急性心肌梗死病人PCI術(shù)后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相對表達水平及其與主要不良心血管事件發(fā)生的關(guān)系

王玉婷 丁文滔 華曉芳

摘要 目的：分析急性心肌梗死（AMI）病人行經(jīng)皮冠狀動脈介入（PCI）術(shù)后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相對表達水平及其與主要不良心血管事件（MACE）發(fā)生的關(guān)系。方法：選取2018年1月—2021年1月我院收治的150例因患AMI進行PCI術(shù)的病人，同時選取同期100名健康體檢者為對照組。采用熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）檢測血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達水平；采用Pearson法分析血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及其與臨床資料的相關(guān)性；受試者工作特征（ROC）曲線評價血清miR-135b-3p、miR-375-3p對AMI病人PCI后發(fā)生MACE的預(yù)測價值。結(jié)果：相較于對照組，試驗組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平顯著升高（P＜0.05）。與非MACE組相比，MACE組C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、miR-135b-3p、miR-375-3p水平顯著上升（P＜0.05）。AMI病人血清miR-135b-3p與miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關(guān)（P＜0.05）；血清miR-375-3p與CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關(guān)（P＜0.05）。ROC結(jié)果顯示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者聯(lián)合預(yù)測AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.78，0.756，0.869，其中聯(lián)合預(yù)測AUC顯著高于二者單獨預(yù)測（P＜0.05）。結(jié)論：AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高，且PCI術(shù)后發(fā)生MACE病人miR-135b-3p、miR-375-3p水平高于非MACE病人，可能成為AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE的預(yù)測因子。

關(guān)鍵詞 急性心肌梗死；miR-135b-3p；miR-375-3p；經(jīng)皮冠狀動脈介入；預(yù)測價值

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.05.018

作者單位 恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院（湖北恩施? 445000）

通訊作者 華曉芳，E-mail：37629106@qq.com

引用信息 王玉婷，丁文滔，華曉芳.急性心肌梗死病人PCI術(shù)后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相對表達水平及其與主要不良心血管事件發(fā)生的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（5）：868-872.

急性心肌梗死（AMI）是常見的心血管疾病，發(fā)病率和死亡率較高，給社會和家庭造成巨大的經(jīng)濟負擔［1］。AMI是因缺氧損害心肌細胞引起的，分為ST段抬高型心肌梗死（STEMI）和非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）兩種類型［2］。目前，臨床首選經(jīng)皮冠狀動脈介入（PCI）對AMI病人進行治療，雖可降低病人死亡率，但因AMI病人PCI術(shù)后易發(fā)生各種心血管疾病事件，嚴重影響預(yù)后［3］。因此，尋找與AMI關(guān)系密切的生物標志物用于臨床對AMI的識別與研究，改善AMI預(yù)后，對提高病人生存率具有重要的意義。microRNA（miRNA）是由18～25個核苷酸組成的非編碼RNA（ncRNA），在細胞增殖、分化、凋亡、免疫和血管生成等各種生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要作用［4］。有研

究顯示，miRNA在維持正常的心臟發(fā)育和心血管疾病的發(fā)病機制方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用［5］。有研究顯示，通過調(diào)節(jié)miRNA-223-3p下調(diào)原發(fā)性新生大鼠心肌細胞中磷酸化蛋白激酶B（AKT）表達，可減輕心肌損傷［6］。因此，猜測miR-135b-3p、miR-375-3p可能與AMI有關(guān)。本探究旨在檢測AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達水平，探討二者聯(lián)合檢測對AMI病人PCI術(shù)后的預(yù)后價值，旨在為臨床AMI的防治和改善預(yù)后提供新的研究方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2021年1月我院收治的因患AMI進行PCI術(shù)的150例病人作為試驗組。納入標準：確診為AMI［7］；心肌酶及肌鈣蛋白超過正常范圍，且動態(tài)演變；心電圖有動態(tài)演變；胸痛持續(xù)時間較長。排除標準：合并腦血管疾?。缓喜⑼庵苎芗膊?；合并惡性腫瘤、肝、腎功能不全；合并血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾??；合并嚴重感染性疾病。選取同期健康體檢者100名為對照組。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。詳見表1。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）測定血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達水平

抽取研究對象體檢清晨空腹靜脈血5 mL，血清保存于－80 ℃待測。使用RNeasy Mini Kit（QIAGEN，Hilden，德國）純化血清總RNA，并用PrimeScript RT-PCR試劑盒反向轉(zhuǎn)錄。計算A260/A280比率評估RNA質(zhì)量和純度。在推薦的熱循環(huán)設(shè)置下，使用RotorGene 6000系統(tǒng)（Corbett Life Science，德國QIAGEN）上使用SensiFASTTMSYBRNo-ROX試劑盒（Bioline）進行qPCR。以U6為內(nèi)參?；蛳嚓P(guān)序列見表2。反應(yīng)結(jié)束后采用2－△△Ct法計算miR-135b-3p、miR-375-3p mRNA相對表達量。

1.2.2 觀察指標

記錄病人年齡、性別、吸煙史、體質(zhì)指數(shù)、收縮壓、舒張壓、高血壓、高脂血癥、糖尿病、心功能Killip分級［8］等。采用邁瑞B(yǎng)C-6800血液分析儀進行血常規(guī)檢測，包括：術(shù)前血糖、平均血小板體積（MPV）、血小板計數(shù)（PLT）、C反應(yīng)蛋白（CRP）；采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（萊爾生物技術(shù)有限公司）檢測血清中白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）；采用全自動生化分析儀（AU5400，日本）檢測三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白。

1.3 研究方法

1）比較試驗組與對照組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平；2）比較預(yù)后良好組與預(yù)后不良組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平；3）比較預(yù)后良好組與預(yù)后不良組臨床特征，分析AMI病人PCI術(shù)后預(yù)后的影響因素。

1.4 隨訪

對PCI術(shù)后試驗組病人進行1年隨訪，所有病人均無失訪。隨訪方式：門診就診、電話；隨訪內(nèi)容：觀察病人PCI術(shù)后主要不良心血管事件（MACE，包括心絞痛、心力衰竭、心律失常、再梗死、心源性死亡等）發(fā)生情況，將發(fā)生MACE的病人設(shè)為MACE組，未發(fā)生MACE的病人設(shè)為非MACE組。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 25.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；定性資料以例數(shù)、百分比（%）表示，采用χ2檢驗。受試者工作特征（ROC）曲線評價血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平對AMI病人PCI后發(fā)生MACE的預(yù)測價值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 對照組與試驗組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平比較

相較于對照組，試驗組血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平顯著升高（P＜0.001）。詳見表3。

2.2 不同預(yù)后組臨床資料比較

與非MACE組相比，MACE組CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表4。

2.3 miR-135b-3p、miR-375-3p水平與臨床檢測指標的相關(guān)性

AMI病人血清miR-135b-3p與miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關(guān)（r值分別為0.625，0.616，0.594，0.553，0.539，0.641，P＜0.05）；血清miR-375-3p與CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相關(guān)（r值分別為0.585，0.633，0.596，0.574，0.608，P＜0.05）。

2.4 血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平對AMI病人PCI術(shù)后MACE發(fā)生的預(yù)測價值

以AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平為檢驗變量，以AMI病人PCI術(shù)后是否發(fā)生MACE（否＝0，是＝1）為因變量，繪制ROC曲線。結(jié)果顯示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者聯(lián)合預(yù)測AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.784，0.756，0.869，其中聯(lián)合預(yù)測AUC高于二者單獨預(yù)測AUC（Z值分別為4.940，4.446，P＜0.05）。詳見圖1、表5。

3 討 論

隨著社會經(jīng)濟的快速發(fā)展和生活方式的改變，心血管疾病已成為全球人類的主要死因，約占我國總死亡人數(shù)的40%［9］。數(shù)據(jù)顯示，2016年我國約397萬例病人死于心血管疾病，較1990年增加了146萬例［10］。冠心病是指冠狀動脈粥樣硬化，導(dǎo)致血管管腔變窄甚至阻塞，AMI是冠心病的嚴重類型，是由冠狀動脈急性持續(xù)缺血和缺氧引起的心肌壞死，臨床表現(xiàn)為心力衰竭、惡性心律失常和心源性休克等，具有起病快、死亡率高的特點［9］。PCI可迅速恢復(fù)血流，開通阻塞的冠狀動脈血管，緩解缺血缺氧癥狀，挽救病人生命，是臨床治療AMI的主要方法［11-12］。然而，經(jīng)PCI治療的AMI病人支架內(nèi)再狹窄、血栓形成和術(shù)后并發(fā)癥概率較高，嚴重影響病人預(yù)后。因此，尋求與AMI關(guān)系密切，并對其預(yù)后有預(yù)測價值的生物標志物成為研究熱點。

miRNA是內(nèi)源性短（20～22個核苷酸）、非編碼RNA，已證實參與多種細胞過程，包括癌癥、心血管疾病和炎癥性疾病，其在心肌損傷期間上調(diào)或下調(diào)，顯示出其作為AMI和缺血再灌注損傷（I/R）生物標志物的潛力［13-14］。有研究顯示，I/R與AMI的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，導(dǎo)致大量亞鐵離子（Fe2＋）流入和活性氧產(chǎn)生，是細胞損傷、發(fā)病的主要機制［15］。大鼠實驗中發(fā)現(xiàn)，miR-135b-3p在心肌I/R大鼠心肌組織和缺氧/復(fù)氧（H/R）心肌細胞中上調(diào)，通過抑制谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）表達，促進鐵死亡，加重細胞損傷，靶向miR-135b-3p可能是心肌I/R損傷的潛在治療方法［16］。本研究結(jié)果表明，與對照組相比，試驗組miR-135b-3p水平顯著上升，提示高水平miR-135b-3p促進AMI發(fā)展；進一步研究發(fā)現(xiàn)，MACE組血清miR-135b-3p表達水平顯著高于非MACE組，其預(yù)測AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE的AUC為0.784，提示血清miR-135b-3p與AMI病人PCI術(shù)后預(yù)后關(guān)系密切，對AMI病人PCI術(shù)后MACE的發(fā)生具有一定的預(yù)測價值。Garikipati等［17］研究顯示，miR-375水平升高與心肌梗死的嚙齒動物及心力衰竭病人有關(guān)，抗miR-375療法靶向少數(shù)由磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1（PDK-1）/AKT信號傳導(dǎo)機制介導(dǎo)的多種細胞類型，減輕炎癥反應(yīng)，減少心肌細胞死亡，改善左心室功能并增強血管生成。Zhuang等［18］研究顯示，在I/R大鼠模型和繼發(fā)性心肌纖維化（CF）細胞模型中，高表達miR-375-3p通過介導(dǎo)GPX4加速心肌細胞鐵死亡，從而促進心肌纖維化，miR-375-3p是預(yù)防和治療CF的新型潛在生物標志物。本研究結(jié)果顯示，試驗組miR-375-3p水平顯著高于對照組，且MACE組AMI病人血清miR-375-3p水平顯著高于非MACE組，提示miR-375-3p參與AMI的發(fā)生、發(fā)展。miR-375-3p預(yù)測AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE的AUC為0.756；進一步ROC分析顯示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平聯(lián)合預(yù)測AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE的AUC及敏感度較高，可能為預(yù)測AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生MACE提供參考。

AMI的發(fā)展加劇炎癥反應(yīng)，有研究顯示，AMI無回流現(xiàn)象病人血液超敏C反應(yīng)蛋白顯著升高［19］。在AMI小鼠中，AMI誘導(dǎo)炎性細胞因子產(chǎn)生，引起IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高［20］。Kristono等［21］研究顯示，IL-6、IL-8在AMI病人中表達上調(diào)，可獨立預(yù)測不良心血管事件。本研究結(jié)果顯示，MACE組血清CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平顯著高于非MACE組，可參與AMI病人預(yù)后；進一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-135b-3p與miR-375-3p具有相關(guān)性，且與CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平呈正相關(guān)?？赡芡ㄟ^miR-135b-3p與miR-375-3p共同作用，增強病人機體炎癥反應(yīng)，進一步使CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表達水平升高，具體機制仍需進一步研究。

綜上所述，AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p表達升高，促進AMI進程，增加病人機體炎癥反應(yīng)，進一步提高CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表達水平。二者可能成為AMI病人PCI術(shù)后MACE發(fā)生的預(yù)測因子。本研究未分析miR-135b-3p、miR-375-3p與AMI病人PCI術(shù)后發(fā)生心血管不良事件的具體作用機制，今后需進一步深入研究。

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（收稿日期：2023-03-14）

（本文編輯薛妮）