黑果花楸果酒中活性成分的分析

摘 """""要： 采用GC-MS法和HPLC法分別測(cè)定黑果花楸果酒中揮發(fā)性和非揮發(fā)性成分。以乙醚-正戊烷（體積比1∶1）作為提取溶劑，采用液液萃取法提取樣品中的揮發(fā)性成分，利用GC-MS法對(duì)其進(jìn)行分析檢測(cè)。樣品中共檢測(cè)出46種揮發(fā)性成分，其中酯類15種、醇類6種、酸類8種、芳香類化合物8種。采用HPLC法測(cè)定黑果花楸果酒的非揮發(fā)性成分，檢測(cè)出原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸和槲皮素，其含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為73"μg·g^-1、152"μg·g^-1、67"μg·g^-1、92"μg·g^-1和、101"μ"μg··g^-1。

關(guān) "鍵 "詞：黑果花楸果酒；"活性成分；"GC-MS；"HPLC

中圖分類號(hào)：O656.31 """""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A """""文章編號(hào)：1004-0935（2024）0×12-1975-04

黑果花楸全稱黑果腺肋花楸，別稱野櫻莓、不老莓，是集食用、藥用、園林和生態(tài)價(jià)值于一身的薔薇科花楸屬灌木^[1-2]。黑果花楸中富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如天然多糖、葡萄糖、甘露糖等，這些物質(zhì)具有很強(qiáng)的活性，可以被人體吸收并盡快為人體補(bǔ)充能量，能增強(qiáng)人體的非特異性免疫功能。黑果花楸富含黃酮、花青素和多酚等物質(zhì)^[3-7]，其提取物對(duì)治療心臟病、高血壓等心腦血管疾病有特效^[8]。

香氣是水果及果酒感官品質(zhì)的重要組成部分^[9]，與普通的白酒和啤酒相比，用果實(shí)釀造的果酒具有豐富的多酚類化合物，抗氧化能力較強(qiáng)^[10]。不同品種水果香氣不同，同一原材料采用不同發(fā)酵工藝或不同酒曲發(fā)酵得到的香氣也會(huì)產(chǎn)生差異，同種工藝生產(chǎn)的果酒年份不同香氣也不相同^[11-12]。目前，關(guān)于黑果花楸果酒中活性成分的研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

采用液-液萃取法提取黑果花楸果酒樣品中的揮發(fā)性成分，利用GC-MS法對(duì)其揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，利用HPLC法測(cè)定其非揮發(fā)性成分，建立黑果花楸果酒活性成分的檢測(cè)方法，為產(chǎn)品的生產(chǎn)和標(biāo)準(zhǔn)化提供技術(shù)支持。

1 "材料和實(shí)驗(yàn)部分

1.1 "樣品來(lái)源

研究中的黑果花楸果酒樣品由遼寧騰鰲酒業(yè)有限公司提供。

1.2""材料和試劑

槲皮素、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸、原兒茶酸對(duì)照品均購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司。乙醚、正戊烷為分析純，乙腈為色譜純，水為超純水。

1.3""儀器與設(shè)備

Agilent"8890-7000D型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，安捷倫科技有限公司；N-1300型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，東京理化器械株式會(huì)社；WP-UP-11-10型實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)，四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司；1525型高效液相色譜儀，配2996型二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司；AL-204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.4""實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 "黑果花楸果酒樣品中揮發(fā)性成分的測(cè)定

1.4.1.1 "揮發(fā)性成分的提取

取樣品20 mL，用20 mL乙醚-正戊烷（體積比1∶1）混合溶液萃取3次，將混合萃取液在25 ℃下蒸發(fā)濃縮至0.5 mL^[13]，4"℃冷藏，待測(cè)。

1.4.1.2""GC-MS測(cè)定條件

GC測(cè)定條件：色譜柱為HP-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱，30 mm×0.20 mm×0.33 μm；進(jìn)樣口溫度為 250 ℃；初始溫度80 ℃，以10 ℃·min^-1的速率升溫到240 ℃，保持5 min；載氣為高純He，載氣流速為1 mL·min^-1；分流比為20∶1；進(jìn)樣量為0.1 μL。

MS測(cè)定條件：離子源為電子轟擊離子源，溫度為230 ℃；電子能量為70 eV；電子倍增器電壓為1 988 V；發(fā)射電流為34.6 μA；接口溫度為230 ℃；掃描質(zhì)量范圍m/z=20～500；溶劑的延遲時(shí)間為3 min。

1.4.1.3 "樣品測(cè)試

按照步驟1.4.1.2中GC-MS條件對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試。

1.4.2 "黑果花楸果酒樣品中非揮發(fā)性成分的測(cè)定

1.4.2.1 "對(duì)照品溶液的配制

精密稱取原兒茶酸、槲皮素、綠原酸、新綠原酸和咖啡酸對(duì)照品，質(zhì)量分別為3.0、3.0、3.3、3.5、3.6 mg，用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，混合均勻，得到各組分質(zhì)量濃度分別為0.060、0.060、0.066、0.070、0.072 mg·mL^-1的混合對(duì)照品溶液。

1.4.2.2 "HPLC測(cè)定條件

色譜柱為Supersil ODS2"C₁₈柱（250 mm×╳4.6 mm，5"μm）；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1 %磷酸水溶液。洗脫程序：A（0～1 min，16%;"1～4 min，16%～24%；4～11 min，24%；11～21 min，24%～64%； 21～28 min，64%；28～35 min，64%～16%）；柱溫為30"℃；流速為1.0 mL·min^-1；進(jìn)樣量為10 μL。

1.4.2.3 "樣品測(cè)試

按照步驟1.4.2.2中HPLC條件對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試。

2 "結(jié)果與討論

2.1 "黑果花楸果酒樣品中揮發(fā)性成分分析

黑果花楸果酒樣品中揮發(fā)性成分的總離子流圖如圖1所示，樣品中揮發(fā)性成分分析結(jié)果分析結(jié)果如見(jiàn)表1所示。

由表1可知，從樣品中共檢測(cè)出46種揮發(fā)性成分，其中包括2種烯類，、3種烷類，、15種酯類，、6種醇類，、8種芳香類，、2種醛類，、8種酸類，、1種酚類，、1種胡蘿卜素。

2.2 "黑果花楸果酒樣品中非揮發(fā)性成分分析

2.2.1 "樣品及對(duì)照品的色譜圖分析

樣品和對(duì)照品的色譜圖如圖2所示。

2.2.2 "線性關(guān)系考察

分別精密移取混合對(duì)照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、3.0、5.0、10.0 mL，用甲醇定容于10 mL容量瓶中，混合均勻，得到梯度對(duì)照品溶液。繪制5種多酚類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如表2所示。

2.2.3 "重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密移取樣品6份，按照1.4.2.2項(xiàng)測(cè)試，經(jīng)計(jì)算，5種多酚類化合物的RSD均小于1.37%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性較好。

2.2.4 "精密度實(shí)驗(yàn)

樣品按照1.4.2.2項(xiàng)測(cè)試，重復(fù)進(jìn)樣6次，經(jīng)計(jì)算，5種多酚類化合物的RSD均小于0.96%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)的精密度較好。

2.2.5 "樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

對(duì)黑果花楸果酒樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其中多酚類化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。經(jīng)計(jì)算，樣品中原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸和槲皮素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為73、152、67、92、101 μg·g^-1，5種化合物的回收率為99.39%～100.97%。

2.3 "結(jié)果分析

從結(jié)果可以看出，黑果花楸果酒中揮發(fā)性成分含有酯類、酸類和醇類，其中酯類占比最多，其次是酸類和醇類，此外還有少量酚類和芳香類物質(zhì)。非揮發(fā)性成分中原兒茶酸、新綠原酸、綠原酸、咖啡酸和槲皮素等5種多酚類化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較可觀。

3 "結(jié)"論

黑果花楸具有較高的藥用價(jià)值、食用價(jià)值和商業(yè)價(jià)值，果實(shí)內(nèi)含有多種對(duì)人體有益的成分，具有較好的開發(fā)前景。研究結(jié)果表明，用黑果花楸果實(shí)釀造的果酒中揮發(fā)性成分種類較多，風(fēng)味獨(dú)特。檢測(cè)出多種非揮發(fā)性有效成分，如原兒茶酸、新綠原酸等，具有抗氧化和活血化瘀的功效。這些多酚類物質(zhì)的存在，為開發(fā)黑果花楸作為釀酒原料提供一定的依據(jù)和支持。

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Analysis of Active Constituents in Aronia Melanocarpa Fruit Wine

LI Bin^1，2， SUN Liyang^1，2， XU Lili³， LUO Weiwei^1，2， LV LYU"Linlin^1，2， LI Tiechun^1，2， DIAO Quanping^1，2*

（1. School of Chemistry and Life Science， Anshan Normal University， Anshan Liaoning 114007， China;2. Liaoning Key Laboratory of Development and Utilization for Natural Products Active Molecules，Anshan Liaoning 114007， China;"3. Weifang Biomedical Industrial Park Service Center， Weifang Shandong 261000， China）

Abstract："GC-MS and HPLC methods were used"to respectively determine the volatile and non-volatile components in Aronia melanocarpa"fruit wine."Ether and n-pentane （volume ratio 1∶1） as the extraction solvent， the volatile components in the sample were extracted using liquid-liquid extraction method， and were analyzed by GC-MS"method. A total of 46 volatile components were detected in the sample， including 15 kinds of esters， 6 kinds of alcohols， 8 kinds of acids and 8 kinds of aromatic compounds. HPLC method was used to determine the non-volatile components of sample. The mass"fractions of protocatechuic acid， neochlorogenic acid， chlorogenic acid， caffeic acid and quercetin were 73，152，67，92，101 μg·g^-1，respectively.

Key words："Aronia"melanocarpa fruit wine; Active constituents; GC-MS; HPLC