爪趾皮膚炎對(duì)富集籠養(yǎng)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、行為和免疫的影響

摘 要：爪趾皮膚炎是家禽爪趾和足底表面的接觸性皮炎，是家禽最常見(jiàn)的爪趾健康問(wèn)題之一，對(duì)其福利和健康都產(chǎn)生了負(fù)面影響。本試驗(yàn)旨在探究爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、行為和免疫的影響。本試驗(yàn)選擇60只48周齡的海蘭褐蛋雞，四分制評(píng)分（0分，正常爪趾；1分，爪趾角化過(guò)度、皮膚發(fā)紅或變色；2分，表皮變色，爪趾皮膚炎病變輕微到糜爛；3分，趾瘤癥）后單只飼養(yǎng)于富集籠至55周齡。記錄爪趾皮膚炎蛋雞和正常蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，并在51和55周齡時(shí)分別進(jìn)行連續(xù)2d的行為錄像，行為觀察后進(jìn)行緊張不動(dòng)性試驗(yàn)和曠場(chǎng)試驗(yàn)。最后剖檢試驗(yàn)雞，從免疫相關(guān)因子在爪趾皮膚炎患處皮膚、脾、肝、小腸和血清的表達(dá)變化探究爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞免疫的影響。結(jié)果顯示：爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響（Pgt;0.05），雖然51周齡爪趾皮膚炎蛋雞的蛋白高度、哈氏單位顯著降低（Plt;0.05），但總體上爪趾皮膚炎對(duì)蛋品質(zhì)的影響較小。蛋雞行為觀察結(jié)果表明，爪趾皮膚炎造成蛋雞的羽毛修飾行為減少（Plt;0.05），但對(duì)其他事件性行為（啄物、啄趾、往返踱步、舒適行為）無(wú)顯著影響（Pgt;0.05）。行為學(xué)測(cè)試結(jié)果表明，爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞恐懼和焦慮情緒無(wú)顯著影響（Pgt;0.05）。爪趾皮膚炎蛋雞爪趾皮膚組織、肝和脾免疫細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和免疫球蛋白IgA、IgG的mRNA相對(duì)表達(dá)差異顯著（Plt;0.05），均呈上升趨勢(shì)；血清IL-4、IL-6、IFN-γ和TNF-α的濃度也顯著增加（Plt;0.05）。爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能影響不顯著；爪趾皮膚炎蛋雞羽毛修飾行為表達(dá)降低，且爪趾患處皮膚組織免疫相關(guān)因子的相對(duì)表達(dá)量均增加，說(shuō)明爪趾皮膚炎可能導(dǎo)致蛋雞的慢性炎癥狀態(tài)。

關(guān)鍵詞：爪趾皮膚炎；蛋雞；生產(chǎn)性能；蛋品質(zhì)；行為；免疫反應(yīng)

中圖分類(lèi)號(hào)：S831.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0366-6964（2024）06-2680-12

收稿日期：2023-09-18

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（32272928；31972608）；黑龍江省自然科學(xué)基金聯(lián)合引導(dǎo)項(xiàng)目（LH2022C032）

作者簡(jiǎn)介：王曉旭（1999-），女，河北石家莊人，碩士，主要從事動(dòng)物行為與福利方向的研究，E-mail：1042599896@qq.com；Tel：17367867467

*通信作者：張潤(rùn)祥，主要從事動(dòng)物行為與福利方向的研究，E-mail：zhangrunxiang@neau.edu.cn

Effect of Foot Pad Dermatitis on Production Performance，Egg Quality，Behavioral Responses，and Immune Levels of Laying Hens in Furnished Cages

WANGXiaoxu，CHENYanqing，ZHANGJiaqi，WANGYe，WANGRui，YUHanlin， YANGKaiqi，BAOJun，ZHANGRunxiang^*

（Key Laboratory of Chicken Genetics and Breeding of Ministry of Agriculture and Rural Affairs，College of Animal Science and Technology，Northeast Agricultural University，Harbin150030，China）

Abstract：Foot pad dermatitis（FPD）is acontact dermatitis affecting the claw and toe surfaces of poultry.FPD is one of the most common paw-toe health problems，with negative effects on the welfare and health of poultry.This study aimed to explore the effects of FPD on production performance，egg quality，behavioral responses，and immune levels of laying hens in the furnished cages.In this study，60Hyline Brown laying hens with48weeks of ages（WOA）were randomly selected.After four-point scoring，that score0for no lesions on the foot pads，score1for excessive keratosis，a small lesion of the foot pad epithelium with redness or discoloration，score2for foot pad dermatitis with epidermis discoloration，cutaneous lesions slight to erosion; score3for bumble foot with swelling of the foot pad visible from dorsal view.Bird was raised in furnished cage until55WOA.Performance and egg quality of laying hens were recorded and video-recorded for2consecutive days at51and55WOA.Then，the tonic immobility（TI）tests and open field tests（OFT）were carried out.Finally，the expression of immune-related factors in the skin，spleens，livers，small intestines，and serum of hens were detected.We found that FPD had no significant effect on the production performance（Pgt;0.05），but improved the body weight compared with the score0group（Plt;0.05），and the protein height and Haugh Units were significantly reduced for hens at51WOA（Plt;0.05）.Behavioral observations showed that FPD reduced the expression of preening behaviors in laying hens（Plt;0.05）.However，there was no significant effect on other event behaviors（object pecking，toe pecking，pacing，comfort behaviors）（Pgt;0.05）.The results of behavioral tests showed that FPD had no significant effect on responses of fear and anxiety in laying hens（Pgt;0.05）.The relative mRNA expressions of immune cytokines（IL-2，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，IL-17，IL-1β，IFN-γ，and TNF-α）and immunoglobulin IgA and IgG in foot，liver，and spleen tissues were significantly increased in hens with FPD（Plt;0.05）.The concentrations of IL-4，IL-6，IFN-γ，and TNF-α were also increased in the serum（Plt;0.05）.FPD had no significant effect on the production performance of laying hens.FPD decreased the expression of preening behavior and increased the expression of immune-related factors in the skin of the paw toe，which might lead to the chronic inflammation of laying hens.

Key words：foot pad dermatitis; laying hens; production performance; egg quality; behaviors; immune responses

*Corresponding author：ZHANG Runxiang，E-mail：zhangrunxiang@neau.edu.cn

爪趾損傷，包括皮膚角化過(guò)度、爪趾皮膚炎和趾瘤癥，是蛋雞最常見(jiàn)的爪趾健康問(wèn)題之一，在非籠養(yǎng)系統(tǒng)、富集籠養(yǎng)系統(tǒng)和傳統(tǒng)疊層籠養(yǎng)系統(tǒng)均有發(fā)生。蛋雞爪趾角質(zhì)層增生導(dǎo)致皮膚角化過(guò)度，一般是蛋雞站立、抓握和棲息在籠網(wǎng)底面或棲架時(shí)爪趾長(zhǎng)期負(fù)荷壓力所致^[1]。角化過(guò)度進(jìn)一步可發(fā)展為爪趾皮膚炎。爪趾皮膚炎是家禽爪趾和足底表面的接觸性皮炎，可引起炎癥性病變，是家禽爪趾損傷的最主要表現(xiàn)形式^[2]。爪趾皮膚炎已成為現(xiàn)代家禽養(yǎng)殖業(yè)的一個(gè)嚴(yán)重的福利和健康問(wèn)題^[3]。從食物安全角度看，爪趾病變區(qū)域很可能成為金黃色葡萄球菌和其它微生物入侵機(jī)體的入口^[4]。數(shù)據(jù)表明，在傳統(tǒng)籠和富集籠飼養(yǎng)系統(tǒng)中的蛋雞比在其他系統(tǒng)中的蛋雞有更好的足部健康狀況，報(bào)道稱(chēng)丹麥商業(yè)蛋雞群中舍飼散養(yǎng)蛋雞爪趾損傷率為16.1%，高于有機(jī)飼養(yǎng)系統(tǒng)中的蛋雞（3.1%）^[5]。而在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)系統(tǒng)中的肉雞爪趾皮膚炎的平均患病率為14.8%，自由放養(yǎng)和有機(jī)飼養(yǎng)系統(tǒng)相比標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)系統(tǒng)顯示出更高的患病率，其中有機(jī)飼養(yǎng)肉雞的爪趾皮膚炎患病率最高為98.1%，自由飼養(yǎng)肉雞為32.8%^[6]。而在2005年，Mayne^[7]報(bào)道了火雞也有相似爪趾皮膚炎情況；近年來(lái)，爪趾皮膚炎在種鴨中的發(fā)病率也不斷上升，導(dǎo)致死亡率高達(dá)20%～30%^[3]。

爪趾皮膚炎能夠誘導(dǎo)疼痛反應(yīng)，致使家禽行走行為和生長(zhǎng)速度下降^[8]。行走行為和步態(tài)穩(wěn)定是評(píng)估農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物疼痛的一個(gè)重要指標(biāo)^[9]?；加凶χ浩つw炎的火雞比爪趾正常的火雞行動(dòng)緩慢，疼痛感隨著炎癥嚴(yán)重程度增加而增加，鎮(zhèn)痛處理后行走行為表達(dá)較為正常^[10]。步幅長(zhǎng)度在患有較輕程度炎癥和較重程度炎癥的家禽之間有著顯著差異，程度較輕時(shí)步幅較長(zhǎng)，程度較重步幅較短^[11]。這些跡象都表明了患有爪趾皮膚炎的禽類(lèi)步態(tài)模式存在缺陷，行走不穩(wěn)定^[12]。因此，爪趾皮膚炎影響了家禽的行為表現(xiàn)和福利水平。

皮膚是身體和環(huán)境之間良好的物理屏障，為機(jī)體抵御外界感染提供免疫防御的第一道防線(xiàn)^[13]。皮膚免疫穩(wěn)態(tài)的維持依賴(lài)于細(xì)胞因子之間良好的協(xié)調(diào)能力，平衡失調(diào)時(shí)則誘導(dǎo)皮膚炎癥產(chǎn)生^[14]。細(xì)胞因子（cytokine，CK）是一類(lèi)由免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞受抗原或絲裂原刺激后產(chǎn)生的具有激素樣活性的多功能多肽和蛋白質(zhì)分子，能夠調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫，也能夠調(diào)節(jié)血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)以及損傷組織修復(fù)。細(xì)胞因子通過(guò)參與機(jī)體炎癥和損傷過(guò)程廣泛調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答^[15]。皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞接收來(lái)自環(huán)境的刺激，并將其傳遞給皮膚中的免疫細(xì)胞，通過(guò)產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子，包括白細(xì)胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），以及通過(guò)細(xì)胞因子和趨化因子受體的表達(dá)，激活患處皮膚的促炎因子^[16]。免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）作為參與黏膜免疫的重要因素，在防御各種致病性病原（如細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)）感染中起著關(guān)鍵作用^[17]。

隨著蛋雞飼養(yǎng)系統(tǒng)逐漸從傳統(tǒng)疊層籠養(yǎng)到非籠養(yǎng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)變，蛋雞爪趾皮膚炎的發(fā)生率有所升高，本試驗(yàn)聚焦爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、行為反應(yīng)和免疫狀態(tài)的影響，為蛋雞在生產(chǎn)上防控爪趾損傷提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器

視頻監(jiān)控設(shè)備（DS-2CD3T10 D，杭州海康威視數(shù)字技術(shù)股份有限公司）；電子天平（FB224，上海舜宇恒平）；蛋殼厚度測(cè)量?jī)x（ORKA-ESTG-1，以色列）；蛋殼硬度測(cè)量?jī)x（ORKA-EFR-01，以色列）；蛋白質(zhì)綜合測(cè)量?jī)x（EMT-5200，以色列）；組織冷凍研磨儀（上海新芝）；分光光度計(jì)（Eppeddorf BioSpectrometer fluorescence，美國(guó)）；FSQ-101反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TOYOBO，日本）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和爪趾皮膚炎等級(jí)判定

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)

本試驗(yàn)在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院人工氣候室進(jìn)行，選取48周齡的富集籠養(yǎng)海蘭褐蛋雞60只作為試驗(yàn)對(duì)象。從當(dāng)?shù)丶仪蒺B(yǎng)殖場(chǎng)（中國(guó)哈爾濱）購(gòu)買(mǎi)60日齡蛋雞飼養(yǎng)于傳統(tǒng)育成籠，18周齡轉(zhuǎn)至長(zhǎng)寬高分別為180cm、70cm和70cm的富集籠（每籠15只蛋雞），爪趾損傷判定后單只飼養(yǎng)于富集籠。富集籠規(guī)格為50cm×50cm×70cm（長(zhǎng)×寬×高）并配備單獨(dú)的乳頭飲水器，籠內(nèi)20cm與40cm高度分別設(shè)置一根棲木，籠子底部設(shè)置木制產(chǎn)蛋箱。雞舍人工光照在20lx左右，光照期為16h（5：00-21：00）。雞舍采取自然通風(fēng)與機(jī)械通風(fēng)相結(jié)合的方式進(jìn)行空氣交換，溫度和濕度分別控制在20～24℃和40%～70%，蛋雞自由采食和飲水。蛋雞飼喂產(chǎn)蛋期配合飼料（禾豐，黑龍江，中國(guó)），飼料成分：玉米、豆粕、玉米蛋白粉、植物油（大豆油）、鹽、氨基酸、碳酸氫鈉、石粉、碳酸二氫鈣、氯化膽堿、維生素預(yù)混料等；飼料營(yíng)養(yǎng)水平：代謝能11720kJ·kg^-1，粗脂肪6.30%，粗蛋白17.84%，總磷0.59%，鈣2.80%，植酸磷0.17%。

1.2.2 爪趾皮膚炎等級(jí)判定

根據(jù)Heerkens等^[18]的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)肉眼觀察對(duì)爪趾部損傷進(jìn)行分組，為確保爪趾皮膚炎評(píng)分準(zhǔn)確性，每4周評(píng)估一次，實(shí)時(shí)調(diào)整爪趾皮膚炎蛋雞的標(biāo)記情況，并在取樣前進(jìn)行最后一次損傷判定，并以最后一次判定作為爪趾評(píng)分分組依據(jù)。

48周齡和55周齡爪趾損傷評(píng)估一致的蛋雞共54只，其中，爪趾正常蛋雞（0分）13只，所占比例為24%；爪趾皮膚炎評(píng)分為1分蛋雞25只，所占比例為46%；評(píng)分為2分的蛋雞占30%，共16只；評(píng)分為3分的蛋雞在試驗(yàn)組內(nèi)并未觀察到，占比0%。因此，正常蛋雞（0分）與爪趾皮膚炎蛋雞（1分、2分）所占比例分別為24%和76%。圖1所示，爪趾皮膚炎的表觀變化，圖1A表示正常蛋雞（0分）爪趾，爪趾無(wú)損傷或疤痕；圖1B表示爪趾皮膚炎評(píng)分為1分的蛋雞爪趾，爪趾腳墊較硬，出現(xiàn)小范圍（lt;4mm²）硬繭；圖1C表示評(píng)分為2分的爪趾，損傷范圍較1分更大，病變較明顯，病變部位顏色變?yōu)樯钌?，表皮壞死，甚至有至真皮的糜爛。

1.3 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

48周齡根據(jù)蛋雞爪趾皮膚炎的評(píng)分進(jìn)行分組，55周齡最終判定試驗(yàn)雞只的爪趾評(píng)分狀態(tài)后，去除掉48～55周齡期間評(píng)分發(fā)生變化的雞，以48～55周齡評(píng)分分?jǐn)?shù)保持一致的試驗(yàn)雞（n=12）作為蛋雞體重和產(chǎn)蛋率的最終記錄依據(jù)。

在蛋雞51、55周齡行為觀察錄像結(jié)束后，隨機(jī)從每組選取10枚雞蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)檢測(cè)。分析蛋重（g）、蛋殼重（g）、蛋黃重（g）、蛋殼厚度（mm）、蛋殼強(qiáng)度（kg·cm^-3）、蛋形指數(shù)、蛋殼顏色、蛋白高度（mm）和哈氏單位。

1.4 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞行為的影響

通過(guò)視頻監(jiān)控設(shè)備采集51和55周齡蛋雞連續(xù)2d的行為錄像，使用Observer觀察系統(tǒng)進(jìn)行行為觀察和數(shù)據(jù)記錄，行為錄像采集時(shí)段為9：00-11：00和14：00-16：00。蛋雞事件性行為（行為參數(shù)和定義見(jiàn)表2）的觀察采用連續(xù)觀察法與0-1取樣法，對(duì)所觀察蛋雞進(jìn)行一次完整的行為記錄，行為每發(fā)生一次就記錄為一次，否則不記錄，用已觀察時(shí)期發(fā)生的總次數(shù)表示。

緊張不動(dòng)性試驗(yàn)（tonic immobility tests，TI）：在51、55周分別對(duì)所有蛋雞進(jìn)行緊張不動(dòng)性測(cè)試，將蛋雞以背部著地的姿勢(shì)放入“U”型槽中，一只手輕按母雞胸部，用另一只手輕按母雞頭部，此狀態(tài)保持15s。為保證試驗(yàn)成功，母雞需保持10s靜止不動(dòng)，隨后操作者慢慢松開(kāi)雙手，此時(shí)開(kāi)始記錄母雞從靜止到站立所用時(shí)間。如果母雞在15min內(nèi)仍然保持靜止?fàn)顟B(tài)，則應(yīng)該記錄為有15min的TI持續(xù)時(shí)間。TI時(shí)間越長(zhǎng)，說(shuō)明蛋雞的恐懼行為反應(yīng)越強(qiáng)。

曠場(chǎng)試驗(yàn)（open field tests，OFT）：55周齡蛋雞爪趾評(píng)分結(jié)束后對(duì)所有蛋雞進(jìn)行曠場(chǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)場(chǎng)地為150cm×150cm×90cm（長(zhǎng)×寬×高）的正方形場(chǎng)地，將場(chǎng)地平均分為5×5方格后，每個(gè)方格的邊長(zhǎng)是30cm。試驗(yàn)開(kāi)始前將蛋雞置于場(chǎng)地中央，試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為10min，使用錄像設(shè)備記錄蛋雞在試驗(yàn)場(chǎng)地內(nèi)的行為。記錄蛋雞第一次移動(dòng)的潛伏時(shí)間、穿過(guò)網(wǎng)格線(xiàn)的次數(shù)、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、舒適行為次數(shù)和探索場(chǎng)地時(shí)間。

1.5 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞免疫反應(yīng)的影響

1.5.1 爪趾皮膚炎蛋雞樣品采集

在55周齡末，試驗(yàn)蛋雞進(jìn)行安樂(lè)死，采集蛋雞爪趾正常部分組織和患處組織樣品，同時(shí)采集肝、脾和小腸組織，凍存管分裝后于-80℃保存，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.5.2 組織RNA提取、反轉(zhuǎn)錄以及qRT-PCR

根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)抽提蛋雞爪趾皮膚組織、脾、肝、小腸組織總RNA（n=6），測(cè)定總RNA濃度后反轉(zhuǎn)錄成cDNA。基因引物序列如表3所示。qRT-PCR反應(yīng)在Roche Applied Science LightCycler480上進(jìn)行。qRT-PCR的反應(yīng)體系為10 μL體系（ddH₂O3.4μL、熒光染料5μL、上下游引物各0.3μL、下游引物0.3μL、cDNA1μL），其反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性60s后進(jìn)入循環(huán)，循環(huán)條件為95 ℃20s，60 ℃60s，共40個(gè)循環(huán)。用2^-ΔΔCt計(jì)算各基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量，β-actin作為內(nèi)參基因統(tǒng)一結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)均先用Excel2016進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)，使用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。首先用Shapiro-Wilk test方法對(duì)行為、生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、及免疫數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，部分不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行Sqrt或Ln轉(zhuǎn)換后符合正態(tài)分布，Levene test進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。利用比較均值下的單因素ANOVA分析正常蛋雞和患有爪趾皮膚炎蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和行為數(shù)據(jù)（站立、趴臥、羽毛修飾、舒適行為）、TI測(cè)試數(shù)據(jù)、曠場(chǎng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)以及免疫相關(guān)因子表達(dá)量之間的差異。結(jié)果以“x-±s_x-”表示，Plt;0.05時(shí)表示差異顯著。蛋雞啄物、啄趾、來(lái)回踱步行為數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后仍不符合正態(tài)性分布，進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，使用曼-惠特尼U檢驗(yàn)進(jìn)行比較分析，結(jié)果以中位數(shù)（Q25，Q75）表示，Plt;0.05時(shí)表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能與蛋品質(zhì)的影響

48～55周齡爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞產(chǎn)蛋率、體重比較如表4所示。48～55周齡，爪趾皮膚炎評(píng)分保持一致的0分蛋雞13只，1分蛋雞25只，2分蛋雞16只。48～55周齡爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞相比較產(chǎn)蛋率差異不顯著（Pgt;0.05）。與爪趾正常蛋雞體重相比，爪趾皮膚炎蛋雞體重較大（Plt;0.05）。

爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞在51、55周齡時(shí)的蛋品質(zhì)比較如表5所示。51周齡時(shí)，與正常蛋雞相比較，爪趾皮膚炎蛋雞蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼蛋重比、蛋黃蛋重比差異均不顯著（Pgt;0.05），蛋白高度和哈氏單位顯著降低（Plt;0.05）。55周齡時(shí)各蛋品質(zhì)指標(biāo)差異均不顯著（Pgt;0.05）。

2.2 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞行為的影響

2.2.1 事件性行為

爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞48～51、52～55周齡事件性行為中的羽毛修飾和舒適行為結(jié)果如表6所示，啄物、啄趾、來(lái)回踱步行為數(shù)據(jù)的非參數(shù)秩和檢驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。爪趾皮膚炎蛋雞羽毛修飾行為表達(dá)降低（Plt;0.05），且52～55周齡時(shí)啄物行為表達(dá)有降低趨勢(shì)（P=0.061），但48～51、52～55周齡時(shí)舒適行為、啄物、啄趾和來(lái)回踱步差異均不顯著（Pgt;0.05）。

2.2.2 緊張不動(dòng)性測(cè)試（TI） 爪趾正常蛋雞與爪趾皮膚炎蛋雞在51周齡和55周齡強(qiáng)直靜止持續(xù)時(shí)間結(jié)果如表7所示。51周齡和55周齡緊張不動(dòng)性差異不顯著（Pgt;0.05）。

2.2.3 曠場(chǎng)試驗(yàn)測(cè)試（OFT） 爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞曠場(chǎng)試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果如表8所示。

爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞相比較，第一次移動(dòng)的潛伏期、穿過(guò)的方格數(shù)量、運(yùn)動(dòng)的時(shí)間、探索場(chǎng)地時(shí)間、舒適行為次數(shù)差異均不顯著（Pgt;0.05）。

2.3 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞免疫相關(guān)因子的表達(dá)影響

2.3.1 蛋雞爪趾皮膚炎組織、肝、小腸、脾炎癥相關(guān)免疫球蛋白和細(xì)胞因子的表達(dá)

蛋雞爪趾皮膚炎組織、肝、小腸、脾炎癥相關(guān)的免疫球蛋白和細(xì)胞因子（IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IgA、IgG、IFN-γ、TNF-α）的mRNA表達(dá)量變化如圖3所示。爪趾皮膚炎組織（1分組、2分組）與正常爪趾（0分組）相比，IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IgA、IgG、IFN-γ、TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量增加（Plt;0.05）（圖3A）；肝組織中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IgA、IgG、IFN-γ、TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量增加（Plt;0.05）（圖3B）；小腸組織IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IgA、IgG、IFN-γ、TNF-α表達(dá)量增加，IL-1β表達(dá)量降低（圖3C）；脾組織中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IgA、IgG、IFN-γ、TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量增加（Plt;0.05）（圖3D）。

2.3.2 蛋雞不同評(píng)分爪趾皮膚炎血清炎癥細(xì)胞因子的分泌水平

蛋雞不同程度爪趾皮膚炎血清炎癥因子表達(dá)水平如表9表示。血清炎癥因子1分組、2分組與0分組相比IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α差異顯著（Plt;0.05），表達(dá)量均增加；血清IL-1β、IL-2、IL-8、IL-10的含量差異不顯著（Pgt;0.05）。

3 討 論

3.1 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

爪趾皮膚炎對(duì)家禽的福利水平和健康狀況具有不利影響，是家禽養(yǎng)殖業(yè)面臨的重大問(wèn)題之一^[3]。作者本試驗(yàn)選取48～55周齡評(píng)分分?jǐn)?shù)保持一致的試驗(yàn)雞進(jìn)行稱(chēng)重，發(fā)現(xiàn)爪趾皮膚炎蛋雞體重顯著高于爪趾正常蛋雞，有研究發(fā)現(xiàn)，性別和體重可能對(duì)爪趾皮膚炎的發(fā)病產(chǎn)生影響^[2]。雄性肉雞爪趾皮膚炎發(fā)病率的增加可能與體型大小有關(guān)，因?yàn)樾坌匀怆u通常比雌性重，因此其腳墊上負(fù)荷壓力更大，這也導(dǎo)致爪趾損傷的發(fā)生率增加，作者的本研究結(jié)果與之相一致符。遺憾的是，作者并沒(méi)有檢測(cè)一開(kāi)始進(jìn)入試驗(yàn)即48周齡蛋雞的體重，無(wú)法通過(guò)體重的變化來(lái)更為精確的驗(yàn)證爪趾皮膚炎對(duì)體重的影響，這也是本試驗(yàn)中相對(duì)不完善的地方。本試驗(yàn)中，爪趾皮膚炎蛋雞與正常爪趾蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)明顯差異說(shuō)明了爪趾皮膚炎本身并沒(méi)有嚴(yán)重影響蛋雞的生產(chǎn)性能。蛋品質(zhì)是由外部蛋品質(zhì)和內(nèi)部蛋品質(zhì)構(gòu)成，外部蛋品質(zhì)包括蛋殼強(qiáng)度、蛋殼重量和蛋殼厚度，對(duì)雞蛋運(yùn)輸、儲(chǔ)存和種蛋孵化等有著直接的影響^[21]。哈氏單位和蛋白高度是反映內(nèi)部蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)，哈氏單位和蛋品質(zhì)呈正相關(guān)，哈氏單位越大表示蛋白黏稠度越高^[22]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞雞蛋的蛋殼強(qiáng)度、蛋殼重量和蛋殼厚度之間無(wú)差異，說(shuō)明爪趾皮膚炎對(duì)外部蛋品質(zhì)沒(méi)有影響。51周齡患爪趾皮膚炎蛋雞雞蛋的蛋白高度和哈氏單位均明顯低于正常爪趾蛋雞，而55周齡時(shí)蛋白高度和哈氏單位之間無(wú)明顯差異。蛋品質(zhì)受到很多因素影響，如營(yíng)養(yǎng)水平、蛋雞周齡、產(chǎn)蛋周期等^[23]。作者猜測(cè)，51周齡時(shí)蛋雞處于產(chǎn)蛋高峰期末期，蛋雞逐漸轉(zhuǎn)入產(chǎn)蛋后期，蛋品質(zhì)可能有所變化，在此期間，爪趾皮膚炎可能放大了這種變化，導(dǎo)致雞蛋內(nèi)部蛋品質(zhì)降低。隨著蛋雞周齡增加，蛋雞轉(zhuǎn)入產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)逐步穩(wěn)定，因此爪趾皮膚炎對(duì)蛋品質(zhì)的影響應(yīng)當(dāng)是有限的。

3.2 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞行為的影響

行為是動(dòng)物與環(huán)境維持平衡的一種協(xié)調(diào)手段，通過(guò)行為調(diào)節(jié)和行為改變促使動(dòng)物主動(dòng)適應(yīng)環(huán)境，行為常用來(lái)評(píng)價(jià)動(dòng)物福利狀況。行為錄像觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞啄物、啄趾、往返踱步、舒適行為等事件性行為無(wú)顯著影響，其原因可能由于本試驗(yàn)中我們選擇的是富集籠飼養(yǎng)系統(tǒng)，而在多層立體棲架系統(tǒng)中地面墊料會(huì)導(dǎo)致母雞爪趾衛(wèi)生不良，致使更高的爪趾皮膚炎患病率^[18]。而羽毛修飾行為在爪趾皮膚炎蛋雞中表達(dá)降低，富集籠或非籠養(yǎng)系統(tǒng)中，蛋雞修飾行為的表達(dá)要高于傳統(tǒng)籠養(yǎng)蛋雞，并且在應(yīng)激條件蛋雞修飾行為表達(dá)減少，因此，修飾行為的高表達(dá)可以說(shuō)明蛋雞處于較低的應(yīng)激水平，或許表明了爪趾皮膚炎使得蛋雞長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)^[24]。

恐懼和焦慮情緒能夠反應(yīng)動(dòng)物的痛苦狀態(tài)，家禽的恐懼和焦慮情緒反應(yīng)被認(rèn)為是評(píng)價(jià)其福利狀態(tài)的重要指標(biāo)^[25]。動(dòng)物品種、生存經(jīng)歷和環(huán)境應(yīng)激都是導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生恐懼的主要影響因素^[26]。測(cè)定家禽的緊張不動(dòng)性持續(xù)時(shí)間是評(píng)估家禽恐懼狀態(tài)的一種常用方法，時(shí)間越長(zhǎng)則表示恐懼程度越高^[27]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)爪趾皮膚炎蛋雞的強(qiáng)直靜止時(shí)間與正常爪趾蛋雞沒(méi)有顯著差異。常見(jiàn)的測(cè)試家禽焦慮的方法是曠場(chǎng)試驗(yàn)測(cè)試^[28]。曠場(chǎng)測(cè)試結(jié)果表明不同程度的爪趾皮膚炎蛋雞行為模式?jīng)]有差異，這與緊張不動(dòng)性持續(xù)時(shí)間測(cè)試結(jié)果相符。作者推測(cè)，爪趾皮膚炎沒(méi)有引起蛋雞恐懼和焦慮反應(yīng)，不影響蛋雞的情緒福利狀態(tài)。

3.3 爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞免疫狀態(tài)的影響

炎癥是細(xì)胞和組織水平上應(yīng)對(duì)各種刺激的復(fù)雜反應(yīng)，通常是免疫系統(tǒng)抗感染的結(jié)果^[29]。持續(xù)的炎癥反應(yīng)產(chǎn)生慢性應(yīng)激損傷。IL-1β也被稱(chēng)為促炎性細(xì)胞因子，介導(dǎo)自身炎癥性疾病，當(dāng)IL-1β活性降低時(shí)炎癥得到緩解^[30]。IL-2與IL-10均是白細(xì)胞介素家族中的抗炎因子，IL-2缺失會(huì)導(dǎo)致免疫缺陷^[31]。IL-10在機(jī)體感染過(guò)程中限制免疫反應(yīng)，從而防止免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的對(duì)宿主的損害^[32]。IL-4已被證實(shí)在B淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用，并調(diào)控B淋巴細(xì)胞分泌IgG和IgE^[33]。在腸道炎癥研究中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子與特定受體結(jié)合并激活腸道上皮細(xì)胞以及協(xié)同免疫細(xì)胞中的NF-κB轉(zhuǎn)錄因子信號(hào)通路，導(dǎo)致IL-4、IL-6和IL-8基因的上調(diào)^[34]。IL-17對(duì)組織細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞具有多效性作用，是組織炎癥中的重要介質(zhì)^[35]。TNF-α和IFN-γ能誘導(dǎo)IL-17的表達(dá)^[36]。同時(shí)，IL-17和IFN-γ協(xié)同促進(jìn)人角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子^[37]。作者研究發(fā)現(xiàn)，爪趾皮膚炎蛋雞與正常爪趾蛋雞相比較，爪趾、肝、脾組織IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β的表達(dá)均呈上升趨勢(shì)。在對(duì)外周血清炎癥因子檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，患爪趾皮膚炎蛋雞血清IL-4、IL-6與正常蛋雞相比均升高。作者推測(cè)，這些變化可能是因?yàn)樽χ浩つw炎導(dǎo)致爪趾組織產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，隨著炎癥的持續(xù)性發(fā)展，進(jìn)一步引發(fā)全身性慢性應(yīng)激，導(dǎo)致肝、脾、小腸和外周血清炎癥因子表達(dá)量增加。炎癥初期，組織免疫細(xì)胞受到刺激分泌促炎因子導(dǎo)致機(jī)體炎癥反應(yīng)，隨著炎癥反應(yīng)的進(jìn)一步發(fā)展，免疫細(xì)胞分泌抗炎因子維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。這也與McGeachy等^[38]的研究結(jié)果相似，他表示，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí)，促炎因子分泌增加促進(jìn)致炎物質(zhì)釋放，這時(shí)炎癥反應(yīng)加重；為了維持機(jī)體免疫的平衡，又通過(guò)分泌抗炎因子來(lái)緩解炎癥反應(yīng)。同時(shí)，小腸中IL-4、IL-6、IL-8、IL-10表達(dá)增多可能反應(yīng)腸免疫穩(wěn)態(tài)受到破壞。爪趾組織中IL-17表達(dá)量的增加也說(shuō)明了機(jī)體正在處于自我修復(fù)的過(guò)程，促進(jìn)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的產(chǎn)生和表達(dá)。

IFN-γ是IFN的一種，主要由自然殺傷細(xì)胞（NK）和T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生^[39]。宿主被病毒感染后免疫系統(tǒng)通過(guò)胞外或胞漿途徑識(shí)別病毒成分誘導(dǎo)分泌IFN-γ^[40]。免疫球蛋白IgG在抗感染免疫尤其是再次免疫應(yīng)答中起重要作用，有中和毒素和病毒的作用。IgA由呼吸道、消化道以及泌尿生殖道黏膜等位于體表固有層的漿細(xì)胞產(chǎn)生，當(dāng)IgA以二聚體形式存在于外分泌液中時(shí)，能與相應(yīng)病原微生物結(jié)合，阻止其黏附到細(xì)胞表面，使其喪失黏附和感染能力，是黏膜表面抗感染免疫的第一道防線(xiàn)^[41]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，患爪趾皮膚炎蛋雞與正常蛋雞相比，爪趾、肝、小腸、脾組織IFN-γ、IgG和IgA表達(dá)水平均顯著性增高，作者推測(cè)細(xì)菌或病毒在爪趾損傷部位聚集并產(chǎn)生分泌物，致病菌及其分泌物隨循環(huán)流經(jīng)機(jī)體到達(dá)各器官組織，在組織部位檢測(cè)到相關(guān)因子表達(dá)量增加，啟動(dòng)免疫應(yīng)答和調(diào)節(jié)系統(tǒng)，分泌免疫球蛋白和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子來(lái)抵御侵害。

4 結(jié) 論

爪趾皮膚炎對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，且對(duì)蛋品質(zhì)的影響有限；爪趾皮膚炎蛋雞羽毛修飾行為表達(dá)降低，但不影響其他事件性行為的表達(dá)，也不影響蛋雞的恐懼和焦慮情緒。與正常爪趾相比，爪趾皮膚炎患處皮膚組織免疫相關(guān)細(xì)胞因子相對(duì)表達(dá)量均增加，而肝、小腸、脾組織中所檢測(cè)的部分免疫細(xì)胞因子表達(dá)升高。因此，爪趾皮膚炎可能導(dǎo)致蛋雞慢性炎癥狀態(tài)，表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞因子高表達(dá)的免疫亢進(jìn)。

參考文獻(xiàn)（References）：

[1]WEITZENBüRGER D，VITS A，HAMANN H，et al.Macroscopic and histopathological alterations of foot pads of laying hens kept in small group housing systems and furnished cages[J].Br Poult Sci，2006，47（5）：533-543.

[2]SHEPHERD EM，F(xiàn)AIRCHILD BD.Footpad dermatitis in poultry[J].Poult Sci，2010，89（10）：2043-2051.

[3]QIN SM，BAI WQ，ZHANG KY，et al.Different microbiomes are found in healthy breeder ducks and those with foot pad dermatitis[J].Poult Sci，2019，98（12）：6340-6348.

[4]HESTER PY.The role of environment and management on leg abnormalities in meat-type fowl[J].Poult Sci，1994，73（6）：904-915.

[5]RIBER AB，HINRICHSEN LK.Keel-bone damage and foot injuries in commercial laying hens in Denmark[J].Anim Welfare，2016，25（2）：179-184.

[6]PAGAZAURTUNDUA A，WARRISS PD.Levels of foot pad dermatitis in broiler chickens reared in5different systems[J].Br Poult Sci，2006，47（5）：529-532.

[7]MAYNE RK.A review of the aetiology and possible causative factors of foot pad dermatitis in growing turkeys and broilers[J].World′s Poult Sci J，2005，61（2）：256-267.

[8]DANBURY TC，WEEKS CA，WATERMAN-PEARSON AE，et al.Self-selection of the analgesic drug carprofen by lame broiler chickens[J].Vet Rec，2000，146（11）：307-311.

[9]GIGLIUTO C，DE GREGORI M，MALAFOGLIA V，et al.Pain assessment in animal models：do we need further studies？[J].J Pain Res，2014，7：227-236.

[10]MCKEEGAN D.Foot pad dermatitis and hock burn in broilers：risk factors，aetiology and welfare consequences[R].Scotland：Faculty of Veterinary Medicine，University of Glasgow，2010.

[11]WEBER WYNEKEN C，SINCLAIR A，VELDKAMP T，et al.Footpad dermatitis and pain assessment in turkey poults using analgesia and objective gait analysis[J].Br Poult Sci，2015，56（5）：522-530.

[12]HARMS RH，SIMPSON CF.Biotin deficiency as apossible cause of swelling and ulceration of foot pads[J].Poult Sci，1975，54（5）：1711-1713.

[13]NESTLE FO，DI MEGLIO P，QIN JZ，et al.Skin immune sentinels in health and disease[J].Nat Rev Immunol，2009，9（10）：679-691.

[14]DI MEGLIO P，PERERA GK，NESTLE FO.The multitasking organ：recent insights into skin immune function[J].Immunity，2011，35（6）：857-869.

[15]KAWAGUCHI M，ADACHI M，ODA N，et al.IL-17cytokine family[J].J Allergy Clin Immunol，2004，114（6）：1265-1273.

[16]LIZZUL PF，APHALE A，MALAVIYA R，et al.Differential expression of phosphorylated NF-κB/RelA in normal and psoriatic epidermis and downregulation of NF-κB in response to treatment with etanercept[J].J Invest Dermatol，2005，124（6）：1275-1283.

[17]MACPHERSON AJ，MCCOY KD，JOHANSEN FE，et al.The immune geography of IgA induction and function[J].Mucosal Immunol，2008，1（1）：11-22.

[18]HEERKENS JL T，DELEZIE E，RODENBURG TB，et al.Risk factors associated with keel bone and foot pad disorders in laying hens housed in aviary systems[J].Poult Sci，2016，95（3）：482-488.

[19]PICKEL T，SCHOLZ B，SCHRADER L.Perch material and diameter affects particular perching behaviours in laying hens[J].Appl Anim Behav Sci，2010，127（1/2）：37-42.

[20]DUNCAN IJ H，WOOD-GUSH DG M.Thwarting of feeding behaviour in the domestic fowl[J].Anim Behav，1972，20（3）：444-451.

[21]ROBERTS JR.Factors affecting egg internal quality and egg shell quality in laying hens[J].J Poult Sci，2004，41（3）：161-177.

[22]BENABDELJELIL K，JENSEN LS.Effectiveness of ascorbic acid and chromium in counteracting the negative effects of dietary vanadium on interior egg quality[J].Poult Sci，1990，69（5）：781-786.

[23]LEDVINKA Z，ZITA L，KLESALOVáL.Egg quality and some factors influencing it：a review[J].Sci Agric Bohem，2012，43（1）：46-52.

[24]POHLE K，CHENG HW.Furnished cage system and hen well-being：comparative effects of furnished cages and battery cages on behavioral exhibitions in White Leghorn chickens[J].Poult Sci，2009，88（8）：1559-1564.

[25]BOISSY A，TERLOUW C，LE NEINDRE P.Presence of cues from stressed conspecifics increases reactivity to aversive events in cattle：evidence for the existence of alarm substances in urine[J].Physiol Behav，1998，63（4）：489-495.

[26]DE HAAS EN，KOPS MS，BOLHUIS JE，et al.The relation between fearfulness in young and stress-response in adult laying hens，on individual and group level[J].Physiol Behav，2012，107（3）：433-439.

[27]FORKMAN B，BOISSY A，MEUNIER-SALAüN MC，et al.A critical review of fear tests used on cattle，pigs，sheep，poultry and horses[J].Physiol Behav，2007，92（3）：340-374.

[28]ARCHER J.Tests for emotionality in rats and mice：a review[J].Anim Behav，1973，21（2）：205-235.

[29]HART J.Inflammation1：its role in the healing of acute wounds[J].J Wound Care，2002，11（6）：205-209.

[30]GOLDBACH-MANSKY R，DAILEY NJ，CANNA SW，et al.Neonatal-onset multisystem inflammatory disease responsive to interleukin-1β inhibition[J].N Engl JMed，2006，355（6）：581-592.

[31]BANCHEREAU J，PASCUAL V，O′GARRA A.From IL-2to IL-37：the expanding spectrum of anti-inflammatory cytokines[J].Nat Immunol，2012，13（10）：925-931.

[32]SABAT R，GRüTZ G，WARSZAWSKA K，et al.Biology of interleukin-10[J].Cytokine Growth Factor Rev，2010，21（5）：331-344.

[33]VITETTA ES，OHARA J，MYERS CD，et al.Serological，biochemical，and functional identity of Bcell-stimulatory factor1and Bcell differentiation factor for IgG1[J].J Exp Med，1985，162（5）：1726-1731.

[34]RHODES JM，CAMPBELL BJ.Inflammation and colorectal cancer：IBD-associated and sporadic cancer compared[J].Trends Mol Med，2002，8（1）：10-16.

[35]VAN BEELEN AJ，TEUNISSEN MB，KAPSENBERG ML，et al.Interleukin-17in inflammatory skin disorders[J].Curr Opin Allergy Clin Immunol，2007，7（5）：374-381.

[36]KOLLS JK，LINDéN A.Interleukin-17family members and inflammation[J].Immunity，2004，21（4）：467-476.

[37]TEUNISSEN MB M，BOS JD，KOOMEN CW，et al.Interleukin-17and interferon-γ synergize in the enhancement of proinflammatory cytokine production by human keratinocytes[J].J Invest Dermatol，1998，111（4）：645-649.

[38]MCGEACHY MJ，BAK-JENSEN KS，CHEN Y，et al.TGF-β and IL-6drive the production of IL-17and IL-10by Tcells and restrain T_H-17cell-mediated pathology[J].Nat Immunol，2007，8（12）：1390-1397.

[39]FARRAR MA，SCHREIBER RD.The molecular cell biology of interferon-gamma and its receptor[J].Annu Rev Immunol，1993，11：571-611.

[40]MEYLAN E，TSCHOPP J.Toll-like receptors and RNA helicases：two parallel ways to trigger antiviral responses[J].Mol Cell，2006，22（5）：561-569.

[41]崔治中，崔保安.獸醫(yī)免疫學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004.

CUI ZZ，CUI BA.Veterinary immunology[M].Beijing：China Agriculture Press，2004.

（編輯 白永平）