犬冠狀病毒病的診斷技術(shù)及治療措施

丁小鵬

（北票市動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 北票 122100）

冠狀病毒是廣泛存在于自然界的一大類病毒，可感染人、犬、貓和家禽等脊椎動物，導(dǎo)致嚴(yán)重的呼吸道、消化道及神經(jīng)系統(tǒng)疾病。犬冠狀病毒主要導(dǎo)致犬只發(fā)生急性腸胃炎，嚴(yán)重可導(dǎo)致犬死亡，給犬類養(yǎng)殖造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。本文主要從病原體特征、流行病學(xué)、致病機(jī)制、臨床癥狀、臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室診斷及防治措施等對犬冠狀病毒做一概述。希望可以為犬養(yǎng)殖業(yè)診斷和防治該病帶來一定參考。

1 病原特征

該病的病原為犬冠狀病毒，主要存在于病犬的腸上皮細(xì)胞和腸內(nèi)容物中。犬冠狀病毒形態(tài)多樣，多為圓形或橢圓形，大小不一，直徑在60～200納米之間，外表有一層脂質(zhì)囊膜，囊膜表面均勻分布著冠狀病毒獨(dú)有的、20納米長、呈花瓣?duì)畹睦w突，凍融易脫落，失去傳染性，因電鏡負(fù)染照片形似皇冠而得名。病毒核心由蛋白質(zhì)和RNA組成。犬冠狀病毒對高溫、紫外線和氯仿、乙醚、75%酒精、含氯消毒劑和脫氧膽酸鹽等化學(xué)消毒劑敏感。在糞便中可存活6～7天，4℃條件下保存數(shù)月仍有傳染性，可保存在-70℃條件下數(shù)年。

2 流行病學(xué)

在1985年我國首次發(fā)現(xiàn)犬冠狀病毒，由徐漢坤報道，后繼續(xù)發(fā)現(xiàn)于軍犬、警犬和民用犬之間。犬冠狀病毒可感染不同品種和年齡的犬只，幼年犬免疫力低，更易感染，發(fā)病率和死亡率均高于成年犬，狐貍和貉等犬科動物也會感染。冬季、初春和晚秋等天氣寒冷的季節(jié)易感。該病傳播速度快，主要傳染源為患病犬和帶毒犬及其排泄物，主要通過糞口途徑傳染給易感犬，也可經(jīng)垂直傳播。

3 致病機(jī)制

犬冠狀病毒感染犬只后兩天左右到達(dá)十二指腸，病毒表面蛋白與小腸細(xì)胞受體結(jié)合，進(jìn)入小腸絨毛間的吸收細(xì)胞后，迅速利用宿主進(jìn)行大量的復(fù)制增殖。在細(xì)胞質(zhì)空泡的平滑膜上出芽，導(dǎo)致細(xì)胞破裂，釋放出大量犬冠狀病毒，導(dǎo)致小腸感染加重，小腸絨毛變得短粗，停止分泌消化酶，致使小腸的消化吸收功能減弱，犬只開始出現(xiàn)嘔吐和腹瀉的癥狀。如果不進(jìn)行及時的補(bǔ)液和消炎，嚴(yán)重的嘔吐和腹瀉會導(dǎo)致病犬最終脫水或酸中毒死亡。通常單獨(dú)感染犬冠狀病毒的死亡率低，但犬冠狀病毒會損害病犬體內(nèi)的免疫細(xì)胞，導(dǎo)致宿主免疫力下降，繼發(fā)感染犬細(xì)小病毒和輪狀病毒、或是運(yùn)輸和突然降溫等應(yīng)激情況后，會大大提高犬只的死亡率。

4 臨床癥狀

犬冠狀病毒病的主要臨床表現(xiàn)為不同程度的消化道癥狀，潛伏期為1-3天，主要癥狀為精神萎靡、食欲不振、喜臥、嘔吐、腹痛、腹瀉，糞便氣味惡臭，嚴(yán)重時病犬會拉綠色或橙色的糊狀或水樣便，其中或許有血或黏膜組織，少數(shù)犬只會出現(xiàn)體溫升高的情況。初期嘔吐的是未消化完全的食物，隨后變?yōu)辄S綠色黏液，且混有泡沫。犬冠狀病毒病嚴(yán)重時會引發(fā)犬只結(jié)膜炎，導(dǎo)致視力下降。幼犬免疫力低下，感染該病毒后，體型快速消瘦、脫水，嚴(yán)重者在1～2天死亡。成年犬只及時治療后，可在7～10天康復(fù)，但在康復(fù)后也可能長時間攜帶病毒，導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)。若病犬繼發(fā)感染其他病毒、細(xì)菌或寄生蟲等，導(dǎo)致病情復(fù)雜，康復(fù)較慢，或是因嚴(yán)重感染死亡。

5 病理變化

解剖病死犬發(fā)現(xiàn)，發(fā)生感染病變最嚴(yán)重的部位是回腸，腸道內(nèi)有白色或黃綠色液體，腸黏膜脫落導(dǎo)致腸壁變薄，小腸絨毛短縮，并出現(xiàn)融合，隱窩變深，黏膜固有層的細(xì)胞成分增加，腹上皮細(xì)胞變得扁平，杯狀細(xì)胞排空。該病特異性的病變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)形成密絲體結(jié)構(gòu)和膜結(jié)合小體。非特異性的細(xì)胞病變是線粒體發(fā)生變形，微絨毛被破壞，胞漿密度嚴(yán)重降低，胞漿空泡擴(kuò)張，并出現(xiàn)脂質(zhì)包涵體。

6 臨床診斷

獸醫(yī)可根據(jù)豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，對患病犬感病的臨床癥狀以及流行病學(xué)特點(diǎn)做一個初步診斷。但犬冠狀病毒通常會與其他病毒混合感染，且輪狀病毒的臨床表現(xiàn)與之相似，很難得出一個明確的診斷結(jié)果。臨床上會應(yīng)用快速檢測試劑配合診斷。

7 實(shí)驗(yàn)室診斷

7.1 電鏡觀察

使用電子顯微鏡對病犬的糞便進(jìn)行觀察，可發(fā)現(xiàn)冠狀病毒特有的冠狀纖突結(jié)構(gòu)，但糞便含有太多雜質(zhì)，或許可有物質(zhì)與之有相似的冠狀結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽性。纖突極易脫落，或是病毒發(fā)生變異，冠狀結(jié)構(gòu)不明顯，導(dǎo)致觀察結(jié)果出現(xiàn)假陰性。電鏡檢查的結(jié)果誤差較大，使用費(fèi)用較高，很多檢測機(jī)構(gòu)還沒有該設(shè)備，限制了該技術(shù)的臨床使用。公認(rèn)的診斷犬冠狀病毒的最標(biāo)準(zhǔn)的方法是分離培養(yǎng)，但分離培養(yǎng)耗時長，難度大，且效率不高，在分離培養(yǎng)期間，犬只可能已經(jīng)死亡，耽誤疾病的防控工作。

7.2 病毒分離培養(yǎng)

取病犬的糞便，無菌條件下離心取上清液，經(jīng)0.22微米的過濾器過濾后，接種于犬腎細(xì)胞或是貓腎細(xì)胞的培養(yǎng)液中，在37℃恒溫箱中、5%二氧化碳的條件下培育48小時后，觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓、脫落，沒有明顯的形態(tài)上的病變癥狀。病毒分離培養(yǎng)所得結(jié)果更加直觀，但在采樣、分離、培養(yǎng)和鑒定的過程中耗時較長，人為因素導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差的概率較大，而且靈敏度低于高通量的篩選方法。

7.3 血清學(xué)診斷技術(shù)

血清學(xué)診斷技術(shù)主要是采集病犬血清進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)和間接ELISA實(shí)驗(yàn)，檢測病犬血清中的抗體效價是否升高。血清學(xué)診斷特異性強(qiáng)、靈敏度高，不與其他病毒交叉反應(yīng)，是獸醫(yī)臨床使用率較高的實(shí)驗(yàn)方法之一。

7.4 普通RT-PCR

普通RT-PCR特異性強(qiáng)且靈敏度高，可檢測輕微患病的病犬，且檢出率較高，但對病毒的載量無法確定。實(shí)驗(yàn)要求較高的操作技術(shù)，否則會導(dǎo)致交叉污染，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

7.5 實(shí)時熒光定量RT-PCR

實(shí)時熒光定量RT-PCR比普通PCR靈敏度高10倍，還具有準(zhǔn)確率高、重復(fù)性好、檢測速度較快的優(yōu)點(diǎn)。但實(shí)驗(yàn)需要精密度高的儀器和實(shí)驗(yàn)水平高的工作人員。

7.6 納米PCR

在PCR的反應(yīng)體系中加入納米金顆粒，納米金顆粒尺寸小，可調(diào)節(jié)DNA與聚合酶之間的特異性結(jié)合，間接的提高聚合酶濃度，有利于模板與引物的結(jié)合，提高目的基因的擴(kuò)增效率，減少非特異性擴(kuò)增，納米金顆粒導(dǎo)熱性更強(qiáng)，可縮短實(shí)驗(yàn)時間，靈敏度和敏感性更優(yōu)于實(shí)時熒光定量RT-PCR，操作簡便，且實(shí)驗(yàn)成本較低，適用于臨床上快速診斷。

8 防治措施

如果發(fā)現(xiàn)病犬，應(yīng)第一時間隔離，并清理排泄物，病死犬和排泄物要進(jìn)行無公害處理，對犬舍和用具進(jìn)行徹底的消毒，徹底切斷病毒的傳播。病犬要及時進(jìn)行補(bǔ)液、止嘔、抗病毒和防止酸中毒等治療，同時采取與抗生素、消炎藥和球蛋白相配合的治療方法，避免繼發(fā)感染輪狀病毒和犬細(xì)小病毒，導(dǎo)致病情復(fù)雜，難以治療。病犬腸胃功能減弱，難以消化食物，應(yīng)飼喂一些容易消化的食物，隨意飼喂會增加腸胃負(fù)擔(dān)，會導(dǎo)致病情難以康復(fù)。沒有特效藥可以治療犬冠狀病毒，多以預(yù)防為主，加強(qiáng)清潔消毒。最有效的預(yù)防措施是給健康犬提前注射犬冠狀病毒高免血清和犬免疫球蛋白。給妊娠犬注射疫苗，激發(fā)母源免疫，幼犬可以從胎盤和乳汁中獲得抗體，提高免疫力。加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，尤其在犬冠狀病毒多發(fā)的冬季，定期清理消毒犬舍，多通風(fēng)，但也應(yīng)保持溫暖，不飼喂變質(zhì)的飼料，不混用喂食器，不要將未吃完的飼料飼喂其他犬只。