病理?yè)p傷減輕，LVESD、LVEDD、IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平、心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)、心肌細(xì)胞凋亡率、Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)降低，LVFS、LVEF及Bcl-2蛋白表達(dá)升高，rh-FasL組對(duì)應(yīng)指標(biāo)變化趨勢(shì)與上述相反（P＜0.05）；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠心肌組織病理?yè)p傷加劇，LVESD、LVEDD、IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平、心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)、心肌細(xì)胞凋亡率、Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)升高，LVFS、LVEF及Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）。結(jié)論：布托啡諾可能通過(guò)抑制Fas/FasL通路抑制AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡。

關(guān)鍵詞 急性心肌梗死；布托啡諾；脂肪酸合成酶/脂肪酸合成酶配體信號(hào)通路；炎癥；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.21.007

Effect of Butorphanol on Myocardial Cell Apoptosis in Rats with Acute Myocardial Infarction by Regulating the Fas/FasL Signaling Pathway

MENG Yuanyuan¹， LIU Yan¹， LI Jun¹， ZHOU Min¹， CHEN Fen^{2， 3， 4}

1. Puren Hospital Affiliated to Wuhan University of Science and Technology， Wuhan 430000， Hubei， China; 2. Union Hospital Affiliated to Tongji Medical College， Huazhong University of Science and Technology， Wuhan 430022， Hubei， China; 3. Hubei Provincial Key Laboratory of Biological Targeted Therapy Research， Hubei 430022， Wuhan， China; 4. Hubei Provincial Engineering Research Center for Immunodiagnosis and Treatment of Cardiovascular Diseases， Wuhan 430022， Hubei， China

Corresponding Author CHEN Fen， E-mail： 54113447@qq.com

Abstract Objective：To investigate the effect of butorphanol regulating fatty acid synthetase（Fas）/fatty acid synthetase ligand（FasL） signaling pathway on myocardial cell apoptosis in rats with acute myocardial infarction（AMI）.Methods：Rats were grouped into blank group，AMI group，low-dose butorphanol group（12.5 μg/kg），high-dose butorphanol group（50 μg/kg），urokinase group （50 000 U/mL），rh-FasL group（0.017 mg/kg），and high-dose butorphanol＋rh-FasL group（50 μg/kg＋0.017 mg/kg），with 18 rats in each group.Except for the blank group，all other groups were used to establish the AMI model by ligating the anterior descending branch of the left coronary artery.After 1 hour of successful modeling，medication was administered once a day for 7 days.The changes of left ventricular end-systolic diameter（LVESD），left ventricular end-diastolic diameter（LVEDD），left ventricular short-axis shortening rate（LVFS），and left ventricular ejection fraction（LVEF） were detected by color Doppler ultrasonography.Serum levels of interleukin-6（IL-6），tumor necrosis factor-α（TNF-α），creatine kinase isoenzyme（CK-MB），and cardiac troponin Ⅰ（cTnⅠ） were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.2，3，5-triphenyltetrazolium chloride（TTC） staining was used to detect the percentage of myocardial infarction in rats.Hematoxylin-eosin（HE） staining was used to detect pathological changes of myocardial tissue in rats.Apoptosis of rat cardiomyocytes was detected by terminal deoxyribonucleotidyl transferase（TdT）-mediated dUTP nick end labeling（TUNEL）.The expressions of Bim，B lymphoblastoma-2 gene（Bcl-2），F(xiàn)as and FasL protein in rat myocardium were detected by Western Blot.Results：Compared with the blank group，the myocardial tissue pathological damage in the AMI group rats was severe，the LVESD，LVEDD，the levels of IL-6，TNF-α，CK-MB，cTnⅠ，the percentage of myocardial infarction area，apoptosis rate of myocardial cells，and the expression of Bim，F(xiàn)as，and FasL proteins increased，the LVFS，LVEF，and the expression of Bcl-2 protein decreased（P＜0.05）.Compared with the AMI group，the myocardial tissue pathological damage of rats in the low-dose group，high-dose group，and urokinase group reduced，the LVESD，LVEDD，the levels of IL-6，TNF-α，CK-MB，cTnⅠ，the percentage of myocardial infarction area，apoptosis rate of myocardial cells，and the expression of Bim，F(xiàn)as，and FasL proteins decreased，the LVFS，LVEF，and the expression of Bcl-2 protein increased，and the corresponding indicators in the rh-FasL group showed opposite trends（P＜0.05）.Compared with the high-dose butorphanol group，the high-dose butorphanol＋rh-FasL group of rats showed increased pathological damage in the myocardial tissue，the LVESD，LVEDD，the levels of IL-6，TNF-α，CK-MB，cTnⅠ，the percentage of myocardial infarction area，apoptosis rate of myocardial cells，and the expression of Bim，F(xiàn)as and FasL proteins increased，the LVFS，LVEF，and the expression of Bcl-2 protein decreased（P＜0.05）.Conclusion：Butorphanol may inhibit inflammatory response and myocardial cell apoptosis in AMI rats by inhibiting the Fas/FasL pathway.

Keywords acute myocardial infarction; butorphanol; fatty acid synthase/fatty acid synthase ligand signaling pathway; inflammation; experimental study

基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81300196）

作者單位 1.武漢科技大學(xué)附屬普仁醫(yī)院（武漢 430000）；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院（武漢 430022）；3.生物靶向治療研究湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（武漢 430022）；4.心血管疾病免疫診療湖北省工程研究中心（武漢 430022）

通訊作者 陳芬，E-mail：54113447@qq.com

引用信息 孟元元，劉艷，李俊，等.布托啡諾調(diào)節(jié)Fas/FasL信號(hào)通路對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（21）：3892-3898.

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是指冠狀動(dòng)脈急性缺血和缺氧引起的心肌壞死，嚴(yán)重者可引起心力衰竭^［1］。此外，AMI也是導(dǎo)致心血管疾病病人死亡的主要因素之一^［2］。研究表明，AMI的主要特征是炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡^［3］。因此，開(kāi)發(fā)抑制炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的藥物可能為AMI的治療提供新的方法。布托啡諾是一種有效的κ-阿片受體激動(dòng)劑和μ-阿片受體拮抗劑，具有鎮(zhèn)痛的作用^［4］。已有研究顯示，布托啡諾可減輕大鼠心肌缺血/再灌注損傷，表明布托啡諾具有心肌保護(hù)作用^［5］。但關(guān)于布托啡諾對(duì)AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的影響鮮有報(bào)道。相關(guān)研究顯示，脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)as）/脂肪酸合成酶配體（fatty acid synthase ligand，F(xiàn)asL）通路可誘導(dǎo)心肌缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞凋亡^［6］。但布托啡諾能否通過(guò)調(diào)控Fas/FasL信號(hào)通路影響AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡尚不明確。因此，本研究探究布托啡諾對(duì)AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的影響以及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

6周齡無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)雄性SD大鼠（體質(zhì)量200～210 g）126只購(gòu)自肇慶市瑞思元生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（粵）2020-0053。研究中的動(dòng)物護(hù)理程序經(jīng)本院動(dòng)物研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)：SYDWLL-036），所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合3R原則。

1.2 主要試劑

布托啡諾購(gòu)自南京北魚(yú)生物科技有限公司；尿激酶購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；Fas/FasL通路激活劑重組人FasL蛋白（rh-FasL）購(gòu)自湖北艾普蒂生物工程有限公司；大鼠白細(xì)胞介素-6（interleukin- 6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzymes，CK-MB）、心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cardiac troponin Ⅰ，cTnⅠ）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒購(gòu)自博輝生物科技（廣州）有限公司；DNA斷裂的原位末端標(biāo)記（TUNEL）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；兔源一抗Bim、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Fas、FasL、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔二抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。蘇木精-伊紅（HE）染色試劑購(gòu)自上海碧云天公司。

1.3 AMI大鼠模型的構(gòu)建及分組

采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的方式復(fù)制AMI模型^［7］，2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，左胸肋骨間開(kāi)胸，暴露心臟，在左心耳下方約2 mm處結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，心電圖檢測(cè)若顯示ST段持續(xù)抬高則表明造模成功。按照隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠隨機(jī)分為空白組、AMI組、布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組、rh-FasL組、布托啡諾高劑量＋rh-FasL組，每組18只?？瞻捉M不結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，除空白組外，剩余組大鼠均需采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方式復(fù)制AMI模型，建模成功1 h后，進(jìn)行給藥處理，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組^［8］大鼠分別尾靜脈注射12.5、50.0 μg/kg布托啡諾，且均腹腔注射等體積的生理鹽水；尿激酶組^［9］、rh-FasL組^［10］大鼠分別腹腔注射尿激酶50 000 U/mL、rh-FasL 0.017 mg/kg，且均尾靜脈注射等體積的生理鹽水；布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠尾靜脈注射50 μg/kg布托啡諾＋腹腔注射0.017 mg/kg rh-FasL；空白組、AMI組大鼠均腹腔注射等體積生理鹽水，尾靜脈注射等體積生理鹽水，每日1次，連續(xù)干預(yù)7 d。

1.4 心功能檢測(cè)

干預(yù)結(jié)束后，采用彩色多普勒超聲顯像儀檢測(cè)大鼠左室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end systolic diameter，LVESD）、左室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic diameter，LVEDD）、左室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening，LVFS）、左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）檢測(cè)。

1.5 標(biāo)本收集

經(jīng)2%戊巴比妥鈉麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，離心后用于ELISA實(shí)驗(yàn)；每組隨機(jī)選取6只大鼠，處死大鼠，收集大鼠的心臟用于2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色；將各組剩余的12只大鼠處死，分為兩部分（每部分包含6只大鼠的心肌組織），一部分固定于4%多聚甲醛中用于蘇木精-伊紅（HE）和TUNEL染色，另一部分凍存于－80 ℃中用于蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)。

1.6 ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)大鼠血清中IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平。

1.7 TTC染色檢測(cè)大鼠心肌梗死面積

收集各組大鼠的心肌組織包埋石蠟，切成5 μm的切片，并用TTC溶液染色15 min。用福爾馬林固定后，使用數(shù)碼相機(jī)拍攝樣品，并使用Image J軟件分析梗死面積，心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)＝梗死面積/總面積×100%。

1.8 HE染色檢測(cè)心肌組織病理變化

取固定于4%多聚甲醛中的心肌組織，經(jīng)石蠟包埋后，使用切片機(jī)切割成5 μm的連續(xù)切片。切片在二甲苯中脫蠟，用不同濃度梯度的乙醇再水化，并用HE染色，在光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯）下檢查切片病理變化。

1.9 TUNEL染色檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡

取1.8中的心肌組織切片與TUNEL溶液在37 ℃下避光孵育1 h，并用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）溶液染色。在熒光顯微鏡下觀察TUNEL染色細(xì)胞。心肌細(xì)胞凋亡率評(píng)估為TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞占DAPI染色細(xì)胞的百分比。

1.10 蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)大鼠心肌組織中Bim、Bcl-2、Fas、FasL蛋白表達(dá)

用500 μL預(yù)冷的RIPA蛋白質(zhì)裂解緩沖液提取心肌組織勻漿蛋白。取30 μg蛋白通過(guò)12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。將5%脫脂奶粉與PVDF膜在37 ℃下孵育1 h。然后，在4 ℃下加入一抗Bim（1∶4000）、Bcl-2（1∶3 000）、Fas（1∶4 000）、FasL（1∶4 000）、GAPDH（1∶4 000）孵育過(guò)夜。洗滌膜后，加入二抗（1∶5 000）在37 ℃下孵育1 h。洗滌膜后，加入增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（ECL）試劑觀察蛋白印跡，并用Image J分析軟件定量分析蛋白質(zhì)條帶灰度值。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，單因素方差分析用于多組測(cè)量數(shù)據(jù)間的分析，進(jìn)一步兩組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 布托啡諾對(duì)各組大鼠心功能指標(biāo)LVESD、LVEDD、LVFS、LVEF的影響

與空白組比較，AMI組大鼠LVESD、LVEDD升高，LVFS、LVEF降低（P＜0.05）；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠LVESD、LVEDD降低，LVFS、LVEF升高（P＜0.05）；與AMI組比較，rh-FasL組大鼠LVESD、LVEDD升高，LVFS、LVEF降低（P＜0.05）；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠LVESD、LVEDD升高，LVFS、LVEF降低（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

2.2 布托啡諾對(duì)各組大鼠血清中IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平的影響

與空白組比較，AMI組大鼠血清中IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平升高（P＜0.05）；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠血清中IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平降低（P＜0.05）；與AMI組比較，rh-FasL組大鼠血清中IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平升高（P＜0.05）；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠血清中IL-6、TNF-α、CK-MB、cTnⅠ水平升高（P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

2.3 布托啡諾對(duì)各組大鼠心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)的影響

與空白組比較，AMI組大鼠心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)升高（P＜0.05）；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)降低（P＜0.05）；與AMI組比較，rh-FasL組大鼠心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)升高（P＜0.05）；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)升高（P＜0.05）。詳見(jiàn)圖1和表3。

2.4 布托啡諾對(duì)各組大鼠心肌組織病理變化的影響

空白組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)正常，心肌細(xì)胞排列整齊且規(guī)則；AMI組心肌細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞數(shù)量減少，且存在大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠心肌組織病理?yè)p傷減輕；與AMI組比較，rh-FasL組大鼠心肌組織病理?yè)p傷加??；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠心肌組織病理?yè)p傷嚴(yán)重。詳見(jiàn)圖2。

2.5 布托啡諾對(duì)各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

與空白組比較，AMI組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05）；與AMI組比較，rh-FasL組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）。詳見(jiàn)圖3和表4。

2.6 布托啡諾對(duì)各組大鼠心肌組織中Bim、Bcl-2蛋白及Fas/FasL通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與空白組比較，AMI組大鼠心肌組織中Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)升高，Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與AMI組比較，布托啡諾低劑量組、布托啡諾高劑量組、尿激酶組大鼠心肌組織中Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)降低，Bcl-2蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與AMI組比較，rh-FasL組大鼠心肌組織中Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)升高，Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與布托啡諾高劑量組比較，布托啡諾高劑量＋rh-FasL組大鼠心肌組織中Bim、Fas、FasL蛋白表達(dá)升高，Bcl-2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）。詳見(jiàn)圖4、表5。

3 討 論

AMI是最嚴(yán)重的心血管疾病之一，盡管近年來(lái)治療策略有所改善，但死亡率依然很高^［11］。目前，直接經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療和溶栓治療廣泛用于治療AMI^［12］。然而，這些治療會(huì)產(chǎn)生副作用，例如再灌注損傷，因此有必要開(kāi)發(fā)新的藥物抑制AMI進(jìn)展。本研究采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的方式復(fù)制AMI模型，結(jié)果顯示，與空白組比較，AMI組大鼠LVESD、LVEDD升高，LVFS、LVEF降低，心肌梗死面積百分?jǐn)?shù)升高，表明AMI大鼠模型構(gòu)建成功，且AMI大鼠心功能異常。炎癥在AMI的病理生理過(guò)程中起重要作用，IL-6、TNF-α作為常見(jiàn)的促炎性細(xì)胞因子，可加重機(jī)體的炎癥反應(yīng)^［13］；細(xì)胞凋亡是AMI的關(guān)鍵病理過(guò)程，Bim作為細(xì)胞凋亡中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，可以激活促凋亡蛋白啟動(dòng)細(xì)胞凋亡途徑以響應(yīng)不良刺激，此外，Bim1還可通過(guò)抑制Bcl-2抗凋亡功能來(lái)觸發(fā)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致凋亡信號(hào)通路激活^［14］。本研究顯示，與空白組比較，AMI組大鼠血清中IL-6、TNF-α水平及心肌損傷生物標(biāo)志物CK-MB、cTnⅠ水平升高，心肌細(xì)胞凋亡率及Bim蛋白表達(dá)升高，Bcl-2蛋白表達(dá)降低，心肌組織病理?yè)p傷嚴(yán)重，表明AMI大鼠存在炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，進(jìn)而加重心肌損傷。

作為合成阿片受體激動(dòng)劑-拮抗劑，布托啡諾具有抑制炎癥和細(xì)胞凋亡的作用^［15］。據(jù)報(bào)道，布托啡諾可抑制氧和葡萄糖剝奪/再灌注誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡^［16］；布托啡諾可通過(guò)抑制脂多糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，從而減輕心肌細(xì)胞損傷^［17］。以上研究表明布托啡諾可通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的方式對(duì)心肌發(fā)揮保護(hù)作用。本研究亦證明，布托啡諾可抑制AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡，且布托啡諾劑量越高，抑制作用越明顯。尿激酶是臨床上常用于治療AMI的藥物^［18］，本研究以該藥物作為陽(yáng)性藥物，結(jié)果顯示，尿激酶與高劑量布托啡諾對(duì)AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示布托啡諾可能成為治療AMI的潛在有效藥物。Fas是一種定位于各種細(xì)胞表面的死亡受體，其與配體FasL相互作用，通過(guò)調(diào)控抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bim等Bcl-2家族蛋白成員來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡^［19］。據(jù)報(bào)道，抑制Fas/FasL途徑可減輕大鼠心肌缺血再灌注過(guò)程中炎癥反應(yīng)所造成的心肌損傷^［20］；Fas/FasL可誘導(dǎo)阿霉素處理的大鼠心肌細(xì)胞凋亡^［21］。本研究顯示，與AMI組比較，rh-FasL組大鼠心肌組織中Fas、FasL蛋白表達(dá)升高，炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡能力增強(qiáng)，表明Fas/FasL通路確實(shí)參與了AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡過(guò)程。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)布托啡諾可抑制AMI大鼠心肌組織中Fas、FasL蛋白表達(dá)，且布托啡諾越高，抑制作用越顯著，推測(cè)布托啡諾可能通過(guò)抑制Fas/FasL通路抑制AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡。為了驗(yàn)證該猜想，本研究在高劑量布托啡諾作用的基礎(chǔ)上再加上Fas/FasL通路激活劑rh-FasL來(lái)干預(yù)AMI大鼠，結(jié)果顯示，rh-FasL減弱了高劑量布托啡諾對(duì)AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用，證實(shí)了布托啡諾可能通過(guò)抑制Fas/FasL通路抑制AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡。

綜上所述，布托啡諾可能通過(guò)抑制Fas/FasL通路抑制AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡。布托啡諾對(duì)AMI大鼠炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用可能還涉及其他通路，本研究尚未探究，這將是本研究后續(xù)研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一。

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（收稿日期：2023-05-30）

（本文編輯 鄒麗）