應(yīng)用促性腺激素釋放激素類似物更新母豬定時(shí)輸精程序

程玲華 ，肖銀霞 ，楊 婷 ，2，廉傳江 ，2，杜長龍 ，2，滕中輝 ，2（編譯）

（1.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司，北京 100194 ；2.北京華牧興農(nóng)種豬科技有限公司，北京 100080 ；3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 100193）

0 引言

在過去60年的養(yǎng)豬實(shí)踐中已經(jīng)證實(shí)應(yīng)用生殖激素調(diào)控母豬卵泡發(fā)育和排卵是可行的。然而，除了用于母豬乏情治療外，激素在商業(yè)農(nóng)場生產(chǎn)上的應(yīng)用非常有限，其原因主要是激素成本高、實(shí)際應(yīng)用效果差。

當(dāng)前，生產(chǎn)上迫切需要使用促性腺激素釋放激素（gonadotropinreleasing hormone，GnRH）類似物精準(zhǔn)控制母豬排卵時(shí)間，一些研究也已證明應(yīng)用GnRH類似物可以對批次母豬進(jìn)行定時(shí)輸精（f ixed-time artif icial insemination，F(xiàn)TAI）。同時(shí)，該技術(shù)還有利于加快母豬遺傳進(jìn)展，提高生產(chǎn)效率。

對GnRH類似物的認(rèn)識始于20世紀(jì)初，當(dāng)時(shí)人們發(fā)現(xiàn)垂體損傷，尤其是腺垂體損傷，可以導(dǎo)致生殖道萎縮，因此確定了下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)控系統(tǒng)。1928年Louria和Rosenzweig證實(shí)孕婦尿液具有刺激性腺發(fā)育的作用，進(jìn)一步證實(shí)了尿液中存在人絨毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin ，HCG）。后來，F(xiàn)evold等人第一次證實(shí)存在兩種促性腺激素，促卵泡素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）和促黃體素（luteinizing hormone，LH）得以分離純化。接下來的30年里，研究人員開始使用孕馬血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin ，PMSG）、馬絨毛膜促性腺激素（equine chorionic gonadotropins ，eCG）和人垂體提取物刺激卵泡發(fā)育，這些外源性促性腺激素被用于誘導(dǎo)排卵，盡管抗體的形成和較差的生物安全性限制了它們作為商品化獸藥大量使用。

1949年，Tanabe等人首次使用eCG和羊的垂體提取物刺激豬卵泡發(fā)育和排卵。隨后，其他研究也為生產(chǎn)上使用外源激素誘導(dǎo)豬發(fā)情和排卵方案奠定了基礎(chǔ)，包括1969年P(guān)olge和Day使用美他硫脲抑制卵泡發(fā)育，接著使用eCG治療來刺激卵泡發(fā)育，HCG來誘導(dǎo)排卵。

在20世紀(jì)60年代，已經(jīng)可以從各種動(dòng)物的腦垂體中獲得FSH和LH提取物，但由于激素的生物安全性和純度較差，幾乎沒有獲得藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果。這些制劑也開始用于誘導(dǎo)母豬排卵。近些年，在生豬生產(chǎn)上使用PMSG來誘導(dǎo)發(fā)情，使用具有高LH活性的HCG誘導(dǎo)排卵。PMSG是一種糖蛋白，具有FSH和LH雙重活性。常用的方案是母豬斷奶后或者烯丙孕素性周期同步處理后注射400 IU 的PMSG和200 IU的HCG，該方案可以誘導(dǎo)母豬發(fā)情同步化，但排卵同步效果并不理想。此外，為了誘導(dǎo)母豬更早發(fā)情，發(fā)情-排卵的時(shí)間間隔被延長，這使得預(yù)測母豬的排卵時(shí)間更加困難。使用eCG和HCG混合制劑，尤其是高劑量eCG制劑（分別為700 IU和350 IU），有產(chǎn)生卵泡囊腫、卵泡黃體化和卵巢囊腫變性的風(fēng)險(xiǎn)。

發(fā)情持續(xù)時(shí)間在不同母豬之間變化很大，因此，很有必要應(yīng)用外源性促性腺激素同步排卵。1971年，GnRH十肽被分離，這使得研究人員能夠識別腺垂體特定區(qū)域，以確定其是否與GnRH受體結(jié)合及其穩(wěn)定性。20世紀(jì)70年代末，東德首次合成了GnRH類似物戈舍瑞林。此后，GnRH激動(dòng)劑被用于刺激卵泡發(fā)育和誘導(dǎo)后備及經(jīng)產(chǎn)母豬排卵。GnRH激動(dòng)劑被認(rèn)為是一種可能替代促性腺激素的藥物，因?yàn)樗鼈冊诖贵w水平刺激LH和FSH釋放，使得在接近排卵的時(shí)間進(jìn)行定時(shí)輸精。

多年來，研究人員開發(fā)出了不同的GnRH激動(dòng)劑用于更好地控制卵泡發(fā)育、排卵時(shí)間和卵母細(xì)胞質(zhì)量，以改善商業(yè)農(nóng)場繁殖方案。為了使不同的GnRH激動(dòng)劑能用于商業(yè)母豬定時(shí)輸精程序，了解母豬生殖生理知識，尤其是卵泡發(fā)育和排卵知識是非常重要的。

1 母豬卵泡發(fā)育和排卵生理學(xué)

母豬的發(fā)情周期包括16～18 d黃體期和3～6 d卵泡期。在黃體期，黃體產(chǎn)生孕酮抑制FSH和LH分泌，進(jìn)而抑制卵泡發(fā)育。黃體期的12～14 d，子宮內(nèi)膜產(chǎn)生PGF2α導(dǎo)致黃體退化，抑制孕酮分泌。激活下丘腦-垂體-卵巢軸， GnRH恢復(fù)并釋放促進(jìn)卵泡生長的LH和FSH，當(dāng)雌激素（E2）增加時(shí)，這些激素聯(lián)合啟動(dòng)下一個(gè)發(fā)情周期。

1.1 促性腺釋放激素和促性腺激素的分泌調(diào)控

雖然并不是所有物種反應(yīng)都相同，對大多數(shù)物種來說，雌二醇（E2）正反饋?zhàn)饔糜谙虑鹉X-垂體-性腺軸是啟動(dòng)下一個(gè)發(fā)情周期的關(guān)鍵。E2作用于下丘腦，釋放GnRH并進(jìn)一步刺激垂體產(chǎn)生促性腺激素（圖1）。此外，研究顯示E2也可以使 LH 短暫性下降，讓垂體儲備足夠的LH， 隨后24～48 h形成排卵前LH峰以啟動(dòng)排卵。在下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)節(jié)下，以不同頻率和幅度脈沖釋放GnRH。卵巢通過垂體GnRH受體調(diào)節(jié)FSH和LH分泌。GnRH脈沖經(jīng)垂體門靜脈到達(dá)垂體，誘導(dǎo)FSH和LH釋放。

圖1 母豬分娩和泌乳后下丘腦-垂體-卵巢軸。（-）表示負(fù)反饋

GnRH在血液中半衰期較短，主要通過腎小球?yàn)V過作用，在4 min左右被清除。GnRH脈沖頻率和振幅影響母豬LH和FSH的釋放模式。卵泡期，雌激素水平增加，GnRH脈沖頻率增加，幅度降低，F(xiàn)SH和LH釋放頻率增加。黃體晚期，GnRH以高振幅低頻率的模式釋放，孕酮水平增加。黃體期結(jié)束時(shí)，孕酮水平降低，GnRH的頻率再次增加，隨后母豬發(fā)情。GnRH脈沖式釋放以調(diào)節(jié)FSH和LH的合成，這對于下丘腦-垂體-性腺軸正常運(yùn)行、卵泡正常發(fā)育是非常有意義的。

1.2 卵巢促性腺激素受體

母豬從原始卵泡啟動(dòng)發(fā)育成有腔卵泡后依賴于FSH水平以維持生長發(fā)育。只有15%的卵泡能夠繼續(xù)發(fā)育到下一階段，其他卵泡因?yàn)轭w粒細(xì)胞的凋亡而閉鎖。

卵泡約1 mm大小時(shí)，它們在卵巢表面肉眼可見。小到中等卵泡主要表達(dá)FSH受體，這些受體隨著卵泡生長成熟而降低。FSH和LH受體表達(dá)水平取決于每個(gè)卵泡發(fā)育狀態(tài)。1 mm以下的小卵泡，F(xiàn)SH受體表達(dá)較高，LH表達(dá)更低。1～6 mm的中等卵泡，促性腺激素可以和FSH和LH受體結(jié)合。6～12 mm的大卵泡，LH受體表達(dá)水平更高，結(jié)合能力更強(qiáng)，此時(shí)FSH受體不表達(dá)。

1.3 發(fā)情期的卵泡發(fā)育

后備母豬在60日齡開始對促性腺激素的刺激產(chǎn)生反應(yīng)，這與卵巢FSH受體表達(dá)時(shí)間相吻合。然而母豬下丘腦-垂體-性腺軸要到100日齡后才開始發(fā)揮作用，并在7月齡左右進(jìn)入初情期。性成熟后，優(yōu)勢卵泡在FSH的刺激下排卵，之后高濃度孕酮抑制母豬發(fā)情。黃體溶解后，孕酮濃度急劇下降，促性腺激素合成的負(fù)反饋消失，卵巢上中等大小卵泡在4～6 d內(nèi)生長到排卵前大小。因此，下丘腦-垂體-卵巢軸的刺激因子（LH和FSH）和抑制因子（P4和抑制素）之間必須保持平衡，以維持生殖功能正常。發(fā)情周期長短受內(nèi)部和外部一系列因素調(diào)節(jié)。

一旦卵泡達(dá)到排卵前大小，F(xiàn)SH濃度下降，LH由高峰低頻變?yōu)榈头甯哳l。在這個(gè)階段，LH受體表達(dá)增加，E2濃度激增觸發(fā)GnRH介導(dǎo)的排卵前LH峰，卵泡壁血管破裂和結(jié)締組織破壞，并發(fā)生排卵。從發(fā)情到LH峰的時(shí)間為8f11 h，LH峰持續(xù)約24 h，發(fā)情到排卵時(shí)間為30f3 h。

有研究表明，并不是所有卵泡在排卵前都達(dá)到相同大小。參與卵泡發(fā)育的FSH受體表達(dá)受能量平衡狀態(tài)、應(yīng)激、繁殖季節(jié)等各種外部因素對母豬下丘腦-垂體-卵巢軸的影響，不同卵泡存在個(gè)體差異。這些外界因素可能會導(dǎo)致妊娠失敗、胚胎存活率下降、卵巢囊腫、小黃體或黃體功能不全。

盡管排卵前卵泡均可以響應(yīng)LH峰，但排卵并不是同時(shí)發(fā)生，從第一個(gè)卵母細(xì)胞到最后一個(gè)卵母細(xì)胞排卵持續(xù)時(shí)間為1～3 h。1990年Kemp 和 Soede 以及2011年Tummaruk等人研究表明，發(fā)情期后70%～72%發(fā)生排卵，與發(fā)情持續(xù)時(shí)間無關(guān)。而Almeida等人研究表明，后備母豬排卵甚至發(fā)生在發(fā)情期后85%。

1.4 母豬泌乳期卵泡發(fā)育

母豬分娩后的泌乳期不會發(fā)情。盡管此時(shí)卵巢上會有20～30個(gè)2 mm左右卵泡生長發(fā)育，但是這些卵泡在生長到4 mm前就會閉鎖。因?yàn)樵诓溉槠?，催乳素、催產(chǎn)素和內(nèi)源性阿片肽等負(fù)反饋?zhàn)饔糜谙虑鹉X-垂體-卵巢軸，抑制GnRH分泌。

1.5 斷奶后卵泡發(fā)育

斷奶時(shí)母豬卵巢上2～5 mm的卵泡可以發(fā)育到排卵前卵泡。仔豬斷奶后，卵泡生長達(dá)到6～7 mm后母豬發(fā)情，排卵前可達(dá)到8～12 mm（圖2）。

圖2 泌乳對下丘腦-垂體-性腺軸的影響

在某些情況下，卵泡發(fā)育調(diào)節(jié)因子會被釋放，進(jìn)而影響斷奶ü發(fā)情間隔和發(fā)情ü排卵間隔。這些因子包括應(yīng)激條件下釋放的糖皮質(zhì)激素、葡萄糖、胰島素、脂肪酸等營養(yǎng)介質(zhì)，還有內(nèi)源性阿片肽類藥物和瘦素等。斷奶后FSH先上升后下降，而LH會增加脈沖的幅度和頻率，啟動(dòng)斷奶后的發(fā)情。

2 誘導(dǎo)母豬同步排卵

在回顧了母豬卵泡發(fā)育動(dòng)力學(xué)后，接下來介紹用于母豬誘導(dǎo)排卵的3個(gè)激素產(chǎn)品：HCG、豬源LH和GnRH 激動(dòng)劑。

烯丙孕素是孕酮類似物，生產(chǎn)上常和促性腺激素和GnRH 激動(dòng)劑聯(lián)合使用，以應(yīng)用于不同狀態(tài)的后備母豬進(jìn)行同期發(fā)情和定時(shí)輸精。但是，這種處理也會導(dǎo)致部分母豬卵泡囊腫，尤其是初情期前母豬最為明顯。2020年，Ziecik等人研究表明使用烯丙孕素處理初情期前母豬降低了原始卵泡和小卵泡比例，增加了有腔卵泡的數(shù)量。但對于性成熟的母豬初級卵泡比例降低，排卵前有腔卵泡和總卵泡的數(shù)量增加。研究發(fā)現(xiàn)，烯丙孕素負(fù)反饋?zhàn)饔糜诼雅菀褐性屑に氐臐舛龋档统跚槠谇澳肛iPGE2的濃度和性成熟母豬PGF2α的代謝。烯丙孕素改變了后備母豬壁層顆粒細(xì)胞cAMP的代謝。與此同時(shí)，烯丙孕素還可以在基因水平上降低初情期前后備母豬卵泡膜細(xì)胞CYP17A1表達(dá)和性成熟后備母豬顆粒細(xì)胞和卵泡膜層中PGF2α合成酶的表達(dá)。最近有研究表明，烯丙孕素處理后聯(lián)合使用促性腺激素對經(jīng)產(chǎn)母豬妊娠率和胚胎存活率存在不利影響。

2.1 HCG

20世紀(jì)70年代，母豬斷奶或者停用烯丙孕素后間隔24 h注射PMSG，78～80 h后注射HCG。排卵一般發(fā)生在HCG注射后40～42 h。因此，在注射HCG后固定時(shí)間（后備母豬14～16 h，經(jīng)產(chǎn)母豬24～26 h）對母豬定時(shí)輸精。由于后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞存活時(shí)間存在差異，所以授精時(shí)機(jī)不同。后備母豬卵母細(xì)胞只能存活4 h，而經(jīng)產(chǎn)母豬的卵母細(xì)胞可存活8 h。經(jīng)產(chǎn)母豬適宜的HCG劑量為600 IU，后備母豬使用900 IU更有利于卵母細(xì)胞發(fā)育。斷奶后80 h注射750 IU HCG， 與以往數(shù)據(jù)（75.7%）相比，母豬妊娠率提高到92.3%。

2.2 豬源LH

豬源LH是一種用于控制斷奶母豬排卵時(shí)間的促性腺激素。注射5 mg LH后約38 h排卵。與使用HCG相比（包括eCG預(yù)處理在內(nèi)的方案），母豬分娩率增加15%。這些結(jié)果表明，在控制商品母豬排卵的潛力方面，LH要優(yōu)于HCG。

2.3 GnRH激動(dòng)劑

GnRH類似物結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)和工藝化合成，使其成為促卵泡生長和促排卵藥物HCG和eCG的潛在替代品。眾多研究表明，促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑可用于刺激母豬LH分泌并誘導(dǎo)排卵。

與HCG處理相比，應(yīng)用GnRH誘導(dǎo)LH釋放具有獨(dú)特的優(yōu)勢。HCG直接作用于卵巢受體，而GnRH刺激垂體釋放LH，LH到達(dá)卵巢誘導(dǎo)排卵。另外，外源促性腺激素和烯丙孕素聯(lián)合治療會導(dǎo)致部分母豬卵泡囊腫。

GnRH激動(dòng)劑對腺垂體受體的親和力高于天然GnRH，其結(jié)合時(shí)間更長，以刺激FSH和LH分泌。延長半衰期后，使得它們比內(nèi)源性GnRH更有效。激動(dòng)劑的設(shè)計(jì)旨在穩(wěn)定分子結(jié)構(gòu)免于遭受酶促反應(yīng)攻擊，以增加其與血漿蛋白和細(xì)胞膜的結(jié)合效率，并進(jìn)一步增加其與GnRH受體的親和力。生產(chǎn)上，后備母豬經(jīng)過烯丙孕素處理后（15～20 mg/d，14～18 d）經(jīng)產(chǎn)母豬同期斷奶后聯(lián)合使用GnRH激動(dòng)劑，可實(shí)現(xiàn)同步排卵，以利于進(jìn)行定時(shí)輸精。

考慮到藥物分子結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和作用時(shí)間的差異，藥物應(yīng)用時(shí)間、方式應(yīng)根據(jù)這些分子性質(zhì)而有所差異。誘導(dǎo)卵泡發(fā)育的方案、GnRH類似物的性質(zhì)、使用時(shí)間、劑量和人工輸精時(shí)間不同，母豬妊娠率和產(chǎn)仔數(shù)等也不盡相同。近年來用于豬繁殖的GnRH激動(dòng)劑包括：戈那瑞林 、來舍瑞林、培弗瑞林。

2.3.1 戈那瑞林（Gonadorelin）

戈那瑞林分子式為C55H75N17O13，是東德最早發(fā)現(xiàn)的GnRH激動(dòng)劑分子。注射eCG后，約36 h后注射50 μg戈那瑞林誘導(dǎo)排卵。與注射HCG相比，可以提高母豬妊娠率。有研究表明戈那瑞林可以誘導(dǎo)后備母豬、泌乳母豬和產(chǎn)后乏情母豬發(fā)情和排卵，且可以獲得令人滿意的妊娠率和產(chǎn)仔數(shù)。然而，有研究表明與只添加蛋氨酸相比，斷奶前4 d添加蛋氨酸和50 μg戈那瑞林，母豬妊娠率無顯著差異。

注射50 μg戈那瑞林后35.5f2.7 h母豬開始排卵，59f1.7 h結(jié)束排卵。然而，母豬的反應(yīng)隨GnRH注射時(shí)間和LH峰頻率變化而變化。1 285頭后備母豬注射1 000 IU eCG 后間隔78～80 h注射 50 μg戈那瑞林，并在注射戈那瑞林后24 h和40 h進(jìn)行兩次定時(shí)輸精，母豬表現(xiàn)出較高的妊娠率。表1匯總了一些研究中使用戈那瑞林后母豬的繁殖性能。

表1 注射eCG后使用戈那瑞林定時(shí)輸精母豬繁殖性能

2.3.2 來舍瑞林（Licerelin）

來舍瑞林的分子式為C59H84N16O12，是一種通過修飾促性腺激素結(jié)構(gòu)獲得的長效合成GnRH激動(dòng)劑。斷奶母豬注射25 μg 來舍瑞林，縮短了斷奶ü發(fā)情間隔和發(fā)情ü排卵間隔時(shí)間。研究顯示，處理后48 h有93%的母豬排卵，并獲得了滿意的繁殖表現(xiàn)。

2.3.3 培弗瑞林（Peforelin）

培弗瑞林的分子式為C59H74N18O14，是一種可以刺激內(nèi)源性FSH分泌的GnRH類似物。注射后培弗瑞林被迅速吸收，半衰期較長。由于具有額外的刺激FSH分泌效果，它多用于促進(jìn)母豬發(fā)情，而不是誘導(dǎo)排卵。

Engl 研究表明多胎母豬注射37.5 μg 培弗瑞林可以獲得良好的妊娠結(jié)果。然而，后續(xù)研究以及培弗瑞林說明書推薦后備和經(jīng)產(chǎn)母豬的最佳劑量均是150 μg。后備母豬在烯丙孕素治療48 h 后注射；經(jīng)產(chǎn)母豬在斷奶后24 h 注射。由于用藥后增加了卵泡期FSH水平，卵泡直也增加，同時(shí)影響了黃體大小和孕酮水平。盡管活產(chǎn)仔數(shù)低于對照組（12.8f3.3 vs 13.2f3.6），但培弗瑞林處理組仔豬出生體重高于對照組（1.42f0.38 vs 1.35f0.35），且均勻度增加。

2.3.4 布舍瑞林（Buserelin）

布舍瑞林的分子式為C62H90N16O15，主要成分是布舍瑞林醋酸鹽。1982年，Von Kaufmann and Holtz 研究顯示eCG后注射10 μg布舍瑞林可以誘導(dǎo)后備母豬排卵。后續(xù)研究了對比了在斷奶后不同時(shí)間（24 h，77 h， 94 h和 104 h）注射以及不同注射劑量（6 μg，10 μg，16 μg， 50 μg）布舍瑞林對母豬繁殖性能的影響。目前，經(jīng)產(chǎn)母豬推薦在斷奶后83～89 h肌內(nèi)注射10 μg布舍瑞林，30 ～33 h后進(jìn)行單次授精。母豬多在注射布舍瑞林后42f2 h排卵。

Driancourt等研究表明一胎母豬斷奶86f3 h注射布舍瑞林后間隔 35～41 h 排卵。Martinat-Botté等在后備母豬最后一次飼喂烯丙孕素后115～120 h注射 10 μg布舍瑞林，間隔30～33 h后進(jìn)行兩次授精。Suárez-Usbeck等人在后備母豬最后一次飼喂烯丙孕素后間隔120 h注射布舍瑞林，并在處理后30～33 h進(jìn)行單次子宮頸深部輸精獲得了不錯(cuò)的繁殖效果。表2是應(yīng)用布舍瑞林誘導(dǎo)排卵相關(guān)研究結(jié)果。

表2 使用布舍瑞林誘導(dǎo)排卵母豬繁殖性能

2.3.5 曲普瑞林（Triptorelin）

曲普瑞林分子式為C64H82N18O13，是一種人工合成的GnRH類似物，多經(jīng)過陰道內(nèi)給藥以刺激垂體分泌LH并誘導(dǎo)排卵。曲普瑞林多用于美國和加拿大的定時(shí)輸精程序，斷奶母豬無論是否有發(fā)情跡象均在固定時(shí)間單次注射，81%的多胎斷奶母豬和92.6%的一胎斷奶母豬注射曲普瑞林后48 h后排卵。然而排卵時(shí)間并不是穩(wěn)定不變的，這和豬場管理水平有很大關(guān)系。造成這些差異的原因與執(zhí)行定時(shí)輸精程序時(shí)是否誘情、查情、曲普瑞林注射時(shí)間、注射劑量、輸精時(shí)間都有關(guān)系。Wang等人基于2004ü 2018年間進(jìn)行的15項(xiàng)研究中的37項(xiàng)試驗(yàn)進(jìn)行了薈萃分析，這些試驗(yàn)研究了后備母豬或經(jīng)產(chǎn)母豬所有數(shù)據(jù)（除總出生數(shù)和活仔數(shù)）使用均值f標(biāo)準(zhǔn)差或者均值f標(biāo)準(zhǔn)誤的形式描述。未作為完整報(bào)告發(fā)表的研究被排除在外，并對會議論文與期刊論文進(jìn)行了交叉核對。結(jié)果顯示，斷奶后96 h注射曲普瑞林可顯著提高分娩率 （P<0 .001）。使用100 μg 曲普瑞林母豬妊娠率和分娩率要優(yōu)于200 μg，最佳的人工授精時(shí)間是給藥后間隔24 h進(jìn)行第一次人工輸精，給藥后間隔48 h進(jìn)行第二次人工授精。目前研究顯示在當(dāng)前定時(shí)輸精程序中使用曲普瑞林可以獲得滿意的結(jié)果，但是其在后備母豬上應(yīng)進(jìn)行更多的應(yīng)用研究。

使用曲普瑞林后母豬繁殖性能和自然發(fā)情相似，這是因?yàn)樵跈z測到發(fā)情時(shí)來準(zhǔn)確預(yù)測母豬排卵時(shí)間，以進(jìn)行定時(shí)輸精。Knox等試驗(yàn)研究和Wang等薈萃分析結(jié)果都表明，和飼喂烯丙孕素的后備母豬相比，經(jīng)產(chǎn)母豬斷奶后96 h注射100 μg 曲普瑞林繁殖性能更加令人滿意。

使用曲普瑞林對母豬定時(shí)輸精的主要目的是無需進(jìn)行發(fā)情檢測，然而在這些研究中，人工授精均是在觀察到發(fā)情后進(jìn)行的。所有實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論中都提到需要進(jìn)行更多研究以重復(fù)結(jié)果并獲得更準(zhǔn)確的結(jié)論。

Wang等人使用薈萃分析對比了后備母豬使用25 μg、100 μg、200 μg曲普瑞林后繁殖性能，發(fā)現(xiàn)處理組后備母豬繁殖性能（妊娠率、分娩率、總產(chǎn)仔數(shù)）低于未處理組?？赡艿脑蛴?個(gè)，一是后備母豬經(jīng)過處理后使用單次定時(shí)輸精而經(jīng)產(chǎn)母豬使用了多次；二是在停用烯丙孕素后72 h、84 h、96 h、120 h使用曲普瑞林相對來說偏早，導(dǎo)致停用烯丙孕素后第6天母豬排卵率僅僅是70.9%，而對照組高達(dá)92.5%。表3是不同研究中使用曲普瑞林后母豬繁殖指標(biāo)的情況。

表3 使用曲普瑞林誘導(dǎo)排卵母豬繁殖成績比較

3 使用GnRH激動(dòng)劑排卵誘導(dǎo)失敗原因分析

母豬排卵前24 h輸精可以獲得最優(yōu)的繁殖效果，然而不同母豬斷奶－發(fā)情間隔、發(fā)情持續(xù)時(shí)間以及發(fā)情至排卵間隔時(shí)間存在很大差異，這對于確定最佳時(shí)間進(jìn)行人工輸精，減少輸精次數(shù)提出了很大的挑戰(zhàn)。母豬發(fā)情-排卵時(shí)間的變異可能和卵泡發(fā)育異質(zhì)性以及LH峰啟動(dòng)時(shí)間有關(guān)。卵母細(xì)胞維持授精能力的時(shí)間是8～12 h，精子維持授精能力的時(shí)間是24 h，這些特征是人工授精成功的關(guān)鍵。生產(chǎn)中應(yīng)使用GnRH類似物誘導(dǎo)母豬發(fā)情和排卵同步化，并根據(jù)排卵規(guī)律及時(shí)修改母豬輸精程序；同時(shí)選擇合適時(shí)間注射GnRH激動(dòng)劑亦是保證成功誘導(dǎo)排卵的關(guān)鍵，因?yàn)樽⑸渫庠碐nRH后誘導(dǎo)的LH峰必須和內(nèi)源LH峰的頻率和水平高度類似。

研究顯示使用GnRH激動(dòng)劑誘導(dǎo)母豬排卵是十分有效的，盡管有一些作者報(bào)道注射GnRH激動(dòng)劑48 h后仍有16%母豬未排卵。從實(shí)用性的角度看，合理的定時(shí)輸精程序可以提高后備母豬繁殖性能，Suárez-Usbeck等人對226頭發(fā)情后備母豬注射布舍瑞林后進(jìn)行單次子宮頸深部輸精僅有11%的母豬未分娩。

注射GnRH激動(dòng)劑后排卵失敗的主要原因可能有2個(gè)，首先，排卵前LH峰濃度可能沒有達(dá)到激活排卵所需要的閾值；其次，排卵前LH峰可能未在預(yù)期時(shí)間出現(xiàn)，在發(fā)情后期人工授精導(dǎo)致胚胎丟失。然而，大多數(shù)情況下使用GnRH激動(dòng)劑后排卵失敗的原因在于沒有在發(fā)情前期注射激素。這意味著母豬注射激素時(shí)可能處于初情期前，或者是斷奶后乏情的母豬，也可能是泌乳期發(fā)情未被發(fā)現(xiàn)，處理時(shí)母豬正處于黃體期卵巢對促排卵相關(guān)激素?zé)o響應(yīng)。

4 當(dāng)前使用GnRH激動(dòng)劑誘導(dǎo)母豬定時(shí)輸精的操作程序

為了更加精確進(jìn)行誘導(dǎo)排卵，必須研究確定GnRH激動(dòng)劑使用時(shí)間、母豬發(fā)情時(shí)間以及人工授精的時(shí)間。在使用定時(shí)輸精程序之前，必須要徹底的了解群體母豬發(fā)情周期。在了解GnRH激動(dòng)劑誘導(dǎo)母豬排卵規(guī)律后，我們就可以建立一個(gè)定時(shí)輸精程序，在最佳時(shí)間進(jìn)行人工授精，獲得最好的繁殖效果。

在確定母豬定時(shí)輸精程序時(shí)，以下兩種方式可以選擇。一是要重視發(fā)情檢測，以發(fā)情時(shí)間輔助優(yōu)化輸精程序，不發(fā)情的母豬不輸精。二是不考慮母豬是否發(fā)情，對所有母豬進(jìn)行定時(shí)輸精。第二種方案適合于技術(shù)人員缺乏的大型農(nóng)場或者能夠承擔(dān)安靜發(fā)情、隱性發(fā)情或乏情母豬授精后帶來的妊娠率降低的農(nóng)場。

GnRH激動(dòng)劑處理后要想獲得最佳的繁殖表現(xiàn)，還有賴于良好的精液質(zhì)量、母豬體況管理（體況評分在3左右），以及母豬斷奶時(shí)無跛足、子宮和乳腺炎癥。優(yōu)勢化后的卵泡才能被誘導(dǎo)產(chǎn)生LH峰，并在合適的時(shí)間進(jìn)行人工授精以獲得最佳的繁殖表現(xiàn)。誘導(dǎo)排卵和單次人工授精不能解決養(yǎng)殖場存在的健康和管理問題。因此，建議激素處理前先解決豬群現(xiàn)有的健康管理問題，這樣才能獲得最佳的生產(chǎn)成績。

后備母豬在性周期同步化處理之前一定要有一次發(fā)情周期，并確保按照規(guī)定劑量及時(shí)準(zhǔn)確的把激素飼喂給每一頭豬。已有學(xué)者成功對后備母豬進(jìn)行了子宮頸內(nèi)單次定時(shí)輸精。但當(dāng)前還需要針對不同GnRH激動(dòng)劑分子特征，進(jìn)一步驗(yàn)證其繁殖表現(xiàn)。

定時(shí)輸精的主要目的是提高豬場繁殖性能，以下是單次定時(shí)輸精的優(yōu)勢：（1）要在正確的時(shí)間進(jìn)行人工輸精。（2）不同母豬同步輸精，出生仔豬均勻度更加一致，可減少死胎數(shù)量。（3）增加仔豬初乳攝入量，提高每頭母豬斷奶仔豬數(shù)。（4）用相同公豬的精液對母豬進(jìn)行人工授精，減少仔豬出生重的變異。（5）單次人工授精節(jié)省精液使用劑量和成本，最大化利用優(yōu)良種公豬，可加快遺傳改良。

5 總結(jié)

提高豬場繁殖效率是養(yǎng)豬業(yè)的重要方向?；趯φ{(diào)控卵泡發(fā)育和排卵規(guī)律的深入研究，已經(jīng)成功研發(fā)了幾種GnRH激動(dòng)劑。實(shí)踐表明，應(yīng)用GnRH激動(dòng)劑對母豬進(jìn)行定時(shí)輸精有效提高了母豬繁殖效率。此外，定時(shí)輸精還可以在不影響母豬繁殖成績的基礎(chǔ)上，減少輸精次數(shù)和精液使用劑量，單次定時(shí)輸精降低了精液用量，使得優(yōu)秀公豬最大化應(yīng)用。同時(shí)，該技術(shù)減少了發(fā)情檢測時(shí)間，簡化了農(nóng)場生殖管理流程。這些技術(shù)還可以縮短種公豬完成后裔測定所需要的時(shí)間。未來，該技術(shù)還可以和冷凍精液等繁殖新技術(shù)結(jié)合使用。