甘草甜素對(duì)大鼠幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎的改善作用及機(jī)制 Δ

劉譽(yù)華 ，劉 蓮 ，汪九重 ，黃 丹 ，周素芳 ，肖歡智 ，安禎祥 （1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，貴陽(yáng) 550001；.貴州醫(yī)科大學(xué)臨床微生物與免疫學(xué)教研室，貴陽(yáng) 550001；.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院傳染病科，北京 10005；.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院脾胃病科，貴陽(yáng) 550001）

幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，HP）是一種革蘭氏陰性桿菌，全球至少有一半人口感染HP[1]。持續(xù)性HP感染是慢性胃炎和消化性潰瘍的重要致病因素，也被認(rèn)為是胃腺癌的第一類致癌因素。目前，HP 相關(guān)性胃炎的發(fā)生機(jī)制尚不清楚。西醫(yī)治療HP相關(guān)性胃炎主要以抗生素為主要手段，但由于抗生素濫用、不規(guī)范應(yīng)用等原因，使得HP耐藥性呈上升趨勢(shì)，HP根除率不斷下降。因此，積極探索HP 相關(guān)性胃炎的發(fā)生機(jī)制對(duì)開(kāi)發(fā)新的有效治療藥物至關(guān)重要。甘草甜素（glycyrrhizin，GL）是甘草根的主要活性成分，具有抗病毒、抗炎、抗腫瘤和抗氧化應(yīng)激等多種藥理作用，臨床上常用于治療慢性肝炎[2]。高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein，HMGB1）分別與Toll 樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）和晚期糖基化終產(chǎn)物受體（receptor of advanced glycation end-products，RAGE）結(jié)合，可激活核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）表達(dá)，HMGB1/NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在HP 相關(guān)性胃炎中發(fā)揮重要作用，抑制該通路可減輕HP誘導(dǎo)的大鼠慢性萎縮性胃炎[3―5]。GL 已被證實(shí)可抑制HP 感染[6]，但其是否可通過(guò)調(diào)節(jié)HMGB1/NF-κB 信號(hào)通路改善HP 相關(guān)性胃炎還不甚清楚。本研究基于HMGB1/NF-κB信號(hào)通路探討了GL對(duì)大鼠HP 相關(guān)性胃炎的改善作用及作用機(jī)制，以期為臨床治療HP相關(guān)性胃炎提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括LD-96A型多功能酶標(biāo)儀（山東萊恩德智能科技有限公司）、5424 型離心機(jī)（艾本德中國(guó)有限公司）、CX31 型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）、Hitachi-600 型透射電子顯微鏡（日本Hitachi公司）。

1.2 主要試劑與儀器

GL對(duì)照品（貨號(hào)MDK-461353，純度99%）購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司；奧美拉唑原料藥（批號(hào)20073922）購(gòu)自河南天方藥業(yè)股份有限公司；膠體果膠鉍（規(guī)格50 mg/粒，國(guó)藥準(zhǔn)字H20083064）購(gòu)自山西同達(dá)藥業(yè)有限公司；阿莫西林膠囊（規(guī)格0.25 g/粒，國(guó)藥準(zhǔn)字H31020838）購(gòu)自上海福達(dá)制藥有限公司；克拉霉素片（規(guī)格0.25 g/片，國(guó)藥準(zhǔn)字H20058305）購(gòu)自浙江震元制藥有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（貨號(hào)G1120-100）、活性氧（reactive oxygen species，ROS）檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)CA1410）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)BC0020）均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；白細(xì)胞介素8（interleukin-8，IL-8）、IL-1β、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（貨號(hào)分別為E-EL-H6008、E-ELR0012c、E-EL-R2856c）均購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；蛋白提取試劑盒（貨號(hào)3122-100T）購(gòu)自上海晶風(fēng)生物科技有限公司；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）試劑盒（貨號(hào)IBIO-C583）購(gòu)自江西艾博因生物科技有限公司；兔抗一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，iNOS）、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗（貨號(hào)分別為ab178945、ab19870、ab239882、ab9485、ab6721）均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)SD 大鼠，雄性，8～10 周齡，體重180～200 g，購(gòu)自陸軍軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教研室，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（渝）2022-0011。所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，飼養(yǎng)在溫度約22 ℃、相對(duì)濕度55%～60%、12 h光暗循環(huán)的環(huán)境中，正常飲食。該實(shí)驗(yàn)方案通過(guò)貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查，批件號(hào)20220086。

1.4 菌株

HP購(gòu)自美國(guó)ATCC公司，以布氏肉湯培養(yǎng)基配成菌懸液，調(diào)整菌液濃度為1×109cfu/mL，備用。

2 方法

2.1 建模、分組與給藥

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，自由飲用2 g/L吲哚美辛溶液30 d破壞胃黏膜屏障，第31天禁食過(guò)夜，行13C尿素呼氣試驗(yàn)，記錄超基準(zhǔn)值（delta over baseline，DOB）；然后每只大鼠灌胃1×109cfu/mL的HP菌懸液1.5 mL，每周2次，共5次；末次灌胃后大鼠正常喂養(yǎng)2周，再禁食、禁水12 h，行13C尿素呼氣試驗(yàn)，以DOB值＞4表示HP相關(guān)性胃炎造模成功[7]。將造模成功的大鼠隨機(jī)分成模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和GL 低、中、高劑量組，每組12 只；另隨機(jī)選取12只正常大鼠作為正常對(duì)照組。GL低、中、高劑量組大鼠分別灌胃5、20、50 mg/kg GL[8]，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠按HP 標(biāo)準(zhǔn)四聯(lián)方案分別以3.6、36、180、72 mg/kg 灌胃奧美拉唑、膠體果膠鉍、阿莫西林、克拉霉素[9]，正常對(duì)照組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水，每天1 次，連續(xù)30 d，給藥結(jié)束后行13C尿素呼氣試驗(yàn)。

2.2 大鼠胃黏膜組織病理變化觀察與評(píng)分

末次13C 尿素呼氣試驗(yàn)結(jié)束后處死大鼠，分離大鼠胃黏膜組織，經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、脫蠟和水化后進(jìn)行HE染色，使用顯微鏡觀察大鼠胃黏膜組織病理變化，并根據(jù)胃黏膜慢性炎癥的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理評(píng)分[10]。

2.3 大鼠胃黏膜組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

取“2.2”項(xiàng)下大鼠胃黏膜組織，經(jīng)固定、漂洗、鋨酸固定、梯度脫水、樹(shù)脂包埋、切片、鈾鉛雙染色后，使用透射電子顯微鏡觀察大鼠胃黏膜組織細(xì)胞形態(tài)并拍照。

2.4 大鼠胃黏膜組織中炎癥與氧化應(yīng)激相關(guān)因子水平的檢測(cè)

將大鼠胃黏膜組織制成勻漿后，嚴(yán)格依據(jù)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α水平，依據(jù)ROS、MDA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA水平。

2.5 大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA 表達(dá)的檢測(cè)

取大鼠胃黏膜組織，用Trizol試劑提取總RNA。以RNA 為模板合成cDNA 后，測(cè)定反轉(zhuǎn)錄的cDNA 濃度，適當(dāng)分裝，于－20 ℃保存。擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性60 s；95 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸45 s，共循環(huán)40 次。HMGB1 的上游引物為5′-AGATATGGCAAAGGCTGACAAGGC-3′，下游引物為5′-GGGCGGTACTCAGAACAGAACAAG-3′，產(chǎn)物片段為148 bp；NF-κB 的上游引物為5′-TGTGGTGGAGGACTTGCTGAGG-3′，下游引物為5′-AGTGCTGCCTTGCTGTTCTTGAG-3′，產(chǎn)物片段為126 bp；GAPDH的上游引物為5′-CTTTGGTATCGTGGAAGGACTC-3′，下游引物為5′-GTAGAGGCAGGGATGATGTTCT-3′，產(chǎn)物片段為110 bp。以GAPDH 為內(nèi)參，按2－ΔΔCt法計(jì)算大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

2.6 大鼠胃黏膜組織中iNOS、HMGB1、NF-κB 蛋白表達(dá)的檢測(cè)

取大鼠胃黏膜組織，提取總蛋白，定量后電泳，轉(zhuǎn)膜，室溫封閉2 h，再分別加入iNOS（稀釋比例為1∶2 000）、HMGB1（稀釋比例為1∶1 000）、p-NF-κB p65（稀釋比例為1∶2 000）、NF-κB p65（稀釋比例為1∶1 000）、GAPDH（稀釋比例為1∶1 000）抗體，4 ℃孵育過(guò)夜；再加入二抗（稀釋比例為1∶2 000），室溫孵育90 min，曝光，顯影。使用Image-Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行分析，以GAPDH為內(nèi)參，以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參的灰度值比值評(píng)價(jià)目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)量，再以p-NF-κB p65/NF-κB p65 計(jì)算NF-κB p65磷酸化水平。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 GL對(duì)各組大鼠DOB值的影響

建模前，各組大鼠DOB值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。建模后，與正常對(duì)照組比較，其他各組大鼠DOB 值均顯著升高（P＜0.05）。藥物干預(yù)后，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠DOB值顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，GL 低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠DOB值均顯著降低（P＜0.05）；與GL低劑量組比較，GL中、高劑量組大鼠DOB 值均顯著降低（P＜0.05）；與GL中劑量組比較，GL高劑量組大鼠DOB值顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠DOB值比較（±s，n＝12）

表1 各組大鼠DOB值比較（±s，n＝12）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與GL低劑量組比較，P＜0.05；d：與GL中劑量組比較，P＜0.05。

干預(yù)后2.48±0.16 45.97±7.23a 37.84±5.62b 28.45±4.57bc 16.35±2.18bcd 14.68±1.57b組別正常對(duì)照組模型組GL低劑量組GL中劑量組GL高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組建模前0.32±0.06 0.28±0.04 0.35±0.07 0.33±0.05 0.26±0.03 0.30±0.02建模后2.36±0.13 46.53±7.21a 45.62±6.98a 47.12±7.52a 44.98±7.26a 46.28±7.35a

3.2 GL對(duì)大鼠胃黏膜組織病理變化的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜變薄，皺襞變淺，腺體數(shù)量明顯減少，有水腫、出血、糜爛、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，GL 低、中劑量組大鼠胃黏膜增厚，皺襞正常，腺體數(shù)量明顯恢復(fù)，水腫、出血、糜爛減輕，有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；GL高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜厚度與腺體數(shù)量基本恢復(fù)正常，無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠胃黏膜組織病理染色圖（HE染色）

正常對(duì)照組，模型組，GL低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織病理評(píng)分分別為（0.24±0.03）、（7.25±0.58）、（5.14±0.46）、（3.48±0.41）、（1.23±0.26）、（1.10±0.18）分。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織病理評(píng)分顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，GL 低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織病理評(píng)分均顯著降低（P＜0.05）。

3.3 GL對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整且數(shù)量減少，細(xì)胞碎片及空泡增多，細(xì)胞固縮明顯；與模型組比較，GL低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)逐漸完整且數(shù)量增多，損傷細(xì)胞較少，空泡減少。結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 各組大鼠胃黏膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

3.4 GL對(duì)大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α 水平均顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，GL 低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α 水平均顯著降低（P＜0.05）。與GL 低劑量組比較，GL 中、高劑量組大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α 水平均顯著降低（P＜0.05）。與GL中劑量組比較，GL 高劑量組大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α水平均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α 水平比較（±s，n＝12，pg/mL）

表2 各組大鼠胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α 水平比較（±s，n＝12，pg/mL）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與GL低劑量組比較，P＜0.05；d：與GL中劑量組比較，P＜0.05。

TNF-α 53.29±6.38 295.82±16.21a 234.74±13.48b 152.81±14.07bc 71.54±9.26bcd 68.39±8.76b組別正常對(duì)照組模型組GL低劑量組GL中劑量組GL高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組IL-8 74.23±8.41 351.78±17.86a 284.62±15.39b 214.09±13.76bc 116.83±11.94bcd 98.75±10.52b IL-1β 104.52±12.14 489.73±25.38a 392.65±23.46b 305.47±19.83bc 163.49±17.98bcd 145.26±14.52b

3.5 GL對(duì)大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA水平均顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，GL 低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA 水平均顯著降低（P＜0.05）。與GL 低劑量組比較，GL中、高劑量組大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA水平均顯著降低（P＜0.05）。與GL 中劑量組比較，GL高劑量組大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA 水平均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA 水平比較（±s，n＝12）

表3 各組大鼠胃黏膜組織中ROS、MDA 水平比較（±s，n＝12）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與GL低劑量組比較，P＜0.05；d：與GL中劑量組比較，P＜0.05。

MDA/（nmol/mL）8.35±1.06 68.46±5.37a 54.81±3.65b 37.53±2.49bc 14.62±1.78bcd 12.64±1.43b組別正常對(duì)照組模型組GL低劑量組GL中劑量組GL高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組ROS/（μmol/mL）54.72±6.81 283.49±15.43a 216.83±13.26b 160.92±11.75bc 89.75±9.43bcd 75.46±10.28b

3.6 GL 對(duì)大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，GL 低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05）。與GL低劑量組比較，GL中、高劑量組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05）。與GL中劑量組比較，GL高劑量組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA表達(dá)比較（±s，n＝12）

表4 各組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA表達(dá)比較（±s，n＝12）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與GL低劑量組比較，P＜0.05；d：與GL中劑量組比較，P＜0.05。

NF-κB mRNA 1.01±0.12 2.45±0.23a 1.92±0.18b 1.58±0.16bc 1.14±0.13bcd 0.87±0.09b組別正常對(duì)照組模型組GL低劑量組GL中劑量組GL高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組HMGB1 mRNA 1.00±0.10 1.96±0.17a 1.61±0.15b 1.32±0.12bc 0.85±0.09bcd 0.67±0.07b

3.7 GL 對(duì)大鼠胃黏膜組織中iNOS 及HMGB1/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中iNOS、HMGB1 蛋白相對(duì)表達(dá)量和NF-κB p65 磷酸化水平均顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，GL低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織中iNOS、HMGB1蛋白相對(duì)表達(dá)量和NF-κB p65 磷酸化水平均顯著降低（P＜0.05）。與GL低劑量組比較，GL中、高劑量組大鼠胃黏膜組織中iNOS、HMGB1蛋白相對(duì)表達(dá)量和NF-κB p65磷酸化水平均顯著降低（P＜0.05）。與GL中劑量組比較，GL高劑量組大鼠胃黏膜組織中iNOS、HMGB1蛋白相對(duì)表達(dá)量和NF-κB p65 磷酸化水平均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖3和表5。

圖3 各組大鼠胃黏膜組織中iNOS 及HMGB1/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)的電泳圖

表5 各組大鼠胃黏膜組織中iNOS 及HMGB1/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)比較（±s，n＝12）

表5 各組大鼠胃黏膜組織中iNOS 及HMGB1/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)比較（±s，n＝12）

a：與正常對(duì)照組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與GL低劑量組比較，P＜0.05；d：與GL中劑量組比較，P＜0.05。

p-NF-κB p65/NF-κB p65 0.09±0.01 0.89±0.07a 0.67±0.05b 0.36±0.04bc 0.15±0.03bcd 0.12±0.02b組別正常對(duì)照組模型組GL低劑量組GL中劑量組GL高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組iNOS/GAPDH 0.35±0.04 1.78±0.16a 1.45±0.13b 1.03±0.10bc 0.64±0.07bcd 0.58±0.06b HMGB1/GAPDH 0.27±0.03 1.65±0.14a 1.24±0.11b 0.72±0.07bc 0.41±0.05bcd 0.36±0.04b

4 討論

HP 引起胃黏膜上皮細(xì)胞的炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，可導(dǎo)致胃黏膜慢性損傷，促進(jìn)HP 相關(guān)性胃炎的發(fā)生。有研究發(fā)現(xiàn)，HP可促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞中的ROS產(chǎn)生，并且累積的ROS能上調(diào)IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等各種細(xì)胞因子的表達(dá)，這些炎癥細(xì)胞因子又可進(jìn)一步誘導(dǎo)ROS 形成，而加重HP 感染引起的炎癥和上皮細(xì)胞損傷[11]。HP感染后，ROS會(huì)損傷胃黏膜細(xì)胞并引起膜脂質(zhì)過(guò)氧化，從而導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化的最終產(chǎn)物MDA 積累。此外，iNOS 是一種誘導(dǎo)性炎癥酶，是HP 引起胃炎的重要致病因子[12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠DOB值，胃黏膜組織病理評(píng)分，胃黏膜組織中IL-8、IL-1β、TNF-α、MDA、ROS 水平及iNOS 蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著升高，而GL 可顯著改善上述指標(biāo)的變化，提示GL 可能通過(guò)抑制炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)來(lái)減輕HP引起的胃黏膜損傷。

HMGB1 是一種普遍存在的核蛋白，在炎癥刺激下可從細(xì)胞核釋放到細(xì)胞質(zhì)甚至細(xì)胞外空間，與TLR4 等受體結(jié)合，從而激活NF-κB，刺激多種炎癥細(xì)胞因子（IL-8、IL-1β、TNF-α、iNOS 等）的釋放，與炎癥性肺損傷、肺炎、敗血癥等炎癥反應(yīng)介導(dǎo)的細(xì)菌性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[12]。研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1 在HP 感染期間高表達(dá)，抑制HMGB1/NF-κB信號(hào)通路可減輕HP誘導(dǎo)的大鼠慢性萎縮性胃炎[3―5]。HP 感染產(chǎn)生的ROS 也可激活NFκB等炎癥信號(hào)傳導(dǎo)。抑制NF-κB信號(hào)通路的活化可降低炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，改善HP 引起的胃損傷[13]。GL是一種天然的三萜類化合物，被認(rèn)為是HMGB1 的抑制劑，通過(guò)抑制HMGB1表達(dá)，可緩解脂多糖誘導(dǎo)的肝臟巨噬細(xì)胞炎癥及改善HP誘導(dǎo)的人胃癌細(xì)胞炎性損傷[6，14]。此外還有研究發(fā)現(xiàn)，GL 可通過(guò)抑制HMGB1-RAGE/TLR4-NF-κB/蛋白激酶B信號(hào)通路，抑制炎癥反應(yīng)，緩解顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的病理變化[8]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中HMGB1、NF-κB mRNA 和HMGB1 蛋白相對(duì)表達(dá)量，以及NF-κB p65磷酸化水平均顯著升高，而GL可顯著降低上述指標(biāo)水平，提示GL 可能通過(guò)抑制HMGB1/NF-κB 信號(hào)通路的激活，抑制炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而減輕HP引起的胃黏膜損傷。

綜上所述，GL 可能通過(guò)抑制HMGB1/NF-κB 信號(hào)通路的激活，抑制炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而減輕HP引起的胃黏膜損傷。然而本研究尚存在一些不足之處，如僅驗(yàn)證了GL 對(duì)HMGB1/NF-κB 信號(hào)通路的影響，未對(duì)其他通路、靶點(diǎn)進(jìn)行研究。后續(xù)將進(jìn)一步驗(yàn)證GL對(duì)HP相關(guān)性胃炎癥狀改善作用的具體機(jī)制，旨在為HP 相關(guān)性胃炎的臨床治療提供依據(jù)。