黃芪多糖、皂苷及益生菌復(fù)合物對(duì)感染大腸桿菌肉雞腸道的保護(hù)作用

摘 要： 旨在評(píng)價(jià)黃芪多糖（APS）、皂苷（AS）與益生菌的復(fù)合物對(duì)肉雞抗大腸桿菌感染能力的影響。選取1日齡的白羽肉雞200只，隨機(jī)分為空白組、受試物組、陽(yáng)性組和模型組，每組50只雞，試驗(yàn)期42 d。1～21 d，空白組和模型組雛雞每日飼喂基礎(chǔ)日糧并灌服生理鹽水0.2 mL·只－1，受試物組飼喂含APS（1 g·kg－1）與AS（10 mg·kg－1）的試驗(yàn)日糧，并灌服益生菌復(fù)合菌液0.2 mL·只－1（非解乳糖鏈球菌∶植物乳桿菌∶枯草芽孢桿菌=1∶1∶1，菌液濃度均為1×109 CFU·mL－1），陽(yáng)性組雛雞每天飼喂基礎(chǔ)日糧中添加了50 mg·kg－1鹽酸多西環(huán)素可溶性粉的試驗(yàn)日糧。21 d時(shí)，受試物組、陽(yáng)性組和模型組試驗(yàn)雞均灌服0.2 mL·只－1大腸桿菌O78菌液（6×108 CFU·mL－1）。在感染第0、1、7、14和21天（即試驗(yàn)期第21、22、28、35和42天）檢測(cè)十二指腸和空腸組織結(jié)構(gòu)、sIgA、炎性因子和氧化指標(biāo)，同時(shí)檢測(cè)盲腸內(nèi)容物細(xì)菌數(shù)量。結(jié)果顯示：1）除感染第0天外，模型組盲腸大腸桿菌數(shù)量均顯著高于空白組、受試物組和陽(yáng)性組（P＜0.05），感染后第0、1、7、14和21天，受試物組雞乳酸菌數(shù)量顯著高于空白組、陽(yáng)性組和模型組（P＜0.05）。2）感染1和7 d時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組雞十二指腸和空腸組織sIgA含量顯著高于空白組和模型組（P＜0.05）；感染14 d時(shí)，受試物組雞空腸組織sIgA含量顯著高于空白組和模型組（P＜0.05）。3）感染1和7 d時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組十二指腸、空腸的TNF-α含量顯著低于模型組（Plt;0.05）；感染7 d時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組十二指腸和空腸IL-10含量顯著高于模型組（Plt;0.05）；感染14和21 d時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組空腸組織IL-10含量顯著高于模型組（Plt;0.05）。4）感染1、7、14、21 d時(shí)，受試物組、陽(yáng)性組的十二指腸、空腸組織MPO活力顯著高于空白組（P＜0.05）；感染1 d時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組空腸組織SOD顯著高于模型組（Plt;0.05）；感染7、21 d時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組十二指腸和空腸組織T-AOC顯著高于模型組（Plt;0.05）。綜上，在本試驗(yàn)條件下，APS、AS與益生菌復(fù)合物聯(lián)合使用能增強(qiáng)雛雞抗大腸桿菌感染能力，有替代抗生素的作用。

關(guān)鍵詞： 黃芪多糖；黃芪皂苷；益生菌；肉雞腸道；保護(hù)作用

中圖分類號(hào)：S858.315.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""" 文章編號(hào)：0366-6964（2024）05-2241-12

收稿日期：2023-06-28

基金項(xiàng)目：益生菌發(fā)酵黃芪工藝研究及制劑開(kāi)發(fā)（2022YFD1801104）；中獸醫(yī)與臨床科技創(chuàng)新工程（CAAS-ASTIP-2015-LIHPS）

作者簡(jiǎn)介：劉佳惠（1998-），女，河南尉氏人，碩士生，主要從事獸醫(yī)學(xué)研究，E-mail：13608696346@163.com；吳開(kāi)開(kāi)（1994-），男，山西稷山人，碩士生，主要從事獸醫(yī)學(xué)研究，E-mail：2719807875@qq.com。劉佳惠和吳開(kāi)開(kāi)為同等貢獻(xiàn)作者

*通信作者：張景艷，主要從事中獸醫(yī)及免疫研究，E-mail：zwzh1223@126.com；李建喜，主要從事獸醫(yī)臨床診斷學(xué)/中獸醫(yī)免疫，E-mail：lzjianxil@163.com

Protective Effects of Astragalus Polysaccharides， Saponins and Probiotic Compounds

on Intestinal Tract of Broilers Infected with E.coli

LIU" Jiahui， WU" Kaikai， WANG" Lei， ZHANG" Kang， HAN" Songwei， CHEN" Fubin， XU" Guowei，

GUO" Zhiting， GU" Xueyan， ZHANG" Jingyan*， LI" Jianxi*

（Lanzhou Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Chinese Academy of

Agricultural Sciences， Lanzhou 730050，" China）

Abstract：" The aim of this study was to evaluate the effects of Astragalus polysaccharide （APS）， saponins （AS） and probiotics on the resistance to E. coli infection in broilers. A total of 200 1-day-old white-feathered broiler chickens were randomly divided into blank group， test group， positive group and model group， with 50 chickens in each group. The experiment lasted for 42 d. From 1 to 21 days， chicks in the blank group and model group were fed a basic diet and each of them was given 0.2 mL of normal saline every day， while chicks in the test group were fed a basic diet containing APS （1 g·kg-1） and AS （10 mg·kg-1）， and each of them was given 0.2 mL of probiotic complex bacterial solution （Streptococcus alactolyticus∶Lactobacillus plantae∶Bacillus subtilis=1∶1∶1， the concentration of bacterial liquid was 1×109 CFU·mL-1）， and chicks in the positive group were fed a basal diet containing 50 mg·kg-1 doxycycline hydrochloride soluble powder every day. At the 21st day， chickens in test group， positive group and model group each were given 0.2 mL Escherichia coli O78 bacterial solution （6×108 CFU·mL-1）. Duodenum and jejunum tissue structure， sIgA， inflammatory factors， and oxidation markers were detected at days 0， 1， 7， 14， and 21 of infection （i.e.， days 21， 22， 28， 35， and 42 of the trial period）， as well as bacterial count in cecum contents. The results were showed as follows： 1） The number of E. coli in model group （except for the 0 day of infection） was significantly higher than that in blank group， test group and positive group （Plt;0.05）， and the number of chicken lactic acid bacteria in test group was significantly higher than that in blank group， positive group and model group （Plt;0.05）. 2） After 1 and 7 days of infection， the sIgA content in duodenum and jejunum tissues of test group and positive group was significantly higher than that of blank group and model group （Plt;0.05）; After 14 days of infection， the sIgA content of jejunum tissue in test group was significantly higher than that in blank group and model group （Plt;0.05）. 3） When infected for 1 and 7 d， the TNF-α content of duodenum and jejunum in the test group and the positive group was significantly lower than that in the model group （Plt;0.05）; When infected for 7 days， the content of duodenum and jejunum IL-10 in the test group and the positive group was significantly higher than that in the model group （Plt;0.05）; After 14 and 21 days of infection， the content of IL-10 in jejunal tissue in the test group and the positive group was significantly higher than that in the model group （Plt;0.05）. 4） When infected for 1， 7， 14 and 21 days， the MPO activity of duodenal and jejunal tissues in the test group and the positive group was significantly higher than that in the blank group （Plt;0.05）.When infected for 1 d， the SOD of jejunal tissues in the test group and the positive group was significantly higher than that in the model group （Plt;0.05）， and when infected after 7 and 21 days， the T-AOC of duodenal and jejunal tissues in the test group and the positive group was significantly higher than that in the model group （Plt;0.05）. In conclusion， under the condition of the current experiment， the combination of APS， AS and probiotic complex can enhance the ability of chicks to resist E. coli infection， and have the effect of replacing antibiotics.

Key words： Astragalus polysaccharides; Astragalus saponins; probiotics; broiler intestines; protective effect

*Corresponding authors： ZHANG Jingyan，E-mail：zwzh1223@126.com；LI Jianxi，E-mail：lzjianxi@163.com

我國(guó)是養(yǎng)雞業(yè)大國(guó)，也是雞肉、雞蛋產(chǎn)品的消費(fèi)大國(guó)。但我國(guó)在該領(lǐng)域的產(chǎn)出投入比較低，如雛雞死淘率、全期料肉比、料蛋比等要高于美國(guó)等養(yǎng)雞業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家。致病性大腸桿菌能夠破壞雛雞腸道屏障功能，從而引起腸道損傷［1］。由于雛雞早期抗病力差，臨床中多使用抗生素進(jìn)行大腸桿菌病的預(yù)防與治療。自2020年我國(guó)全面實(shí)施飼料端禁抗、養(yǎng)殖端限抗以來(lái)，如何篩選出安全、有效防治雞大腸桿菌病的獸藥產(chǎn)品是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。黃芪多糖（Astragalus polysaccharides，APS）和黃芪皂苷（Astragalus saponins，AS）是中藥材黃芪的主要活性成分，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、降血糖、抗炎、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理學(xué)作用，其中APS主要由己糖醛酸、果糖等組成［2］，AS主要由黃芪皂苷（Ⅰ～Ⅶ）、異黃芪皂苷（Ⅰ、Ⅱ）等組成［3］。研究表明，日糧添加APS、AS可提高畜禽的生長(zhǎng)性能和免疫功能，并可降低致病菌對(duì)機(jī)體的損傷程度［4］。孫波等［5］研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加500和1 000 mg·kg－1的APS，能顯著增加腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌等有益菌的數(shù)量，而且沙門菌和大腸桿菌等有害菌數(shù)量顯著減少。Song等［6］發(fā)現(xiàn)，日糧中添加APS可以改善腸道菌群，促進(jìn)腸道健康。黃芪皂苷Ⅳ在濃度達(dá)到5 μL·mL－1時(shí)，可以在體外提高異嗜性粒細(xì)胞吞噬殺傷大腸桿菌O78的作用［7］。益生菌是一種或多種能夠維持正常胃腸道菌群活動(dòng)的有益微生物［8］，其可以改善胃腸道黏膜完整性、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化能力、機(jī)體免疫功能，并競(jìng)爭(zhēng)性抑制致病菌生長(zhǎng)，從而提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能和抗病力［9-10］。研究證實(shí)，許多中藥和益生菌在預(yù)防、治療疾病的過(guò)程中可發(fā)揮協(xié)同生物學(xué)作用［11］。如劉明生等［12］發(fā)現(xiàn)，在蛋雞日糧中聯(lián)合使用APS和益生菌可以顯著提高蛋雞的生產(chǎn)性能，改善機(jī)體抗體水平和抗氧化功能。王巍等［13］發(fā)現(xiàn)，中藥聯(lián)合益生菌可通過(guò)抑制小腸組織及血液TNF-α和IL-6 mRNA的過(guò)度表達(dá)，降低小腸組織及血清TNF-α和IL-6含量，改善腸腺變性和黏膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及小腸絨毛和微絨毛損傷，從而對(duì)大腸桿菌致小鼠腹瀉起到保護(hù)作用。由此猜想，APS、AS聯(lián)合益生菌能提高雛雞對(duì)致病性大腸桿菌的抵抗力，發(fā)揮抗生素替代作用。然而相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)對(duì)比APS、AS及益生菌的復(fù)合物與多西環(huán)素對(duì)大腸桿菌O78菌液感染肉雞的十二指腸和空腸的腸道保護(hù)作用，旨在評(píng)價(jià)黃芪活性成分與益生菌的協(xié)同替代抗生素的效果，為家禽疾病防控技術(shù)提供引導(dǎo)和數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器與材料

光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS），切片機(jī)（LEICA RM2265），超凈工作臺(tái)（北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司），多功能微孔板檢測(cè)儀（Synergy LX）。甲醛、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉為分析純，鹽酸多西環(huán)素可溶性粉（10%，福建貝迪藥業(yè)有限公司），黃芪多糖（≥90%，北京生泰爾科技股份有限公司，2304291），AS（≥98%，上海源葉生物科技有限公司，N13HB201030），雞分泌型免疫球蛋白（sIgA）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）與白細(xì)胞介素-10（IL-10）檢測(cè)試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），髓過(guò)氧化物酶MPO測(cè)試盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）測(cè)試盒、超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒和總抗氧化能力（T-AOC）測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。非解乳糖鏈球菌FGM菌株（GenBank登錄號(hào)JX435470），大腸桿菌O78（CVCC1418）購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心，植物乳桿菌（CICC 20871），枯草芽孢桿菌（ATCC6633）?；A(chǔ)日糧按照NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）配制。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

白羽肉雞購(gòu)自甘肅省酒泉市肅州區(qū)旺苗種禽養(yǎng)殖場(chǎng)，飼養(yǎng)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房，雞舍內(nèi)初始溫度為35℃，每周降低3℃直至26℃，濕度為50%～60%。雛雞飼喂基礎(chǔ)日糧，按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫，自由采食和飲水。試驗(yàn)選取1 d的白羽肉雞200只，隨機(jī)分成4組，分別是空白組、受試物組、陽(yáng)性組和模型組，每組6個(gè)重復(fù)，其中每個(gè)重復(fù)8～10只雞。1～21 d時(shí)，空白組和模型組雛雞每日飼喂基礎(chǔ)日糧并灌服0.2 mL生理鹽水，受試物組雛雞每天灌服益生菌復(fù)合菌液0.2 mL（非解乳糖鏈球菌∶植物乳桿菌∶枯草芽孢桿菌=1∶1∶1，菌液濃度均為1×109 CFU·mL－1）［14-15］，同時(shí)飼喂含APS（1 g·kg－1）與AS（10 mg·kg－1）的基礎(chǔ)日糧［16-17］，陽(yáng)性組雛雞每天飼喂基礎(chǔ)日糧中添加了50 mg·kg－1鹽酸多西環(huán)素可溶性粉的日糧。21 d時(shí)，受試物組、陽(yáng)性組和模型組試驗(yàn)雞均灌服0.2 mL·只－1大腸桿菌O78菌液（6×108 CFU·mL－1），空白組雛雞每日飼喂基礎(chǔ)日糧并灌服0.2 mL·只－1生理鹽水。試驗(yàn)期為42 d。

1.3 樣品采集及石蠟切片制作

試驗(yàn)第21、22、28、35和42天［即感染第0（未灌服大腸桿菌O78菌液之前）、1、7、14和21天］時(shí)，每個(gè)重復(fù)選取1只體重接近該重復(fù)平均體重的肉雞（共24只），頸靜脈放血處死，取雛雞剖腹分離出盲腸段，取盲腸內(nèi)容物于1.5mL凍存管中用于乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量檢測(cè)；采集十二指腸和空腸，于10%中性福爾馬林溶液中固定，參考文獻(xiàn)［18］制備組織切片，取約2 cm十二指腸和空腸組織于液氮速凍后－80 ℃保存，用于sIgA含量、相關(guān)炎性因子的檢測(cè)和氧化指標(biāo)GSH-Px、SOD、T-AOC及MPO的檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 盲腸內(nèi)容物乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量檢測(cè)

稱取1 g盲腸內(nèi)容物，用無(wú)菌生理鹽水依次進(jìn)行1×10-1 ～1×10-6倍稀釋，每個(gè)稀釋度取0.1 mL稀釋液分別接種于MRS培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基中，平板培養(yǎng)法測(cè)定乳酸菌（MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h）和大腸桿菌（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h）菌落數(shù)，結(jié)果以1 g腸道內(nèi)容物中細(xì)菌菌落的對(duì)數(shù)表示（lg CFU·g－1）。

1.4.2 sIgA含量檢測(cè)

稱取0.1 g雞十二指腸和空腸組織，置于1.5 mL離心管中，加入0.9 mL的PBS，勻漿后，5 000 r·min－1離心10 min，取上清，備用。取ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。用多功能微孔板檢測(cè)儀檢測(cè)各孔的OD值（波長(zhǎng)450 nm），計(jì)算sIgA含量。

1.4.3 細(xì)胞因子IL-1、TNF-α與IL-10含量檢測(cè)

按“1.4.2”處理取上清然后用ELISA試劑盒檢測(cè)IL-1、TNF-α和IL-10含量，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。用多功能微孔板檢測(cè)儀檢測(cè)各孔的OD值（波長(zhǎng)450 nm），計(jì)算IL-1、TNF-α和IL-10含量。

1.4.4 氧化指標(biāo)GSH-Px、SOD、T-AOC及MPO檢測(cè)

稱取0.1 g雞十二指腸或空腸組織，按照重量（g）∶體積（mL）=1∶9的比例加入0.9 mL生理鹽水，冰水浴制備組織勻漿，3 000 r·min－1離心10 min，取上清液按照測(cè)試盒說(shuō)明書檢測(cè)GSH-Px活力、SOD活力。同上處理取組織勻漿12 000 r·min－1離心5 min，取上清液按照測(cè)試盒說(shuō)明書檢測(cè)T-AOC。稱取0.1 g雞十二指腸或空腸組織，按照重量（g）∶體積（mL）=1∶19的比例加入1.9 mL勻漿介質(zhì)制備成5%的組織勻漿，按照MPO測(cè)試盒說(shuō)明書檢測(cè)MPO活力。

1.5 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均用SPSS20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行One-way-ANOVA分析，再用LSD法進(jìn)行多重比較，并繪圖。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）”表示，Plt;0.05表示顯著差異，Plt;0.01表示極顯著差異。

2 結(jié) 果

2.1 十二指腸和空腸組織結(jié)構(gòu)

顯微鏡下觀察各組肉雞十二指腸和空腸組織結(jié)構(gòu)變化，結(jié)果如圖1和圖2所示。感染第0天時(shí)，各組雛雞十二指腸和空腸組織結(jié)構(gòu)正常。感染第1、7、14和21天時(shí)，空白組雞十二指腸和空腸組織結(jié)構(gòu)均正常；受試物組和陽(yáng)性組雞十二指腸和空腸組織結(jié)構(gòu)較為完整；模型組雞十二指腸和空腸有出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腸上皮細(xì)胞增生和絨毛斷裂、脫落等病變。

2.2 盲腸內(nèi)容物乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量

各組試驗(yàn)雞盲腸內(nèi)容物乳酸菌數(shù)量如圖3a所示，感染第0、1、7、14和21天時(shí)，受試物組雞盲腸乳酸菌數(shù)量顯著高于空白組、陽(yáng)性組和模型組（P＜0.05）；各組試驗(yàn)雞盲腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量如圖3b所示，感染第0天，空白組和模型組大腸桿菌數(shù)量顯著高于受試物組和陽(yáng)性組（P＜0.05），感染第1、7、14和21天時(shí)，模型組大腸桿菌數(shù)量顯著高于空白組、受試物組和陽(yáng)性組（P＜0.05），且受試物組顯著高于空白組（P＜0.05）。

2.3 十二指腸和空腸組織sIgA含量

各組試驗(yàn)雞十二指腸組織sIgA含量如圖4a所示，感染第0天時(shí)，各組雞十二指腸組織sIgA含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；感染第1和7天時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組雞十二指腸組織sIgA含量顯著高于空白組和模型組（P＜0.05）；感染第14和21天時(shí)，受試物組雞十二指腸組織sIgA含量顯著高于其他3組（P＜0.05），陽(yáng)性組雞十二指腸組織sIgA含量與模型組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。各組試驗(yàn)雞空腸組織sIgA含量如圖4b所示，感染第0天時(shí)，各組雞空腸組織sIgA含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；感染第1、7和14天時(shí)，受試物組和陽(yáng)性組雞空腸組織sIgA含量顯著高于空白組和模型組（P＜0.05）；感染第21天時(shí)，受試物組雞空腸組織sIgA含量顯著高于空白組和模型組（P＜0.05），陽(yáng)性組雞空腸組織sIgA含量與模型組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.4 十二指腸和空腸組織炎性因子IL-1、TNF-α與IL-10含量

各組試驗(yàn)雞十二指腸和空腸組織炎性因子IL-1、TNF-α與IL-10含量如圖5所示，感染第0天時(shí)，各組雞十二指腸和空腸組織炎性因子含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）。感染第1天時(shí)（圖5c、5d），受試物組和陽(yáng)性組十二指腸、空腸的TNF-α含量顯著低于模型組（Plt;0.05）；感染第7天時(shí)（圖5a、5b、5c、5d）受試物組和陽(yáng)性組十二指腸和空腸的IL-1、TNF-α含量顯著低于模型組（Plt;0.05），受試物組和陽(yáng)性組十二指腸和空腸IL-10含量顯著高于模型組（圖5e、5f，Plt;0.05）；感染第14天時(shí)（圖5b、5d），受試物組和陽(yáng)性組空腸組織IL-1含量和空腸組織TNF-α含量顯著低于模型組（Plt;0.05），受試物組和陽(yáng)性組空腸組織IL-10含量顯著高于模型組（圖5f，Plt;0.05）；感染21 d時(shí)（圖5d、5f），受試物組和陽(yáng)性組空腸組織TNF-α含量顯著低于模型組（Plt;0.05），受試物組和陽(yáng)性組空腸組織IL-10含量顯著高于模型組（Plt;0.05）。

2.5 十二指腸和空腸組織GSH-Px、SOD、MPO活力與T-AOC水平

各試驗(yàn)組雞十二指腸和空腸組織GSH-Px、SOD活力與T-AOC如圖6所示，感染第0天時(shí)，各組雞十二指腸和空腸組織GSH-Px、SOD活力、T-AOC與MPO活力無(wú)顯著差異（P＞0.05）；感染1 d時(shí)（圖6d），受試物組和陽(yáng)性組空腸組織SOD活力顯著高于模型組（Plt;0.05）；感染第14天時(shí)（圖6g、6h），受試物組和陽(yáng)性組十二指腸、空腸的MPO活力低于模型組（Plt;0.05）；感染第7、21天時(shí)（圖6e、6f），受試物組和陽(yáng)性組十二指腸、空腸T-AOC能力顯著高于模型組（Plt;0.05），受試物組和陽(yáng)性組空腸組織MPO活力顯著低于模型組（圖6h，Plt;0.05）。

3 討 論

腸道具有消化、吸收、免疫和內(nèi)分泌的功能［19］，是機(jī)體抵抗病原微生物感染的重要組織器官。致病性大腸桿菌可以破壞腸道微生物屏障，損傷雞腸道黏膜結(jié)構(gòu)，影響腸道健康。腸道屏障被破壞后會(huì)影響雞正常腸道功能的發(fā)揮，進(jìn)而影響雞的健康和生產(chǎn)性能，甚至影響食品安全和人類健康［20］。研究發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌O78對(duì)雛雞具有高致病性［21］。因此，本研究采用大腸桿菌O78菌液對(duì)雛雞進(jìn)行攻毒。已有文獻(xiàn)報(bào)道，飼糧中添加APS可以顯著減少雛雞盲腸大腸桿菌數(shù)量、增加盲腸乳酸菌數(shù)量，改善腸道菌群，促進(jìn)腸道健康［22］。AS可顯著抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，使菌懸液中核酸物質(zhì)含量增多，表明AS可通過(guò)破壞菌體細(xì)胞膜的完整性、致使大分子物質(zhì)外溢而發(fā)揮抑菌作用［23］。肉雞飼喂枯草芽孢桿菌后，機(jī)體抗氧化能力顯著增強(qiáng)，盲腸菌群中乳酸菌數(shù)量和總芽孢桿菌數(shù)量顯著提高，大腸桿菌數(shù)量顯著下降［24］。本研究發(fā)現(xiàn)，雛雞感染大腸桿菌O78后，模型組盲腸的大腸桿菌數(shù)量升高，而乳酸菌數(shù)量降低，且十二指腸黏膜、空腸可見(jiàn)明顯損傷；而受試物組和陽(yáng)性組雞大腸桿菌數(shù)量顯著低于模型組，十二指腸、空腸的腸組織結(jié)構(gòu)也較模型組更加完整；此外，受試物組盲腸的大腸桿菌數(shù)量、乳酸菌數(shù)量顯著高于陽(yáng)性組。結(jié)果表明，APS、AS與益生菌復(fù)合物聯(lián)合使用后，可改善大腸桿菌導(dǎo)致的盲腸菌群失調(diào)、十二指腸損傷。

sIgA是機(jī)體黏膜防御系統(tǒng)的主要成分，覆蓋在鼻、咽、氣管、腸和膀胱黏膜的表面，它能抑制微生物在呼吸道上皮附著，減緩病毒繁殖，是黏膜重要屏障，對(duì)某些病毒、細(xì)菌和一般抗原具有抗體活性，是防止病原體入侵機(jī)體的第一道防線。有文獻(xiàn)報(bào)道，AS能夠促進(jìn)小鼠腸黏膜sIgA的表達(dá)［25］。APS、AS與益生菌復(fù)合物聯(lián)合使用后可增加雞腸黏膜sIgA含量，增強(qiáng)腸黏膜免疫功能。本試驗(yàn)中，受試物組雞感染大腸桿菌O78后十二指腸sIgA含量顯著高于模型組，在感染第14、21天時(shí)其顯著高于陽(yáng)性組。結(jié)果表明，APS、AS與益生菌復(fù)合物聯(lián)合使用后，可一定程度上改善雛雞腸道的免疫功能。

促炎性細(xì)胞因子的過(guò)度產(chǎn)生（TNF-α、IL-1和IL-6等），可引起機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，且能引發(fā)抗炎因子的高表達(dá)（IL-4、IL-10、G-CSF等）［26-27］。Yang等［28］與許航和孟林［29］的研究顯示，APS和AS單獨(dú)使用，均可通過(guò)降低腸組織促炎因子IL-1和TNF-α含量，減輕腸道炎癥反應(yīng)，降低腸黏膜損傷。研究發(fā)現(xiàn)，飼喂枯草芽孢桿菌也能降低肉雞腸道促炎因子IL-1和升高抑炎因子IL-10水平，抑制炎癥反應(yīng)，減少腸黏膜損傷［30-31］。本試驗(yàn)中，與模型組相比，受試物組、陽(yáng)性組雞感染致病性大腸桿菌后，十二指腸IL-1和TNF-α含量均顯著降低，IL-10含量均顯著升高，其中受試物組與陽(yáng)性組無(wú)顯著性差異。結(jié)果表明APS、AS和3種復(fù)合益生菌聯(lián)合使用，可通過(guò)抑制雞腸道炎癥反應(yīng)保護(hù)大腸桿菌對(duì)腸組織的損傷。

機(jī)體受到病原微生物刺激時(shí)，氧化還原狀態(tài)失衡引起抗氧化能力降低，發(fā)生氧化損傷［32］。雛雞感染致病性大腸桿菌后，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，炎性細(xì)胞會(huì)大量分泌MPO，MPO活性可反映炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度［33］。已有研究發(fā)現(xiàn)，APS具有提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的作用，可以提高肉雞血清中GSH-Px和SOD的活力［34-35］。研究表明，在1～42日齡白羽肉雞日糧添加一定量的植物乳桿菌，能提高生產(chǎn)性能和抗氧化功能，改善腸道結(jié)構(gòu)，有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收［36］。本試驗(yàn)中，APS、AS與益生菌復(fù)合物聯(lián)合使用后，能夠改善大腸桿菌O78引起的雞十二指腸和空腸組織中GSH-Px、SOD和T-AOC的下降和MPO的升高，可有效保護(hù)大腸桿菌O78引起的雞十二指腸和空腸氧化損傷，表明，APS和AS與益生菌復(fù)合物聯(lián)合使用可以改善大腸桿菌引起的雞腸道組織氧化應(yīng)激。

4 結(jié) 論

聯(lián)合使用APS、AS和非解乳糖鏈球菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌復(fù)合菌可通過(guò)減少腸組織損傷和炎癥反應(yīng)，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)、免疫力及氧化應(yīng)激，增強(qiáng)雛雞抗大腸桿菌感染能力，有替代抗生素的作用。

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（編輯 范子娟）