白及根腐病病原菌的鑒定及抑制效應(yīng)研究

摘 要：為明確鑒定白及塊莖腐爛?。ǜ。┑牟≡⒑Y選能夠抑制病原菌的中藥材提取物。該研究利用常規(guī)組織分離法對(duì)病原菌進(jìn)行分離，通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)致病菌株進(jìn)行鑒定，同時(shí)觀察了7種中藥材提取物對(duì)病原菌的抑菌效果。結(jié)果表明：（1）從感病葉片、葉鞘及塊莖中共分離得到 14 株真菌和 4株細(xì)菌，病原菌室內(nèi)和室外回接表明菌株 GF-1致病癥狀與田間一致，致病率均達(dá)到100%。（2）經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，菌株GF-1為附球菌屬（Epicoccum）病原菌，菌落白色絨絮狀，圓形；菌絲匍匐向外、向上生長(zhǎng)，氣生，無色，有隔膜，有分枝，具有分生孢子和厚垣孢子。（3）菌株GF-1的ITS 序列（全長(zhǎng)522 bp）與 GenBank 中已登錄的甘蔗的高粱附球菌（E. sorghinum，MN493119.1）序列一致性最高，達(dá)99.62%，與已報(bào)道的白及葉斑病致病菌高粱附球菌（E. sorghinum， MF948994.1）的一致性為98.88%。（4）培養(yǎng)基中含有0.1～0.2 g·mL^-1的青錢柳等7種中藥材提取物，能夠完全抑制GF-1菌落的生長(zhǎng)；當(dāng)培養(yǎng)基中含有0.05 g·mL^-1的提取物時(shí)，肉桂和丁香提取物仍然能夠完全抑制菌落的生長(zhǎng)。綜上認(rèn)為，引起白及根腐病的致病菌為附球菌屬高粱附球菌（E. sorghinum），培養(yǎng)基中分別含有0.1～0.2 g·mL^-1的青錢柳、白及、厚樸、八角、肉桂、蛇床子和丁香7種中藥材提取物且均能完全抑制致病菌的生長(zhǎng)。該研究結(jié)果為白及根腐病的防治提供了理論指導(dǎo)。

關(guān)鍵詞：白及，根腐病，病原菌分離和鑒定，高粱附球菌，中草藥提取物

中圖分類號(hào)：Q948 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1000-3142（2024）02-0345-09

基金項(xiàng)目：廣西重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目 （桂科AB18294026）；廣西科學(xué)院園藝植物種質(zhì)資源創(chuàng)新及利用創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（CQZ-E-1919）；桂林市創(chuàng)新平臺(tái)和人才計(jì)劃項(xiàng)目 （20210102-3）；桂林市技術(shù)應(yīng)用與推廣計(jì)劃項(xiàng)目 （20220135-1）。

第一作者：馬曉雅（1997-），碩士研究生，主要從事園林植物栽培及景觀設(shè)計(jì)研究，（E-mail）1207092435@qq.com。

^*通信作者：鄭文俊，博士，教授，主要從事民族鄉(xiāng)土景觀及風(fēng)景旅游規(guī)劃，（E-mail）149480860@qq.com;" 仇碩，博士，副研究員，主要從事園藝植物種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用研究，（E-mail）qiushuo001@163.com。

Identification and inhibiting effect of pathogens that caused tuber rot of Bletilla striata MA Xiaoya^1，2， LU Xi^1，2， WU Qiaofen²， YANG Yanni²， XIA Ke²，

ZHAO Zhiguo²， ZHENG Wenjun^1*， QIU Shuo^2*

（ 1. College of Tourism ＆ Landscape Architecture， Guilin University of Technology， Guilin 541006， Guangxi， China; 2. Guangxi Key Laboratory of Plant Functional Phytochemicals and Sustainable Utilization， Guangxi Institute of Botany， Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences， Guilin 541006， Guangxi， China ）

Abstract： In order to identify" the pathogens that caused tuber rot in Bletilla striata and study the inhibiting effects of herbal extracts on pathogens， the pathogens that caused tuber rot of B. striata were isolated using usual tissue isolation the strains were identified by morphological and molecular biological techniques， and inhibiting effects of seven traditional Chinese medicine extracts on pathogen were observed. The results were as follows：（1） A total of fourteen fungi and four bacteria were isolated from diseased leaves， leaf sheaths and tubers. But only strain GF-1 caused disease， whose symptoms consistent with those in the field. The incidences of GF-1 disease reinoculated in the field and laboratory were both 100％. （2）GF-1 was identified as a member of Epicoccum， and its colonial morphology was a circular form， with white mycelium， prostrate on the medium， aerial， diaphragms and branches. There were conidia and chlamydospores. （3）At last， the sequence of internal transcribed spacer （ITS） region of GF-1 were analyzed， the length was 522 bp. The sequence was compared with other species in the GenBank and reached" 99.62% similarity to Epicoccum sorghinum （MN493119.1） isolated form Sorghum， which was" closer than others， including Epicoccum sorghinum （MF948994.1） isolated form leaves of Bletilla striata. （4）GF-1 could be fully inhibited when the medium contained 0.1-0.2 g·mL^-1 extracts that extracted from seven traditional Chinese medicines， respectively." It also could be fully inhibited by 0.05 g·mL^-1 of Cinnamomum cassia or Syringa oblate. In summary， the pathogen that caused tuber rot in Bletilla striata was identified as Epicoccum sorghinum. And GF-1 could be fully inhibited cultivated on the medium which contained 0.1-0.2 g·mL^-1 herbal extracts， e.g.： Cinnamomum cassia， Syringa oblate， Cyclocarya paliurus， Bletilla striata， Houpoea officinalis， Illicium verum or Cnidium monnieri. The results provide theoretical references for the control of tuber rot of Bletilla striata.

Key words： Bletilla striata， tuber rot， pathogen isolation and identification， Epicoccum sorghinum， Chinese herbal extracts

白及（Bletilla striata）為蘭科（Orchidaceae）白及屬（Bletilla）多年生草本植物，別名白芨、連及草、利知子、甘根等。白及屬植物全球有6種，均分布在亞洲，其中中國(guó)有4種，分別為白及、小白及、華白及、黃花白及（中國(guó)植物志，1999）。白及具有止血補(bǔ)肺、生肌止痛之功效，用于防治咯血、吐血、慢性胃潰瘍及腫瘤、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂等癥（中華人民共和國(guó)藥典，2020）；此外，白及葉態(tài)優(yōu)美、花大色艷、花期長(zhǎng)，可在園林景觀中用于布置花壇、花境或花海（石晶，2010；朱嬌等，2020）。此外，白及還可用于制作粘合劑、漿絲綢、面膜或涂料以及釀酒等（劉光斌等，2005；Gouvg et al.， 2009）。因此，白及是一種兼具藥用、觀賞和工業(yè)價(jià)值的多用途植物。

近年來，隨著市場(chǎng)需求量的逐年上升，種植規(guī)模不斷擴(kuò)大，各類病害頻繁爆發(fā)，如葉斑病（柯尚艷等，2018；Zhou et al.， 2018）、葉褐斑病和銹病等（宋莉莎，2019），嚴(yán)重影響了白及的產(chǎn)量和質(zhì)量以及觀賞價(jià)值。根腐病是白及的常見病害之一，大多發(fā)生在6—8月，地下塊莖出現(xiàn)褐色病斑，內(nèi)部呈黑褐色軟腐狀，并伴有腥臭味，整個(gè)根部維管束被破壞，失去輸水能力；地上莖稈、葉片基部和葉鞘早期表現(xiàn)為褐色干枯狀長(zhǎng)條形病斑，邊緣黃色暈染狀，后期則干枯至死，病株易連根莖從土中拔出，發(fā)病塊莖呈木質(zhì)化纖維。整體發(fā)病率在15%左右，危害較大，一旦受害就會(huì)嚴(yán)重影響藥材的品質(zhì)和產(chǎn)量。該病害易與葉斑病混淆（Zhou et al.， 2018）。目前，雖然研究報(bào)道表明引起白及根腐病的病原菌主要是尖孢鐮刀菌 （Fusarium oxysporum）和腐皮鐮刀菌（F. solani）（孫樂樂等，2013；宋莉莎，2019），但這些研究并未報(bào)道引起根腐病的地上部癥狀的病原菌。鑒于以上情況，在廣西地區(qū)引起白及根腐病的病原菌是否與葉斑病致病菌一致或者與根腐病致病菌一致目前尚不清楚。中藥材提取物具有低污染、低毒、低殘留的特點(diǎn)，廣泛用于中藥材病害防治，如厚樸和蛇床子提取液分別對(duì)黃芪和五味子根腐病具有很好的防治效果（劉瑩等，2009；馬偉等，2010）。然而，這些中藥材提取物對(duì)白及病害的防治效果還需要驗(yàn)證。本文以白及根腐病為研究對(duì)象，采用常規(guī)組織分離法分離不同組織部位的病原菌，通過形態(tài)學(xué)且結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)鑒定病原菌，并采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定中藥材提取液對(duì)病原菌的抑制效果，以期明確鑒定廣西地區(qū)根腐病的病原菌，并篩選出能夠抑制病原菌的中藥材提取物，為白及根腐病防治提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2021年6月，于桂林市雁山區(qū)（地處110°17′ E、25°01′ N）采集白及病株，初步判斷為葉斑病或根腐病。該病害多發(fā)生在6月中旬至8月初，整體發(fā)病率在15%左右，發(fā)病初期地上部無癥狀，地下部根系和塊莖出現(xiàn)褐色病斑，塊莖切開后呈黑褐色軟腐狀，并伴有腥臭味；隨著病情的加深，當(dāng)?shù)叵聣K莖出現(xiàn)1/3～1/2腐爛時(shí)，根系完全腐爛，地上莖稈開始出現(xiàn)褐色，葉片尖部和基部出現(xiàn)不規(guī)則病斑，病斑中央深褐色，邊緣黃褐色至淡黃色，直至萎蔫，莖稈容易被抽出（圖1）。A. 田間病株; B. 田間病株莖稈; C. 病株塊莖; D. 健康塊莖; E. 健康植株。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌的分離 參照常規(guī)組織分離法（方中達(dá)，1998），從發(fā)病植株上采集病葉、葉鞘和地下塊莖，沖洗干凈，在病健交界處切下約 5 mm×5 mm 的小塊組織；先用75%的酒精處理30 s，再用0.1%濃度的升汞溶液消毒 60 s、無菌水沖洗晾干、無菌濾紙吸干水分后移置于 PDA 培養(yǎng)基上；在每個(gè)培養(yǎng)皿中（Φ=90 mm）放入3～4 塊組織，于25℃恒溫條件下培養(yǎng)3 d，對(duì)其進(jìn)行純化培養(yǎng)。采用平板劃線法進(jìn)行菌種純化，即在無菌操作臺(tái)中用接種環(huán)挑取菌絲，在PDA平板上劃線，進(jìn)行編號(hào)后繼續(xù)置于 25℃ 恒溫條件下培養(yǎng)，純化至出現(xiàn)單個(gè)的菌落即可。

1.2.2 病原菌的致病性測(cè)定

1.2.2.1 室內(nèi)回接 將3年生的白及組培苗健康植株采回實(shí)驗(yàn)室，采取創(chuàng)傷接種法進(jìn)行接種。用無菌水沖洗葉片和塊莖，用無菌濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作，步驟如下：用解剖刀將葉片背面輕輕刮傷（約 5 mm×5 mm）；對(duì)塊莖采用刺傷接種法，使用直徑5 mm的打孔器在菌落邊緣打取菌餅；將帶有菌絲那一面覆蓋在葉片和塊莖的傷口處，以接種PDA 培養(yǎng)基的健康白及葉片和塊莖為對(duì)照組；每個(gè)葉片處理3個(gè)傷口，粘貼菌餅，重復(fù) 3 次；每個(gè)塊莖從中間切開，各處理1個(gè)傷口，粘貼菌餅，重復(fù)3次。將樣品平鋪于帶有濕潤(rùn)吸水紙的平盤內(nèi)，做保濕處理，6 d 后統(tǒng)計(jì)感病數(shù)和發(fā)病率。計(jì)算公式：發(fā)病率=（感病數(shù)/接種總數(shù)）×100%。

1.2.2.2 田間回接 選擇室內(nèi)回接致病的菌株，進(jìn)一步進(jìn)行田間回接驗(yàn)證。選擇健康植株的葉片，用解剖刀輕輕割傷葉片上表面，面積約 5 mm×5 mm，使用直徑5 mm的打孔器取培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好的病原菌菌餅，將帶有菌絲的一面貼向葉片，并利用透明膠布粘附到已接種的葉片部位；以無菌的 PDA 培養(yǎng)基作對(duì)照。每個(gè)處理 3 株，每張葉片粘貼 3個(gè)菌餅，共計(jì)9個(gè)接種部位。用保鮮袋罩住 24 h，6 d 后統(tǒng)計(jì)感病數(shù)和發(fā)病率。計(jì)算公式：發(fā)病率=（感病數(shù)/接種總數(shù)）×100%。

1.2.2.3 致病菌重新分離 對(duì)田間回接致病的植株進(jìn)行再次分離，驗(yàn)證是否符合柯赫式法則，病原菌的分離方法同1.2.1。

1.2.3 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定 對(duì)田間回接致病的病原菌，挑取生長(zhǎng)良好的病原菌菌落，采用插片培養(yǎng)法置于含有 PDA培養(yǎng)基的一次性培養(yǎng)皿中，在25℃ 恒溫條件下培養(yǎng)，3～5 d 后觀察菌絲體、分生孢子的形態(tài)，用leika正置式顯微鏡DM2500拍照，并測(cè)量分生孢子大?。ㄩL(zhǎng)、寬）及菌絲直徑。同時(shí)，查閱文獻(xiàn)資料進(jìn)行初步鑒定。

1.2.4 病原菌的分子生物學(xué)鑒定 刮取菌絲，用液氮研磨法破壁，采用CTAB法提取病原菌菌絲的 DNA。采用真菌通用引物對(duì)ITS1/ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將獲得的DNA片段進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)。 PCR產(chǎn)物的純化和測(cè)序由武漢擎科創(chuàng)新生物有限科技公司完成，將所得序列與GenBank （http： //www.ncbi.nlm.nih.gov） 中核酸數(shù)據(jù)進(jìn)行BLAST分析，利用Vector NTIAdvance 11 進(jìn)行比對(duì)，通過MEGA 5.0 進(jìn)行UPGMA分析生成系統(tǒng)發(fā)育樹。通過同源性分析，對(duì)病原菌菌種進(jìn)行分子水平鑒定（李若瑜等，2002）。

1.2.5 中藥材提取物對(duì)根腐病病原菌的抑制效應(yīng) 把7種備試中藥材于烘箱中60℃烘干，粉碎，過40目篩（孔徑0.425 mm），密封后于-20℃下保存待用。將乙醇作為溶劑，采用3次振蕩浸提法提取（韓建華等，2002），合并3次濾液進(jìn)行減壓濃縮至質(zhì)量濃度為1 g·mL^-1，密封后于4℃冰箱中保存。采用菌絲生長(zhǎng)速率法（吳文君，1988）測(cè)定中藥材提取液對(duì)白及根腐病致病菌的抑制效果。取質(zhì)量濃度1 g·mL^-1的中藥提取液加入PDA培養(yǎng)基中，搖勻，參照前人的濃度設(shè)計(jì)梯度制成濃度分別為0.05、0.1、0.2 g·mL^-1的帶藥平板（馬偉等，2010；劉瑩等，2019），以加入無菌水的PDA培養(yǎng)基為空白對(duì)照。選用直徑為5 mm的打孔器，打取菌落邊緣的菌餅，接種于帶藥平板上，每組處理重復(fù)3次，于25℃恒溫下培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h，每隔24 h用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，連續(xù)記錄7次結(jié)果，計(jì)算抑制生長(zhǎng)率。計(jì)算公式：抑制生長(zhǎng)率=［（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑5.0 mm）］×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的分離

根據(jù)田間癥狀，初步判斷為根腐病或葉斑病。從感病植株的葉片、葉鞘和塊莖的病健交界處分別取樣，分離病原菌，共分離出病原菌18株（真菌14株、細(xì)菌4株）。其中，從葉片中分離得到2株真菌和1株細(xì)菌，從葉鞘中分離得到9株真菌和2株細(xì)菌，從塊莖中分離得到3株真菌和1株細(xì)菌，這說明分離的菌種相對(duì)較多且較為復(fù)雜，但不同組織部位均沒有分離到霉菌。真菌編號(hào)為GF-1～GF-14，細(xì)菌編號(hào)為GB-1～GB-4，其中GF-1和GF-7在葉片、葉鞘以及塊莖中均能分離得到。圖2：A示部分分離的菌株。

2.2 病原菌的致病性測(cè)定

分別對(duì)18株菌株進(jìn)行室內(nèi)回接，接種3 d后觀察，發(fā)現(xiàn)真菌GF-1、GF-4、GF-5和GF-7出現(xiàn)較明顯的致病癥狀（圖2：B），6 d 后統(tǒng)計(jì)發(fā)病率（表1）。對(duì)室內(nèi)接種發(fā)病率較高的GF-1、GF-4、GF-5和GF-7等進(jìn)行田間回接，發(fā)現(xiàn)僅GF-1接種部位呈現(xiàn)黑斑、有燒焦?fàn)睢⒅虚g部位干枯（圖3：A），室內(nèi)回接有明顯的黃色暈斑（圖2：B中的GF-1），切開根莖后有腐爛（圖2：C），與田間采取病株時(shí)的病害癥狀基本一致；其他菌株因致病病斑和對(duì)照組沒有繼續(xù)擴(kuò)大或者無感病癥狀而接種部位干枯（圖3：B-E）。從接種GF-1的發(fā)病組織中重新分離獲得的病原菌，經(jīng)純化培養(yǎng)后與接種的病原菌完全一致，符合柯赫式法則，這充分表明分離獲得的病原菌為該病的致病菌。

2.3 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

病原菌GF-1在 PDA培養(yǎng)基上，于25℃恒溫條件下培養(yǎng) 5 d ，長(zhǎng)出白色絨絮狀菌落，菌絲匍匐向外、向上生長(zhǎng)，氣生，菌落絮狀，白色，圓形，菌落背部中心褐色或黑褐色，周圍綠褐色至黃褐色（圖4：A，B）。菌絲無色，生長(zhǎng)較快，有隔膜，直徑為3.2～6.9 μm，其分生孢子梗多分枝；厚垣孢子為長(zhǎng)方形或橢圓形，大小為 （6.5～9.6） μm×（6.5～7.1） μm，分生孢子散生，呈卵形，大小為（5.3～8.9）μm×（1.4～3.6）μm（圖4：C，D）。菌落培養(yǎng)5 d 后直徑為5.2～7.0 cm（培養(yǎng)皿Φ=90 mm）。對(duì)照中國(guó)真菌志沒有發(fā)現(xiàn)類似的真菌種類，經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料（Aveskamp et al.，2010），初步判斷GF-1病原菌為附球菌屬病原菌。

2.4 病原菌ITS 區(qū)的序列系統(tǒng)發(fā)育分析

對(duì)菌株 GF-1 的 ITS rDNA 的 PCＲ 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序、校對(duì)、剪切和拼接，獲得全長(zhǎng)為552 bp的序列。將序列與 GenBank 中的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行一致性分析，結(jié)果表明菌株 GF-1的ITS 序列（TSB1G643013）與甘蔗的高粱附球菌（E. sorghinum，MN493119.1）序列一致性最高，為99.62%，而與白及中分離的A. 分離的4個(gè)菌株; B. 4個(gè)菌株室內(nèi)回接; C. GF-1室內(nèi)回接塊莖; D. 對(duì)照塊莖。

高粱附球菌（E. sorghinum，MF948994.1）序列一致性為98.88%。將這些序列利用MEGA 5.0構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，該序列與甘蔗分離的高粱附球菌（E. sorghinum，MN493119.1）聚為同一族，親緣關(guān)系最近，與已分離鑒定的白及高粱附球菌（E. sorghinum， MF948994.1）的親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，后者與煙草高粱附球菌（E. sorghinum，KJ767080.1）聚為同一族，這可能是因致病菌自身容易變異而引起的，這些病原菌在分子進(jìn)化方向上存在一定差異（圖5）。

2.5 中藥材提取物對(duì)白及根腐病致病菌的抑制效果

中藥材提取物對(duì)根腐病致病菌的抑制效果如圖6和表2所示。與含無菌水培養(yǎng)的菌落（對(duì)照）相比，培養(yǎng)基中分別含有0.1、0.2 g·mL^-1的7種中藥材提取物能夠完全抑制GF-1菌落的生長(zhǎng)。當(dāng)培養(yǎng)基中添加低濃度（0.05 g·mL^-1）的提取物時(shí)，肉桂和丁香提取物仍能完全抑制菌落的生長(zhǎng)，八角提取物抑制菌的生長(zhǎng)率達(dá)到99.6%；而低濃度的青錢柳、白及、 厚樸和蛇床子卻不能完全抑制菌病原菌（Rhizoctonia sp.）引起白及塊莖腐爛病癥狀相似。根腐病發(fā)病率高，對(duì)藥材產(chǎn)量和品質(zhì)危害很大，目前已成為影響三七、白術(shù)、黃芪等多種藥用植物生產(chǎn)的主要病害，并發(fā)現(xiàn)鐮刀屬真菌為主要病原菌（沈清清等，2014）。孫樂樂等（2013）報(bào)道，引起云南地區(qū)白及根腐病的病原菌是尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）和腐皮鐮刀菌（F. solani）；宋莉沙（2019）鑒定了貴州地區(qū)白及根腐病致病菌是腐皮鐮刀菌（F. solani）。本研究通過調(diào)查、致病菌分離，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子序列鑒定，發(fā)現(xiàn)引起廣西桂林地區(qū)白及根腐病的致病菌與前人（Perelló amp; Moreno， 2005;Aldo et al.， 2010；Oliveira et al.， 2017；朱香，2018；Zhou et al.， 2018）的報(bào)道不同，鑒定為附球菌屬真菌高粱附球菌（Epicoccum sorghinum）。該病菌鑒定時(shí)間較晚，國(guó)內(nèi)于2018年后才逐漸報(bào)道，引起多種園藝植物葉斑病、褐斑病或環(huán)斑?。╕u et al.， 2019；Laurel et al.， 2021）。該致病菌引起白及葉斑?。╖hou et al.， 2018）的葉片出現(xiàn)褐色斑塊，周圍有黃色暈圈；而本研究發(fā)現(xiàn)該病菌早期引起白及地下塊莖腐爛，有腥臭味，后期導(dǎo)致莖基部和葉鞘基部長(zhǎng)條形灰褐色斑塊，斑塊中央呈干枯狀、周圍黃色暈圈；而分子序列聚類則不是同一族，親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，這說明可能屬于不同生理小種引起的不同病害。

3.2 中草藥提取物對(duì)白及根腐病病原菌的抑制效應(yīng)

化學(xué)農(nóng)藥常用于藥用植物根腐病的防治，雖然具有療效快、操作方便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，但易造成農(nóng)藥殘留量超標(biāo)，從而影響藥材的品質(zhì)；而植物源殺菌劑具有安全無毒害的作用，但控制藥用植物根腐病的效果較慢，并且易受環(huán)境影響（穆向榮等，2014）。丁香酚是丁香提取物的主要成分，通過干擾微生物的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)起到抗菌作用（于未博，2020）；北細(xì)辛主要化學(xué)成分為萜類化合物，具有提高免疫力功能、抗菌等功效，蛇床子主要成分蛇床子素具有較好的速效性（馬偉，2010；肖瑤，2019）；劉瑩等（2009）發(fā)現(xiàn)厚樸主要活性成分厚樸酚具有抗炎抗菌等作用；趙慶芳等（2011）發(fā)現(xiàn)同種物質(zhì)丙酮溶液的抑菌效果明顯好于水溶液。高粱附球菌 （E. sorghinum）能分泌一種類似于苯乙酸的毒素，不僅具有很強(qiáng)的致病性（朱香，2018），而且該病原菌寄主范圍廣泛，易感染葫蘆科、豆科、十字花科、楊柳科、禾本科、馬齒莧科、百合科及天南星科的植物（李潤(rùn)根等，2020）。目前，未見有關(guān)該致病菌的生物防治研究。本研究利用乙醇提取了7種中藥材的提取物，觀察了對(duì)白及致病病原菌的室內(nèi)抑制作用，發(fā)現(xiàn)0.1 g·mL^-1和0.2 g·mL^-1的青錢柳、白及、厚樸、八角、肉桂、蛇床子、丁香的提取物均能完全抑制高粱附球菌（E. sorghinum）的生長(zhǎng)，0.05 g·mL^-1的八角、肉桂和丁香的提取物也基本能完全抑制生長(zhǎng)，抑制生長(zhǎng)率達(dá)到99.6%或100%。因此，這些中藥材提取物室內(nèi)抑制菌的生長(zhǎng)非常顯著，而室外田間抑制效果以及施用濃度卻還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

AVESKAMP MM， DE GRUYTER J， WOUDENBERG JHC， et al.， 2010. Highlights of the Didymellaceae： A polyphasic approach to characterise Phoma and related pleosporalean genera ［J］. Stud Mycol， 65： 1-60.

ALDO A， MLDE C， BARBOSA NETOI JF， et al.， 2010. Phoma sorghina， a new pathogen associated with phaeosphaeria leaf spot on maize in Brazil ［J］. Plant Pathol， 53： 259-259.

Chinese Phanmacopoeia Commission， 2020. Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China ［S］. Beijing： China Medical Science and Technology" Press." ［國(guó)家藥典委員會(huì)， 2020. 中華人民共和國(guó)藥典一部 ［S］. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.］

FANG ZD， 1998. Methodology for plant pathology ［M］. 3rd ed. Beijing： China Agriculture Press. ［方中達(dá)， 1998. 植病研究方法 ［M］. 第3版. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.］

Editorid committee of Flora of China， 1999. Flora Reipublicae Popularis Sinicae ［M］. Beijing： Science Press， 18： 50." ［《中國(guó)植物志》編輯委員會(huì). 1999. 中國(guó)植物志 ［M］. 北京： 科學(xué)出版社， 18： 50.］

GOUVG MR，RIBEIRO C， DE SOUZA CF， et al.， 2009. Rheological behavior of borate complex and polysaccharides ［J］. Mat Sci Eng： C， （2）： 607-612.

HAN JH， ZHU MJ， FENG JT， et al.， 2002. Screening studies on fungistasis of 27 plants" ［J］. J NW A amp; F Univ （Nat Sci Ed）， （6）： 134-137." ［韓建華， 祝木金， 馮俊濤， 等， 2002. 27種植物抑菌活性初步篩選 ［J］. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， （6）： 134-137.］

KE SY， YANG LY， CHEN L， et al.， 2018. Isolation and identification of a fungal disease from Bletilla striata" ［J］. J Yunnan Agric Univ （Nat Sci Ed）， 33（3）： 405-409." ［柯尚艷， 楊林毅， 陳潞， 等， 2018. 白及植株上一種真菌病害的分離與鑒定 ［J］. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 33（3）： 405-409.］

LAUREL NR， DE TORRES RL， MENDOZA JVS， et al.， 2021. Identification of Epicoccum sorghinum and its effect on stalk sugar yield ［J］. Sugar Technol， 23： 1383-1392.

LI RG， XU D， LI ZQ， 2020. Preliminary identifying on host range of Lily pathogen Epicoccum sorghinum ［J］. J Kunming Univ， 42（6）： 64-67." ［李潤(rùn)根， 徐丹， 李子奇， 2020. 百合病原菌高粱附球菌寄主范圍的初步研究 ［J］. 昆明學(xué)院學(xué)報(bào)， 42（6）： 64-67.］

LIRY， LI DM， YU J， et al.， 2002. Recent advances in medical mycology" ［J］. J Peking Univ （Health Sci Ed）， 34（5）： 559-563." ［李若瑜， 李東明， 余進(jìn)， 等， 2002. 真菌與真菌病研究近況 ［J］. 北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 34（5）： 559-563.］

LIU GB， HUANG Z， HUANG CG， et al.， 2005. Functions and application in cosmetics of Bletilla striata （Thunb） Reichb. f ［J］. Deterg Cosmet， 28（8）： 22-24." ［劉光斌， 黃忠， 黃長(zhǎng)干， 等， 2005. 天然植物白芨膠的功能及在化妝品中的應(yīng)用 ［J］. 日用化學(xué)品科學(xué)， 28（8）： 22-24.］

LIU Y， ZHOU RJ， FU JF， et al.， 2009. Study on the extraction method of antibacterial active ingredients of Houpoea officinalis ［J］. J Chin Med Mat， 32（5）： 791-794." ［劉瑩， 周如軍， 傅俊范， 等， 2009. 厚樸抑菌活性成分提取方法研究 ［J］. 中藥材， 32（5）： 791-794.］

MA W， WANG BQ， MA L， et al.， 2010. Inhibitory effect of Chinese medicine extracts on pathogen of Astragalus root rot ［J］. Bull Bot Res， 30（5）： 634-636." ［馬偉， 王寶秋， 馬玲， 等， 2010. 中藥提取物對(duì)黃芪根腐病菌的抑制效果 ［J］. 植物研究，" 30（5）： 634-636.］

MU XR， MA YY， YANG ZZ， et al.， 2014. Research advance on the control of root rot disease of medical plants ［J］. Pharm Clin Chin Mat Med， 5（2）： 5-8." ［穆向榮， 馬逾英， 楊枝中， 等， 2014. 藥用植物根腐病防治的研究進(jìn)展 ［J］. 中藥與臨床， 5（2）： 5-8.］

OLIVEIRA RC， DAVENPORT KW， HOVDE B， et al.， 2017. Draft genome sequence of sorghum grain mold fungus Epicoccum sorghinum， a producer of tenuazonic acid ［J］. Genome Announc， 5： e01495-01496.

PERELL AE， MORENO MV， 2005. First report of Phoma sorghina （Sacc.） Boerema Dorenbosch amp; van Kest on wheat leaves （Triticum aestivum L.） in Argentina ［J］. Mycopathologia， 159： 75-78.

SHEN QQ， LIU F， HU Y， 2014. Research progress of pathogens of root rot disease on medicinal plants ［J］. N Hortic， （11）： 187-190." ［沈清清， 劉芳， 胡彥， 2014. 藥用植物根腐病病原菌研究進(jìn)展 ［J］. 北方園藝， （11）： 187-190.］

SHI J， 2010. Resources and medicinal utilization of Bletilla （Orchidaceae）" ［D］. Haikou： Hainan University." ［石晶， 2010. 白芨屬植物資源與利用 ［D］. ?？冢?海南大學(xué).］

SONG LS， 2019. Studies on pathogen identification and disease control of major fungal diseases on Bletilla striata ［D］. Guiyang： Guizhou University." ［宋莉莎， 2019. 白及主要真菌病害病原鑒定及防治研究 ［D］. 貴陽： 貴州大學(xué).］

SUN LL， YANG YH， LIU JK， et al.， 2013. Bletilla striata pseudobulb rot pathogen identification and its biological characteristic ［J］. J Chin Med Mat， 36（3）： 341-345. ［孫樂樂， 楊永紅， 劉軍凱， 等， 2013. 白及根腐病病原鑒定和生物學(xué)特性研究 ［J］. 中藥材， 36（3）： 341-345.］

WU WJ， 1988. Introduction to experimental techniques in phytochemical protection" ［M］. Xian： Shaanxi Science and Technology Press." ［吳文君， 1988. 植物化學(xué)保護(hù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)導(dǎo)論 ［M］. 西安： 陜西科學(xué)技術(shù)出版社.］

XIAO Y， 2019. Improved method to obtain essential oil from the roots and rhizomes of Asarum heteropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum （Maxim.）Kitag. using microwave-assisted steam distillation and antifungal activity of the essential oil against Fusarium spp. in vitro" ［D］. Harbin： Northeast Forestry University." ［肖瑤， 2019. 北細(xì)辛精油的微波水上蒸餾法提取及對(duì)黃芪根腐致病菌的抑制活性的研究 ［D］. 哈爾濱： 東北林業(yè)大學(xué).］

YU L， SHE XM， LAN GB， et al.， 2019. First report of leaf spot caused by Epicoccum sorghinum on Chinese flowering cabbage （Brassica parachinensis） in China ［J］. Plant Dis， 103（11）： 2966.

YU WB， 2020. Inhibitory effect and mechanism of eugenol on Panax notoginseng root rot fungi ［D］. Kunming： Kunming University Science and Technology." ［于未博， 2020. 丁香酚對(duì)三七根腐病真菌的抑制作用及其機(jī)理研究 ［D］. 昆明： 昆明理工大學(xué).］

ZENG LX， YANG L， CHEN YY， et al.， 2012. Investigation and integrated management on diseases and pests for Bletilla striata in Guizhou ［J］. Guizhou Agric Sci， 40（7）： 106-108." ［曾令祥， 楊琳， 陳婭婭， 等， 2012. 貴州中藥材白及病蟲害種類的調(diào)查與綜合防治 ［J］. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)， 40（7）： 106-108.］

ZHAO QF， CHEN J， LI QX， et al.， 2011. Inhibition effects of different monomer substances on the growth of Astragalus membranaceus root rot ［J］. J Lanzhou Univ（Nat Sci Ed）， 47（2）： 83." ［趙慶芳， 陳健， 李巧峽， 等， 2011. 不同物質(zhì)對(duì)黃芪根腐病致病菌的抑制作用 ［J］. 蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 47（2）： 83.］

ZHOU H， LIU PP， QIU S， et al.， 2018. Identity of Epicoccum sorghinum causing leaf spot disease of Bletilla striata in China ［J］. Plant Dis， 102（5）： 1039.

ZHU J， HUANG WC， CAO JG， et al.， 2020. Evaluation and selection of Bletilla species through AHP method ［J］. Chin J Trop Crop， 41（8）： 1553-1559." ［朱嬌， 黃衛(wèi)昌， 曹建國(guó)， 等， 2020. 我國(guó)白及屬植物資源評(píng)價(jià)及其篩選 ［J］. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 41（8）： 1553-1559.］

ZHU X， 2018. Isolation of Epicoccum sorlghinum and resistance identification of multi-transgenes maize lines ［D］. Wuhan： Huazhong Agricultural University." ［朱香， 2018. Epicoccum sorghinum的分離及多基因轉(zhuǎn)玉米株系的抗性鑒定 ［D］. 武漢： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué).］

（責(zé)任編輯 蔣巧媛）