錯配修復(fù)蛋白3在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

修小斐 高峰 王曉梅 徐嘉曼 肖雪蘭 王大維

[摘要]?目的?探討錯配修復(fù)蛋白3（MutS?homolog?3，MSH3）在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義。方法?采用免疫組化檢測20例正?？谇火つず?0例口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中MSH3蛋白的表達(dá)。結(jié)果?口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中MSH3的陽性表達(dá)低于正?？谇火つ?。其中，高分化和中分化鱗狀細(xì)胞癌中MSH3陽性表達(dá)高于低分化。與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗狀細(xì)胞癌患者比較，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者M(jìn)SH3陽性表達(dá)明顯升高。MSH3表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無相關(guān)性。結(jié)論?MSH3蛋白表達(dá)降低與口腔鱗狀細(xì)胞癌的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，MSH3可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用。

[關(guān)鍵詞]?錯配修復(fù)蛋白3；口腔鱗狀細(xì)胞癌；免疫組化；分化程度；轉(zhuǎn)移

[中圖分類號]?R739.8????[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]?A ????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.02.006

Expression?of?MutS?homolog?3?in?oral?squamous?cell?carcinoma?and?its?significance

XIU?Xiaofei1，?GAO?Feng1，?WANG?Xiaomei1，?XU?Jiaman2，?XIAO?Xuelan1，?WANG?Dawei1

1.Department?of?Pathology，?the?Third?Hospital?of?Hebei?Medical?University，?Shijiazhuang?050051，?Hebei，?China;?2.Department?of?Oral?surgery，?the?Third?Hospital?of?Hebei?Medical?University，?Shijiazhuang?050051，?Hebei，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?expression?of?MutS?homolog?3?（MSH3）?in?oral?squamous?cell?carcinoma?and?its?significance.?Methods?The?MSH3?protein?expression?was?examined?by?immunohistochemistry?in?20?normal?oral?mucosa?and?60?oral?squamous?cell?carcinoma?tissues.?Results?Our?results?showed?that?MSH3?expression?in?oral?squamous?cell?carcinoma?tissues?was?lower?than?normal?oral?mucosa.?The?MSH3?expression?in?oral?squamous?cell?carcinoma?tissues with?better?differentiation?was?higher?than?that?with?worse?differentiation.?The?positive?MSH3?expression?decreased?from?oral?squamous?cell?carcinoma?patients?without?lymph?nodal?metastasis?to?that?with?metastasis.?MSH3?expression?was?not?related?to?the?patients’?gender，?age，?tumour?location?or?size.?Conclusion?Downregulation?of?MSH3?is?consistent?with?poorly?differentiation?and?nodal?metastasis?in?oral?squamous?cell?carcinoma.?MSH3?may?play?a?significant?role?in?the?malignant?progression?of?oral?squamous?cell?carcinoma.

[Key?words]?MutS?homolog?3;?Oral?squamous?cell?carcinoma;?Immunohistochemistry;?Differentiation;?Metastasis

DNA錯配修復(fù)（mismatch?repair，MMR）系統(tǒng)是DNA重組和復(fù)制過程中糾正堿基錯配的重要DNA修復(fù)途徑，是細(xì)胞維持基因組穩(wěn)定的必要條件，也可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞對放療和化療藥物的敏感性[1]。錯配修復(fù)蛋白3（MutS?homolog?3，MSH3）位于5q11-q12染色體上，是MMR系統(tǒng)的重要成員[2]。有研究表明，MSH3的表達(dá)降低或缺失可導(dǎo)致多種惡性腫瘤的發(fā)生，40%～60%的結(jié)直腸癌中出現(xiàn)異常MSH3表達(dá)，并與預(yù)后不良有關(guān)[3]。然而，MSH3的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系未見報道。本研究檢測MSH3在正?？谇火つず涂谇击[狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，分析口腔鱗狀細(xì)胞癌MSH3蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為口腔癌的診斷和預(yù)后評估提供依據(jù)。

1??資料與方法

1.1??標(biāo)本收集

收集2019至2020年河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院病理科診斷的口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本60例，其中高+中分化41例、低分化19例，術(shù)前均未接受放療或化療?；颊吣挲g為52歲（28～81歲）。根據(jù)腫瘤部位，舌癌27例、牙齦癌18例、頰癌15例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。20例正常口腔黏膜組織為同期牙槽嵴整形手術(shù)切除的樣本，經(jīng)組織學(xué)檢查無鱗狀細(xì)胞癌和癌前病變。該研究經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會討論審議并批準(zhǔn)（倫理審批號：G2020-007-1）。該研究患者均已簽署知情同意書。

1.2??免疫組化檢測

石蠟包埋組織切片（4μm）后常規(guī)脫蠟至水，在0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH值為6.0）中高壓鍋中煮沸10min，室溫靜置30min，磷酸鹽緩沖液（PBS，pH值為7.4）洗滌3次。內(nèi)源性過氧化物酶的活性在0.5%H2O2甲醇中阻斷10min，4℃下加入MSH3一抗（1：100，英國Abcam公司）孵育過夜。MaxVisionTMHRP試劑（福州邁新生物科技有限公司）在37℃下孵育30min，PBS洗滌，DAB顯色，用蘇木精復(fù)染后，中性樹膠封片。

1.3??結(jié)果判定

雙盲條件下，由兩位有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師對免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行評估。MSH3在細(xì)胞核呈棕黃色顆粒表達(dá)。根據(jù)視野下細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽性率進(jìn)行評分判定：無著色為陰性；≤5%的細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度的細(xì)胞核著色為弱陽性；5%～25%的細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的細(xì)胞核著色或≤75%呈現(xiàn)弱或中等強(qiáng)度的細(xì)胞核著色為中陽性；>25%的細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的細(xì)胞核著色或>75%呈現(xiàn)中等強(qiáng)度細(xì)胞核著色為強(qiáng)陽性。根據(jù)臨床病理特征的相似性，將MSH3陰性、弱陽性染色劃分為陰性表達(dá)組，中、強(qiáng)陽性染色劃分為陽性表達(dá)組。

1.4??統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS?20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，采用χ2檢驗進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以n（%）表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1&nbsp;?正?？谇火つず枉[狀細(xì)胞癌組織中MSH3表達(dá)

免疫組化檢測MSH3在正常口腔黏膜上皮和鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞核表達(dá)。在正?？谇火つ?，大部分（95%）MSH3為陽性表達(dá)，僅有1例（5%）為陰性表達(dá)組。40例（67%）鱗狀細(xì)胞癌組織為陽性表達(dá)，20例（33%）為陰性表達(dá)?？谇击[狀細(xì)胞癌MSH3表達(dá)陽性水平明顯低于正?？谇火つぃé?=6.22，P=0.013）。見表1、圖1。

2.2??鱗狀細(xì)胞癌MSH3表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

在41例高+中分化鱗狀細(xì)胞癌中，33例（80%）MSH3呈陽性表達(dá)。而在19例低分化鱗狀細(xì)胞癌中，僅7例（37%）為陽性表達(dá)。高+中分化鱗狀細(xì)胞癌MSH3陽性表達(dá)高于低分化鱗狀細(xì)胞癌（P=0.001）。在鱗狀細(xì)胞癌患者中，37例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，MSH3陽性表達(dá)為30例（81%）。23例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，僅10例（43%）MSH3為陽性表達(dá)。MSH3陽性表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗狀細(xì)胞癌患者比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯下降（P=0.003）。MSH3表達(dá)情況與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3??討論

MSH3是MMR系統(tǒng)的重要組成部分，主要功能是維持基因組的完整性，修復(fù)基因復(fù)制和重組過程中產(chǎn)生的DNA錯配。MSH3蛋白在結(jié)直腸癌、胃癌、膀胱癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌和卵巢癌中表達(dá)下降[3-9]，研究表明MSH3表達(dá)降低在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用。本研究發(fā)現(xiàn)MSH3在口腔鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)較正常口腔黏膜顯著下降，這與其他腫瘤研究結(jié)果一致，提示MSH3蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定的作用。由于MSH3通過糾正DNA重組和復(fù)制過程中的堿基錯配來維持基因組的穩(wěn)定性，其表達(dá)的降低或缺失可能誘導(dǎo)細(xì)胞突變，導(dǎo)致癌癥發(fā)生。

既往研究表明MSH3表達(dá)強(qiáng)度與膀胱癌和腎癌的分化程度密切相關(guān)，MSH3蛋白在高級別膀胱癌和腎癌組織中的表達(dá)水平明顯低于低級別腫瘤[6，8]。本研究發(fā)現(xiàn)分化較好的鱗狀細(xì)胞癌中MSH3的陽性表達(dá)高于低分化的鱗狀細(xì)胞癌，表明MSH3在鱗狀細(xì)胞癌組織中的低表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，其促進(jìn)鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞更具有侵襲性。Ni等[10]發(fā)現(xiàn)MSH3蛋白表達(dá)水平與結(jié)直腸癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況無關(guān)。但在本研究中，發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔癌患者M(jìn)SH3的陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，這說明MSH3在促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，與結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不同。

綜上，MSH3在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)降低，且與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示MSH3可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2023–02–03）

（修回日期：2023–11–15）