• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    半枝蓮抗肝癌活性部位的化學(xué)成分研究

    2024-01-01 00:00:00方振峰曹曉琴陳中強(qiáng)房輝
    廣西植物 2024年6期
    關(guān)鍵詞:二萜細(xì)胞增殖化學(xué)成分

    DOI: 10.11931/guihaia.gxzw202306008

    方振峰, 曹曉琴, 陳中強(qiáng), 等, 2024.

    半枝蓮抗肝癌活性部位的化學(xué)成分研究 [J].

    廣西植物, 44(6): 1070-1081.

    FANG ZF, CAO XQ, CHEN ZQ, et al., 2024.

    Chemical constituents of the anti-liver cancer active site of Scutellaria barbata" [J].

    Guihaia, 44(6): 1070-1081.

    摘" 要:" 前期研究發(fā)現(xiàn),半枝蓮(Scutellaria barbata)全草醇提物的乙酸乙酯萃取部位經(jīng)大孔吸附樹脂處理,其70%乙醇洗脫部位具有較好的抗肝癌活性。為明確其活性成分,該研究采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、制備TLC、半制備液相色譜等對(duì)活性部位進(jìn)行分離和純化,運(yùn)用多種波譜分析方法鑒定了單體化合物結(jié)構(gòu),并利用CCK-8法評(píng)價(jià)了所有單體化合物對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞體外增殖抑制活性,同時(shí)利用分子對(duì)接技術(shù)考察了活性最好的化合物與肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況。結(jié)果表明:(1)從該活性部位共分離得到14個(gè)化合物,包括12個(gè)新克羅烷型二萜類化合物和2個(gè)黃酮類化合物,分別鑒定為scutefolide C (1)、6-乙酰氧基-7-煙酸酰氧基半枝蓮堿G (2)、scutestrigillosin D (3)、 scutehenanine D (4)、半枝蓮堿A (5)、半枝蓮堿B (6)、7-煙酸酰氧基半枝蓮堿H (7)、半枝蓮堿N (8)、半枝蓮堿Y (9)、barbatin A (10)、barbatin B (11)、barbatin D (12)、5, 7, 6′-三羥基-2′-甲氧基黃酮醇(13)和5, 8-二羥基-6, 7-二甲氧基黃酮(14)。其中,化合物1-3、13、14為首次從該植物中分離得到。(2)活性測(cè)試結(jié)果顯示,化合物4、7、10-12表現(xiàn)出較弱的HepG2細(xì)胞增殖抑制活性,化合物6的細(xì)胞增殖抑制活性和陽(yáng)性對(duì)照(順鉑)活性接近,而化合物5表現(xiàn)出比順鉑更強(qiáng)的細(xì)胞增殖抑制活性。(3)分子對(duì)接結(jié)果顯示,化合物5和化合物6與肝癌靶蛋白VEGF-2均具有良好的結(jié)合力。該研究結(jié)果不僅豐富了半枝蓮的化學(xué)物質(zhì)類群,也為進(jìn)一步深入研究活性化合物抗肝癌的作用機(jī)制提供了參考。

    關(guān)鍵詞: 半枝蓮, 化學(xué)成分, 二萜, 肝癌, 細(xì)胞增殖

    中圖分類號(hào):" Q946

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:" A

    文章編號(hào):" 1000-3142(2024)06-1070-12

    收稿日期: 2023-10-06" 接受日期: 2023-10-29

    基金項(xiàng)目:" 湖北省衛(wèi)生健康委員會(huì)科研項(xiàng)目(WJ2019M258)。

    第一作者: 方振峰(1980—),博士,副教授,研究方向?yàn)橹兴幖疤烊凰幬锏幕钚猿煞郑‥-mail)zhenfengfang@163.com。

    *通信作者

    Chemical constituents of the anti-liver cancer

    active site of Scutellaria barbata

    FANG Zhenfeng*, CAO Xiaoqin, CHEN Zhongqiang, FANG Hui

    ( Department of Pharmacy, School of Medicine, Jianghan University, Wuhan 430056, China )

    Abstract:" In previous study, the ethanol extract of Scutellaria barbata was partitioned with petroleum ether and EtOAc, respectively. The ethyl acetate extract site was subjected to column chromatography over macroporous adsorption resin eluting with gradient ethanol. The 70% ethanol elution fraction exhibited good anti-liver cancer activity. To clarify the active ingredients, the active site was separated and purified by silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, preparative TLC, and semi preparative liquid chromatography, etc. Multiple spectroscopic analysis methods were used to identify the structure of the monomer compounds, and" CCK-8 method was used to evaluate the inhibitory activity of all compounds on the proliferation of human liver cancer HepG2 cells in vitro. At the same time, molecular docking technology was used to investigate the binding of the most active compounds with target proteins VEGF-2 and FGFR-1, which were obtained from targeted drug for liver cancer. The results were as follows: (1) A total of 14 compounds were isolated from the active site, including 12 neo-clerodane diterpenoids and 2 flavonoids, which were identified as scuefolide C (1), 6-acetoxy-7-nicotinoyloxyscutebarbatine G (2), scutestrigillosin D (3), scutehenanine D (4), scutebarbatine A (5), scutebarbatine B (6), 7-O-nicotinoyloxyscutebarbatine H (7), scutebarbatine N (8), scutebarbatine Y (9), barbatin A (10), barbatin B (11), barbatin D (12), 5, 7, 6′- trihydroxy-2′-methoxyflavonol (13) and 5, 8-dihydroxy-6, 7-dimethoxyflavone (14). Compounds 1-3 and 13, 14 were isolated from this plant for the first time. (2) The results of cell proliferation inhibition activity test showed that compounds 4, 7, 10-12 exhibited weaker cell proliferation inhibitory activity against HepG2, and Compound 6 exhibited similar cell proliferation inhibitory activity to the positive control (cisplatin), while Compound 5 exhibited stronger" cell proliferation inhibitory activity than cisplatin. (3) The molecular docking results showed that Compound 5 and Compound 6 had good binding affinity with target protein VEGF-2, which binded to residues such as GLY-841, LEU-840, ASN-923, ARG-1032 in VEGF-2 protein through hydrogen bonding. At the same time, Compound 5 and Compound 6 exhibited poor binding affinity with target protein FGFR-1. The results of this study not only enrich the chemical groups of S. barbata, but also provide a reference for further study on the mechanism of active compounds against liver cancer.

    Key words: Scutellaria barbata, chemical constituents, diterpenoids, liver cancer, cell proliferation

    半枝蓮(Scutellaria barbata)作為一種傳統(tǒng)的抗癌中藥,自2005版《中華人民共和國(guó)藥典》收載以后,均被各版本《中華人民共和國(guó)藥典》收錄。半枝蓮為全草入藥,具有清熱解毒等功效(國(guó)家藥典委員會(huì),2020)。由于半枝蓮中黃酮成分豐富,因此對(duì)其總黃酮成分(Li et al., 2014;陳明等,2017;Zheng et al., 2018)、單體黃酮成分(曾劍,2018;雷楠等,2020)的抗腫瘤研究一直是半枝蓮研究的熱點(diǎn)。2010年以后,半枝蓮多糖在抗腫瘤方面的作用引起了人們的關(guān)注(高山等,2017;Sun et al., 2017;Li et al., 2019;林霄月,2021),逐漸成為半枝蓮抗腫瘤研究的另一個(gè)熱點(diǎn)。近幾年,半枝蓮中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些二萜(含二萜生物堿)類化合物對(duì)鼻咽癌、口腔表皮樣癌、肺癌等表現(xiàn)出較好的活性,引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注(牛淑睿等,2021;顧永哲等,2023)。

    目前,對(duì)半枝蓮二萜類化學(xué)成分及其抗肝癌的研究很少。在前期研究中,本課題組發(fā)現(xiàn)半枝蓮全草乙酸乙酯萃取部位大孔樹脂70%乙醇洗脫部位具有較好的抗肝癌活性(劉欣等,2023),并且通過(guò)化學(xué)鑒別反應(yīng)初步推測(cè)其主要化學(xué)成分可能為二萜生物堿類。因此,為進(jìn)一步明確半枝蓮抗肝癌的活性成分,為肝癌藥物研制提供可能的先導(dǎo)化合物,本課題組對(duì)半枝蓮乙酸乙酯萃取部位大孔樹脂70%乙醇洗脫部位進(jìn)行了系統(tǒng)分離,并對(duì)單體化合物進(jìn)行了人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制活性測(cè)試。同時(shí),利用分子對(duì)接考察了活性較好的化合物與肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況,為進(jìn)一步深入研究活性化合物抗肝癌的作用機(jī)制提供參考。

    1" 材料與方法

    1.1 材料

    半枝蓮購(gòu)自亳州中藥材市場(chǎng),產(chǎn)地為河北省,經(jīng)江漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系張濤教授鑒定為唇形科黃芩屬植物半枝蓮(Scutellaria barbata)的干燥全草。

    1.2 儀器和試劑

    Bruker DRX-600 MHz核磁共振儀(德國(guó)布魯克公司);安捷倫UPLC/Q-TOF 6230型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;創(chuàng)新通恒LC 3000半制備型高效液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒色譜技術(shù)有限公司);CO2培養(yǎng)箱、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(Thermo Fisher);半制備型反相YMC-Pack ODS-A色譜柱 ( 250 mm × 20 mm, 10

    SymbolmA@

    m) 、分析型反相YMC C18色譜柱 ( 250 mm × 4. 6 mm, 5

    SymbolmA@

    m) (日本YMC公司);Sephadex LH-20(英國(guó)Amersham Pharmacia Biotech AB 公司);色譜甲醇、乙腈(美國(guó)賽默飛世爾科技公司);分析純?cè)噭▏?guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司)。順鉑(Pt,65%)購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞株由江漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院提供;胎牛血清、同仁化學(xué)CCK-8試劑盒購(gòu)自賽因百奧生物技術(shù)(北京)有限公司;DMEM高糖培養(yǎng)基、0.01 mol·L-1 PBS、0.25%胰蛋白酶消化液均購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司。

    1.3 提取和分離

    取干燥半枝蓮全草約10 kg, 粉碎后用95%乙醇回流提取3次,合并提取液,減壓濃縮得浸膏約1 279 g。浸膏加適量水使其混懸分散,依次用石油醚(60~90

    SymbolpB@

    C)、乙酸乙酯等體積萃取,回收溶劑得到石油醚、乙酸乙酯2個(gè)萃取部位。取乙酸乙酯萃取部位(約232 g)加入適量水超聲溶解,使溶液中無(wú)明顯顆粒狀,過(guò)AB-8型大孔吸附樹脂(約2.5 kg),用大量水洗至水溶液無(wú)明顯渾濁,隨后用10%

    SymbolnB@

    90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫,每次增加10%乙醇,每個(gè)梯度洗脫3個(gè)柱床體積,收集各濃度洗脫溶液并減壓回收溶劑得到9個(gè)部分(Fr.A-Fr.I)。根據(jù)前期活性測(cè)試結(jié)果,選定70%乙醇洗脫部位(Fr.G)作為研究對(duì)象。Fr.G(約8.52 g)經(jīng)硅膠柱色譜,以石油醚-丙酮(18∶1、12∶1、7∶1、3∶1、1∶1,V/V)進(jìn)行梯度洗脫,得到5個(gè)流分(G1-G5)。G1(約0.75 g)經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜,以二氯甲烷-乙酸乙酯(12∶1、7∶1、3∶1,V/V)進(jìn)行梯度洗脫,合并得3個(gè)流分(G1.1-G1.3),其中流分G1.2(110 mg)經(jīng)半制備液相色譜分離,以MeCN-H2O(78∶22,V/V)洗脫,得到化合物1(13 mg)。流分G2(0.85 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(100 g),以CH2Cl2-MeOH (3∶1,V/V)洗脫,得到3個(gè)流分(G2.1-G2.3)。其中流分G2.2(約0.12 g)經(jīng)制備TLC[V(氯仿)∶V(丙酮)=9∶2]分離得到化合物2(14 mg);流分G2.3(約0.11 g)經(jīng)制備TLC[V(氯仿)∶V(丙酮)=9∶2]分離得到化合物3(23 mg)。流分G3(2.3 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(200 g),以CH2Cl2-MeOH (1∶1,V/V)洗脫,得到G3.1-G3.7共7個(gè)部分。G3.1(約90 mg)經(jīng)反相半制備HPLC分離,以MeOH-H2O(53∶47,V/V)洗脫,得到化合物10(8 mg);G3.2(約112 mg)經(jīng)反相半制備HPLC分離,以MeOH-H2O(54∶46,V/V)洗脫,得到化合物11(19 mg);G3.3(約235 mg)經(jīng)反相半制備HPLC分離,以MeOH-H2O(55∶45,V/V)洗脫,得到化合物4(39 mg)和化合物7(14 mg);G3.4(約0.36 g)經(jīng)反相半制備HPLC分離,以MeOH-H2O(55∶45,V/V)洗脫,得到化合物6(19 mg)和化合物12(24 mg);G3.5(約80 mg)經(jīng)反相半制備HPLC分離,以MeOH-H2O(54∶46,V/V)洗脫,得到化合物8(11 mg)。流分G3(約0.91 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(100 g),以CH2Cl2-MeOH (1∶1,V/V)洗脫,得到3個(gè)流分(G3.1-G3.3)。G3.1(約0.18 g)經(jīng)反相制備HPLC分離,以MeOH-0.1% TFA(52∶46,V/V)洗脫,得到化合物13(2.1 mg)和化合物14(2.9 mg);G3.2(約0.29 g)經(jīng)反相制備HPLC分離,以MeOH-H2O(54∶46

    SymbolnB@

    60∶40,V/V)進(jìn)行梯度洗脫,得到化合物5(27 mg)和化合物9(19 mg)。

    1.4 人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制活性

    參考音金萍和卓少元(2021)的方法,取對(duì)數(shù)期的HepG2細(xì)胞按每孔5×103個(gè)的密度接種在96孔板中并孵育過(guò)夜。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)完整后,除去培養(yǎng)基,用不同濃度的單體化合物和陽(yáng)性對(duì)照物(順鉑)(0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80、160 μmol·L-1)處理細(xì)胞48 h。再向每個(gè)孔中加入10 μL CCK-8試劑,并將細(xì)胞在37 ℃下孵育1 h。另設(shè)對(duì)照組(含細(xì)胞、純培養(yǎng)基和CCK-8溶液)、空白組(含純培養(yǎng)基和CCK-8溶液),每組平行6次。按照CCK-8試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制活性,采用酶標(biāo)儀在450 nm處記錄OD值,計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率,并據(jù)此計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)值。

    1.5 分子對(duì)接

    在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.rcsb.org/)中選取肝癌靶標(biāo)VEGF-2蛋白(ID:3WZD)、FGFR-1(ID:5ZV2),用pymol進(jìn)行蛋白和特異性配體樂(lè)伐替尼(lenvatinib,LEV)的分離,并去掉蛋白里的水分子,利用AutoDock 1.5.6對(duì)蛋白和特異性配體進(jìn)行加氫、加電荷處理,并轉(zhuǎn)換格式為PDBQT格式,同時(shí)確定蛋白VEGF-2和FGFR-1的活性口袋,記錄“grid”參數(shù)。在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)中下載活性化合物的3D結(jié)構(gòu),通過(guò)AutoDock 1.5.6進(jìn)行加氫、加電荷處理,并轉(zhuǎn)換為PDBQT格式。利用Autodock Vina 1.0對(duì)活性化合物、特異性配體和肝癌靶標(biāo)進(jìn)行分子對(duì)接,考察化合物和肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    利用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,半數(shù)抑制濃度(IC50)數(shù)值均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)形式表示。

    2" 結(jié)果與分析

    2.1 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

    利用各種色譜分離手段,從半枝蓮抗肝癌活性部位共分離得到14個(gè)化合物。通過(guò)1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜分析方法及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比鑒定了所有化合物結(jié)構(gòu),化合物1-14的結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

    化合物1" 白色粉末。ESI-MS m/z: 505.3" [M+H]+, 推測(cè)化合物1的分子量為504,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C28H40O8。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.18 (1H, m, H-1a), 1.55 (1H, m, H-1b), 1.28 (1H, m, H-2a), 1.66 (1H, m, H-2b), 2.13 (1H, m, H-3a), 2.55 (1H, br d, J=18.1 Hz, H-3b), 6.22 (1H, d, J=10.5 Hz, H-6), 5.57 (1H, d, J=10.5 Hz, H-7), 3.14 (1H, br t, J=8.4 Hz, H-10), 1.41 (1H, m, H-11a), 1.66 (1H, m, H-11b), 1.64 (1H, m, H-12a), 1.81 (1H, m, H-12b), 2.60 (1H, d, J=16.8 Hz, H-14a), 3.02 (1H, d, J=16.8 Hz, H-14b), 4.28 (1H, d, J=9.0 Hz, H-16a), 4.36 (1H, d, J = 9.0 Hz, H-16b), 1.26 (3H, s, H-17), 4.67 (2H, br s, H-18), 0.68 (3H, s, H-20), 7.07 (1H, m, H-3′), 1.56 (1H, br d, J=7.3 Hz, H-4′), 1.94 (1H, br s, H-5′), 2.63 (1H, m, H-2″), 1.19 (1H, br d, J=7.2 Hz, H-3″), 1.14 (1H, br d, J=7.2 Hz, H-4″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 23.9 (C-1), 22.9 (C-2), 30.1 (C-3), 137.5 (C-4), 127.7 (C-5), 74.3 (C-6), 76.5 (C-7), 81.2 (C-8), 40.9 (C-9), 36.8 (C-10), 25.9 (C-11), 28.5 (C-12), 77.5 (C-13), 44.8 (C-14), 174.5 (C-15), 77.3 (C-16), 21.1 (C-17), 61.6 (C-18), 17.9 (C-20), 166.8 (C-1′), 129.1(C-2′), 138.6 (C-3′), 14.2 (C-4′), 12.5 (C-5′), 176.5 (C-1″), 34.8 (C-2″), 19.6 (C-3″), 19.1 (C-4″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Kurimoto et al., 2015)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物1為scutefolide C。

    化合物2" 白色粉末。ESI-MS m/z: 619.2" [M+H]+, 641.3" [M + Na]+,推測(cè)化合物2的分子量為618,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C34H38N2O9。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.72 (1H, m, H-1a), 2.06 (1H, m, H-1b), 2.72 (2H, m, H-2), 5.45 (1H, br s, H-3), 5.73 (1H, d, J=10.5 Hz, H-6), 5.47 (1H, d, J=10.5 Hz, H-7), 2.76 (1H, dd, J=12.5, 3.0 Hz, H-10), 5.94(1H, dd, J=12.4, 4.5 Hz, H-11), 1.78 (1H, m, H-12a), 2.30 (1H, m, H-12b), 2.61(1H, d, J=16.5 Hz, H-14a), 3.16 (1H, d, J=16.5 Hz, H-14b), 4.13 (1H, d, J=8.9 Hz, H-16a), 4.19 (1H, d, J = 8.9 Hz, H-16b), 1.21 (3H, s, H-17), 1.75 (3H, s, H-18), 1.53 (3H, s, H-19), 1.26 (3H, s, H-20), 9.24 (1H, br s, H-3′), 8.80 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5′), 7.48 (1H, dd, J=7.8, 4.8 Hz, H-6′), 8.33 (1H, br d, J=7.8 Hz, H-7′), 9.19 (1H, br s, H-3″), 8.78 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5″), 7.41 (1H, dd, J=7.8, 4.8 Hz, H-6″), 8.28 (1H, br d, J=7.8 Hz, H-7″), 1.81 (3H, s, CH3-CO-)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 28.9 (C-1), 32.9 (C-2), 121.1 (C-3), 145.5 (C-4), 45.7 (C-5), 73.3 (C-6), 75.5 (C-7), 81.7 (C-8), 38.9 (C-9), 44.3 (C-10), 71.9 (C-11), 29.5 (C-12), 77.8 (C-13), 44.9 (C-14), 173.5 (C-15), 76.9 (C-16), 21.2 (C-17 ), 20.6 (C-18), 17.3 (C-19), 20.3 (C-20), 164.5 (C-1′), 126.1(C-2′), 150.9 (C-3′), 155.2 (C-5′), 123.5 (C-6′), 137.5 (C-7′), 164.3 (C-1″), 126.4 (C-2″), 151.6 (C-3″), 155.1 (C-5″), 123.8 (C-6″), 138.5 (C-7″), 171.8 (CH3-CO-), 22.3 (CH3-CO-)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(李桂生等,2015)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物2為6-乙酰氧基-7-煙酸酰氧基半枝蓮堿G。

    化合物3" 白色粉末。ESI-MS m/z: 576.3" [M+H]+, 推測(cè)化合物3的分子量為575,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C33H37NO8。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.81 (1H, m, H-1a), 2.55 (1H, m, H-1b), 2.15 (2H, m, H-2), 5.33 (1H, br s, H-3), 5.33 (1H, d, J=10.2 Hz, H-6), 3.62 (1H, d, J=10.2 Hz, H-7), 2.51 (1H, d, J=12.5 Hz, H-10), 5.69 (1H, dd, J=12.6, 4.2 Hz, H-11), 2.15 (1H, m, H-12a), 2.26 (1H, m, H-12b), 2.87 (1H, d, J=18.1 Hz, H-14a), 2.94 (1H, d, J=18.1 Hz, H-14b), 4.23 (1H, d, J=9.6 Hz, H-16a), 4.42 (1H, d, J = 9.6 Hz, H-16b), 1.53 (3H, s, H-17), 1.64 (3H, s, H-18), 1.39 (3H, s, H-19), 1.18 (3H, s, H-20), 9.24 (1H, br s, H-3′), 8.84 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5′), 7.54 (1H, dd, J=7.8, 4.8 Hz, H-6′), 8.33 (1H, br d, J=7.8 Hz, H-7′), 8.04 (2H, br d, J=7.8 Hz, H-3″, 7″), 7.41 (2H, br d, J=7.8 Hz, H-4″, 6″), 7.51 (1H, dd, J=7.8, 4.8 Hz, H-5″)。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 18.7 (C-1), 26.9 (C-2), 123.1 (C-3), 141.7 (C-4), 42.7 (C-5), 77.5 (C-6), 75.5 (C-7), 84.7 (C-8), 43.9 (C-9), 40.8 (C-10), 75.9 (C-11), 35.5 (C-12), 77.2 (C-13), 42.9 (C-14), 173.5 (C-15), 78.9 (C-16), 21.0 (C-17 ), 17.4 (C-18), 17.7 (C-19), 17.9 (C-20), 165.5 (C-1′), 126.3(C-2′), 150.9 (C-3′), 154.2 (C-5′), 123.6 (C-6′), 137.9 (C-7′), 167.6 (C-1″), 130.4 (C-2″), 130.3 (C-3″, 7″), 128.8 (C-4″, 6″), 133.5 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2016)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物3為scutestrigillosin D。

    化合物4" 黃色粉末。ESI-MS: m/z: 574.2" [M+H]+, 596.4" [M + Na]+, 推測(cè)化合物4的分子量為573,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C33H35NO8。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.84 (1H, m, H-1a), 2.11 (1H, m, H-1b), 2.19 (2H, m, H-2), 5.31 (1H, br s, H-3), 5.81 (1H, d, J=10.4 Hz, H-6), 5.68 (1H, d, J=10.4 Hz, H-7), 2.56 (1H, dd, J=12.6, 2.2 Hz, H-10), 5.58 (1H, br d, J=10.4 Hz, H-11), 2.74 (1H, dd, J=13.8, 10.4 Hz, H-12a), 3.36 (1H, br d, J=13.8 Hz, H-12b), 4.50 (1H, d, J=16.8 Hz, H-16a), 4.75 (1H, d, J=16.8 Hz, H-16b), 1.34 (3H, s, H-17), 1.62 (3H, s, H-18), 1.48 (3H, s, H-19), 1.06 (3H, s, H-20), 8.97 (1H, br s, H-3′), 8.69 (1H, br d, J=4.2 Hz, H-5′), 7.26 (1H, dd, J=8.2, 4.2 Hz, H-6′), 8.09 (1H, br d, J=8.2 Hz, H-7′), 7.36 (2H, m, H-3″, 7″), 7.26 (2H, m, H-4″, 6″), 7.40 (1H, br t, J = 8.1 Hz, H-5″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.7 (C-1), 25.9 (C-2), 123.5 (C-3), 141.2 (C-4), 43.6 (C-5), 75.4 (C-6), 77.5 (C-7), 78.5 (C-8), 47.5 (C-9), 41.1 (C-10), 75.5 (C-11), 29.0 (C-12), 130.5 (C-13), 138.9 (C-14), 171.3 (C-15), 70.3 (C-16), 22.3 (C-17 ), 21.2 (C-18), 17.7 (C-19), 17.1 (C-20), 164.5 (C-1′), 126.0 (C-2′), 150.7 (C-3′), 152.2 (C-5′), 123.1 (C-6′), 138.2 (C-7′), 166.3 (C-1″), 130.2 (C-2″), 129.5 (C-3″, 7″), 128.7 (C-4″, 6″), 133.5 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2009)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物4為scutehenanine D。

    化合物5" 黃色粉末。ESI-MS m/z: 559.2" [M+H]+, 推測(cè)化合物5的分子量為558,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C32H34N2O7。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.39 (1H, m, H-1a), 1.71 (1H, m, H-1b), 2.07 (2H, m, H-2), 5.27 (1H, s, H-3), 5.96 (1H, d, J=10.4 Hz, H-6), 5.77 (1H, d, J=10.4 Hz, H-7), 2.42 (1H, d, J=17.3 Hz, H-10), 6.43 (1H, d, J=17.3 Hz, H-11), 6.46 (1H, d, J=16.8 Hz, H-12), 5.94 (1H, s, H-14), 5.04 (1H, s, H-16), 1.08 (3H, s, H-17), 1.59 (3H, s, H-18), 1.47 (3H, s, H-19), 1.30 (3H, s, H-20), 8.97 (1H, d, J=1.8 Hz, H-3′), 8.66 (1H, dd, J=4.6, 1.8 Hz, H-5′), 7.25 (1H, dd, J=8.2, 4.6 Hz, H-6′), 8.02 (1H, dt, J=8.2, 1.8 Hz, H-7′), 9.03 (1H, d, J=1.8 Hz, H-3″), 8.68 (1H, dd, J=4.6, 1.8 Hz, H-5″), 7.29 (1H, dd, J=8.2, 4.9 Hz, H-6″), 8.09 (1H, dt, J=8.2, 1.8 Hz, H-7″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.5 (C-1), 26.5 (C-2), 123.4 (C-3), 140.8 (C-4), 43.3 (C-5), 76.1 (C-6), 76.5 (C-7), 77.1 (C-8), 48.5 (C-9), 42.6 (C-10), 146.6 (C-11), 122.3 (C-12), 162.4 (C-13), 115.3 (C-14), 174.3 (C-15), 70.2 (C-16), 22.7 (C-17), 20.2 (C-18), 17.8 (C-19), 15.9 (C-20), 165.2 (C-1′), 125.9 (C-2′), 151.1 (C-3′), 153.6 (C-5′), 123.6 (C-6′), 137.0 (C-7′), 165.4 (C-1″), 124.5 (C-2″), 151.5 (C-3″), 153.6 (C-5″), 123.3 (C-6″), 137.9 (C-7″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Nguyen et al., 2009)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物5為半枝蓮堿A。

    化合物6" 白色粉末。ESI-MS m/z: 558.2" [M+H]+, 556.1" [M-H ]-, 推測(cè)化合物6的分子量為557,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C33H35NO7。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.36 (1H, m, H-1a), 1.67 (1H, m, H-1b), 2.06 (2H, m, H-2), 5.27 (1H, br s, H-3), 5.91 (1H, d, J=10.7 Hz, H-6), 5.75(1H, d, J=10.7 Hz, H-7), 2.37(1H, br d, J=12.0 Hz, H-10), 6.49 (1H, d, J=16.8 Hz, H-11), 6.39 (1H, d, J=16.8 Hz, H-12), 5.98 (1H, br s, H-14), 5.02 (2H, br s, H-16), 1.09 (3H, s, H-17), 1.59 (3H, s, H-18), 1.46 (3H, s, H-19), 1.29 (3H, s, H-20), 8.99 (1H, br s, H-3′),8.66 (1H, br d, J=4.7 Hz, H-5′), 7.29 (1H, dd, J=7.9, 4.7 Hz, H-6′), 8.07 (1H, br d, J=7.9 Hz, H-7′), 7.86 (2H, m, H-3″, 7″), 7.35 (2H, m, H-4″, 6″), 7.49 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.1 (C-1), 26.7 (C-2), 123.6 (C-3), 140.9 (C-4), 43.5 (C-5), 76.5 (C-6), 75.9 (C-7), 77.2 (C-8), 48.5 (C-9), 42.7 (C-10), 146.6 (C-11), 122.1 (C-12), 162.1 (C-13), 115.3 (C-14), 174.4 (C-15), 70.8 (C-16), 22.9 (C-17), 20.6 (C-18), 17.7 (C-19), 15.3 (C-20), 164.9 (C-1′), 125.7 (C-2′), 150.1 (C-3′), 153.5 (C-5′), 123.4 (C-6′), 137.1 (C-7′), 165.5 (C-1″), 128.9 (C-2″), 130.3 (C-3″, 7″), 128.4 (C-4″, 6″), 133.6 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2006)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物6為半枝蓮堿B。

    化合物7" 白色粉末。ESI-MS m/z: 575.2" [M+H]+, 推測(cè)化合物7的分子量為574,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C32H34N2O8。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.85 (1H, m, H-1a), 2.13 (1H, m, H-1b), 2.21 (2H, m, H-2), 5.29 (1H, br s, H-3), 5.91 (1H, d, J=10.4 Hz, H-6), 5.73 (1H, d, J=10.4 Hz, H-7), 2.53 (1H, dd, J=12.0, 1.8 Hz, H-10), 5.57 (1H, br d, J=10.4 Hz, H-11), 2.72 (1H, dd, J=14.4, 10.4 Hz, H-12a), 3.42 (1H, br d, J=14.4 Hz, H-12b), 4.57 (1H, d, J=16.8 Hz, H-16a), 4.78 (1H, d, J=16.8 Hz, H-16b), 1.36 (3H, s, H-17), 1.59 (3H, s, H-18), 1.48 (3H, s, H-19), 1.05 (3H, s, H-20), 9.06 (1H, br s, H-3′), 8.71 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5′), 7.29 (1H, dd, J=8.1, 4.8 Hz, H-6′), 8.11 (1H, br d, J=8.1 Hz, H-7′), 8.99(1H, br s, H-3″), 8.69 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5″), 7.29 (1H, dd, J=7.8, 4.6 Hz, H-6″), 8.09 (1H, br d, J=7.8 Hz, H-7″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.5 (C-1), 26.5 (C-2), 123.6 (C-3), 141.1 (C-4), 43.1 (C-5), 76.5 (C-6), 77.4 (C-7), 78.2 (C-8), 47.5 (C-9), 40.7 (C-10), 75.9 (C-11), 29.1 (C-12), 130.1 (C-13), 139.3 (C-14), 171.7 (C-15), 70.3 (C-16), 21.9 (C-17), 20.6 (C-18), 17.4 (C-19), 16.6 (C-20), 164.8 (C-1′), 126.7 (C-2′), 150.4 (C-3′), 153.5 (C-5′), 123.5 (C-6′), 137.8 (C-7′), 164.8 (C-1″), 125.9 (C-2″), 150.3 (C-3″), 153.4 (C-5″), 123.6 (C-6″), 137.6 (C-7″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2007)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物7為7-煙酸酰氧基半枝蓮堿H。

    化合物8" 黃色粉末。ESI-MS m/z: 535.2" [M+H]+, 533.1" [ M-H ]-, 推測(cè)化合物8的分子量為534,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C30H34N2O7。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.36 (1H, m, H-1a), 1.68 (1H, m, H-1b), 2.08 (2H, m, H-2), 5.25 (1H, br s, H-3), 5.94 (1H, d, J=10.2 Hz, H-6), 5.63 (1H, d, J=10.2 Hz, H-7), 2.51 (1H, dd, J=12.6, 2.1 Hz, H-10), 7.26 (1H, br d, J=16.8 Hz, H-11), 6.21 (1H, d, J=16.8 Hz, H-12), 1.59 (3H, s, H-14), 1.45 (1H, s, H-15), 1.26 (3H, s, H-16), 1.09 (3H, s, H-17), 4.54 (2H, br s, H-18), 9.06 (1H, br s, H-3′), 8.69 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5′), 7.27 (1H, dd, J=7.9, 4.8 Hz, H-6′), 8.14 (1H, br d, J=7.9 Hz, H-7′), 9.02 (1H, br s, H-3″), 8.68 (1H, br d, J=4.8 Hz, H-5″), 7.28 (1H, dd, J=7.8, 4.8 Hz, H-6″), 8.08 (1H, br d, J=7.8 Hz, H-7″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.4 (C-1), 26.3 (C-2), 123.5 (C-3), 140.7 (C-4), 43.3 (C-5), 76.2 (C-6), 76.4 (C-7), 77.2 (C-8), 48.5 (C-9), 42.7 (C-10), 154.9 (C-11), 126.7 (C-12), 198.5 (C-13), 20.3 (C-14), 17.5 (C-15), 15.3 (C-16), 22.9 (C-17), 66.8 (C-18), 164.8 (C-1′), 124.7 (C-2′), 150.7 (C-3′), 153.5 (C-5′), 123.9 (C-6′), 137.2 (C-7′), 164.7 (C-1″), 125.9 (C-2″), 150.7 (C-3″), 153.5 (C-5″), 123.6 (C-6″), 137.5 (C-7″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2011)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物8為半枝蓮堿N。

    化合物9" 白色粉末。ESI-MS m/z: 558.1" [M+H]+, 580.2" [ M+Na ]+, 推測(cè)化合物9的分子量為557,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C33H35NO7。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.36 (1H, m, H-1a), 1.67 (1H, m, H-1b), 2.07 (2H, m, H-2), 5.25 (1H, br s, H-3), 5.91 (1H, d, J=10.2 Hz, H-6), 5.75(1H, d, J=10.2 Hz, H-7), 2.39 (1H, br d, J=12.4 Hz, H-10), 6.44 (1H, d, J=16.8 Hz, H-11), 6.48 (1H, d, J=16.8 Hz, H-12 ), 5.96 (1H, br s, H-14), 5.02 (2H, br s, H-16), 1.06 (3H, s, H-17), 1.59 (3H, s, H-18), 1.47 (3H, s, H-19), 1.28 (3H, s, H-20), 9.02 (1H, br d, J=1.8 Hz, H-3′),8.64 (1H, dd, J=4.8, 1.8 Hz, H-5′), 7.24 (1H, dd, J=7.8, 4.7 Hz, H-6′), 8.07 (1H, br d, J=7.8 Hz, H-7′), 7.81 (2H, d, J=8.2 Hz, H-3″, 7″), 7.28 (2H, dd, J=8.2, 7.4 Hz, H-4″, 6″), 7.39 (1H, br t, J=7.4 Hz, H-5″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.5 (C-1), 26.3 (C-2), 123.3 (C-3), 140.9 (C-4), 43.5 (C-5), 75.5 (C-6), 76.9 (C-7), 77.1 (C-8), 48.5 (C-9), 42.9 (C-10), 146.9 (C-11), 122.3 (C-12), 162.5 (C-13), 115.1 (C-14), 174.6 (C-15), 70.4 (C-16), 22.8 (C-17), 20.5 (C-18), 17.6 (C-19), 15.3 (C-20), 164.9 (C-1′), 125.4 (C-2′), 150.7 (C-3′), 153.6 (C-5′), 123.5 (C-6′), 137.5 (C-7′), 165.8 (C-1″), 129.9 (C-2″), 129.5 (C-3″, 7″), 128.5 (C-4″, 6″), 133.3 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Wang et al., 2010)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物9為半枝蓮堿Y。

    化合物10" 白色粉末。ESI-MS m/z: 575.3" [M+H]+, 推測(cè)化合物10的分子量為574,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C34H38O8。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.66 (1H, m, H-1a), 2.06 (1H, m, H-1b), 2.19 (2H, m, H-2), 5.34 (1H, br s, H-3), 5.68 (1H, d, J=10.1 Hz, H-6), 3.75 (1H, d, J=10.1 Hz, H-7), 2.88 (1H, dd, J=12.6, 2.6 Hz, H-10), 5.83 (1H, dd, J=12.0, 4.3 Hz, H-11), 1.75 (1H, m, H-12a), 2.55 (1H, m, H-12b), 2.56 (1H, d, J=17.8 Hz, H-14a), 3.17 (1H, d, J=17.8 Hz, H-14b), 4.05 (1H, d, J=8.8 Hz, H-16a), 4.22 (1H, d, J=8.8 Hz, H-16b), 1.12 (3H, s, H-17), 1.69 (3H, s, H-18), 1.37 (3H, s, H-19), 1.09 (3H, s, H-20), 7.84 (2H, m, H-3′, 7′), 7.37 (2H, m, H-4′, 6′), 7.42 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5′), 7.77 (2H, m, H-3″, 7″), 7.48 (2H, m, H-4″, 6″), 7.45 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 29.1 (C-1), 33.5 (C-2), 121.6 (C-3), 143.9 (C-4), 44.5 (C-5), 73.3 (C-6), 70.4 (C-7), 83.2 (C-8), 39.5 (C-9), 43.7 (C-10), 72.6 (C-11), 29.7 (C-12), 77.1 (C-13), 43.6 (C-14), 174.4 (C-15), 76.8 (C-16), 19.9 (C-17), 20.5 (C-18), 16.7 (C-19), 22.4 (C-20), 166.9 (C-1′), 128.7 (C-2′), 130.1 (C-3′, 7′), 129.5 (C-4′, 6′), 133.5 (C-5′), 168.5 (C-1″), 129.6 (C-2″), 130.2 (C-3″, 7″), 128.5 (C-4″, 6″), 133.8 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2006)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物10為barbatin A。

    化合物11" 白色粉末。ESI-MS m/z: 575.3" [M+H]+, 推測(cè)化合物11的分子量為574,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C34H38O8。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.86 (1H, m, H-1a), 2.47 (1H, m, H-1b), 1.46 (1H, m, H-2a), 2.08 (1H, m, H-2b), 2.15 (1H, m, H-3a), 2.31 (1H, m, H-3b), 5.71 (1H, d, J=10.8 Hz, H-6), 5.65(1H, d, J=10.8 Hz, H-7), 2.37 (1H, dd, J=12.6, 2.0 Hz, H-10), 4.37 (1H, dd, J=12.4, 4.1 Hz, H-11), 1.59 (1H, m, H-12a), 2.16 (1H, m, H-12b), 2.87 (1H, d, J=17.0 Hz, H-14a), 3.05 (1H, d, J=17.0 Hz, H-14b), 4.25 (1H, d, J=9.0 Hz, H-16a), 4.41 (1H, d, J=9.0 Hz, H-16b), 1.11 (3H, s, H-17), 4.64 (2H, br s, H-18), 1.45 (3H, s, H-19), 1.59 (3H, s, H-20), 7.94 (2H, m, H-3′, 7′), 7.56 (2H, m, H-4′, 6′), 7.44 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5′), 7.96 (2H, m, H-3″, 7″), 7.65 (2H, m, H-4″, 6″), 7.49 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 22.3 (C-1), 28.5 (C-2), 32.6 (C-3), 154.7 (C-4), 45.9 (C-5), 74.3 (C-6), 70.1 (C-7), 84.8 (C-8), 43.7 (C-9), 43.4 (C-10), 74.6 (C-11), 31.6 (C-12), 77.7 (C-13), 42.6 (C-14), 174.2 (C-15), 79.4 (C-16), 16.7 (C-17), 104.5 (C-18), 17.7 (C-19), 20.4 (C-20), 166.7 (C-1′), 128.8 (C-2′), 130.3 (C-3′, 7′), 129.2 (C-4′, 6′), 133.2 (C-5′), 167.9 (C-1″), 129.5 (C-2″), 129.9 (C-3″, 7″), 128.3 (C-4″, 6″), 133.7 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2006)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物11為barbatin B。

    化合物12" 白色粉末。ESI-MS m/z: 557.3" [M+H]+, 推測(cè)化合物12的分子量為556,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C34H36O7。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δH: 1.36 (1H, m, H-1a), 1.66 (1H, m, H-1b), 2.06 (2H, m, H-2), 5.25 (1H, br s, H-3), 5.73 (1H, d, J=10.4 Hz, H-6), 5.91(1H, d, J=10.4 Hz, H-7), 2.37(1H, dd, J=12.8, 2.1 Hz, H-10), 6.47 (1H, d, J=16.8 Hz, H-11), 6.43 (1H, d, J=16.8 Hz, H-12), 5.95 (1H, br s, H-14), 5.01 (1H, dd, J=16.8, 1.8 Hz, H-16a), 5.04 (1H, dd, J=16.8, 1.8 Hz, H-16b), 1.06 (3H, s, H-17), 1.59 (3H, s, H-18), 1.47 (3H, s, H-19), 1.28 (3H, s, H-20), 7.83 (2H, m, H-3′, 7′), 7.31 (2H, m, H-4′, 6′), 7.43 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5′), 7.86 (2H, m, H-3″, 7″), 7.34 (2H, m, H-4″, 6″), 7.47 (1H, br t, J=7.8 Hz, H-5″)。13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 19.5 (C-1), 26.5 (C-2), 123.5 (C-3), 139.9 (C-4), 43.5 (C-5), 75.8 (C-6), 75.9 (C-7), 77.2 (C-8), 48.4 (C-9), 42.7 (C-10), 146.8 (C-11), 121.7 (C-12), 162.1 (C-13), 115.1 (C-14), 174.0 (C-15), 70.8 (C-16), 22.8 (C-17), 20.2 (C-18), 17.5 (C-19), 15.3 (C-20), 166.2 (C-1′), 129.8 (C-2′), 130.5 (C-3′, 7′), 128.2 (C-4′, 6′), 133.3 (C-5′), 166.3 (C-1″), 129.5 (C-2″), 129.3 (C-3″, 7″), 128.3 (C-4″, 6″), 132.8 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Dai et al., 2008)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物12為barbatin D。

    化合物13 ""黃色粉末。ESI-MS m/z: 317.1" [M+H]+, 339.2" [M + Na]+,推測(cè)化合物13的分子量為316,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C16H12O7。1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δH: 6.21 (1H, d, J=1.9 Hz, H-6), 6.32(1H, d, J=1.9 Hz, H-8), 6.58 (1H, d, J=8.2 Hz, H-3′), 7.29 (1H, dd, J=8.2, 8.1 Hz, H-4′), 6.57 (1H, d, J=8.1 Hz, H-5′), 12.52 (5-OH), 10.76 (7-OH), 9.79 (5-OH), 3.75 (3H, s, 2′-OMe)。13C-NMR (DMSO-d6, 150 MHz) δC: 145.9 (C-2), 138.1 (C-3), 176.7 (C-4), 161.4 (C-5), 98.3 (C-6), 164.0 (C-7), 93.6 (C-8), 157.6 (C-9), 103.9 (C-10), 107.4 (C-1′), 158.8 (C-2′), 102.1 (C-3′), 131.9 (C-4′), 108.7 (C-5′), 156.7 (C-6′), 55.8 (2′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Long et al., 2015)報(bào)道的基本一致,故鑒定化合物13為5, 7, 6′-三羥基-2′-甲氧基黃酮醇。

    化合物14 ""黃色粉末。ESI-MS m/z: 315.1" [M+H]+, 推測(cè)化合物14的分子量為314,結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù),推測(cè)其分子式為C17H14O6。1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δH: 6.98 (1H, s, H-3), 7.53~7.67 (3H, m, H-3′, 4′, 5′), 7.96~8.09 (2H, m, H-2′, 6′), 12.71 (1H, s, 5-OH), 3.88 (3H, s, 6-OMe), 3.79 (7-OMe)。13C-NMR (DMSO-d6, 150 MHz) δC: 164.1 (C-2), 105.2 (C-3), 182.7 (C-4), 146.3 (C-5), 132.8 (C-6), 152.0 (C-7), 129.1 (C-8), 148.9 (C-9), 103.8 (C-10), 131.4 (C-1′), 126.8 (C-2′, 6′), 130.0 (C-3′, 5′), 132.5 (C-4′), 60.5, 61.5 (-OMe × 2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Tomimori et al., 1982)報(bào)道的基本一致, 故鑒定化合物14為5, 8-二羥基-6, 7-二甲氧基黃酮。

    2.2 人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制活性

    采用CCK-8法評(píng)價(jià)了化合物1-14對(duì)人肝癌活性HepG2細(xì)胞體外增殖抑制活性,其IC50值見(jiàn)表1。由表1可知,化合物1-3、8、9、13、14均表現(xiàn)出無(wú)明顯活性,化合物4、7、10-12表現(xiàn)出較弱的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性,化合物6" [IC50值為(15.62 ± 2.07)μmol·L-1]細(xì)胞增殖抑制活性和陽(yáng)性對(duì)照 [順鉑,IC50值為(13.74 ± 1.04)μmol·L-1]活性接近,而化合物5" [IC50值為(1.25 ± 0.39)μmol·L-1]表現(xiàn)出比順鉑更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性。

    2.3 分子對(duì)接

    利用Autodock Vina 1.1.2軟件將活性最好的單體化合物半枝蓮堿A(5)和半枝蓮堿B(6)與肝癌靶標(biāo)VEGF-2蛋白、FGFR-1蛋白進(jìn)行分子對(duì)接,化合物與受體的結(jié)合情況通過(guò)結(jié)合能(kcal·mol-1)衡量,通常結(jié)合能低于0 kcal·mol-1,表明化合物和蛋白可以結(jié)合,而結(jié)合能低于-5 kcal·mol-1,表明結(jié)合良好(黃俊鑫等,2022)。分子對(duì)接結(jié)果表明,肝癌靶標(biāo)VEGF-2蛋白與其特異性配體樂(lè)伐替尼(LEV)的結(jié)合能為-9.2 kcal·mol-1,而與半枝蓮堿A(5)、半枝蓮堿B(6)的結(jié)合能分別為-8.5、-8.4 kcal·mol-1;FGFR-1蛋白與其特異性配體LEV的結(jié)合能為-10.6 kcal·mol-1,而與半枝蓮堿A(5)、半枝蓮堿B(6)的結(jié)合能分別為0.7、1.1 kcal·mol-1。因此,化合物5和化合物6與VEGF-2具有良好的結(jié)合力,其分子對(duì)接圖見(jiàn)圖2。由圖2可知,半枝蓮堿A(5)和半枝蓮堿B(6)通過(guò)氫鍵與GLY-841、LEU-840、ASN-923、ARG-1032等殘基結(jié)合。

    3" 討論與結(jié)論

    半枝蓮為我國(guó)常見(jiàn)中草藥,其在抗腫瘤領(lǐng)域應(yīng)用較廣泛,常使用半枝蓮及其藥治療或輔助治療惡性腫瘤(張洪石等,2022)。目前,半枝蓮的研究主要集中在黃酮類成分和多糖類成分抗腫瘤及作用機(jī)制的研究。近幾年,對(duì)于半枝蓮二萜及二萜生物堿類化學(xué)成分的研究逐漸增多,得到了一些具有較好活性的化合物。Wu等(2015)研究發(fā)現(xiàn)化合物scutolide A-L、(14R)-14β-hydroxyscutolide K等13個(gè)化合物對(duì)EB病毒裂解復(fù)制有不同的抑制作用,其中化合物scutolide D的EC50(半最大效應(yīng)濃度)和SI(選擇指數(shù))值分別為3.2 μmol·L-1和46.1,表明其對(duì)EB病毒具有較強(qiáng)活性和高安全性;Xue等(2016)研究發(fā)現(xiàn)半枝蓮中二萜或二萜生物堿類化合物scutebatin A、6, 7-二煙酸酰氧基半枝蓮堿G(6, 7-di-O-nicotinoylscutebarbatine G)、6-煙酸酰氧基-7-乙酰氧基半枝蓮堿G(6-O-nicotinoyl-7-O-acetylscutebarbatine G)、半枝蓮堿W(scutebarbatine W)表現(xiàn)出比維拉帕米(經(jīng)典P-gp 抑制劑)具有更好的對(duì)抗多藥耐藥(MDR)能力,其中作用最強(qiáng)化合物為scutebatin A,其通過(guò)抑制P-gp活性和抑制p糖蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥;Yuan等(2017)研究發(fā)現(xiàn)半枝蓮中化合物scubatine F對(duì)A549(人肺腺癌)細(xì)胞和HL-60(人早幼粒細(xì)胞白血?。┘?xì)胞表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒活性,IC50分別為10.4 μmol·L-1和15.3 μmol·L-1。綜上可知,目前半枝蓮中二萜類化合物的活性研究較少,主要集中在抗病毒、抗多藥耐藥等方面,而在抗腫瘤活性方面研究較少,尤其是在抗肝癌方面。

    前期對(duì)半枝蓮95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了大孔樹脂梯度洗脫,發(fā)現(xiàn)50%乙醇洗脫部位具有很好的抗乳腺癌活性,其主要活性成分為黃酮類化合物,而70%~90%乙醇洗脫部位對(duì)乳腺癌無(wú)明顯活性(嚴(yán)緒華等,2023)。同時(shí),對(duì)60%~90%大孔樹脂乙醇洗脫部位進(jìn)行抗肝癌活性篩選(劉欣等,2023)。本研究則在前期抗肝癌活性研究基礎(chǔ)上,選取活性最好的70%乙醇洗脫部位作為對(duì)象。利用多種色譜手段從70%乙醇洗脫部位中分離得到14個(gè)單體化合物,包括12個(gè)二萜類化合物和2個(gè)黃酮類化合物,其中化合物1-3、13、14為首次從該植物中分離得到。同時(shí),利用CCK-8法評(píng)價(jià)了14個(gè)單體化合物對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株體外增殖活性的影響,其中化合物1-3、8、9、13、14無(wú)明顯抑制活性,化合物4、7、10-12表現(xiàn)出較弱的抑制活性,化合物6對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性(IC50值為15.62 μmol·L-1)與陽(yáng)性對(duì)照活性接近,而化合物5表現(xiàn)出比順鉑更好的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性(IC50值為1.25 μmol·L-1)。由于所得的具有抗肝癌活性二萜類化合物數(shù)量較少且化合物分屬不同的新克羅烷結(jié)構(gòu)類型,因此其構(gòu)效關(guān)系目前還不明確。通過(guò)文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)化合物4、6、7、8、10、11對(duì)HONE-1人鼻咽癌細(xì)胞株、KB人口腔表皮樣癌細(xì)胞株和HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞株均具有較好的生長(zhǎng)抑制活性,IC50值為2.8~8.1 μmol·L-1(Dai et al., 2006, 2007, 2009, 2011),表明半枝蓮二萜類化合物在其他腫瘤方面也能表現(xiàn)出較好的活性,值得進(jìn)一步研究。本研究同時(shí)利用分子對(duì)接法探討化合物半枝蓮堿A(5)和半枝蓮堿B(6)與肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況。通過(guò)一線抗肝癌藥物樂(lè)伐替尼(或侖伐替尼)明確的靶標(biāo)結(jié)合蛋白銀行數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.rcsb.org/)中特異性配體樂(lè)伐替尼對(duì)應(yīng)的蛋白,篩選出2個(gè)肝癌靶標(biāo)VEGF-2(ID:3WZD)、FGFR-1(ID:5ZV2)蛋白作為目標(biāo)蛋白。利用autodock vina 1.1.2將化合物5和化合物6與目標(biāo)蛋白進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果顯示,半枝蓮堿A(5)和半枝蓮堿B(6)與VEGF-2蛋白均有良好的結(jié)合能力,比樂(lè)伐替尼稍弱,但與FGFR-1蛋白結(jié)合能力差,表明化合物5和化合物6的抗肝癌作用靶標(biāo)之一可能為VEGF-2蛋白,靶標(biāo)驗(yàn)證及后續(xù)作用機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。

    綜上所述,本研究不僅豐富了半枝蓮的化學(xué)物質(zhì)類群, 也為半枝蓮抗肝癌物質(zhì)的基礎(chǔ)研究做出了一定貢獻(xiàn)。

    參考文獻(xiàn):

    CHEN M, WANG JT, WU ZN, et al., 2017. Effect of total flavonoids in Scutellaria barbata in mediating autophagy in tumor cells via PI3K/AKT/mTOR pathway" [J]. Chin J Chin Mat Med, 42(7): 1358-1364." [陳明, 王舉濤, 吳珍妮, 等, 2017. 半枝蓮總黃酮通過(guò)PI3K/AKT/mTOR通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 42(7): 1358-1364.]

    DAI SJ, PENG WB, SHEN L, et al., 2011. New norditerpenoid alkaloids from Scutellaria barbata with cytotoxic activities" [J]. Nat Prod Res, 25(11): 1019-1024.

    DAI SJ, PENG WB, ZHANG DW, et al., 2009. Cytotoxic neo-clerodane diterpenoid alkaloids from Scutellaria barbata" [J]. J Nat Prod, 72(10): 1793-1797.

    DAI SJ, SHEN L, REN Y, 2008. Two new neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata" [J]. J Integr Plant Biol, 50(6): 699-702.

    DAI SJ, TAO JY, LIU K, et al., 2006. neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata with cytotoxic activities" [J]. Phytochemistry, 67(13): 1326-1330.

    DAI SJ, WANG GF, CHEN M, et al., 2007. Five new neo-clerodane diterpenoid alkaloids from Scutellaria barbata with cytotoxic activities" [J]. Chem Pharm Bull, 55(8): 1218-1221.

    DAI SJ, XIAO K, ZHANG L, et al., 2016. New neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria strigillosa with cytotoxic activities" [J]. J Asian Nat Prod Res, 18(5): 456-461.

    GAO S, SONG GC, XU XY, 2017. Influence of Scutellaria Barbata polysaccharide on the cell activity of gastric carcinoma cell SGC-7901" [J]. Chin Foreign Med Res, 15(15): 1-2." [高山, 宋高臣, 許曉義, 2017. 半枝蓮多糖對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901的細(xì)胞活性影響 [J]. 中外醫(yī)學(xué)研究, 15(15): 1-2.]

    GU YZ, WEI LL, LIU Y, et al., 2023. Research progress on diterpenoid constituents and their pharmacological effects of medicinal plants in the Labiatae family in the past decade" [J]. J Chin Med Mat, 46(2): 511-524." [顧永哲, 魏樂(lè)樂(lè), 劉月, 等, 2023. 近10年唇形科藥用植物二萜類化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展 [J]. 中藥材, 46(2): 511-524.]

    HUANG JX, WANG BX, ZOU HB, et al., 2022. Mechanism of Fangji Fulingtang for treating acute kidney injury induced by ischemia-reperfusion based on network pharmacology and molecular docking verification" [J]. Chin J Exp Tradit Med, 28(8): 175-182." [黃俊鑫, 王碧霞, 鄒漢斌, 等, 2022. 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探究防己茯苓湯治療缺血再灌注急性腎損傷的作用機(jī)制 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 28(8): 175-182.]

    KURIMOTO SI, PU JX, SUN HD, et al., 2015. Acylated neo-clerodanes and 19-nor-neo-clerodanes from the aerial parts of Scutellaria coleifolia (Lamiaceae)" [J]. Phytochemistry, 116: 298-304.

    LEI N, XIONG SH, TAN L, et al., 2020. Inhibition of scutellarin on differentiation of colonic cancer stem cells via hedgehog signaling pathway" [J]. Chin J Chin Mat Med, 45(7): 1676-1683." [雷楠, 熊思會(huì), 譚溧, 等, 2020. 野黃芩苷通過(guò)hedgehog 信號(hào)通路抑制結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞分化的研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 45(7): 1676-1683.]

    LI GS, HAO XM, ZHANG L, et al., 2015. Diterpenoids from Scutellaria strigillosa" [J]. Chin J Chin Mat Med, 40(1): 98-102." [李桂生, 郝鑫淼, 張雷, 等, 2015. 沙灘黃芩中的二萜類化合物 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 40(1): 98-102.]

    LI HQ, SU J, JIANG JY, et al., 2019. Characterization of polysaccharide from Scutellaria barbata and its antagonistic effect on the migration and invasion of HT-29 colorectal cancer cells induced by TGF-β1" [J]. Int J Biol Macromol, 131: 886-895.

    LI J, WANG Y, LEI JC, et al., 2014. Sensitisation of ovarian cancer cells to cisplatin by flavonoids from Scutellaria barbata" [J]. Nat Prod Res, 28(10): 683-689.

    LIN XY, 2021. Extraction, purification, composition analysis and anti-hepatocellular activity of Scutellaria barbata D. Don polysaccharide" [D]. Harbin: Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine." [林霄月, 2021. 半枝蓮多糖提取純化與組成分析及抗肝癌活性研究 [D]. 哈爾濱: 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué).]

    LIU X, YAN XH, CHEN ZQ, et al., 2023. Studies on the separation of total alkaloids from Sculellaria barbata and its antitumor activities" [J]. Strait Pharm J, 35(4): 12-16." [劉欣, 嚴(yán)緒華, 陳中強(qiáng), 等, 2023. 半枝蓮總生物堿的純化分離及其抗腫瘤活性研究 [J]. 海峽藥學(xué), 35(4): 12-16.]

    LONG HL, XU GY, DENG AJ, et al., 2015. Two new flavonoids from the roots of Scutellaria baicalensis" [J]. J Asian Nat Prod Res, 17(7): 756-760.

    National Pharmacopoeia Commission, 2020. Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China: Vol. I" [S]. Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press: 122." [國(guó)家藥典委員會(huì), 2020. 中華人民共和國(guó)藥典: 一部 [S]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社: 122.]

    NGUYEN VH, PHAM VC, NGUYEN TTH, et al., 2009. Novel antioxidant neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata" [J]. Eur J Org Chem," (33): 5810-5815.

    NIU SR, SHI Y, YANG X, et al., 2021. Research progress on anti-tumor effects of chemical components from Scutellaria barbata" [J]. Chin Pharm, 32(15): 1915-1920." [牛淑睿, 石蕓, 楊鑫, 等, 2021. 半枝蓮化學(xué)成分的抗腫瘤作用研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)藥房, 32(15): 1915-1920.]

    SUN PD, SUN D, WANG XD, 2017. Effects of Scutellaria barbata polysaccharide on the proliferation, apoptosis and EMT of human colon cancer HT29 cells" [J]. Carbohyd Polym, 167: 90-96.

    TOMIMORI T, MIYAICHI Y, KIZU H, 1982. On the flavonoid constituents from the roots of Scutellaria baicalensis Georgi. I" [J]. Yakugaku Zasshi, 102(4): 388-391.

    WANG F, REN FC, LI YJ, et al., 2010. Scutebarbatines W-Z, new neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata and structure revision of a series of 13-spiro neo-clerodanes" [J]. Chem Pharm Bull, 58(9): 1267-1270.

    WU TZ, WANG Q, JIANG C, et al., 2015. neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata with activity against Epstein-Barr virus lytic replication" [J]. J Nat Prod, 78(3): 500-509.

    XUE GM, XIA YZ, WANG ZM, et al., 2016. neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata mediated inhibition of P-glycoprotein in MCF-7/ADR cells" [J]. Eur J Med Chem, 121: 238-249.

    YAN XH, ZHOU TX, MEI L, et al., 2023. Study on the chemical constituents of Scutellaria barbata and its inhibitory activity on the proliferation of breast cancer cells" [J]. Chin Tradit Pat Med, 45(6): 1864-1870." [嚴(yán)緒華, 周童曦, 梅凌, 等, 2023. 半枝蓮化學(xué)成分及其體外抑制乳腺癌細(xì)胞增殖活性 [J]. 中成藥, 45(6): 1864-1870.]

    YIN JP, ZHUO SY, 2021. Effects of ferulic acid on the proliferation, invasion and apoptosis of HepG2 hepatocellular carcinoma cells" [J]. Chin Pharm, 32(13): 1565-1571." [音金萍, 卓少元, 2021. 阿魏酸對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響 [J]. 中國(guó)藥房, 32(13): 1565-1571.]

    YUAN QQ, SONG WB, WANG WQ, et al., 2017. Scubatines A-F, new cytotoxic neo-clerodane diterpenoids from Scutellaria barbata D. Don" [J]. Fitoterapia, 119: 1-18.

    ZENG J, 2018. The mechanism of breviscapine inhibiting the growth of non-small cell lung cancer by regulating the expression of miRNA-7 and IGFBP-4" [D]. Hangzhou: Zhejiang University." [曾劍, 2018. 燈盞花素通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA-7和IGFBP-4的表達(dá)抑制非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)的機(jī)制研究 [D]. 杭州: 浙江大學(xué).]

    ZHANG HS, SU WW, ZHANG QM, et al., 2022. Research progress on antitumor bioactivity of Scutellaria Barbata" [J]. Chin J Pharm Econ, 17(5): 124-128." [張洪石, 蘇文文, 張啟明, 等, 2022. 半枝蓮抗腫瘤生物活性研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué), 17(5): 124-128.]

    ZHENG X, KANG W, LIU HH, et al., 2018. Inhibition effects of total flavonoids from Scutellaria barbata D. Don on human breast carcinoma bone metastasis via downregulating PTHrP pathway" [J]. Int J Mol Med, 41(6): 3137-3416.

    (責(zé)任編輯" 鄧斯麗)

    猜你喜歡
    二萜細(xì)胞增殖化學(xué)成分
    益母草中的1個(gè)新二萜苷
    中草藥(2022年1期)2022-01-13 03:11:56
    結(jié)構(gòu)改造制備抗菌和抗腫瘤的姜科二萜衍生物
    山荊子化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展
    miRAN—9對(duì)腫瘤調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展
    金線蓮的研究進(jìn)展
    九龍?zhí)僖宜嵋阴ゲ课换瘜W(xué)成分的分離鑒定
    核桃青皮的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展
    人類microRNA—1246慢病毒抑制載體的構(gòu)建以及鑒定
    有關(guān)“細(xì)胞增殖”一輪復(fù)習(xí)的有效教學(xué)策略
    RNA干擾HDACl對(duì)人乳腺癌MCF—7細(xì)胞生物活性的影響
    色综合亚洲欧美另类图片| 日韩欧美在线二视频| 亚洲午夜理论影院| 午夜视频精品福利| 亚洲精品色激情综合| 精品免费久久久久久久清纯| 精品欧美国产一区二区三| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美日韩精品网址| 欧美在线黄色| 最近最新中文字幕大全免费视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产伦在线观看视频一区| 97碰自拍视频| 国产一区二区激情短视频| 后天国语完整版免费观看| 级片在线观看| 欧美成人午夜精品| 国产欧美日韩一区二区三| 大型av网站在线播放| www国产在线视频色| 黑人操中国人逼视频| 国产成人欧美| 午夜福利免费观看在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 麻豆成人午夜福利视频| 成人欧美大片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 欧美成人性av电影在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲色图av天堂| 美女午夜性视频免费| 午夜亚洲福利在线播放| 人妻久久中文字幕网| 成人永久免费在线观看视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美zozozo另类| 国产日本99.免费观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲最大成人中文| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美在线一区亚洲| 久久伊人香网站| 亚洲色图av天堂| 久久亚洲精品不卡| 禁无遮挡网站| 欧美久久黑人一区二区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| АⅤ资源中文在线天堂| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产成+人综合+亚洲专区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲无线在线观看| 91国产中文字幕| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲av成人一区二区三| 在线观看免费视频日本深夜| 免费在线观看完整版高清| 日韩大码丰满熟妇| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产成人欧美| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲国产精品久久男人天堂| 在线观看www视频免费| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 一区二区日韩欧美中文字幕| 成年人黄色毛片网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 妹子高潮喷水视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| av电影中文网址| 色在线成人网| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲第一电影网av| 日韩免费av在线播放| 久久久久久久午夜电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美乱色亚洲激情| 免费av毛片视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| www.自偷自拍.com| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品免费视频内射| 亚洲熟妇熟女久久| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品99久久99久久久不卡| 丰满的人妻完整版| 一级作爱视频免费观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久天堂一区二区三区四区| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲av片天天在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 99在线视频只有这里精品首页| 久久青草综合色| 精品电影一区二区在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 日本三级黄在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 禁无遮挡网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 国产色视频综合| 欧美最黄视频在线播放免费| av中文乱码字幕在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 观看免费一级毛片| 久久久久亚洲av毛片大全| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品久久久久久成人av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国内精品久久久久精免费| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美一级毛片孕妇| 999精品在线视频| 亚洲无线在线观看| 高清在线国产一区| 国产成人欧美| 99国产精品一区二区蜜桃av| 日日夜夜操网爽| 国产av在哪里看| 满18在线观看网站| 国产99久久九九免费精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精华国产精华精| 国产高清videossex| 不卡一级毛片| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品久久久av美女十八| 色精品久久人妻99蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲第一青青草原| 在线av久久热| 又黄又爽又免费观看的视频| 不卡一级毛片| 女人被狂操c到高潮| 国产片内射在线| 亚洲专区字幕在线| 亚洲专区国产一区二区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲七黄色美女视频| 国产片内射在线| 久久久久久九九精品二区国产 | 男人的好看免费观看在线视频 | 免费看a级黄色片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产成人av激情在线播放| 波多野结衣高清无吗| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品国产清高在天天线| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品久久久久久成人av| 大型黄色视频在线免费观看| 一本久久中文字幕| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 在线播放国产精品三级| 波多野结衣av一区二区av| 久久精品成人免费网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 草草在线视频免费看| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 黄色视频,在线免费观看| 午夜久久久在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 老鸭窝网址在线观看| 国产99久久九九免费精品| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美乱妇无乱码| 国产亚洲精品一区二区www| 国产欧美日韩一区二区三| x7x7x7水蜜桃| 国产99白浆流出| 国产精品av久久久久免费| 国产av一区在线观看免费| 成人国产一区最新在线观看| 国产成人影院久久av| 欧美日本视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久久久久免费高清国产稀缺| 精品国产乱码久久久久久男人| 九色国产91popny在线| 久久精品人妻少妇| 淫秽高清视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 一本精品99久久精品77| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 成年免费大片在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 欧美国产日韩亚洲一区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲专区中文字幕在线| АⅤ资源中文在线天堂| 国产熟女午夜一区二区三区| 男女那种视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 91国产中文字幕| 精品一区二区三区av网在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩成人在线观看一区二区三区| 视频区欧美日本亚洲| 国产精华一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 91在线观看av| 精品电影一区二区在线| 久久久久九九精品影院| 国产精品99久久99久久久不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久青草综合色| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 悠悠久久av| 国产精品 国内视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产区一区二久久| 亚洲精品国产区一区二| 精品久久久久久久末码| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 我的亚洲天堂| 亚洲激情在线av| 免费看日本二区| 亚洲专区中文字幕在线| 1024手机看黄色片| 日本黄色视频三级网站网址| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文字幕高清在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久人妻av系列| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲精华国产精华精| 国产伦一二天堂av在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲在线自拍视频| 国产精品,欧美在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲精华国产精华精| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲九九香蕉| 国产亚洲精品av在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美大码av| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中出人妻视频一区二区| 精品久久久久久,| 在线观看免费午夜福利视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 男人操女人黄网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一级片免费观看大全| 国产成+人综合+亚洲专区| av有码第一页| 国产激情偷乱视频一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 日韩欧美在线二视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 人人妻人人澡人人看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美日韩精品网址| 久久亚洲真实| 国产黄片美女视频| 日韩av在线大香蕉| 亚洲色图av天堂| 51午夜福利影视在线观看| 精品国产国语对白av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 中文在线观看免费www的网站 | 亚洲精华国产精华精| 亚洲最大成人中文| av视频在线观看入口| 国产亚洲精品一区二区www| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久99热这里只有精品18| 色综合欧美亚洲国产小说| av天堂在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 悠悠久久av| 亚洲成av人片免费观看| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲七黄色美女视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 成人精品一区二区免费| or卡值多少钱| 搡老熟女国产l中国老女人| 成人免费观看视频高清| 亚洲av成人一区二区三| 黄色视频,在线免费观看| 精品高清国产在线一区| 级片在线观看| av在线播放免费不卡| 久久久久国产一级毛片高清牌| 午夜福利18| 精品无人区乱码1区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 免费看日本二区| 男女午夜视频在线观看| 国产成人欧美在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产精品久久电影中文字幕| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 免费av毛片视频| 在线播放国产精品三级| 欧美激情 高清一区二区三区| 级片在线观看| 亚洲av美国av| 啦啦啦韩国在线观看视频| 一二三四社区在线视频社区8| 黄色a级毛片大全视频| 岛国视频午夜一区免费看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国内精品久久久久精免费| 男女床上黄色一级片免费看| 99精品在免费线老司机午夜| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 丁香六月欧美| 亚洲av电影在线进入| 亚洲国产欧美网| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲一区二区三区不卡视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美激情久久久久久爽电影| 中亚洲国语对白在线视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 看黄色毛片网站| 欧美午夜高清在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 99在线人妻在线中文字幕| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲精品色激情综合| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲av成人av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久久国产精品麻豆| 看片在线看免费视频| 午夜福利免费观看在线| 又黄又粗又硬又大视频| 男女视频在线观看网站免费 | 久久天堂一区二区三区四区| 黄色a级毛片大全视频| 国产av不卡久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| a级毛片a级免费在线| 黑人操中国人逼视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日韩欧美国产一区二区入口| av片东京热男人的天堂| 久久狼人影院| 国产人伦9x9x在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 露出奶头的视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 免费观看人在逋| 欧美激情久久久久久爽电影| a在线观看视频网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 在线观看舔阴道视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲免费av在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲av成人av| netflix在线观看网站| 国产亚洲精品久久久久5区| 天天一区二区日本电影三级| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 一二三四在线观看免费中文在| 日韩大码丰满熟妇| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 性色av乱码一区二区三区2| 久久青草综合色| avwww免费| 免费在线观看成人毛片| 悠悠久久av| 大型av网站在线播放| 亚洲午夜理论影院| 黄色视频不卡| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 深夜精品福利| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人一区二区视频在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 久久草成人影院| www.自偷自拍.com| 麻豆成人午夜福利视频| 午夜两性在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品电影一区二区三区| 99热只有精品国产| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品久久久av美女十八| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 午夜激情av网站| 搡老妇女老女人老熟妇| av电影中文网址| 嫩草影院精品99| 波多野结衣巨乳人妻| 国产午夜精品久久久久久| 久久人妻av系列| 国产欧美日韩一区二区三| 久久久久精品国产欧美久久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲第一av免费看| 99久久综合精品五月天人人| 村上凉子中文字幕在线| e午夜精品久久久久久久| 亚洲成人免费电影在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 午夜视频精品福利| 欧美成狂野欧美在线观看| 熟女电影av网| 中亚洲国语对白在线视频| 精品福利观看| 69av精品久久久久久| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲人成77777在线视频| 99国产精品99久久久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| av欧美777| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| xxxwww97欧美| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久这里只有精品19| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人手机av| 亚洲精品在线美女| 禁无遮挡网站| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 又大又爽又粗| 久久国产精品影院| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费看美女性在线毛片视频| 美女高潮到喷水免费观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲男人天堂网一区| 久久热在线av| 99精品欧美一区二区三区四区| 91老司机精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲第一青青草原| 久久人妻av系列| 99热只有精品国产| 人人澡人人妻人| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国内精品久久久久精免费| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产成人av激情在线播放| www.999成人在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 深夜精品福利| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲av成人av| 日日夜夜操网爽| 国产一区二区激情短视频| 看片在线看免费视频| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 欧美成人免费av一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美一级毛片孕妇| 免费高清视频大片| 亚洲国产精品合色在线| 在线观看日韩欧美| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 中文字幕久久专区| 久久久久久久精品吃奶| 欧美一区二区精品小视频在线| 午夜福利成人在线免费观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 岛国在线观看网站| av福利片在线| 草草在线视频免费看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品 国内视频| 韩国精品一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 在线观看www视频免费| 欧美中文日本在线观看视频| www.999成人在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| av欧美777| 亚洲中文日韩欧美视频| 又大又爽又粗| 精品久久久久久,| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本a在线网址| 老汉色∧v一级毛片| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 免费在线观看日本一区| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久精品吃奶| 男人舔女人的私密视频| 正在播放国产对白刺激| 日韩欧美免费精品| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲中文av在线| 国产熟女xx| 欧美黑人巨大hd| 日本黄色视频三级网站网址| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久亚洲av毛片大全| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 91大片在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美中文综合在线视频| 天天添夜夜摸| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久香蕉国产精品| 国产视频一区二区在线看| 国产成人欧美在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲专区国产一区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 日本成人三级电影网站| 性欧美人与动物交配| 欧美激情极品国产一区二区三区| 麻豆成人av在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 美女高潮到喷水免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 少妇的丰满在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 国产精品一区二区精品视频观看| av片东京热男人的天堂| 久久精品影院6| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| www国产在线视频色| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲三区欧美一区| 校园春色视频在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 老司机靠b影院| www.熟女人妻精品国产| 国产黄色小视频在线观看| 男人舔女人的私密视频| xxx96com| 一级片免费观看大全| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 高清毛片免费观看视频网站|