分析HLA-DQA1基因與干燥綜合征患者臨床特征的相關(guān)性

[摘要]目的探討人類(lèi)白細(xì)胞抗原DQA1（humanleucocyteantigen-DQA1，HLA-DQA1）與干燥綜合征（Sj?gren’ssyndrome，SS）患者臨床特征的相關(guān)性。方法選取2022年8月至2023年8月包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治的242例SS患者為研究對(duì)象，根據(jù)HLA-DQA1檢測(cè)結(jié)果，將患者分為HLA-DQA1陽(yáng)性組（n=147）和HLA-DQA1陰性組（n=95）。比較兩組患者的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)、唇腺活檢和疾病活動(dòng)度。采用受試者操作特征曲線分析HLA-DQA1對(duì)SS患者疾病活動(dòng)度的診斷價(jià)值。結(jié)果HLA-DQA1陽(yáng)性組患者的口干、眼干、紫癜占比和抗干燥綜合征A抗體（anti-Sj?gren’ssyndromeAantibody，抗SSA抗體）、抗干燥綜合征B抗體（anti-Sj?grensyndrome’sBantibody，抗SSB抗體）、抗核抗體（antinuclearantibody，ANA）陽(yáng)性占比及免疫球蛋白G水平均顯著高于HLA-DQA1陰性組（P<0.05），血紅蛋白水平顯著低于HLA-DQA1陰性組（P<0.05）；HLA-DQA1陽(yáng)性組患者的疾病活動(dòng)度顯著高于HLA-DQA1陰性組（P<0.05）。HLA-DQA1、抗SSA抗體、抗SSB抗體判斷SS患者疾病活動(dòng)度的曲線下面積分別為0.593、0.534、0.593。三者聯(lián)合判斷SS患者疾病活動(dòng)度的曲線下面積為0.638。結(jié)論HLA-DQA1與SS患者的疾病活動(dòng)度相關(guān)，在HLA-DQA1陽(yáng)性患者中，口干、眼干、高球蛋白血癥、貧血和紫癜等癥狀更明顯，同時(shí)，抗SSA/SSB抗體和ANA陽(yáng)性率較高，提示HLA-DQA1表達(dá)有助于判斷SS患者的病情。

[關(guān)鍵詞]干燥綜合征；HLA-DQA1；抗SSA抗體；抗SSB抗體

[中圖分類(lèi)號(hào)]R593.2；R392.2[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.19.017

AnalyzingthecorrelationbetweenHLA-DQA1geneandclinicalcharacteristicsofpatientswithSj?gren’ssyndrome

XUHui1，ZHULingyan2，ZHAOKai2，WANGHui2，WANGYongfu2

1.GraduateSchoolofBaotouMedicalCollege，Baotou014040，InnerMongolia，China;2.DepartmentofRheumatologyandImmunology，theFirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollege，Baotou014010，InnerMongolia，China

[Abstract]ObjectiveToinvestigatethecorrelationbetweenhumanleucocyteantigen-DQA1（HLA-DQA1）andclinicalcharacteristicsofpatientswithSj?gren’ssyndrome（SS）.MethodsAtotalof242SSpatientsadmittedtotheFirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollegefromAugust2022toAugust2023wereselectedasthestudyobjects.AccordingtotheHLA-DQA1testresults，thepatientsweredividedintoHLA-DQA1positivegroup（n=147）andHLA-DQA1negativegroup（n=95）.Theclinicalmanifestations，laboratoryindicators，labialglandbiopsyanddiseaseactivitywerecomparedbetweentwogroups.ReceiveroperatingcharacteristiccurvewasusedtoanalyzethediagnosticvalueofHLA-DQA1fordiseaseactivityinSSpatients.ResultsTheproportionofdrymouth，dryeyeandpurpura，theproportionofanti-SSAantibodies，anti-SSBantibodies，antinuclearantibody（ANA）positiveandthelevelofimmunoglobulinGinHLA-DQA1positivegroupweresignificantlyhigherthanthoseinHLA-DQA1negativegroup（P<0.05），andthehemoglobinlevelwassignificantlylowerthanthatinHLA-DQA1negativegroup（P<0.05）.ThediseaseactivityofHLA-DQA1positivegroupwassignificantlyhigherthanthatofHLA-DQA1negativegroup（P<0.05）.TheareasunderthecurveofHLA-DQA1，anti-SSAantibodyandanti-SSBantibodytodeterminethediseaseactivityofSSpatientswere0.593，0.534and0.593，respectively.TheareaunderthecurveofdiseaseactivityofSSpatientsjudgedbythethreeindexescombinedwas0.638.ConclusionHLA-DQA1iscorrelatedwiththediseaseactivityofSSpatients.InHLA-DQA1positivepatients，drymouth，dryeyes，hyperglobulinemia，anemiaandpurpuraweremoreobvious.Meanwhile，thepositiveratesofanti-SSA/SSBantibodiesandANAwerehigher，suggestingthatHLA-DQA1expressionishelpfulinjudgingthediseaseofSSpatients.

[Keywords]Sj?gren’ssyndrome;Humanleucocyteantigen-DQA1;Anti-SSAantibody;Anti-SSBantibody

干燥綜合征（Sj?gren’ssyndrome，SS）是一種以侵犯淚腺、唾液腺等外分泌腺、B淋巴細(xì)胞異常增殖、組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的彌漫性結(jié)締組織病。臨床上主要表現(xiàn)為干燥性角膜炎和口腔干燥癥，還可累及內(nèi)臟器官。中國(guó)人群中SS的患病率為0.29%～0.77%，男女比例1∶9，其中40～50歲的女性是最大的高危群體[1]。SS的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚，自身免疫反應(yīng)、環(huán)境及遺傳因素等在SS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[2]。人類(lèi)白細(xì)胞抗原（humanleucocyteantigen，HLA）是第一個(gè)被確定為與大多數(shù)自身免疫性疾病相關(guān)的基因組，這種關(guān)聯(lián)已被多個(gè)獨(dú)立的研究反復(fù)證實(shí)[3-7]。研究發(fā)現(xiàn)在抗干燥綜合征A抗體（anti-Sj?gren’ssyndromeAantibody，抗SSA抗體）、抗干燥綜合征B抗體（anti-Sj?gren’ssyndromeBantibody，抗SSB抗體）陽(yáng)性患者中，攜帶HLA-DQA1基因的患者出現(xiàn)SS的風(fēng)險(xiǎn)較高[8]。張雄鷹等[9]研究發(fā)現(xiàn)山西漢族SS患者與HLA-DQA1、HLA-DQB1基因具有相關(guān)性。本研究通過(guò)探討HLA-DQA1基因與SS患者的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系，從而為SS的發(fā)病機(jī)制和治療提供新的可能。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2022年8月至2023年8月包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治的242例SS患者為研究對(duì)象，所有患者均符合2016年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（AmericanCollegeofRheumatology，ACR）聯(lián)合歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EuropeanLeagueAgainstRheumatism，EULAR）制定的SS分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[10]。本研究經(jīng)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)[倫理審批號(hào)：2024倫理審查第（L004）號(hào)]，研究對(duì)象均已簽署知情同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1樣本收集及保存采集SS患者外周血2ml，枸櫞酸鈉抗凝，置于–20℃冰箱保存。

1.2.2臨床資料的收集收集患者的臨床資料，包括性別、年齡、病程、臨床表現(xiàn)（口干、眼干）、腺外表現(xiàn)（雷諾現(xiàn)象、關(guān)節(jié)炎、紫癜、間質(zhì)性肺病、間質(zhì)性腎炎）；實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)包括抗核抗體（antinuclearantibody，ANA）、抗SSA抗體、抗SSB抗體、C反應(yīng)蛋白（C-reactiveprotein，CRP）、紅細(xì)胞沉降率（erythrocytesedimentationrate，ESR）、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）、白細(xì)胞（whitebloodcell，WBC）、血小板（platelet，PLT）、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）G、IgM、IgA和唇腺活檢。唇腺活檢病理分級(jí)按Chisholm標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)，Ⅰ級(jí)：少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；Ⅱ級(jí)：中等量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；Ⅲ級(jí)：按浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞>50個(gè)/4mm2為一個(gè)灶；Ⅳ級(jí)：>1個(gè)灶。采用EULAR干燥綜合征疾病活動(dòng)指數(shù)（EULARSj?gren’ssyndromediseaseactivityindex，ESSDAI）評(píng)價(jià)SS的疾病活動(dòng)度，ESSDAI<5為低疾病活動(dòng)度，5≤ESSDAI≤13為中疾病活動(dòng)度，ESSDAI≥14為高疾病活動(dòng)度[11]。

1.2.3DNA提取按照血液基因組DNA提取試劑盒（TIANGEN產(chǎn)品）說(shuō)明進(jìn)行提取。

1.2.4外周血HLA-DQA1表達(dá)情況①引物的設(shè)計(jì)與合成：上游引物序列為hHLA-DQA1F：5-GCTGACTGAAACTATGGCTAA-3，下游引物序列為hHLA-DQA1R：5-GGCAGACGGTATCCATTA-3。②聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction，PCR）擴(kuò)增體系：25μl反應(yīng)體系中含有基因組DNA5μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、TaqPCRMix12.5μl及ddH2O6.5μl。PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性3min；95℃30s、55℃30s，72℃1min共循環(huán)35次，于72℃延伸5min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為238bp。③擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定：取擴(kuò)增產(chǎn)物8μl，加入到2%瓊脂糖凝膠上樣孔內(nèi)，連接電泳儀，120V，電泳30min，在凝膠成像儀中進(jìn)行成像，并根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物HLA-DQA1擴(kuò)增條帶的有無(wú)判斷結(jié)果。有條帶為HLA-DQA1陽(yáng)性患者，納入HLA-DQA1陽(yáng)性組，反之為HLA-DQA1陰性患者，納入HLA-DQA1陰性組。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理使用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（Q1，Q3）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用受試者操作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線）分析HLA-DQA1對(duì)SS患者疾病活動(dòng)度的診斷價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組患者的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

兩組患者的性別、年齡、病程比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；HLA-DQA1陽(yáng)性組患者的口干、眼干、紫癜占比和抗SSA抗體、抗SSB抗體、ANA陽(yáng)性占比及IgG水平均顯著高于HLA-DQA1陰性組（P<0.05），血紅蛋白水平顯著低于HLA-DQA1陰性組（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2兩組患者的唇腺活檢分級(jí)比較

共116例SS患者行唇腺活檢，兩組患者的唇腺活檢分級(jí)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.265，P=0.322），見(jiàn)表2。

2.3兩組患者的病程比較

兩組患者的病程比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.437，P=0.109），見(jiàn)表3。

2.4兩組患者的疾病活動(dòng)度比較

HLA-DQA1陽(yáng)性組患者的疾病活動(dòng)度顯著高于HLA-DQA1陰性組（χ2=8.877，P=0.012），見(jiàn)表4。

2.5HLA-DQA1對(duì)SS患者疾病活動(dòng)度的診斷價(jià)值

HLA-DQA1、抗SSA抗體、抗SSB抗體判斷SS患者疾病活動(dòng)度的曲線下面積（areaunderthecurve，AUC）分別為0.593、0.534、0.593。三者聯(lián)合判斷SS患者疾病活動(dòng)度的AUC為0.638，見(jiàn)表5。

3討論

SS是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病。表觀遺傳、環(huán)境、炎癥和免疫因素參與其發(fā)病[12]。HLA是首個(gè)被確定與風(fēng)濕性疾病相關(guān)的位點(diǎn)。目前，普遍認(rèn)為HLAⅡ類(lèi)基因的不同等位基因與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化及SS有關(guān)。研究顯示，HLA-DRB1和HLA-DQB1與系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)[4]。也有研究表明特異性HLAⅡ類(lèi)及HLAⅠ類(lèi)位點(diǎn)與系統(tǒng)性硬化具有強(qiáng)關(guān)聯(lián)性[5]。HLA-DRB1*04和*10等位基因與自身抗體陽(yáng)性類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，且對(duì)HLA相關(guān)自身抗體陽(yáng)性類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有很強(qiáng)的保護(hù)作用[6]。HLAⅡ類(lèi)基因區(qū)內(nèi)的特定等位基因主要是HLA-DR和HLA-DQ，其已被證明參與SS的發(fā)病[13]。而HLA-DQA1*0501、HLA-DQB1*0201和HLA-DQB1*0301單倍型也已被確定為SS的最強(qiáng)遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素，并與免疫反應(yīng)有關(guān)[14-15]。

本研究檢測(cè)242例SS患者的HLA-DQA1表達(dá)情況，結(jié)果顯示HLA-DQA1陽(yáng)性的SS患者共147例，陽(yáng)性率達(dá)60.7%。本研究發(fā)現(xiàn)HLA-DQA1陽(yáng)性組的SS患者更容易出現(xiàn)口干、眼干、紫癜、貧血等臨床癥狀及抗SSA抗體、抗SSB抗體、ANA的陽(yáng)性率更高。與Thorlacius等[8]研究結(jié)論一致。紫癜與HLA-DQA1、HLA-DRB1、HLA-DQB1的相關(guān)性已得到證實(shí)[16]；也有研究表明抗SSA/SSB抗體的存在與HLA-DQA1*0501高度相關(guān)[17]。有研究證明血清IgG升高與HLA-DRB1*03相關(guān)[18]。本研究也發(fā)現(xiàn)HLA-DQA1陽(yáng)性患者的IgG水平高于HLA-DQA1陰性患者，說(shuō)明HLA-DQA1陽(yáng)性患者更易出現(xiàn)球蛋白增高的表現(xiàn)。

本研究還分析HLA-DQA1與SS患者病程和唇腺活檢評(píng)分的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不論HLA-DQA1陽(yáng)性與否，SS患者的病程和唇腺活檢評(píng)分之間均無(wú)明顯差異。說(shuō)明HLA-DQA1參與SS的發(fā)生過(guò)程可能和疾病的病程關(guān)系不大，也考慮與本研究納入的SS患者病程多少于5年有關(guān)，后續(xù)需納入更多長(zhǎng)病程患者進(jìn)行研究。

ESSDAI評(píng)分評(píng)估SS患者的病情活動(dòng)具有較好的可信度。本研究結(jié)果顯示，HLA-DQA1陽(yáng)性組患者的ESSDAI評(píng)分高于陰性組，提示HLA-DQA1對(duì)SS患者疾病活動(dòng)度有一定影響。本研究還發(fā)現(xiàn)，HLA-DQA1單獨(dú)判斷SS患者疾病活動(dòng)度的能力強(qiáng)于抗SSA抗體，與抗SSB抗體幾乎一致。三者聯(lián)合判斷患者疾病活動(dòng)度的能力提升，敏感度更高。

綜上所述，HLA-DQA1與SS患者的口干、眼干、高球蛋白血癥、貧血、紫癜及抗SSA/SSB抗體、ANA具有相關(guān)性，提示HLA-DQA1可預(yù)測(cè)SS患者的臨床表型。同時(shí)HLA-DQA1可作為監(jiān)測(cè)SS疾病活動(dòng)度的一個(gè)指標(biāo)，聯(lián)合其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)有助于判斷疾病的活動(dòng)程度。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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