Hfgl2在宮頸癌患者組織中的表達(dá)及其臨床意義

［收稿日期］2023-11-19

［基金項(xiàng)目］國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（82203465）

［作者簡(jiǎn)介］江" 玉（1988—），女，住院醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科臨床及相關(guān)研究。

［通訊作者］陳" 剛，副主任醫(yī)師；鄒余糧，教授/主任醫(yī)師。

［摘" 要］目的" 分析人纖維介素（Hfgl2）在宮頸癌組織中的表達(dá)及其意義，探究其對(duì)宮頸癌惡性生物學(xué)行為的影響。方法" 選取2016年1月至2018年1月在榆林市第一醫(yī)院經(jīng)病理確診的50例宮頸癌患者的癌組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組，另外收集同期50例正常宮頸組織作為對(duì)照組。采用免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)組織，蛋白質(zhì)印跡法（WB）檢測(cè)細(xì)胞中Hfgl2的表達(dá)，分析其與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系；采用基因敲降下調(diào)Hfgl2表達(dá)，四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，WB方法檢測(cè)血管生成及細(xì)胞增殖、遷移相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果" Hfgl2在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=73.990，P＜0.05）；Hfgl2在宮頸癌組織的免疫組化評(píng)分高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.022，P＜0.05）；RT-PCR測(cè)定表明，實(shí)驗(yàn)組Hfgl2 mRNA陽性表達(dá)率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=61.455，P＜0.05）；Hfgl2在宮頸癌國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期Ⅲ-Ⅳ期中的陽性表達(dá)率高于Ⅰ期、Ⅱ期組，在病理分級(jí)G2-G3級(jí)宮頸癌組的陽性表達(dá)率高于G1級(jí)組，在有淋巴轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2值分別為6.737、7.147、12.037，P＜0.05）；Hfgl2在宮頸癌細(xì)胞系中均高表達(dá)，敲降Hfgl2后，細(xì)胞體外增殖能力明顯降低，人宮頸癌細(xì)胞Hela血管生成及增殖遷移相關(guān)蛋白如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1（VEGFR1）、蛋白激酶B（PKB/Akt）、磷脂酶C（PLC）-γ、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）2和MMP9表達(dá)均明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值介于4.904～8.304之間，P＜0.05）。結(jié)論" Hfgl2在宮頸癌組織中高表達(dá)且可能促進(jìn)腫瘤血管生成及浸潤(rùn)生長(zhǎng)，有望成為宮頸癌靶向治療新方向。

［關(guān)鍵詞］人纖維介素；宮頸癌；臨床病理特征；血管生成；增殖遷移

Doi：10.3969/j.issn.1673-5293.2024.06.006

［中圖分類號(hào)］R173""" ［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1673-5293（2024）06-0033-08

Expression of Hfgl2 in patients with cervical cancer and its clinical significance

JIANG Yu1，PEI Meili1，CHEN Qian2，CHEN Gang3，ZOU Yuliang1

（ 1.Department of Gynecology and Obstetrics，The First Affiliated Hospital of Xi′an Jiaotong University，Shaanxi Xi′an

710061，China;2. Department of Reproductive Medicine，The First Affiliated Hospital of Xi＇an Jiaotong University，Shaanxi

Xi′an 710061，China;3.Department of Gynecology and Obstetrics，he First Hospital of Yulin，Shaanxi Yulin 719001，China）

［Abstract］ Objective To analyze the expression and significance of human fibrinogen-like protein （Hfgl2） in cervical cancer tissues and explore its impact on the malignant biological behavior of cervical cancer. Methods We selected tumor specimens from 50 cervical cancer patients diagnosed pathologically at the First Hospital of Yulin from January 2016 to January 2018 as the experimental group，and collected 50 normal cervical tissue specimens from the same period as the control group.Immunohistochemistry and reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） were used to detect tissue samples.Western blot （WB） was employed to assess Hfgl2 expression in cells，and the relationship with clinical pathological characteristics of cervical cancer was analyzed.Gene knockdown was utilized to downregulate Hfgl2 expression，and the methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide （MTT） assay was employed to measure cell proliferation ability，with WB used to evaluate the expression of proteins related to angiogenesis，cell proliferation，and cell migration. Results The positive expression rate of Hfgl2 in cervical cancer tissues was higher than that in normal cervical tissues，with statistically significant differences （χ2=73.990，P＜0.05）;The immunohistochemical score of Hfgl2 in cervical cancer tissues was higher than those in normal cervical tissues，with statistically significant differences （t=8.022，P＜0.05）;RT-PCR analysis revealed a higher positive rate of Hfgl2 mRNA expression in the experimental group compared to the control group，with statistically significant differences （χ2=61.455，P＜0.05）;The positive expression rate of Hfgl2 in Federation International of Gynecology and Obstetrics （FIGO） stage Ⅲ-Ⅳ cervical cancer was higher than in stage I and II groups，higher in pathological grade G2-G3 cervical cancer than in G1，and higher in cervical cancer tissues with lymph node metastasis than in those without，all with statistically significant differences （χ2=6.737，7.147，and 12.037 respectively，P＜0.05）;Hfgl2 was highly expressed in cervical cancer cell lines，and knockdown of Hfgl2 resulted in a significant decrease in cell vitro proliferation ability，and the expression of angiogenesis and proliferation-related proteins vascular endothelial growth factor receptor 1 （VEGFR1），protein kinase B （PKB/Akt），phospholipase C （PLC）-γ，matrix metalloproteinase （MMP） 2，and MMP9 in human cervical cancer cells HeLa were significantly downregulated，with statistically significant differences （t=4.904-8.304，P＜0.05）. Conclusion Hfgl2 is highly expressed in cervical cancer tissue and may promote tumor angiogenesis and invasive growth，which is expected to become a new direction for targeted treatment in cervical cancer.

［Key words］ human fibrinogen-like protein 2;cervical cancer;clinical pathological characteristics;angiogenesis;proliferative and migration

宮頸癌是全球女性第4位常見惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅女性健康［1］。2020年全球有60.4萬新發(fā)宮頸癌和34.2萬死亡病例［2］。目前，手術(shù)、放療和化療是宮頸癌的主要治療手段［3］。初始治療后，30%～50%的宮頸癌患者會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，其長(zhǎng)期生存率僅為10%～20%［4］。因此，復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性宮頸癌是婦科惡性腫瘤治療的難點(diǎn)，也是提高患者生存率的關(guān)鍵點(diǎn)。隨著腫瘤靶向治療、免疫治療的研究，尋找宮頸癌新的生物學(xué)標(biāo)志物及治療手段已成為臨床研究熱點(diǎn)。

纖維介素（fibroleukin/fibrinogen-like protein 2，fgl2），又稱fgl2凝血酶原酶，屬于纖維蛋白原超家族的成員。研究發(fā)現(xiàn)，人纖維介素（human fibroleukin/fibrinogen-like protein-2，Hfgl2）可表達(dá)于人體各臟器中，參與細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、凝血及免疫調(diào)節(jié)等［5］。既往研究顯示，fgl2凝血酶原酶參與病毒誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)、自身免疫性疾病、流產(chǎn)和腫瘤等相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展［6-8］。目前，關(guān)于Hfgl2對(duì)宮頸癌發(fā)病的影響及作用機(jī)制尚不清楚，且相關(guān)研究甚少。本研究通過檢測(cè)宮頸癌組織中Hfgl2的表達(dá)，分析其與宮頸癌臨床病理特征之間的關(guān)系，并探究Hfgl2對(duì)宮頸癌惡性生物學(xué)行為的影響，以期尋找潛在的生物標(biāo)志物和分子治療靶點(diǎn)，為宮頸癌的治療提供新的策略。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年1月至2018年1月在榆林市第一醫(yī)院經(jīng)病理確診的50例宮頸癌患者的癌組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組，另外收集同期50例正常宮頸組織作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①具有完整的病例資料；②經(jīng)宮頸活檢或手術(shù)切除后病理診斷為宮頸癌；③術(shù)前均未接受放化療治療；④術(shù)前六個(gè)月內(nèi)未服用激素類藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病；②嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病；③嚴(yán)重心肝腎功能不全；④全身感染性疾病；⑤預(yù)計(jì)生存時(shí)間不足3個(gè)月。對(duì)照組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)；②病例資料完整。對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并其他臟器嚴(yán)重功能障礙；③合并免疫功能疾病或血液系統(tǒng)疾病。

所有患者年齡在37～68歲之間，其中50歲以下52名，50歲及以上48名。所有宮頸癌患者按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）2018年宮頸癌標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期29例，Ⅲ-Ⅳ期9例；病理分級(jí)：G1級(jí)22例，G2-G3級(jí)28例；41例手術(shù)患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者14例。本研究經(jīng)榆林市第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批號(hào)：2019-001），所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1免疫組化方法及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

組織標(biāo)本切成4μm薄片，切片放于玻片架上，63℃烘烤過夜。二甲苯脫蠟后乙醇水化，檸檬酸鈉修復(fù)液高壓熱修復(fù)后3%的H2O2封閉10min，加入兔抗人Hfgl2抗體（1∶100），4℃過夜。二抗孵育后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸乙醇分化，1%氨水反藍(lán)。乙醇脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片，在顯微鏡下觀察。免疫組化染色的片子，將染色結(jié)果顯示為棕黃色、顆粒者視為陽性。采用Leica Qwin圖像分析系統(tǒng)，對(duì)染色細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分（選取至少5個(gè)不同的400倍視野）：其中0分為＜5%，1分為5%～25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為＞75%。按照染色程度的強(qiáng)弱分為3級(jí)：其中弱染色計(jì)為1分，中度染色計(jì)為2分，強(qiáng)染色計(jì)為3分。每份切片最終評(píng)分=染色細(xì)胞計(jì)數(shù)比例分?jǐn)?shù)×染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)，結(jié)果分?jǐn)?shù)＜1視為陰性，≥1視為陽性。

1.2.2 mRNA表達(dá)檢測(cè)

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription po-lymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)mRNA表達(dá)。TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)錄條件為37℃ 15min，85℃ 5s，以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行RT-PCR，甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參。引物序列：GAPDH-F：GCACCGTCAAGGCTGAGAAC；GAPDH-R：TGGTGAAGACGCCAGTGGA；Hfgl2-F：GCTCTGACTACTACGCAATA；Hfgl2-R：ATGTTCTGGTGAAGTTGGT。按照SYBR Premix Ex TaqTM說明書進(jìn)行，反應(yīng)條件為Step1（1 Cycle） 95℃ 30s，Step2（40 Cycles） 95℃ 5s 60℃ 30s，Step3 Dissociation（1 Cycle）。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3蛋白表達(dá)檢測(cè)

從細(xì)胞中提取蛋白，二喹啉甲酸法（bicinchoninic acid，BCA）定量測(cè)定濃度。蛋白經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）電泳，應(yīng)用Bio-Rad濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜，5%脫脂牛奶封閉1h，加入5%脫脂牛奶稀釋的一抗［1∶1 000 Hfgl2、1∶500V血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1（vascular endothelial growth factor receptor 1，VEGFR1）、1∶1 000蛋白激酶（protein kinase B，PKB/Akt）、1∶1 000 磷脂酶C（phospholipase C，PLC）-γ、1∶500基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）2、1∶500 MMP9、1：20 000 GAPDH］4℃孵育過夜，與相應(yīng)的1∶20 000稀釋的二抗室溫孵育1h，加入增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（enhanced chemiluminescence，ECL）試劑，用Western Blot化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)一體機(jī)進(jìn)行曝光，采用ImageJ2×軟件進(jìn)行吸光度分析。

1.2.4細(xì)胞活性檢測(cè)

四甲基偶氮唑鹽比色法（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）檢測(cè)細(xì)胞活性。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用胰蛋白酶消化后，接種于96孔板中（4×104個(gè)/孔），24h細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組加入siRNA寡聚物，陰性對(duì)照組加入無血清培養(yǎng)基，作用6h后，更換成正常培養(yǎng)基。分別隔24h、48h、72h、96h后，每孔加入0.5mg/mL MTT，37℃孵育4～6h。加入二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）置于脫色搖床上充分振蕩，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于490nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光度（optical delnsity，OD）值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各陽性表達(dá)等計(jì)數(shù)資料使用頻數(shù)（n）和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)。免疫組化評(píng)分等計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本ｔ檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析。推斷兩個(gè)分類變量間有無相關(guān)性時(shí)使用Spearman相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Hfgl2在宮頸癌組織中的表達(dá)

Hfgl2在宮頸癌組織中（見圖1A）的陽性表達(dá)率高于正常宮頸組織（見圖1B），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（92.00% vs. 6.00%，χ2=73.990，P＜0.05），見表1。Hfgl2在宮頸癌組織及正常宮頸組織免疫組化評(píng)分分別為（8.88±0.35）分、（1.00±0.50）分，Hfgl2在宮頸癌組織的免疫組化評(píng)分高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.022，P＜0.05），見圖1C。分別對(duì)宮頸鱗癌、腺癌進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，Hfgl2在宮頸鱗癌組織及正常宮頸組織免疫組化評(píng)分分別為（9.29±0.24）分、（1.00±0.50）分，Hfgl2在宮頸鱗癌組織的免疫組化評(píng)分高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.249，P＜0.05），見圖1D。Hfgl2在宮頸腺癌組織及正常宮頸組織免疫組化評(píng)分分別為（8.56±0.41）分、（1.00±0.50）分，Hfgl2在宮頸腺癌組織的免疫組化評(píng)分高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.399，P＜0.05），見圖1E。另外，RT-PCR測(cè)定表明，實(shí)驗(yàn)組Hfgl2 mRNA陽性表達(dá)率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（84.00% vs. 6.00%，χ2=61.455，P＜0.05），見表2。

注：A為16例宮頸癌組織Hfgl2免疫組化染色圖（100×）；B為5例正常宮頸組織Hfgl2免疫組化染色圖（100×）；C為宮頸癌組織和正常宮頸組織中Hfgl2免疫組化評(píng)分統(tǒng)計(jì)分析；D為宮頸鱗癌組織和正常宮頸組織中Hfgl2免疫組化評(píng)分統(tǒng)計(jì)分析；E為宮頸腺癌組織和正常宮頸組織中Hfgl2免疫組化評(píng)分統(tǒng)計(jì)分析；****表示P＜0.000 1。

2.2 Hfgl2的表達(dá)與宮頸癌臨床病理參素之間的關(guān)系

宮頸癌組織中，Hfgl2在宮頸癌FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期中的陽性表達(dá)率高于Ⅰ期、Ⅱ期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.737，P＜0.05）；在病理分級(jí)中，Hfgl2在G2-G3級(jí)宮頸癌組的陽性表達(dá)率顯著高于G1級(jí)組（χ2=7.147，P＜0.05）；在有淋巴轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中，Hfgl2陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（χ2=12.037，P＜0.05）；年齡與Hfgl2的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.3 Hfgl2在三株人宮頸癌細(xì)胞的表達(dá)

采用Western blot方法檢測(cè)Hfgl2在三株人宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)量，結(jié)果顯示，三株人宮頸癌細(xì)胞中Hfgl2均有表達(dá)，在SiHa細(xì)胞中的表達(dá)量最高，見圖2。進(jìn)一步確證Hfgl2在宮頸癌中的作用，采用RNA干擾試劑干擾三株人宮頸癌細(xì)胞中的Hfgl2基因。采用RT-PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，干擾后Hfgl2的mRNA表達(dá)量降低，表明所選擇的寡聚siRNA片段可成功干擾Hfgl2基因，見圖3。采用Western blot方法進(jìn)一步驗(yàn)證RNA干擾三株人宮頸癌細(xì)胞中的Hfgl2基因，結(jié)果顯示干擾后Hfgl2的蛋白表達(dá)明顯降低，表明所選擇的寡聚siRNA片段可成功干擾Hfgl2基因，見圖4。

2.4敲降Hfgl2表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖的影響

采用上述實(shí)驗(yàn)中篩選得到的siRNA片段干擾三株宮頸癌細(xì)胞后，進(jìn)一步考察了野生型的Hela、MS751和SiHa細(xì)胞在Hfgl2基因干擾后的細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示敲降Hfgl2，三株宮頸癌細(xì)胞的增殖能力明顯降低，見圖5。

2.5敲降Hfgl2表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞信號(hào)通路的影響

采用上述實(shí)驗(yàn)中篩選得到的siRNA片段干擾Hela細(xì)胞后，進(jìn)一步考察了敲降Hfgl2基因?qū)ela細(xì)胞血管生成及增殖遷移相關(guān)信號(hào)通路的影響。在Hela細(xì)胞中敲降Hfgl2，與血管生成相關(guān)的VEGFR1表達(dá)下降，與細(xì)胞增殖相關(guān)的Akt和PLC-γ的蛋白表達(dá)也降低（t值分別為4.904、6.126、6.216，P＜0.05），見圖6。在Hela細(xì)胞中敲降Hfgl2，和細(xì)胞遷移密切相關(guān)的MMP2和MMP9蛋白表達(dá)均下調(diào)（t值分別為5.731、8.304，P＜0.05），見圖7。

3討論

3.1宮頸癌的概況及Hfgl2的生物學(xué)性質(zhì)

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）的持續(xù)感染高度相關(guān)。雖然宮頸癌篩查的推廣及HPV疫苗的研發(fā)一定程度上提高了宮頸癌的防治效果，但晚期、復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性患者治療效果及預(yù)后仍較差。近年來，免疫治療和靶向治療的發(fā)展為宮頸癌的治療帶來了機(jī)遇［4］。Fgl2凝血酶原酶在正常生理及感染性疾病、自身免疫性疾病和惡性腫瘤等的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用［6，9］，可能有望成為腫瘤靶向治療的新方向。

Hfgl2基因位于人類染色體7q11.23，是一種含有439個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，與纖維蛋白原的β和γ鏈有36%的同源性。生理情況下，fgl2以膜型和分泌型兩種形式存在。膜型fgl2（membrane fibrinogen-like protein 2，mfgl2）具有絲氨酸蛋白酶活性，能直接將凝血酶原裂解成凝血酶，導(dǎo)致級(jí)聯(lián)反應(yīng)［5］，同時(shí)還可以誘導(dǎo)纖維蛋白沉積，在微循環(huán)障礙和腫瘤血管新生方面發(fā)揮重要作用［5］。分泌型fgl2（soluble fibrinogen-like protein 2，sfgl2）主要由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌，能通過抑制樹突狀細(xì)胞成熟、促進(jìn)B細(xì)胞凋亡、影響T細(xì)胞增殖分化及殺傷靶細(xì)胞，發(fā)揮負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用［10］。

3.2 Hfgl2在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用

近年來發(fā)現(xiàn)，fgl2在肝癌、腎癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、食管癌和膠質(zhì)瘤等多種實(shí)體瘤中高度表達(dá)，提示其可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)［11］。Ma等［12］報(bào)道，fgl2在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，且參與了低級(jí)別膠質(zhì)瘤向高級(jí)別膠質(zhì)瘤的惡性轉(zhuǎn)化。張嵐［13］研究發(fā)現(xiàn)，fgl2在宮頸癌中表達(dá)升高，且與宮頸癌臨床分級(jí)、病理類型及不良預(yù)后有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，Hfgl2在宮頸癌組織中高表達(dá)，并且FIGO分期晚、組織學(xué)分級(jí)差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中Hfgl2表達(dá)增高，提示Hfgl2可能與宮頸癌的惡性生物學(xué)行為有關(guān)，與上述相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致。

3.3 Hfgl2影響宮頸癌惡性生物學(xué)行為的作用機(jī)制

目前普遍認(rèn)為，fgl2主要是通過促進(jìn)腫瘤的血管形成來發(fā)揮促瘤作用。Liu等［14］研究報(bào)道，fgl2參與絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路，促進(jìn)了結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。Xiao等［8］研究顯示，在暴發(fā)型肝炎小鼠模型中，fgl2通過調(diào)節(jié)核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）、MAPK等信號(hào)通路促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化，加速疾病進(jìn)展。此外，在腦膠質(zhì)瘤的研究中發(fā)現(xiàn)［15-16］，fgl2可以促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞的極化和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）的增殖，從而增強(qiáng)免疫抑制功能來促進(jìn)膠質(zhì)瘤的進(jìn)展。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是包括宮頸癌在內(nèi)的多種癌性腫瘤的關(guān)鍵促血管生成因子，一直是靶向抗血管生成治療的焦點(diǎn)。本研究中，敲降人宮頸癌細(xì)胞Hela中fgl2，VEGFR1表達(dá)明顯下調(diào)。PLC與細(xì)胞增殖分化密切相關(guān)，PLC-γ屬于其一種亞型［17］。Akt是生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)細(xì)胞存活的關(guān)鍵介質(zhì)，Akt的活化參與腫瘤的侵襲遷移［18］。MMP在細(xì)胞外基質(zhì)的降解和轉(zhuǎn)化中起著特殊作用。有研究顯示MMP2和MMP9的表達(dá)與宮頸癌擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)正相關(guān)，下調(diào)后可抑制癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移［19］。本研究顯示，敲降人宮頸癌細(xì)胞Hela中fgl2，宮頸癌細(xì)胞體外增殖能力明顯降低，與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白Akt、PLC-γ、MMP2和MMP9表達(dá)均明顯下調(diào)，與上述相關(guān)報(bào)道一致。我們推測(cè)Hfgl2可能通過促進(jìn)宮頸癌腫瘤血管生成、促進(jìn)細(xì)胞增殖及遷移來影響宮頸癌惡性生物學(xué)行為的進(jìn)展。

綜上，Hfgl2在宮頸癌組織中高表達(dá)且與宮頸癌FIGO分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Hfgl2可能促進(jìn)宮頸癌腫瘤血管生成及浸潤(rùn)生長(zhǎng)，有望成為靶向治療新方向。后期研究中，我們將增加樣本量探索Hfgl2對(duì)宮頸癌的免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。

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