中性粒細(xì)胞的異質(zhì)性與腫瘤

葉依依

作者單位：200032 上海 上海中醫(yī)藥附屬龍華醫(yī)院中醫(yī)外科研究所

近年來，隨著免疫療法在癌癥治療應(yīng)用中突飛猛進(jìn)，T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞在癌癥生物學(xué)中發(fā)揮重要作用［1］。中性粒細(xì)胞有別于其他免疫細(xì)胞，具有非增殖、生存期短等特性。人體發(fā)生感染時(shí)，中性粒細(xì)胞作為天然免疫系統(tǒng)的一線防御，會(huì)迅速聚集到感染部位和炎癥組織，執(zhí)行特定的免疫功能。目前對(duì)中性粒細(xì)胞的研究多限于感染性疾病，但近期有研究發(fā)現(xiàn)，在癌癥背景下，中性粒細(xì)胞的生物學(xué)行為會(huì)發(fā)生很大的改變并影響腫瘤進(jìn)展。本文就中性粒細(xì)胞在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的生物學(xué)作用及臨床應(yīng)用和靶向中性粒細(xì)胞治療癌癥的可能性作一綜述。

1 中性粒細(xì)胞的異質(zhì)性和功能

在正常生理狀態(tài)下，中性粒細(xì)胞產(chǎn)量高、壽命短，在機(jī)體內(nèi)保持動(dòng)態(tài)平衡。健康人體循環(huán)中的中性粒細(xì)胞半衰期為5～10 h，此后快速進(jìn)入自發(fā)凋亡［2］。在癌癥背景下，中性粒細(xì)胞在骨髓中大量擴(kuò)增并釋放，其中還包括許多未成熟的中性粒細(xì)胞。一旦從骨髓中釋放，中性粒細(xì)胞會(huì)被CXC 趨化因子受體CXCR2的配體CXCL1、CXCL2、CXCL5 和CXCL8 募集到腫瘤［3］。有證據(jù)表明，腫瘤相關(guān)細(xì)胞因子有助于中性粒細(xì)胞存活，癌癥患者中性粒細(xì)胞的半衰期延長到17～84 h［4］。ZHU 等［5］分析了黑色素瘤患者的血液樣本，從中鑒別出7 種不同的中性粒細(xì)胞亞群，而且這些細(xì)胞亞型在體外表現(xiàn)出不同的吞噬能力和活性氧產(chǎn)生能力，在癌癥發(fā)生和進(jìn)展中也承擔(dān)不同功能。

中性粒細(xì)胞的異質(zhì)性和功能改變受到多種因素的影響，這些因素包括癌癥、感染、肥胖、壓力及其他慢性炎癥性疾?。?］。癌癥類型與宿主狀態(tài)是影響中性粒細(xì)胞異質(zhì)性的決定性條件，但是目前中性粒細(xì)胞與腫瘤進(jìn)展的確切關(guān)系仍存在較大爭議。既往研究提出中性粒細(xì)胞具有與巨噬細(xì)胞類似的極化表型，表現(xiàn)出促腫瘤和抗腫瘤兩種相互矛盾的作用［7］。參照M1/M2腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞命名方案，腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞的極化表型分為N1 型和N2 型。其中，N1 型（抗腫瘤表型）中性粒細(xì)胞的細(xì)胞核呈過多分葉狀，具有腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、細(xì)胞間黏附分子1、Fas 等因子高表達(dá)的特征，它能活化簇分化抗原8（cluster of differentiation 8，CD8）T 細(xì)胞，具有很強(qiáng)的體外殺傷腫瘤細(xì)胞能力［7］；N2 型（促腫瘤表型）中性粒細(xì)胞的細(xì)胞核形態(tài)多為環(huán)狀，它能產(chǎn)生并釋放大量精氨酸酶（arginase，Arg），且高表達(dá)CCL趨化因子2［chemokine（C-C motif）ligand 2，CCL2］、CCL5 等因子，耗竭此類細(xì)胞能活化瘤內(nèi)T 細(xì)胞，抑制腫瘤生長［7］。雖然N1/N2 型中性粒細(xì)胞的概念已經(jīng)深入人心，但是仍缺乏足夠的證據(jù)證明其存在，目前尚無特定的表面標(biāo)志物可以明確區(qū)分。

此外，還有其他描述中性粒細(xì)胞不同極化狀態(tài)的術(shù)語，如多形核粒細(xì)胞（polymorphonuclear granulocyte，PMNs）和多形核髓源性抑制細(xì)胞（polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cells，PMN-MDSCs），以及低密度中性粒細(xì)胞（low-density neutrophils，LDNs）和高密度中性粒細(xì)胞（high-density neutrophils，HDNs）。在腫瘤生長過程中，PMNs可轉(zhuǎn)變成病理激活的PMNMDSCs。目前研究認(rèn)為PMN-MDSCs 的標(biāo)志物為CD11b+Ly6G+Ly6Clow，主要特征是S100 鈣結(jié)合蛋白A8/A9 復(fù)合物（S100A8/A9）和髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）高表達(dá)［8］。此外，其氧化磷酸化和糖酵解的速率也大幅升高，三磷酸腺苷生成增加，顯示出超強(qiáng)的自發(fā)遷移特性［9］。LDNs 和HDNs 根據(jù)中性粒細(xì)胞的浮力密度不同劃分。循環(huán)中的中性粒細(xì)胞具有鐘型分布的密度異質(zhì)性，且這種異質(zhì)性同時(shí)存在于健康和疾病機(jī)體中。在正常小鼠體內(nèi)，超過95%的循環(huán)中性粒細(xì)胞是HDNs［10］。但在炎癥或腫瘤狀態(tài)下，LDNs 占比升高，且隨著腫瘤進(jìn)展進(jìn)一步增加；HDNs 則表現(xiàn)出較高水平的吞噬作用，并介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞毒性，體內(nèi)過繼轉(zhuǎn)移HDNs 能顯著延緩早期腫瘤生長［10］。與HDNs 相比，LDNs 產(chǎn)生的活性氧較少，其對(duì)內(nèi)源性趨化肽N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸的反饋更活躍，抗菌能力更強(qiáng)，且能抑制T 細(xì)胞增殖［11］。雖然中性粒細(xì)胞的極化確切存在，但是這些術(shù)語還過于簡單和片面，仍無法通過這些術(shù)語準(zhǔn)確地區(qū)分中性粒細(xì)胞的生理、病理狀態(tài)及功能。無論如何，由微環(huán)境驅(qū)動(dòng)的腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞的功能差異幾乎是確定的，充分了解這類細(xì)胞與周圍環(huán)境之間的相互作用有助于更好地了解腫瘤生長和轉(zhuǎn)移過程。

2 中性粒細(xì)胞的抗腫瘤作用

2.1 T細(xì)胞依賴性抗腫瘤

通常情況下，中性粒細(xì)胞的抗腫瘤作用是通過促進(jìn)T 細(xì)胞活化殺傷腫瘤來實(shí)現(xiàn)的。SINGHAL 等［12］在肺癌早期患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)一類具有抗原提成細(xì)胞特征的中性粒細(xì)胞亞群，其通過TNF 配體超家族成員4（TNF ligand superfamily member 4，TNFSF4）、TNFSF9、CD86、CD54 等分子提供共刺激信號(hào)，從而增強(qiáng)抗原非特異性和腫瘤特異性T 細(xì)胞反應(yīng)。PONZETTA 等［13］發(fā)現(xiàn)活化的中性粒細(xì)胞可驅(qū)動(dòng)腫瘤微環(huán)境中CD4-CD8-非常規(guī)αβ T 細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，抑制3-甲基膽蒽（3-methylcholanthrene，3-MCA）肉瘤的生成。但是，中性粒細(xì)胞的T 細(xì)胞活化效應(yīng)只存在于腫瘤早期階段，隨著腫瘤的進(jìn)展，這種效應(yīng)也隨之減弱［14］。除了中性粒細(xì)胞本身外，中性粒細(xì)胞胞外陷阱（neutrophil extracellular traps，NETs）也能激活T細(xì)胞。NETs是由活化的中性粒細(xì)胞釋放的脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）-組蛋白復(fù)合物和蛋白質(zhì)組成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，它能與T 細(xì)胞上的Toll 樣受體2（Toll-like receptor 2，TLR2）相互作用，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活蛋白3磷酸化，促進(jìn)輔助性T細(xì)胞17分化［15］。

2.2 非T細(xì)胞依賴性抗腫瘤

中性粒細(xì)胞還可以通過非T 細(xì)胞依賴的方式發(fā)揮抗腫瘤作用。譬如，中性粒細(xì)胞可以通過釋放活性氧、過氧化氫、TNF-α、一氧化氮合酶等直接誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡［16-18］。CUI 等［19］發(fā)現(xiàn)彈性蛋白酶ELANE 是人源中性粒細(xì)胞釋放的主要抗癌蛋白，其可通過蛋白水解釋放CD95死亡結(jié)構(gòu)域殺傷多種癌細(xì)胞。另有研究發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞通過促進(jìn)癌細(xì)胞從子宮內(nèi)膜的基底膜分離、脫落和死亡，延緩早期子宮內(nèi)膜癌小鼠的惡性進(jìn)展［20］。此外，中性粒細(xì)胞還能通過調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡抑制腸癌。TRINER 等［21］發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞下調(diào)白細(xì)胞介素17（interleukin 17，IL17），能減少腫瘤相關(guān)細(xì)菌的擴(kuò)增和腫瘤相關(guān)炎癥，抑制結(jié)腸癌的增殖和侵襲。中性粒細(xì)胞也能直接殺傷腫瘤細(xì)胞，過程與其抗感染類似。中性粒細(xì)胞利用免疫球蛋白G Fc受體，通過抗體依賴性細(xì)胞毒作用（antibody-dependent cellular toxicity，ADCC）直接識(shí)別和吞噬癌細(xì)胞［22］。

綜上所述，目前盡管中性粒細(xì)胞的抗腫瘤作用報(bào)道相對(duì)較少，但可以發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞的抗腫瘤作用多報(bào)道在腫瘤發(fā)展的初期階段。在這個(gè)時(shí)期，中性粒細(xì)胞被腫瘤影響，但仍保留抗腫瘤功能，其主要通過激活適應(yīng)性免疫、釋放細(xì)胞毒性介質(zhì)、啟動(dòng)ADCC 過程發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)（表1）。

表1 中性粒細(xì)胞的抗腫瘤作用及機(jī)制Tab.1 Anti-tumor effects of neutrophils and their mechanisms

3 中性粒細(xì)胞的促腫瘤作用

3.1 誘導(dǎo)炎癥發(fā)揮促腫瘤作用

中性粒細(xì)胞的促癌作用與炎癥有著密不可分的關(guān)系，可以說中性粒細(xì)胞是炎癥與癌癥之間聯(lián)系的重要介質(zhì)。一項(xiàng)納入近50 萬名成年受試者的前瞻性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)量與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，而且這種關(guān)聯(lián)主要是由中性粒細(xì)胞數(shù)量增加驅(qū)動(dòng)［23］。COFFELT等［24］證實(shí)“γδ T細(xì)胞-IL17-中性粒細(xì)胞軸”參與乳腺癌轉(zhuǎn)移過程。該研究檢測到Trp53F/F乳腺癌自發(fā)性轉(zhuǎn)移小鼠血清中IL17A和粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factor，G-CSF）水平升高，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)腫瘤誘導(dǎo)γδ T細(xì)胞分泌大量的IL17A，而IL17A 可刺激G-CSF 高表達(dá)，從而驅(qū)動(dòng)中性粒細(xì)胞的擴(kuò)增和表型改變（cKIT+細(xì)胞比例增加），進(jìn)而促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移。此外，肥胖相關(guān)炎癥以粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子和IL-5 依賴的方式誘導(dǎo)肺部中性粒細(xì)胞聚集，然后上調(diào)Cxcr2、Tlr4、S100a8、S100a9、5-脂氧合酶、還原型輔酶Ⅱ氧化酶2、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2 等與中性粒細(xì)胞動(dòng)員、活化、免疫抑制相關(guān)的基因，促進(jìn)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移［25］。還有研究報(bào)道，腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞可特異性上調(diào)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2，使花生四烯酸加工成前列腺素E2，從而增強(qiáng)其促腫瘤免疫抑制特性［26］。

3.2 促進(jìn)轉(zhuǎn)移前生態(tài)位建立發(fā)揮腫瘤作用

早在一個(gè)世紀(jì)前，英國外科醫(yī)生Stephen Paget 就提出了腫瘤轉(zhuǎn)移的“種子與土壤”學(xué)說，該學(xué)說奠定了“轉(zhuǎn)移前生態(tài)位”的基礎(chǔ)。近幾十年來，“轉(zhuǎn)移前生態(tài)位”的學(xué)術(shù)理念得到了進(jìn)一步完善。轉(zhuǎn)移前生態(tài)位有利于腫瘤細(xì)胞的定植、存活、生長，而中性粒細(xì)胞是其中的關(guān)鍵組分。目前科學(xué)家們已經(jīng)達(dá)成共識(shí)，認(rèn)為中性粒細(xì)胞的積聚有助于遠(yuǎn)端器官的免疫抑制和細(xì)胞外基質(zhì)重塑，促進(jìn)轉(zhuǎn)移前生態(tài)位建立［27］。WCULEK等［28］研究報(bào)道中性粒細(xì)胞是乳腺癌小鼠肺轉(zhuǎn)移前生態(tài)位建立的主要成分和驅(qū)動(dòng)因素，其衍生的白三烯通過選擇性地?cái)U(kuò)增保留高致瘤潛力的癌細(xì)胞從而幫助其在遠(yuǎn)端組織定植。其中，原發(fā)腫瘤衍生物--腫瘤源性外泌體和腫瘤衍生因子是轉(zhuǎn)移前生態(tài)位形成的“元兇”。腫瘤源性外泌體RNA 激活肺上皮細(xì)胞中的TLR3，誘導(dǎo)趨化因子分泌并促進(jìn)中性粒細(xì)胞募集，這對(duì)肺轉(zhuǎn)移生態(tài)位的形成至關(guān)重要［29］。另外，卵巢癌的嗜網(wǎng)膜性也是由于卵巢腫瘤衍生的炎癥因子刺激中性粒細(xì)胞動(dòng)員和NETs 的釋放，形成轉(zhuǎn)移前網(wǎng)膜生態(tài)位，從而有助于卵巢癌細(xì)胞在網(wǎng)膜中定植［30］。腫瘤衍生因子還可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞p38α 激酶的激活，在肺轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的形成和隨后的肺轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用［31］。而其機(jī)制是活化的p38α激酶上調(diào)成纖維細(xì)胞活化蛋白，促進(jìn)趨化因子分泌，然后聚集大量中性粒細(xì)胞浸潤肺部，從而形成轉(zhuǎn)移前生態(tài)位。

3.3 釋放NETs促進(jìn)腫瘤進(jìn)展

NETs 水平升高與多種類型癌癥的進(jìn)展均呈正相關(guān)［30，32-33］。NETs 能直接促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、滲出、遷移和侵襲，還能通過推動(dòng)腫瘤惡性生物學(xué)過程、激活休眠癌細(xì)胞、參與轉(zhuǎn)移前生態(tài)位形成等促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移［34-36］。在肺轉(zhuǎn)移中，NETs 的作用尤為突出。有研究報(bào)道，持續(xù)的肺部炎癥可誘導(dǎo)休眠的癌細(xì)胞周圍區(qū)域形成NETs，NETs 的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶NE、基質(zhì)金屬蛋白酶9 與層黏連蛋白相互作用，喚醒肺臟中的休眠癌細(xì)胞，誘導(dǎo)乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移［37］。中性粒細(xì)胞的一種亞型--腫瘤相關(guān)衰老中性粒細(xì)胞在早期乳腺癌的肺臟中蓄積，形成轉(zhuǎn)移前生態(tài)位，促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移［38］。其機(jī)制是腫瘤分泌的煙酰胺磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶上調(diào)中性粒細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子去乙?；?，促進(jìn)線粒體通透性過渡孔通道開放，釋放線粒體DNA，誘導(dǎo)線粒體依賴的NETs 形成，而NETs 捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移。

NETs 與凝血功能的相關(guān)性也突出了NETs 在癌癥中的重要性。JUNG 等［39］發(fā)現(xiàn)胰膽管惡性腫瘤患者血漿中高水平的NETs 標(biāo)志物--組蛋白-DNA 復(fù)合物和游離雙鏈DNA 與高水平的內(nèi)源性凝血酶生成潛力存在相關(guān)性。在MMTV-PyMT 乳腺癌小鼠和C57/Bl6 原位胰腺癌小鼠模型中，NETs 通過激活血小板或釋放組織因子促進(jìn)凝血引發(fā)癌癥相關(guān)血栓［40-41］。NETosis，即NETs 的釋放，是中性粒細(xì)胞的炎性死亡方式，阻斷該過程能有效預(yù)防血栓的形成［42］。據(jù)報(bào)道，各種引發(fā)全身性炎癥損傷的因素，包括脂多糖、煙草煙霧、腫瘤衍生的炎癥細(xì)胞因子和手術(shù)應(yīng)激等都會(huì)誘導(dǎo)NETosis，進(jìn)而促進(jìn)癌癥患者疾病進(jìn)展［32］。因此，調(diào)控NETosis 可能為抗癌癥血栓形成提供新的靶點(diǎn)，甚至可能有助于控制癌癥本身。

3.4 其他促腫瘤作用途徑

除了以上促腫瘤機(jī)制，GONG 等［43］發(fā)現(xiàn)荷瘤鼠的中性粒細(xì)胞表達(dá)更高水平的免疫抑制相關(guān)基因，如Ptgs2、IL1β、IL10、Arg1、Arg2等，表現(xiàn)出強(qiáng)大的抑制T細(xì)胞增殖和殺傷NK 細(xì)胞的免疫抑制特性，在過繼T細(xì)胞治療中會(huì)抑制T 細(xì)胞功能，導(dǎo)致過繼細(xì)胞療法失敗。YEE 等［44］發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞通過鐵死亡誘導(dǎo)腫瘤壞死，加速惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤進(jìn)展。腫瘤組織內(nèi)部的早期壞死會(huì)誘導(dǎo)大量中性粒細(xì)胞浸潤，其通過鐵死亡殺傷腫瘤細(xì)胞，造成更多的腫瘤壞死，如此惡性循環(huán)加速膠質(zhì)瘤進(jìn)一步惡化。除此之外，中性粒細(xì)胞甚至能作為腫瘤轉(zhuǎn)移的能量儲(chǔ)存庫。有研究報(bào)道，在乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移前，肺間充質(zhì)細(xì)胞以前列腺素E2 依賴性和非依賴性方式抑制中性粒細(xì)胞中脂肪甘油三酯脂肪酶的活性，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞積累脂質(zhì)，這些脂質(zhì)通過巨胞飲-溶酶體途徑轉(zhuǎn)運(yùn)到轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞中，賦予腫瘤細(xì)胞更強(qiáng)的存活和增殖能力［45］。

總之，隨著腫瘤的進(jìn)展，在腫瘤及腫瘤微環(huán)境的持續(xù)影響下，中性粒細(xì)胞可向免疫抑制表型轉(zhuǎn)換。這個(gè)時(shí)期的中性粒細(xì)胞可分泌或表達(dá)更高水平的炎癥因子、血管生成因子、免疫抑制因子，它們通過誘導(dǎo)炎癥、釋放NETs、誘導(dǎo)免疫抑制、促進(jìn)血管生成、強(qiáng)化腫瘤惡性行為等過程促進(jìn)腫瘤進(jìn)展（表2）。

表2 中性粒細(xì)胞的促腫瘤作用及機(jī)制Tab.2 Tumor-promoting effects of neutrophils and their mechanisms

4 中性粒細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)的臨床應(yīng)用探索

4.1 中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio，NLR）

NLR 已被證實(shí)是多種類型癌癥患者的獨(dú)立預(yù)后因素［1，46］。一項(xiàng)包含316 例乳腺癌患者的回顧性研究評(píng)估了NLR 預(yù)測患者死亡率的有效性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NLR＞3.3 是乳腺癌患者近期和遠(yuǎn)期死亡的獨(dú)立預(yù)測因素［47］。CUPP 等［48］評(píng)估了NLR 與癌癥預(yù)后之間關(guān)聯(lián)證據(jù)的強(qiáng)度和有效性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NLR升高與癌癥患者的不良預(yù)后存在關(guān)聯(lián)，特別是在前列腺癌、非肌肉侵襲性膀胱癌和鼻咽癌中，NLR 和總生存期（overall survival，OS）之間的關(guān)聯(lián)證據(jù)最有力。此外，還有研究報(bào)道NLR≥4 的非小細(xì)胞肺癌患者接受免疫治療后死亡風(fēng)險(xiǎn)增加［49］。值得注意的是，盡管中性粒細(xì)胞在癌癥不同時(shí)期具有顯著異質(zhì)性，但在大部分實(shí)體瘤中，NLR 升高只與不良結(jié)局相關(guān)，無論是在癌癥早期還是晚期。綜上認(rèn)為，NLR 作為癌癥預(yù)后的生物標(biāo)志物展現(xiàn)了較好的臨床應(yīng)用前景，但是其與部分類型癌癥的預(yù)后關(guān)聯(lián)仍存在不確定性，并且不同研究對(duì)于高NLR 閾值的定義也不相同，需要進(jìn)一步研究提供更加強(qiáng)有力的證據(jù)評(píng)估NLR 與癌癥的因果關(guān)系并測試其臨床效用。

4.2 NETs

在一組接受轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌肝切除術(shù)的患者隊(duì)列中，術(shù)后NETs 的增加與無病生存期（disease-free survival，DFS）降低相關(guān)，因此認(rèn)為NETs 與手術(shù)應(yīng)激后肝轉(zhuǎn)移的發(fā)展有關(guān)，消除NETs 可能有助于降低腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)［50］。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌和結(jié)腸癌患者的肝轉(zhuǎn)移灶中存在大量NETosis，血液中NETs 水平的升高可用于預(yù)測早期乳腺癌患者肝轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)［51］。YAZDANI 等［52］在27 例接受結(jié)直腸根治術(shù)的患者中發(fā)現(xiàn)高水平血清MPO-DNA（NETs 形成標(biāo)志物）與更短的DFS和OS顯著相關(guān)。

如上所述，NETs 與血栓形成具有相關(guān)性，因此NETs 檢測技術(shù)的開發(fā)與應(yīng)用可能對(duì)癌癥相關(guān)血栓的預(yù)測更有意義。MAURACHER 等［53］檢測了984 例癌癥患者血漿中NETs 的生物標(biāo)志物循環(huán)游離DNA（circulating free DNA，cfDNA）、核小體和瓜氨酸組蛋白H3（citrullinated histone H3，CitH3）的水平，其中89例患者在2 年隨訪中發(fā)生靜脈血栓栓塞，其中肺癌和胰腺癌患者血漿的CitH3水平與靜脈血栓栓塞表現(xiàn)出很強(qiáng)的相關(guān)性，乳腺癌患者有邊緣性相關(guān)性，而腦癌或結(jié)直腸癌患者沒有相關(guān)性。另外一項(xiàng)納入957 例患者的前瞻性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)CitH3、cfDNA 和核小體水平與腫瘤患者動(dòng)脈血栓栓塞癥的風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，但是與癌癥患者死亡率呈正相關(guān)［54］。

NETs 作為癌癥生物標(biāo)志物已成為共識(shí)，未來靶向NETosis 的臨床治療方案或?qū)⒊蔀榭赡?。CitH3 和CitH3-DNA 復(fù)合物是NETs 的最佳生物標(biāo)志物。MPO-DNA 復(fù)合物也是較好的NETs 生物標(biāo)志物，但仍存在非特異性現(xiàn)象［55］。目前，溶解NETs 藥物，如肝素和DNA 酶Ⅰ（deoxyribonuclease Ⅰ，DNase Ⅰ）等，已經(jīng)在臨床使用。肽基精氨酸脫亞氨酶4 是NETs 形成必需的蛋白，其特異性抑制劑也在開發(fā)中。雖然前景光明，但是到目前為止，靶向NETs的基礎(chǔ)和臨床研究主要是以感染性疾病和自身免疫疾病為主，NETs 作為癌癥治療靶標(biāo)的有效性及安全性仍需要更多的確鑿證據(jù)。

4.3 中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)

較高的腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)往往預(yù)示不良的疾病預(yù)后［56］。有研究報(bào)道中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)與肝內(nèi)膽管癌的不良無復(fù)發(fā)生存期和癌癥特異性生存率相關(guān)，可用于預(yù)測疾病復(fù)發(fā)［57］。SONG等［58］分析了食管鱗癌患者圍手術(shù)期中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與OS 的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)≥2.6 是OS 的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。但是，目前中性粒細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)與癌癥預(yù)后的相關(guān)性存在很大爭議，它們之間的關(guān)聯(lián)證據(jù)受研究質(zhì)量、異質(zhì)性、小樣本效應(yīng)的限制，需要進(jìn)一步研究打破現(xiàn)有證據(jù)的局限性。

目前絕大多數(shù)中性粒細(xì)胞的表型和功能研究是在動(dòng)物模型中進(jìn)行，而關(guān)于癌癥患者體內(nèi)研究證據(jù)非常有限。盡管許多研究已經(jīng)證實(shí)中性粒細(xì)胞在癌癥進(jìn)展中的作用，但中性粒細(xì)胞如何作為靶標(biāo)應(yīng)用于腫瘤不同階段的免疫療法仍沒有明確答案，需要進(jìn)一步探索。

5 小結(jié)

近年來的研究揭示了中性粒細(xì)胞在腫瘤發(fā)生、生長、轉(zhuǎn)移、血管生成、腫瘤相關(guān)血栓形成、免疫抑制等方面的重要作用，展現(xiàn)了腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞的可塑性和異質(zhì)性，以及其作為癌癥診斷生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的潛力，靶向中性粒細(xì)胞的治療方式與現(xiàn)有的抗腫瘤治療方式相結(jié)合可能是有效、安全的癌癥治療策略。但是，鑒于中性粒細(xì)胞在人體中的復(fù)雜性，未來仍需更多的研究和數(shù)據(jù)才能確定調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞表型和功能的生物標(biāo)志物及其作用機(jī)制。